Name: Moderata esposizione prenatale di alcool e quantificazione di comportamento sociale in ratti adulti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Scopri come esporre ratti a alcol prenatale moderato e quantificare i comportamenti sociali nell'età adulta. Questo metodo aiuta a studiare gli effetti dello sviluppo prenatale sul cervello.

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Tutte le procedure qui e nel video allegato descritti sono stati approvati dalla cura e utilizzo dei Comitati animali istituzionale del Health Sciences Center e il campus principale della University of New Mexico. 1. prenatale Etanolo Esposizione <ol><li> Ottenere tutti i materiali e le sostanze chimiche necessarie: Saccarina idrato sale di sodio, 190 etanolo prova (alcool al 95% in volume), tubi di bere vetro perline, gomma naturale bianco # 4 tappo un foro, 1 &quot;punto di curvatura tubi-ball, governanti carta stampata da www .vendian.org / mncharity / dir3 / paper_rulers /. </li><li> Ottenere provati ratti allevatore adulto da un fornitore o fonte alternativa. Utilizzare allevatori lungo Evans per i metodi ei dati rappresentativi presentati in questo protocollo. Le femmine pesano 125-150 g e 6-7 settimane di età all&#39;arrivo tale che essi sono di circa 9-10 settimane al momento della riproduzione (passo 1.5). Assicurarsi che tutti i futuri dighe sono primipare. Assicurarsi che i maschi sono 12settimane di età in arrivo e 15 settimane all&#39;inizio del protocollo allevamento. </li><li> Casa gli animali singolarmente in gabbie di plastica a 22 ° C su un rovescio 12 ore di luce / buio calendario (si accende 21:00-9:00 hr). Fornire l&#39;accesso a cibo e acqua del rubinetto ad libitum per tutto lo studio, anche durante tutte le sessioni di bere. Lasciare almeno 1 settimana per acclimatazione alla struttura prima di procedere alla fase 1.4. </li><li> Ottenere peso corporeo di base per ogni ratto femmina. </li><li> Valutare i livelli di consumo pre-gravidanza nei ratti femmina per 2 settimane. Seguire i passaggi 1.5.1-1.5.6 in ordine. <ol><li> Nei giorni 1 e 2 riempire un tubo potabile contenente 0,066% soluzione saccarina (senza etanolo) in acqua di rubinetto. Per quantificare il consumo di apporre un righello di carta con precisione mm al tubo di bere prima di riempirlo. Utilizzare questo metodo in quanto riduce gli errori in misura associata pesatura tubi per quantificare il consumo di etanolo. Riempire il tubo per i 20 mm del righello. Inizia quattro ore drinkisessioni ng (passi 1.5.1-1.5.6 e 1.7) 1 ora dopo l&#39;inizio della fase di buio (10:00 ore), quando i livelli di attività e bere sono più elevati. </li><li> Al termine di ogni sessione potabile quantificare il volume della soluzione di saccarina che è stato consumato. Per facilitare la misurazione, determinare il volume di soluzione per mm sul righello in anticipo e convertire mm volumi. Per i tubi raccomandate qui ogni mm corrisponde a 0,366 ml. </li><li> Nei giorni 3 e 4 riempire un tubo con 2,5% di etanolo (v / v) e la soluzione di saccarina 0,066% in acqua di rubinetto. Al termine di ogni sessione di quantificare la quantità di soluzione di etanolo (peso per kg di peso corporeo) che è stato consumato. </li><li> Il giorno 5 e successivamente riempire un tubo con 5% di etanolo (v / v) e la soluzione di saccarina 0,066% in acqua di rubinetto. Al termine di ogni sessione di quantificare la quantità di soluzione di etanolo (peso per kg di peso corporeo) che è stato consumato. </li><li> Al completamento della fase di pre-gravidanza potabile pesare i ratti e calcolare il consum etanolo medioption e deviazione standard per l&#39;intero gruppo. Rimuovere i ratti per il che significa il consumo è maggiore di 1 deviazione standard sopra o sotto il gruppo media dallo studio per ridurre la variabilità nel bere volontaria durante la gravidanza. </li><li> Assegnare i rimanenti