Name: Tecnica chirurgica per limpianto di ingegneria tessutale vascolari Innesti e successive In Vivo Monitoraggio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Impara l'impianto chirurgico di vasi ingegnerizzati (TEV) nell'arteria carotidea di pecore con monitoraggio emodinamico in tempo reale. Questo protocollo ottimizzato consente di studiare il rimodellamento vascolare in vivo.

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Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Cuore e Polmone Istituto Nazionale (R01 HL086582) e la Stem Cell Science Fund di New York (NYSTEM, Contract # &#160; C024316) per STA e DDS illustrazioni utilizzate in video JoVE sono state completate da John Nyquist; Medical Illustrator dalla State University di New York a Buffalo.

NOTA: Questo protocollo è stato approvato dalla cura e l&#39;uso degli animali Comitato presso la State University di New York a Buffalo. Preparazione 1. Pre-chirurgica <ol><li> Utilizzare pecore (Dorset croce, femmina, circa 1-3 anni con un peso di 40-60 kg) per il seguente studio. Somministrare ciclosporina A (200 mg / die), aspirina (975 mg / die), e coumadin (20-30 mg / die) per via orale, iniziando 3 giorni prima chirurgia e continua per tutta la durata di tutti gli studi. </li><li> Assicurarsi che la pecora ha digiunato 12 ore prima dell&#39;intervento chirurgico (alimentazione normale = 1,8 kg e 0,4 kg di fieno grano). </li><li> Sterilizzare tutte le forniture chirurgiche in autoclave a vapore a 121 ° C e 15 psi per 30 min. </li><li> Posizionare le seguenti voci di un paraformaldeide essiccatore 48 ore prima dell&#39;intervento chirurgico: 4 mm sonde flusso Doppler, 1 millimetro cristalli ultrasuoni, cateteri arteriosi, tubi di estensione, e 42 &quot;Tygon Tubing. NOTA: Una tabella di attrezzature mediche, necessarie perchirurgia e per la sterilizzazione sono elencati nella Tabella 1. Pre-posizionamento della strumentazione nel tubo Tygon in questo passaggio aiuterà risparmiare tempo durante l&#39;intervento chirurgico. <ol><li> Etichettare ogni estremità delle sonde, cateteri e cristalli come destra e sinistra, se applicabile. </li></ol></li></ol> 2. Operazione Chirurgica <ol><li> Indurre pecore per anestesia con diazepam (0,5 mg / kg) e ketamina (4 mg / kg) per via endovenosa (IV). In alternativa, utilizzare Telazol (4 mg / kg) IV. <ol><li> Eseguire intubazione oro-tracheale con diametro 8,5-10,0 mm interno ammanettato endotracheale tubo 7. </li><li> Somministrare anestesia inalatoria attraverso un circuito rirespirazione con un ventilatore marea di volume (7-10 ml / kg) o di un ventilatore regolata pressione (15-20 cm H 2 O). Utilizzare un vaporizzatore di precisione per amministrare isoflurano o sevoflurano ad una quantità adeguata (3% -4% inizialmente) per raggiungere un mezzo di profonda fase anestetico chirurgico. La concentrazione alveolare minima perpecora è di 1,4% o 1,9%, rispettivamente, 8. </li><li> Valutare profondità dell&#39;anestesia osservando risposta motoria agli stimoli, riflesso palpebrale, posizione degli occhi, e la frequenza cardiaca. Monitorare la saturazione di ossigeno nel sangue (95% -100%) con pulsossimetria, CO 2 concentrazione (45-55 mmHg) in gas espiratorio utilizzando capnografia e mantenere la temperatura corporea durante la procedura (38,5-39,5 ° C) con un auto regolata riscaldamento coperta. </li></ol></li><li> Shave lana tutto il collo della pecora, e più di un vena cefalica, con una lama # 40 su Clippers standard. Preparare la pelle di entrambi i siti per la chirurgia con il 70% di alcool isopropilico e il 7,5% betadine scrub garza saturi. Inizia con l&#39;alcol garza per facilitare la rimozione di oli per la pelle. Si alternano tra betadine garza e alcol garza tre volte. </li><li> Posizionare pecore sul tavolo operatorio in decubito dorsale sulla cima di una coperta riscaldamento. Passare un tubo orogastrico di medie dimensioni per consentire l&#39;espulsione passiva del contenuto dello stomaco. Estendere lacollo di pecora e utilizzare ammortizzazione di supporto secondo necessità per mantenere il posizionamento. <ol><li> Eseguire uno scrub asettica finale con il 7,5% betadine garza imbevuta e lasciar riposare per 5 minuti prima di un intervento chirurgico. </li></ol></li><li> Somministrare fluidi IV (Ringer lattato o 0,9% Saline) a 10 ml / kg / ora attraverso un catetere venoso posizionato nella vena cefalica. Somministrare antibiotici intraoperatorie e analgesia: la penicillina G procaina 6.600 U / kg per via intramuscolare (IM), gentamicina 1,6 mg / kg IM, e buprenorfina 0,005-0,01 mg IV o IM. </li><li> Fare un cm un&#39;incisione ~ 12 longitudinalmente sul collo linea mediana ventrale con cauterizzazione electro. Isolare sinistra e destra carotide arterie (~ 6 cm), rimuovendo il tessuto connettivo con una tecnica dissezione smussa. Legare e cauterizzare microvasi diramano dalle arterie carotidi per ridurre al minimo il sanguinamento. </li><li> Mantenere la sterilità utilizzando (un non-sterile) infermiera chirurgica per assistere con scavare tutto il cablaggio e tubazioni (sonda di mandata, fili di cristallo ad ultrasuonie il tubo del catetere) nello strato sottocutaneo della pelle. Utilizzare un trocar smussata, che esce attraverso