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DOI: 10.3791/52345-v
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Qui presentiamo un metodo economico per definire le interazioni chimico-genetiche nel lievito in gemmazione. L'approccio si basa su tecniche fondamentali nella biologia molecolare del lievito ed è adatto per l'interrogazione meccanicistica di piccole e medie collezioni di sostanze chimiche e altri ambienti multimediali.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare le cellule di lievito per trovare i processi biologici bersaglio di una sostanza chimica di interesse. Ciò si ottiene determinando prima il profilo dose-risposta di una sostanza chimica per il lievito. Il secondo passo consiste nel far crescere una collezione completa di ceppi knockout genici di lievito su una dose subletale di sostanza chimica e su una piastra di controllo.
Successivamente vengono identificati i mutanti del lievito che sono ipersensibili alla sostanza chimica. Questo elenco viene analizzato bioinformaticamente per rivelare tutti i geni necessari per tollerare la sostanza chimica. Il passo finale consiste nell'eseguire una replica biologica dell'esperimento a bassa produttività.
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