ratti sia al controllo saccarina o condizioni PAE tali che i livelli bere pre-gravidanza sono abbinati il ​​più possibile per i due gruppi. </li></ol></li><li> Entro 1-14 giorni coppia ogni ratto femmina con un allevatore di sesso maschile provata. Ratti femmina non consumano etanolo durante la fase di riproduzione. Confermare la gravidanza dalla presenza di un tappo vaginale, pesare il ratto femmina, e la casa dei suoi individualmente. Questo è definito come il giorno di gestazione 1. Facoltativamente, lasciare i ratti femmina con un allevatore di sesso maschile per un massimo di 5 giorni, dopo che rimuovono le femmine dallo studio. NOTA: poiché il consumo di etanolo durante la gravidanza inizia alle 10:00 ora il gestazionale giorno 1 di ispezione per la presenza di un tappo vaginale deve essere eseguitaprima di questo tempo. </li><li> Fornire soluzioni etanolo o saccarina per 4 ore al giorno (1.000 a 1.400 ore) per la durata della gravidanza. <ol><li> A partire dal giorno di gestazione 1 forniscono il topo femmina con uno 0% o 5% di etanolo e la soluzione di saccarina 0,066% in acqua di rubinetto in base alla assegnazione di gruppo. Assicurarsi che il volume di soluzione di etanolo 0% fornito ai ratti di controllo saccarina corrisponde al volume medio di soluzione di etanolo al 5% consumata dai topi etanolo. Al termine di ogni sessione di quantificare la quantità di soluzione di etanolo (peso per kg di peso corporeo) o la saccarina che è stato consumato. </li><li> Pesare dighe ratto settimanale per valutare l&#39;aumento di peso materno. </li><li> Fornire cibo e acqua del rubinetto in ogni momento, tra cui le bevute. </li><li> Cessate le procedure di esposizione etanolo quando la prole sono nati. Registrare il numero di cuccioli vivi e pesi dei cuccioli alla nascita. Designare il giorno della nascita come postnatale giorno 0. </li><li> Abbattere la cucciolata di 10 cuccioli in giro giorno postnatale 2-3. Tentativo to mantenere una parità di rapporto maschi femmine in ogni cucciolata. Se questo non è possibile, abbattere a 10 cuccioli con un numero disuguale di maschi e femmine. </li><li> Registra pesi cuccioli 2-3 giorni dopo la nascita. </li><li> Svezzare gli animali al giorno circa 21-24 postnatale e la casa a coppie dello stesso sesso con un animale della stessa condizione trattamento prenatale. Non utilizzare più di 1-2 ratti da ogni disordine per esperimento per limitare i potenziali effetti del disordine. </li></ol></li></ol> 2. Social Behavior <ol><li> Ottenere e preparare tutti i materiali e le attrezzature necessarie. <ol><li> Ottenere un apparato per l&#39;interazione sociale. Usare una camera con una parte superiore aperta costruito di materiale facile da pulire e sterilizzare. La parte anteriore dell&#39;apparecchio deve essere coperto con plastica rigida trasparente (~ spessore 2 mm) per le riprese. Linea le pareti interne e il pavimento con plastica trasparente (~ 2 mm di spessore) per aiutare nella pulizia e controllo degli odori. Specchi svolge lungo il wa interno posteriorell per aiutare l&#39;analisi. NOTA: Per i dati rappresentativi riportati qui una camera personalizzato (95 cm di lunghezza × 47 centimetri di larghezza di altezza × 43 cm), con un top aperto e trasparente di plastica rigida (2 mm di spessore) che copre i fianchi interni e piano dell&#39;apparato è stato utilizzato. Specchi sono stati collocati lungo la parete di fondo. Le dimensioni e materiali specifici non sono critici per la misurazione del comportamento sociale, tuttavia, è consigliabile che le dimensioni essere sufficientemente grande da garantire che autentica interazione sociale può essere distinto da altri comportamenti. Cioè, l&#39;apparato deve essere abbastanza grande in modo che gli animali non sono sempre in stretta vicinanza l&#39;uno all&#39;altro. </li><li> Ottenere telecamere in grado di registrare in condizioni di