l&#39;incisione chirurgica preparata al collo dorsolaterale. <ol><li> Reach sotto il telo sterile e girare la testa della pecora modo che il lato del collo può essere visualizzata sotto il telo. </li><li> Utilizzare un emostatico curvato da 8 cm a tunnel attraverso lo spazio sottocutaneo tra la linea mediana ventrale incisione del collo e il lato del collo. Aprire e chiudere il emostatico di sezionare senza mezzi termini uno spazio per i tubi ~ 1,5 centimetri di larghezza. Le punte della pinza emostatica dovrebbero risiedere a metà strada tra la testa e le spalle, circa 10 cm caudale verso destra o di sinistra. Girare il hemostat modo che le punte siano rivolte verso la pelle superficiale. </li><li> Reach sotto il telo sterile e fare un 1,5 centimetri incisione attraverso la pelle, sulle punte del emostato con una sterile # 11 lama. Visualizza le punte della pinza emostatica per confermare una chiara uscita attraverso la pelle. </li><li> Passare il tubo Tygon contenente unll cablaggio e il tubo attraverso il tunnel sottocutaneo. Tenere i cavi e tubi sopra il telo sterile. </li><li> Reach sotto il telo per rimuovere il tubo esterno Tygon dal collo, esponendo il cablaggio impiantato quando lascia il collo della pecora. Estrarre singole linee fuori per minimizzare il gioco nello spazio sottocutaneo. Lasciare una distanza sufficiente per fissare correttamente la strumentazione per l&#39;arteria. </li></ol></li><li> Inserire 4 millimetri sonde flusso Doppler su entrambe le arterie carotidi e ottenere una lettura iniziale (Figura 1). Somministrare 100 U / kg di eparina IV 30 min prima bloccaggio dell&#39;arteria. </li><li> Continuare somministrazione di eparina a 100 U / kg / ora fino alla fine dell&#39;intervento. Bloccare la carotide utilizzando non schiacciamento morsetti vascolari e asportare una porzione (circa 4 cm di lunghezza). La portata carotideo controlaterale aumenterà del 50% -100% per mantenere il flusso di sangue al cervello. NOTA: È possibile limitare tratto longitudinale rinculo del vaso nativo rimuovendosegmenti più brevi rispetto sostituiti e / o stiramento dell&#39;arteria nativa con vascolare morsetti per accorciare gap fino procedura anastomotica completo è completato. Questo aiuterà limitare la tensione sui singoli suture holding e l&#39;innesto impiantato. </li><li> Suturare la TEV in luogo utilizzando semplici punti interrotti con 7-0 prolina ethalloy doppia armato monofilamento sutura. Se necessario, applicare miorilassanti lisce vascolari quali papaverina (15 mg / ml) o nicardipina (1,25 mg / ml) per via topica alla vascolarizzazione nativa per evitare vasocostrizione che ostacolerebbe sutura anastomotica. NOTA: Iniziare suture con circa 1 mm di distanza. Questo può variare notevolmente da caso a caso. La composizione e lo spessore TEV influenzerà la distanza effettiva tra suture. Poiché lo spessore del tessuto nativo o TEV diminuisce, può essere necessario collocare le suture più vicini. <ol><li> Prima di ancoraggio quattro punti del TEV alla arteria nativa mettendo due s oppostetitches su entrambe estremità prossimale e distale (Figura 2 -Di). Tenere ogni ancoraggio insegnato usando emostatiche. NOTA: descrizioni prossimale e distale si riferiscono alla direzione del flusso di sangue attraverso il foglio. </li><li> Aggiungere 5-6 più suture sul lato superficiale sia l&#39;estremità prossimale e distale per iniziare l&#39;anastomosi. (Figura 2 -Pr). Contemporaneamente ruotare vascolare morsetti 180 gradi. </li><li> Ristabilire tensione sulle suture di ancoraggio. Aggiungi supplementare (5-6) interrotto suture di estremità prossimale e distale sul lato ruotato del TEV. </li></ol></li><li> Una volta che il TEV viene suturata saldamente in posizione, ruotarlo indietro alla posizione iniziale e rimuovere vascolare morsetti uno alla volta, morsetto distale. Lieve sanguinamento nei siti anastomosi è comune. Questo può naturalmente risolvere dopo alcuni minuti di rilascio morsetto e reclamping o richiedere il posizionamento di suture supplementari. Posizionare la sonda Doppler (Figura 3-FL) Sul nativa dell&#39;arteria prossimale al flusso di sangue che entra nel TEV e portata monitor. NOTA: Aspettatevi le portate della carotide sinistra e destra per equilibrare dopo circa 15 min. Se la portata sulla carotide con impiantato TEV costante gocce, è possibile che il TEV è coagulazione. Altre anomalie possibili per quanto riguarda il flusso possono essere attribuiti alla costrizione della prossimale arterie nativo o distale al TEV. In questo caso, l&#39;uso di ulteriori rilassante della muscolatura liscia vascolare può essere applicato, e il vaso nativo deve ritornare ad un tono basale dopo 30-60 min a seguito della chiusura del tessuto sul sito dell&#39;innesto. <ol><li> Se lo si desidera, asportare la carotide controlaterale e suturare nuovamente in sede come controllo &quot;Sham&quot;. Questo è più clinicamente rilevante che lasciare la carotide destra solo e soltanto di collegare la sonda flusso, cristalli ultrasonici, e il catetere. Se un controllo sham è voluto, fare questo prima di passare al punto 2.11. </li></ol></li><li> Suturare 1 millimetro cristalli ultrasuoni (Figura 3 -cr1 CR2) a lati opposti del TEV con 7-0 Proline. Filo