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DOI: 10.3791/52212-v
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Presentiamo qui un protocollo ottimizzato per genotipizzare, colorare e preparare topi fetali per l'imaging di proiezioni di assoni nocicettori periferici nell'intero animale, come metodo efficace per valutare i fenotipi di crescita degli assoni sensoriali nello sviluppo di topi geneticamente modificati.
L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di valutare efficacemente i fenotipi di crescita degli assoni sensoriali nei topi fetali in via di sviluppo. Ciò si ottiene allevando e genotipizzando correttamente i topi reporter tre a tau laxy in modo tale che i saggi di colorazione a valle possano essere eseguiti come seconda fase. Gli embrioni di topo vengono fissati e colorati per consentire la visualizzazione delle proiezioni sensoriali degli assoni nell'intero animale.
Successivamente, gli embrioni vengono disidratati e purificati per visualizzare completamente le proiezioni assoniche profonde che altrimenti non sarebbero visibili. I risultati dimostrano che questi metodi sono un mezzo efficace per valutare rapidamente i fenotipi di crescita degli assoni nocicettivi embrionali. Utilizzando la traccia un reporter Tau Lae, questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della crescita degli assoni sensoriali, consentendo ai ricercatori di incrociare il loro gene di interesse sulla traccia di uno sfondo Z tlac e di eseguire lo screening di eventuali cambiamenti nei fenotipi di crescita degli assoni sensoriali.
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