luce bassa o come non tutte le riprese è condotta con illuminazione poco o nessun ambiente all&#39;interno dello spettro visibile. Assicurarsi che la fotocamera ha una risoluzione elevata nello spettro infrarosso, tuttavia, qualsiasi fotocamera in grado di registrare in condizioni di oscurità nella sua nativamodalità notte o con l&#39;aggiunta di illuminatori a infrarossi dovrebbe essere sufficiente. </li><li> Posizione illuminatori infrarossi intorno all&#39;apparecchio per migliorare l&#39;illuminazione dell&#39;apparecchio nella registrazione video. </li><li> Ottenere cippato grado di laboratorio (di chip pioppo). </li><li> Ottenere un pennello, paletta, biossido di cloro e alcool isopropilico (70%) per pulire l&#39;apparecchio tra le sessioni e controllo degli odori. </li></ol></li><li> Acclimatazione Apparato e il comportamento sociale <ol><li> Per questa fase dell&#39;esperimento, effettuare misurazioni in ratti adulti che sono almeno 90 giorni di età. </li><li> Prima di ogni sessione di rimuovere eventuali trucioli boschi, pulire l&#39;apparecchio pulito con alcool isopropilico per controllare gli odori tra le sessioni e fornire cippato fresco. Assicurarsi che i trucioli coprono interamente il fondo dell&#39;apparecchio. Pulire e disinfettare l&#39;apparato con un agente appropriato, ad esempio il biossido di cloro, come necessario. </li><li> Per tre giorni consecutivi inserire un suo compagno di gabbia degli animali e nellacamera per 30 minuti per acclimatare animali all&#39;apparecchio. Durante le sessioni di acclimatazione tutte le luci delle camere sono spente. </li><li> Alla fine della terza sessione di acclimatazione casa gli animali singolarmente in nuove gabbie con biancheria fresca, cibo e acqua per 24 ore per motivare l&#39;interazione sociale. </li><li> Record interazione sociale il giorno 24 ore dopo gli animali sono stati separati. <ol><li> Rimuovere i trucioli di legno dall&#39;apparecchio, pulito e disinfettare con biossido di cloro, pulire con alcool isopropilico per controllare gli odori, e sostituire i trucioli di legno prima della sessione. </li><li> Posizionare una o più telecamere per registrare l&#39;interazione. Posizione almeno una telecamera di fronte dell&#39;apparecchiatura in modo che gli specchi sulla parete posteriore dell&#39;apparecchio può fornire un&#39;ulteriore prospettiva per l&#39;analisi. </li><li> Recupero animali uno alla volta e tenere l&#39;animale di fronte alla telecamera in modo che le caratteristiche uniche della pelliccia modello possono notare. Questi elementi di identificazione diil pelo può essere utilizzata per distinguere ratti durante l&#39;analisi anziché marcatura artificialmente gli animali. NOTA: Poiché molti aspetti del roditore interazione sociale coinvolgono i segnali olfattivi e odorare il partner, ovunque devono essere evitati eventuali odori estranei introduzione. Ratti lunghi-Evans hanno tipicamente qualche caratteristica del modello di pellicce che può essere utilizzata per distinguere una data coppia di animali. Per altri ceppi (ad esempio, ratti Sprague-Dawley) potrebbero essere utilizzati approcci alternativi come la marcatura della coda con un colorante inodore. E &#39;importante riconoscere che molti comportamenti di interesse sono diretti verso obiettivi specifici (ad es., Anogenitale sniffing diretto vicino alla base della coda, attacchi giocose diretti alla nuca, o attacchi aggressivi diretti verso i fianchi o la pancia). Marcatura gli animali più vicino alla punta della coda lontano da questi bersagli di interesse è raccomandato. </li><li> Registrazione video della interazione sociale per almeno 12 min.