di sutura attraverso la testa cristallo ultrasuoni e cucite solo allo strato superficiale del TEV. </li><li> Cateterizzare l&#39;arteria con una versione modificata 18 G catetere con una abbottonatura Teflon tessuto (Figura 3- Ca &amp; Figure 4A). Posizionare il distale del catetere per il TEV in tessuto arterioso nativo. <ol><li> Suturare la abbottonatura alla parete arteriosa con 5/0 Ethibond per controllare qualsiasi emorragia. Utilizzare cicloesanone aderire il tubo microbore al catetere che è stata lavata con soluzione salina. Utilizzare il tubo come una linea di estensione. </li><li> Utilizzare un G Luer stub adattatore 20 con una spina iniezione Surflo per sigillare l&#39;estremità del tubo esteriorizzato (Figura 4B). Per mantenere la pervietà del catetere, ottenere il volume di adescamento della linea e lavare con 10 ml di soluzione salina e poi 5.000 U / ml di eparina sodica iniettabile ogni 2-3 giorni. </li></ol></li><li> Registrare la distanza tra la sonda di flusso ei cristalli ultrasonici, così come la distanza tra la sonda di flusso e il catetere. Questa velocità dell&#39;onda di polso permetterà di calcolare in combinazione con il software. Se non sono necessari calcoli, non impiantare un catetere. </li><li> Ottenere una lettura intraoperatoria se lo si desidera per garantire tutto l&#39;hardware è impiantato funzionale (vedi sezione 3). </li><li> Fissare le linee impiantati e fili alla vicina muscolatura con 2/0 seta e un ago cono (Figura 3). <ol><li> Posizionare la sonda di flusso vascolare filo parallelamente alla nave, con la caudale sonda e il filo che si estende cranialmente, e poi fare una &quot;U-Turn&quot; verso la muscolatura laterale. Fissare il filo muscolatura adiacente, utilizzando 2-0 seta su un ago conico a due posizioni, in modo che la sonda filo o flusso non è in grado di provocare sollecitazioni sulla nave. Assicurarsi suture sono aderente ma non stringere troppo e strangulate musculature (Figura 3). </li><li> Suturare la linea di fili di cristallo e arteriosa catetere alla muscolatura laterale, consentendo ~ 1,5 cm slack, simile a passaggi precedenti per il fissaggio della sonda di flusso (Figura 3). </li><li> Gruppo tutti i cavi e le linee insieme e ancorare al muscolatura poco prima di uscire fuori attraverso tunnel sottocutaneo, simile a fasi precedenti. </li></ol></li><li> Chiudere il sito chirurgico con un Vicryl sutura 2-0 in livelli utilizzando un modello di sutura in esecuzione su plancia e sottocutaneo, in esecuzione materasso punto sulla pelle (plancia, ago non tagliare, la pelle, il taglio ago). Chiudere l&#39;1,5 centimetri un&#39;incisione al collo dorsale attorno i fili esteriorizzato e le linee con 2/0 Vicryl e un ago di taglio. </li><li> Inserire fili sonda flusso, linee, cateteri e fili di cristallo ultrasuoni in un sacchetto (10 cm x 10 cm) che viene suturata saldamente alla pelle della pecora (Figura 5 - dopo il recupero). </li><li> Gradualmente svezzare anestesia pecore offe il volume del ventilatore di marea quindi estubare le pecore quando respiro spontaneo è ripreso. Rimuovere il catetere venoso inserito nella vena cefalica e benda, se necessario. </li><li> Fasciatura al collo con tripla pomata antibiotica sulle incisioni, un pad Telfa, tratto rotolo di garza, e elasticon. </li><li> Amministrare analgesia postoperatoria: meglumina flunixin 2,2 mg / kg IM una volta durante il recupero, poi 1,1 mg / kg IM una volta al giorno per due giorni, buprenorfina 0,005-0,01 mg IV o IM due volte al giorno per un giorno. </li></ol> 3. In Vivo Monitoring <ol><li> Mettere le pecore nel carrello mobile per garantire una corretta moderazione. In questo modo le pecore a mantenere la calma e consapevole, senza compromettere l&#39;hardware. Potrebbe essere necessario per ambientarsi pecore al carrello 2 o 3 volte per 30 minuti prima di ottenere registrazioni di strumentazione. </li><li> Rimuovere tutti i cavi e le linee dalla busta e la connessione a dispositivi di monitoraggio. Collegare la sonda del flusso di un misuratore di portata, cristalli 1 millimetro ultrasuoni collegato a TRBBox -USB, e cateteri linee a trasduttori di pressione. Un diagramma di flusso di questa configurazione è fornito (Figura 6). </li><li> Calibrare le sonde di flusso e trasduttori di pressione prima di acquisizione dati. NOTA: A causa della variabilità potenziale tra le versioni del software e le differenze nelle apparecchiature utilizzate, le tarature e le impostazioni varieranno da caso a caso. </li><li> Utilizzare un oscilloscopio per mettere a punto la misura di cristallo Sonometrics, secondo il protocollo del produttore. </li><li> Registrare i dati utilizzando il software del computer (Figura 7). Tracce nella metà superiore della figura 7 in colore bianco corrisponde al TEV impiantato, mentre tracce nella metà inferiore di colore rosso corrisponde al Sham / nativo. Sia per il TEV e Sham la portata (ml / min), la pressione sanguigna arteriosa (mmHg) e il diametro (mm) vengono registrate vivo. </li><li> Record per almeno 1 minuto, senza disturbi. Esportare questi dati per un&#39;analisi più dettagliata. Dopo la registrazione, disconnect tutti i cavi e posto nuovamente dentro il sacchetto suturato sul collo della pecora. </li></ol>