</li><li> Monitorare gli animali per combattere per tutta la sessione. Se possibile, osservare gli animali tramite un monitor o finestra in modo che lo sperimentatore non è nella camera durante la sessione. NOTA: Fighting è stato solo raramente osservata in studi con ratti adulti, invece, gli animali devono essere monitorati per tutta la sessione. La sessione dovrebbe essere cessato se non vi è lotta eccessiva o vi sono segni di danni o lesioni ad un animale. </li></ol></li></ol></li><li> Codifica comportamentale e analisi. <ol><li> Identificare i seguenti comportamenti di interesse di cui al precedente lavoro con PAE 1,18. Quantificare la durata, la frequenza e la latenza di prima occorrenza dei seguenti comportamenti; wrestling (compresi pinning), pugilato, strisciando (incrocio) sopra / sotto il partner, anogenitale sniffing, altro sniffing del corpo del partner (corpo sniffing), allogrooming (grooming del partner), l&#39;allevamento, e sniffing / scavando nei trucioli di legno . Esempi di ogni comportamento sono illustrared nel componente video di questo articolo. </li><li> Quantificare i comportamenti sociali di interesse dal video. Ottenere la frequenza, la durata totale e la latenza di prima istanza per ogni comportamento di interesse. NOTA: Ottenere queste misure può essere realizzato manualmente, tuttavia, si raccomanda di quantificazione con analisi computerizzate di video digitalizzato. A Matlab (www.mathworks.com) script per la riproduzione del video e la quantificazione dei comportamenti è fornita come supplemento a questo articolo. </li><li> Dopo codifica completata per tutti i ratti i dati relativi alla durata, frequenza e latenza risultanti vengono analizzati con un pacchetto statistico. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Il paradigma esposizione prenatale qui descritto comporta il consumo volontario di etanolo (5% v / v) di dighe ratto durante la gravidanza. Ci sono un certo numero di protocolli per esporre gli animali non umani a etanolo durante lo sviluppo cerebrale rappresentato in letteratura, che differiscono rispetto alla temporizzazione, dose, la durata e la via di somministrazione etanolo nonché specie in esame. Anche se uno studio approfondito dei vantaggi dei vari protocolli di esposizione non è fornito qui, numerosi vantaggi ...

Si stima che circa 1-5% dei bambini sono diagnosticati con Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs) 2, che comprendono la sindrome alcolica fetale (FAS), parziale FAS (PFA), e alcolcorrelati dello sviluppo neurologico Disturbi (ARNDs) 3. I deficit nel comportamento sociale e cognizione sono tra gli esiti avversi più comuni osservati nei bambini con FASDs 4-7. Conseguenze negative non sono limitati a forte esposizione prenatale (PAE), come moderato PAE che non porta al deficit morfologici, comportamentali e cognitivi cospicua caratteristica del FAS può causare relativamente sottili, ma comunque persistente, deficit negli esseri umani con FASDs 8-10 e gli animali non umani esposti all&#39;etanolo durante lo sviluppo del cervello 11. L&#39;importanza di comprendere le conseguenze neurobiologiche comportamentali e corrispondenti di moderata PAE è sottolineata da stime attuali indicano che la grande maggioranza dei casi FASD rientrano fra le meno sgamma Evere dello spettro 12. Diversi laboratori indipendenti hanno segnalato alterazioni roditore comportamento sociale legati a etanolo esposizione durante lo sviluppo del cervello, tra cui una diminuzione di indagine e di interazione 1,13-15, alterata gioco 14,16,17, aumento interazioni aggressive 17,18, alterazioni nella risposta a stimoli sociali 19-21, e deficit in preferenze alimentari socialmente acquisite e la memoria di riconoscimento sociale 22. Deficit comportamento sociale sono stati osservati a seguito dell&#39;esposizione ad pesanti (concentrazioni di etanolo nel sangue (BECS) ~ 300 mg / dl) 22,23 o livelli più moderati di etanolo (BEC ~ 80mg / dl) 1, e attraverso una vasta gamma di parametri per altro significativo fattori, tra cui i tempi di esposizione, durata dell&#39;esposizione, e l&#39;età al momento della valutazione del comportamento. Precedenti ricerche hanno dimostrato che le alterazioni in aspetti specifici di int socialeeraction in età adulta discriminare ratti esposti a livelli moderati di alcol da animali di controllo esposti a saccarina 1,18. In particolare, moderata PAE ha sempre stato associato con aumenti robusti di wrestling, che suggerisce un aumento del comportamento aggressivo, e più bassi livelli di indagine sociale (ad esempio, fiutando del partner) in età adulta. Perché alterazioni nel comportamento sociale sono conseguenze affidabili PAE, la quantificazione del comportamento sociale in seguito PAE può tenere importanza per progredire verso una più completa comprensione delle basi neurali di alterazioni PAE-correlate nel comportamento sociale e lo sviluppo di approcci interventistici. L&#39;obiettivo di questo documento e il video associato è di fornire istruzioni sul protocollo PAE moderato e metodi per la quantificazione del comportamento sociale in figli adulti che hanno affidabile distinto prenatale alcol esposti da prole non esposti rat.

<table><tbody><tr><td>Saccarina sale di sodio idrato</td><td>Sigma</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190 prova etanolo</td><td>Sigma</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>Tubi per bere in vetro perline</td><td>Fisher</td><td>14-955K</td><td></td></tr><tr><td>Gomma naturale bianca #4 tappo un foro</td><td></td><td>Plasticoid LSG4M181</td><td></td></tr><tr><td>1 "tubi piegati-punto a sfera</td><td>Ancare</td><td>TD-199-3 "</td><td></td></tr><tr><td>Carta righelli</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td><a href="http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers</a></td></tr><tr><td>Apparecchio per l'interazione sociale</td><td>Costruito su misura</td><td>N/A</td><td>95 cm X 47 cm X 43 cm</td></tr><tr><td>Videocamere</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>In grado di registrare condizioni di luce scarsa/assente</td></tr><tr><td>Illuminatori a infrarossi</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>Teklad per prove di laboratorio sani-chips</td><td>Harlan</td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>Spazzola e paletta</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Alcool isopropilico</td><td>Sigma</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>Biossido di cloro (compresse da 1,5 mg)</td><td>Quiplabs</td><td>N/A</td><td>Prepare secondo la raccomandazione del produttore</td></tr></tbody></table>

moderata esposizione prenatale di alcool e quantificazione di comportamento sociale in ratti adulti

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

Le alterazioni del comportamento sociale sono tra le principali conseguenze negative osservate nei bambini con Disturbi dello Spettro Fetale Alcolico (FASD). Diversi laboratori indipendenti hanno dimostrato robuste alterazioni nel comportamento sociale dei roditori esposti all'alcol durante lo sviluppo cerebrale in un'ampia gamma di durate di esposizione, tempi, dosi ed età al momento della quantificazione comportamentale. Il lavoro precedente di questo laboratorio ha identificato alterazioni affidabili in specifiche forme di interazione sociale a seguito di una moderata esposizione prenatale all'alcol (PAE) nel ratto che persistono fino all'età adulta, tra cui un aumento del wrestling e una diminuzione delle indagini. Queste alterazioni comportamentali sono state utili nell'identificare i circuiti neurali alterati da PAE1 moderato e possono essere importanti per progredire verso una comprensione più completa delle basi neurali delle alterazioni correlate a PAE nel comportamento sociale. Questo articolo descrive le procedure per l'esecuzione di PAE moderate in cui le madri di ratto consumano volontariamente etanolo o saccarina (controllo) durante la gestazione e la misurazione dei comportamenti sociali nella prole adulta.