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<li>Han, J., Liu, J. Y., Swartz, D. D., Andreadis, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+functional+effects+of+organismal+ageing+on+smooth+muscle+cells+derived+from+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular and functional effects of organismal ageing on smooth muscle cells derived from bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Cardiovascular Research. 87, 147-155 (2010).</li>
</ol>

Non ci sono divulgazioni da segnalare.

Lo scopo di questo rapporto è quello di fornire una procedura affidabile e riproducibile di TEV impianto di interesse nella carotide ovine. Le arterie carotidi native degli animali utilizzati in questo modello sono stati 0,5-0,75 mm di spessore e 4,5-5 mm di diametro esterno. La tecnica chirurgica qui descritta ha avuto successo per l&#39;impianto di TEV di varie geometrie di misura 0,25-1 mm di spessore, 4-5 mm di diametro esterno e 4 cm di lunghezza con grande successo dimostrando efficace fino a 3 mesi di durata, il ...

L&#39;obiettivo principale per lo sviluppo di TEV è stato quello di fornire un sostituto per la sostituzione del trapianto autologo quando vasi autologhi non sono disponibili e limitare donatori di vista morbilità. Ad esempio, il numero di interventi di bypass coronarico all&#39;anno ha superato 350.000 negli Stati Uniti, e la fonte ideale di opportuni innesti rimane fianco arteria mammaria interna, discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria e safena 1. Dal momento che molte persone che soffrono di malattie vascolari non possono avere le arterie e le vene adatte per la sostituzione del trapianto autologo, lo sviluppo di TEV è così diventato un campo di intensa ricerca da decenni 1-6. Mentre la progettazione e l&#39;ottimizzazione di nuovi TEV hanno subito molti progressi, relazioni sulle tecniche chirurgiche impiegate per impiantare i TEV stessi non è stato un argomento di tale discussione intensa. Piuttosto, i protocolli per quanto riguarda l&#39;impianto di TEV in modelli animali sono in gran parte lasciatifino alla ricerca investigatori. Il seguente manoscritto illustrato come impiantare TEV utilizzando un approccio anastomosi end-to-end. Questa procedura è stata ottimizzata utilizzando uno specifico modello di sutura anastomotica, stabilizzante tecnica di sutura, ottimizzando tensione longitudinale e l&#39;aggiunta di monitoraggio in vivo strumentazione. Questo metodo è in contrasto con alcune delle molte varianti che sono state usate in precedenza. Inoltre, questa procedura viene descritto come acquisire i parametri come la pressione arteriosa, TEV diametro / conformità e portata attraverso il TEV dopo l&#39;intervento fino espianto. Questa raccolta di dati fornisce un&#39;analisi indispensabile del TEV mentre è in fase di rimodellamento.