Nel corso di molti cicli di allevamento ratti femmina nella condizione etanolo bere costantemente una media di circa 2,1 g / kg di etanolo per 4 hr bevuta. Dighe Rat consumano circa la metà del totale di quattro ore durante il primo 15 a 30 minuti dopo l&#39;introduzione dei tubi bere, causando un picco di concentrazione di etanolo nel siero materno di circa 60 mg / dl, misurata al punto di tempo di 45 min. Il restante 3,5 ore del periodo di bere, continuano a consumare 5% di etanolo a un tasso inferiore, ma relativamen...

L'obiettivo del protocollo qui presentato è descrivere le procedure per esporre i ratti a livelli moderati di alcol durante lo sviluppo cerebrale prenatale e quantificare le alterazioni risultanti nel comportamento sociale durante l'età adulta.

Moderata esposizione prenatale di alcool e quantificazione di comportamento sociale in ratti adulti

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

Esposizione prenatale moderata all'alcol e quantificazione del comportamento sociale in ratti adulti. Questo video descrive un paradigma di esposizione prenatale all'alcol seguito dalla quantificazione del comportamento sociale nell'età adulta. Tutte le procedure descritte in questo video sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali del Centro per le Scienze della Salute e del campus principale dell'Università del Nuovo Messico; si inizia ottenendo ratti femmine adulti di età compresa tra le sei e le sette settimane, che pesano mediamente tra 125 e 150 grammi, e riproduttori maschi di ratti provati.In genere, a 12 settimane di età si concede almeno una settimana affinché gli animali si ambientino al nuovo ambiente di alloggio. Nel complesso, il cronoprogramma dell'esposizione prenatale all'alcol comprende un periodo pre-esposizione di due settimane, un periodo di accoppiamento durante il quale gli animali non hanno accesso all'alcol e un periodo di esposizione prenatale, che avviene per tutta la durata della gestazione. I dettagli di ogni fase sono i seguenti.Per valutare i livelli di assunzione di alcol prima della gravidanza, le femmine di ratto consumano volontariamente acqua addolcita con saccarosio contenente concentrazioni crescenti di alcol per un periodo di due settimane. Lo scopo di questa valutazione è identificare i ratti che assumono alcol ai livelli desiderati per le fasi successive del protocollo di assunzione. Questo aspetto del paradigma di esposizione all'alcol garantisce inoltre che tutte le femmine di ratto abbiano sperimentato l'assunzione di alcol prima della gravidanza.Preparare i tubi da bere raccogliendo le seguenti forniture. Sale sodico di saccarina, idrato, etanolo al 190 proof, tubi da bere in vetro con perline, tappi di gomma naturale bianca con foro numero quattro, tubi piegati di un pollice con punta a sfera e righelli di carta. Preparare una soluzione di saccarina allo 0,066% disciolta in acqua di rubinetto. Utilizzare una parte della soluzione di saccarina allo 0,066% per preparare una soluzione madre contenente etanolo al 2,5% e un’altra parte per preparare una soluzione madre contenente etanolo al 5%.Preparare i tubi per l'assunzione di bevande fissando con del nastro adesivo un righello di carta su un tubo. Riempire il tubo fino al segno di 20 millimetri con la soluzione corretta per il giorno in questione. Assicurarsi di ottenere i pesi corporei di base per ciascuna ratto femmina; le sessioni di assunzione della bevanda durano quattro ore al giorno, a partire da un'ora dopo l'inizio del ciclo scuro.Nel primo e nel secondo giorno, alle femmine verrà fornita acqua con saccarina allo 0,066%. Nel terzo e nel quarto giorno, alle femmine verrà fornita la soluzione di SAC contenente etanolo al 2,5%. A partire dal quinto giorno, alle femmine verrà fornita