<table><tbody><tr><td>Trasduttore di pressione</td><td>Becton Dickinson</td><td>P23XL-1</td><td>Quantità: 1+ (1 per ogni arteria). Utilizzato con cupole a membrana riempite d'acqua.</td></tr><tr><td>Scatola dell'amplificatore e del trasduttore</td> Gabbia del condizionatore di segnale <td>Gould</td><td>5900</td><td>Quantità: 1, Nella gabbia devono essere inclusi due trasduttori e amplificatori. Sebbene questa unità specifica possa essere interrotta, altri trasduttori di pressione disponibili in commercio con uscita BNC/analogica comunicheranno con l'apparecchiatura Sonometrics.</td></tr><tr><td>Console T403 con modulo flussimetro perivascolare TS420 (x2)</td><td>Sistemi transonici</td><td>Modulo T403 e TS420 (x2)</td><td>Quantità: 1, Le sonde di flusso che misurano il flusso attraverso ciascuna delle arterie carotidi si collegheranno a ciascuna delle unità TS420.</td></tr><tr><td>Unità di misura digitale ad ultrasuoni</td><td>Sonometrics</td><td>TR-USB</td><td>Quantità: 1</td></tr><tr><td>Sonda di flusso Precision S-Series 4&nbsp; mm</td><td>Sistemi transonici Inc.</td><td>MC4PSS-LS-WC100-CM4B-GA</td><td>Quantità: 2</td></tr><tr><td>1&nbsp; mm Sonometrics Crystals</td><td>Sonometrics Systems</td><td>1R-38S-20-NC-SH</td><td>Quantità: 2-4 (2 per ogni arteria)</td></tr><tr><td>Catetere per impianto</td><td>BD (Becton Dickinson)</td><td>&nbsp; 381447</td><td>Quantità: 1+ (1 per ogni arteria). Il catetere viene tagliato e fissato al tubo microborato, la stiletta viene utilizzata per l'inserimento.</td></tr><tr><td>Tygon Microbore Tubing</td><td>Norton Performance Plastics</td><td>(AAQ04127) Formulazione S-54-HL</td><td>Taglio a misura per un set di estensione</td></tr><tr><td>Luer Stub Adapter</td><td>BD (Becton Dickinson)</td><td>427564 (20 gauge)</td><td>Quantità: 1+ (1 per ogni catetere arterioso)</td></tr><tr><td>Tappo per iniezione Surflo</td><td>Terumo</td><td>SR-IP2</td><td>Quantità: 1+ (1 per ogni catetere arterioso)</td></tr><tr><td>Meadox</td><td>PTFE (Teflon) Feltro</td><td>19306</td><td>Taglio a misura. Il feltro PTFE utilizzato nei nostri studi è stato interrotto. Tuttavia, aziende comparabili come " Rete chirurgica" offrire prodotti equivalenti.</td></tr></tbody></table>

tecnica chirurgica per l&#39;impianto di ingegneria tessutale vascolari innesti e successive<em&gt; in vivo</em&gt; monitoraggio

Surgical Technique for the Implantation of Tissue Engineered Vascular Grafts and Subsequent In Vivo Monitoring

Lo sviluppo di ingegneria tessutale Vessels (TEV) è avanzata dalla capacità di di routine ed efficace TEV impianto (4-5 mm di diametro) in un grande modello animale. Un protocollo passo-passo per il posizionamento tra posizionale della valutazione TEV digitale in tempo reale del TEV e arterie carotidi native è descritto qui. In vivo monitoraggio è reso possibile dal impiantazione di sonde di flusso, cateteri e cristalli ultrasonici (grado di registrare i cambiamenti di diametro dinamici di TEV impiantati e delle arterie carotidi native) al momento della chirurgia. Una volta impiantato, i ricercatori possono calcolare i modelli flusso di sangue arterioso, invasiva della pressione arteriosa e del diametro dell&#39;arteria che producono parametri come la velocità dell&#39;onda di polso, indice di aumento, le pressioni di impulsi e la conformità. L&#39;acquisizione dei dati viene eseguita utilizzando un singolo programma per computer per l&#39;analisi per tutta la durata dell&#39;esperimento. Tali dati inestimabile permette di comprendere meglio TEV rimodellamento della matrice, la sua resemblanCé a controlli nativi / sham e prestazioni TEV generale in vivo.

Più di 30 pecore sono stati sottoposti alla tecnica chirurgica descritta nella presente relazione per l&#39;impianto di TEV (in corso di stampa) 9. Una tabella che riassume le più recenti operazioni di ovini dopo l&#39;ottimizzazione del protocollo sono riportati nella tabella 2. Tutte le pecore recuperati dopo TEV l&#39;impianto senza pericolo di vita complicazioni. In alcuni animali, la fibrosi è stata osservata in arteria nativa vicino alla punta del catetere arterioso. Non è stato osserva...

Un protocollo step-by-step per il collocamento inter-posizionale di ingegneria tessutale Vessels (TEV) nella carotide di una pecora con anastomosi end-to-end e di valutazione digitale in tempo reale in vivo fino al sacrificio degli animali.

Tecnica chirurgica per l&#39;impianto di ingegneria tessutale vascolari Innesti e successive<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio

The development of Tissue Engineered Vessels (TEVs) is advanced by the ability to routinely and effectively implant TEVs (4-5 mm in diameter) into a large ...

L'obiettivo generale di questa procedura è fornire un protocollo riproducibile per l'impianto chirurgico di innesti vascolari e una nuova strumentazione nell'arteria carotide. Ciò si ottiene asportando prima una sezione dell'arteria carotide nativa in una pecora. Il secondo passo consiste nella sutura nell'innesto vascolare qui indicato come vaso di ingegneria tissutale o TEV utilizzando semplici punti interrotti e per stabilire l'anastomosi.Successivamente, un catetere con sonda di flusso. E così i cristalli metrici vengono fissati sull'arteria carotide e sull'innesto vascolare. In definitiva, dopo l'impianto, questa procedura consente di registrare in vivo le variazioni di diametro, il flusso sanguigno e le pressioni arteriose per tutta la durata dell'esperimento.Da queste misurazioni, la compliance dinamica, la velocità dell'onda del polso e altri parametri emodinamici possono essere monitorati per seguire il rimodellamento in vivo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce un protocollo di impianto di innesti vascolari ottimizzato e dettagliato che può diventare una pratica standard, riducendo così al minimo la variabilità chirurgica e fornendo un mezzo per studiare il rimodellamento in vivo. In generale, gli individui che non conoscono questo metodo possono avere difficoltà perché potrebbero non avere familiarità con i dettagli della procedura di impianto ottimizzata e l'importanza del monitoraggio dell'innesto vascolare, dell'adattamento e del rimodellamento in vivo.Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dello sviluppo e della biologia degli innesti vascolari, come le condizioni ottimali di ingegneria dei tessuti vascolari e il rimodellamento e la malattia degli innesti vascolari. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia della sostituzione vascolare perché fornisce una procedura per studiare meglio lo sviluppo di innesti vascolari per applicazioni cliniche. Attraverso questo metodo, possiamo fornire approfondimenti sullo studio dell'ingegneria tissutale dell'intero organo e del rimodellamento vascolare e di malattie come l'ipertensione o persino il trapianto di intero organo.Abbiamo avuto questa idea per la prima volta quando abbiamo utilizzato un modello di shunt arterovenoso ex vivo per valutare le condizioni ottimali per lo sviluppo di un innesto vascolare di ingegneria tissutale. La dimostrazione visiva di questo metodo è essenziale in quanto il posizionamento delle suture e della strumentazione è fondamentale per la pervietà e il successo dell'acquisizione dei dati. Per iniziare questa procedura, indurre le pecore per l'anestesia e preparare le pecore per l'intervento chirurgico.Come descritto nel protocollo di testo, praticare un'incisione di circa 12 centimetri nel senso della lunghezza sul collo della linea mediana ventrale utilizzando l'elettrocauterizzazione. Quindi, quindi isolare le arterie carotidi sinistra e destra rimuovendo il tessuto connettivo. Utilizzando una tecnica di dissezione smussata, allungare la mano sotto il telo sterile e girare la testa della pecora in modo che il lato del collo possa essere visualizzato sotto il drappo.Utilizzare un emostatico curvo di otto centimetri per scavare un tunnel attraverso lo spazio sottocutaneo tra l'incisione ventrale del collo della linea mediana e il lato del collo. Aprire e chiudere l'emostatico per sezionare senza mezzi termini uno spazio per il tubo largo circa 1,5 centimetri. Allungare la mano sotto il telo sterile e praticare un'incisione di 1,5 centimetri attraverso la pelle sopra le punte dell'emostatico con una lama sterile numero 11.Far passare il tubo tigon contenente tutti i cavi e i tubi attraverso il tunnel sottocutaneo. Tenere i fili e i tubi sopra il telo sterile. Quindi allunga la mano sotto il telo per rimuovere il tubo tigon esterno dal collo, esponendo il cablaggio impiantato mentre lascia il collo della pecora.Estrarre le singole linee per ridurre al minimo l'allentamento dello spazio sottocutaneo. Lasciare una distanza sufficiente per fissare correttamente la strumentazione all'arteria. Dopo aver posizionato le sonde di flusso doppler e somministrato l'eparina come descritto nel protocollo di testo, bloccare l'arteria carotide utilizzando pinze vascolari non schiaccianti e asportare una porzione di circa quattro centimetri di lunghezza.Sutura il vaso di ingegneria tissutale o TEV in posizione utilizzando semplici punti interrotti con lega 7.0 prolina F. Sutura monofilamento a doppio braccio. Per prima cosa ancorare quattro punti del TEV all'arteria nativa posizionando due punti opposti su entrambe le estremità prossimale e distale.Quindi aggiungere altre cinque o sei suture sul lato superficiale di entrambe le estremità prossimale e distale. Per iniziare l'anastomosi contemporaneamente, ruotare le pinze vascolari di 180 gradi, ristabilire la tensione sulle suture di ancoraggio e aggiungere da cinque a sei suture interrotte aggiuntive alle estremità prossimale e distale sul lato ruotato del TEV. Una volta che il TEV è saldamente suturato in posizione, ruotarlo di nuovo nella posizione originale e rimuovere i morsetti vascolari uno alla volta, prima il morsetto distale.Quindi, sutura cristalli ultrasonici di un millimetro ai lati opposti del TEV. Utilizzando il 7.0, il cateterismo prolina dell'arteria utilizza un catetere calibro 18 modificato con una placca tessuta in teflon. Suturare la placca alla parete arteriosa con 5,0 a theon per controllare eventuali emorragie.Utilizzare il ciclone per far aderire il tubo microforo al catetere che è stato lavato con soluzione fisiologica. Successivamente, fissa le linee e i fili impiantati alla muscolatura vicina utilizzando seta 2.0 e un ago conico. Per fare ciò, posizionare il filo della sonda del flusso vascolare parallelamente al vaso con la capsula della sonda e il filo che si estende verso il cran, quindi facendo un'inversione a U verso la muscolatura laterale.Fissare il filo alla muscolatura adiacente utilizzando seta 2.0 su un ago conico in due punti in modo che il filo o la sonda di flusso non siano in grado di esercitare alcuna tensione sul vaso. Quindi sutura i fili di cristallo e la linea del catetere arterioso alla muscolatura laterale, lasciando circa 1,5 centimetri di gioco simile ai passaggi precedenti per fissare la sonda di flusso, raggruppare tutti i fili e le linee insieme e ancorarli alla muscolatura appena prima di uscire attraverso il tunnel sottocutaneo. Simile alla precedente S, chiudere il sito chirurgico con una sutura Vicryl 2.0 a strati utilizzando un modello di sutura in esecuzione sulla fascia e sottocutanea e un punto a materasso in esecuzione sulla pelle.Chiudere l'incisione di 1,5 centimetri sul collo dorsale attorno ai fili e alle linee esteriorizzate utilizzando Vicryl 2.0 e un ago da taglio. Infine, posizionare i fili della sonda di flusso, le linee del catetere e i fili di cristallo a ultrasuoni in una sacca suturata saldamente alla pelle della pecora. Vedere il protocollo di testo per l'assistenza postoperatoria delle pecore Posizionare le pecore in un carrello mobile per garantire un'adeguata contenzione.Ciò consente alle pecore di rimanere calme e coscienti senza compromettere l'hardware. Rimuovere tutti i fili e le linee dalla custodia e collegarli ai dispositivi di monitoraggio. Connetti il flusso.sonda a un flussometro, i cristalli ultrasonici da un millimetro alla scatola A-T-R-B-U-S-B e le linee del catetere ai trasduttori di pressione. Calibrare le sonde di flusso e i trasduttori di pressione. Prima dell'acquisizione dei dati.Utilizza un oscilloscopio per mettere a punto la misurazione del cristallo SOE. Secondo il protocollo del produttore, registrare i dati utilizzando il software del computer qui. La metà superiore di colore bianco corrisponde al TEV impiantato mentre la metà inferiore di colore rosso corrisponde alla finzione o arteria nativa sia per il TEV che per la finzione.Vengono registrati il diametro, la portata e la pressione arteriosa. Live dopo aver registrato per almeno un minuto senza disturbi. Esporta questi dati per un'analisi più dettagliata.Quindi scollegare tutti i fili e rimetterli nella sacca suturata sul collo della pecora. Mostrato. Ecco la registrazione in vivo in vivo del diametro, della portata e della pressione arteriosa del TEV, che può essere registrata per tutta la durata dell'esperimento. Ottimizzazione dell'impianto di innesti vascolari.L'uso di questa tecnica chirurgica consente ai ricercatori di escludere l'errore chirurgico come causa del fallimento dell'innesto. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in appena due ore e mezza o tre ore. Se viene impiantato un TEV o fino a sei ore e mezza. Se si deve impiantare anche una finzione autologa TEV e la strumentazione Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di mantenere un livello adeguato di anticoagulazione.Utilizzare agenti vasodilatatori con una precisione ottimizzata nel posizionamento della sutura anastomotica Seguendo questa procedura. Altri metodi, come l'immunocolorazione, possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive come la migrazione cellulare e la differenziazione cellulare. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come impiantare vasi di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di una pecora, nonché di come monitorare il flusso sanguigno arterioso, la pressione sanguigna e i cambiamenti nell'innesto vascolare, diametro in vivo.Non dimenticare che lavorare con pecore e altri animali di grandi dimensioni per l'uso in un ambiente sperimentale deve seguire precauzioni specifiche per specie. Se hai intenzione di lavorare con questi grandi animali per i tuoi studi, assicurati di essere adeguatamente addestrato per gestire questi animali in modo sicuro ed etico. Grazie per aver guardato il nostro video.

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Bioingegneria

Il nostro gruppo ha sviluppato un sistema di coltura bioreattore che imita lo stress pulsatile fisiologica del sistema cardiovascolare per rigenerare impiantabili protesi vascolari di piccolo diametro.

Ingegneria biologica basata innesti vascolari Utilizzando un bioreattore pulsatile

Un metodo per il titanio semina sangue a contatto con le cellule autologhe biomateriali e biocompatibilità test è descritta. Questo metodo utilizza cellule progenitrici endoteliali e tubi in titanio, teste di serie in pochi minuti di impianto chirurgico nelle cave cavae suina. Questa tecnica è adattabile a molti altri dispositivi biomedici impiantabili.

Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni

Per migliorare la nostra conoscenza della formazione neotissue cellulare e molecolare, un modello murino della TEVG è stata sviluppata di recente. Gli innesti sono stati impiantati come infrarenali innesti vena cava interposizione di C57BL / 6 topi. Questo modello raggiunge risultati simili a quelli ottenuti nella nostra ricerca clinica, ma nel corso di un time-course di gran lunga ridotto.

L&#39;impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Qui, vi presentiamo un protocollo per generare ingegneria dei tessuti dei vasi innesti che sono funzionali per l'innesto in topi con un doppio semina cellule staminali pluripotenti indotte in parte (PiPSC) - derivato cellule muscolari lisce e PiPSC - cellule endoteliali derivate su una nave decellularized ponteggio bioreattore.

Generazione e innesto delle navi tissutale in un modello di topo

Ad oggi, i difetti dei tessuti spessi vengono tipicamente ricostruiti applicando lembi di tessuto autologo o tessuti ingegnerizzati. In questo protocollo, presentiamo un nuovo metodo per l'ingegnerizzazione di un lembo di tessuto vascolarizzato con un peduncolo autologo, per fungere da sostituto dei lembi autologhi.

Progettato Vascolarizzato muscolare Flap

Questa è una linea guida per la costruzione di tessuto vascolarizzato in vivo utilizzando un circuito arterovenoso microchirurgico o una configurazione peduncolare a flusso continuo all'interno di una camera di ingegneria tissutale. I tessuti vascolarizzati generati possono essere impiegati per la rigenerazione degli organi e la sostituzione di difetti tissutali, nonché per test farmacologici e modellazione della malattia.

Ingegneria dei tessuti da parte intrinseca Vascolarizzazione in un<em&gt; In Vivo</em&gt; Camera ingegneria dei tessuti

Descriviamo un approccio microchirurgico per la generazione di un loop arterovenosa (AV) come un modello di analisi vascolarizzazione in vivo in un ambiente isolato e ben caratterizzato. Questo modello non è solo utile per l'indagine di angiogenesi, ma è anche perfettamente adatto per l'ingegneria vascolarizzato assialmente e tessuti trapiantabili.

Il arterovenosa (AV) loop in un modello di Piccoli Animali per studiare Angiogenesi e ingegneria dei tessuti vascolarizzati

Scalabili vasi sanguigni ingegnerizzati migliorerebbero applicabilità clinica. Uso delle guide facilmente considerevoli 3D-stampati, anelli di muscolatura liscia vascolare sono stati creati e accatastati in una forma tubolare, formando un innesto vascolare. Innesti possono essere dimensionati per soddisfare la gamma di dimensioni delle arterie coronarie umane semplicemente cambiando la dimensione guida 3D-stampata.

Scaling di Engineered vascolari innesti Usando 3D Stampato Guide e il metodo di impilamento Anello

Qui, presentiamo un metodo di elettrofilatura modificate per fabbricare gli innesti vascolari PCL con fibre spesse ed i grandi pori e descrivere un protocollo per valutare l'efficacia in vivo in un modello del ratto di sostituzione dell'aorta addominale.

Impianto degli innesti vascolari elettrofilate con struttura ottimizzata in un modello del ratto

Qui, viene presentato un protocollo per l'impianto di un innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo utilizzando la tecnica della cuffia, fornendo un modello animale adatto per studiare i meccanismi di rigenerazione del tessuto vascolare.

Impianto di innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo tramite tecnica della cuffia

Questo studio presenta un modello suino per la valutazione di innesti di piccolo diametro nelle arterie femorali. Il modello imita la dinamica vascolare umana e valuta in modo completo la pervietà dell'innesto, l'emodinamica e il rimodellamento vascolare. Offre una preziosa piattaforma per testare gli innesti vascolari e monitorarli con l'ecografia Doppler e l'angiografia.

Impianto di innesto vascolare femorale in un modello suino per testare innesti vascolari di piccolo diametro

Impara l'impianto chirurgico di vasi ingegnerizzati (TEV) nell'arteria carotidea di pecore con monitoraggio emodinamico in tempo reale. Questo protocollo ottimizzato consente di studiare il rimodellamento vascolare in vivo.

Tecnica chirurgica per l'impianto di ingegneria tessutale vascolari Innesti e successive

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