la soluzione di SAC contenente etanolo al 5% durante le sessioni di consumo della soluzione con etanolo al 5%.Proseguire fino al completamento della fase di consumo di alcol precedente alla gravidanza. Cibo e acqua di rubinetto sono disponibili durante tutte le sessioni di consumo. Al termine della sessione di consumo di quattro ore, quantificare il peso della soluzione di etanolo consumata per chilogrammo di peso corporeo.Al termine della fase di assunzione di alcol prima della gravidanza, calcolare il consumo medio di etanolo e la deviazione standard per l'intero gruppo ed escludere i ratti il cui consumo medio si discosta di una deviazione standard o più rispetto alla media del gruppo, in eccesso o in difetto.Assegnare i ratti rimanenti al gruppo di controllo con saccarina o al gruppo con esposizione prenatale all'etanolo. Abbinare i livelli di consumo di alcol prima della gravidanza il più possibile. Per i due gruppi, accoppiare ogni femmina con un maschio riproduttore provato.Le femmine di ratto non consumano alcol durante la fase di accoppiamento. Quando la gravidanza viene confermata dalla presenza di un tappo vaginale, pesare la femmina di ratto e il Hauser individualmente a partire dal primo giorno di gestazione. Somministrare soluzioni di alcol o saccarina in base all'assegnazione al gruppo.Ogni giorno, consentire l'accesso al cibo e all'acqua di rubinetto per quattro ore durante le sessioni di ingestione. Continuare le sessioni quotidiane di ingestione per tutta la durata della gravidanza. Quantificare giornalmente il consumo di liquidi e pesare le ratte gravide settimanalmente.Interrompere le procedure di esposizione all'alcol quando nascono i discendenti. Indicare il giorno della nascita come postnatale. Giorno zero.Portare la nidiata a circa 10 cuccioli intorno al secondo o terzo giorno postnatale e registrare i pesi dei cuccioli. Svezzare gli animali all'incirca tra il 21° e il 24° giorno postnatale e alloggiarli in coppie dello stesso sesso con un animale sottoposto alla stessa condizione di trattamento prenatale. Non utilizzare più di uno o due ratti per ogni nidiata in ciascun esperimento, per limitare i possibili effetti legati alla nidiata.Quantificazione del comportamento sociale nell'età adulta. Ottenere tutti i materiali e l'attrezzatura necessari. Utilizziamo una camera appositamente costruita, lunga 95 centimetri, larga 47 centimetri e alta 43 centimetri.La camera è costruita in materiale plastico composito facilmente pulibile e disinfettabile, con un lato anteriore in plastica trasparente e un lato superiore aperto. Il pavimento e le pareti laterali sono rivestiti in plastica per facilitare la pulizia. La parete interna posteriore è ricoperta di piastrelle specchiate per agevolare l'analisi.I materiali aggiuntivi necessari includono le seguenti videocamere in grado di registrare in condizioni di scarsa o nulla illuminazione. Idealmente, la videocamera dovrebbe avere un'elevata risoluzione nello spettro infrarosso e illuminatori a infrarossi, posizionati intorno all'apparato per migliorare l'illuminazione dell'apparato. Nel laboratorio di registrazione sono inoltre necessari frammenti di sabbia di grado scientifico, una spazzola e una paletta per pulire l'apparato tra una sessione e l'altra e alcol isopropilico al 70% per eliminare gli odori di ratto tra le sessioni.Per la misurazione nell'età adulta, i ratti hanno almeno 90 giorni di età quando questa fase dell'esperimento inizia; per tre giorni consecutivi, un animale e il suo compagno di gabbia vengono posizionati nell'apparato per 30 minuti per abituarsi all'ambiente. Prima di ogni sessione, tutti i trucioli di legno vengono rimossi. L'apparato viene pulito con alcol isopropilico e vengono forniti trucioli di legno freschi, puliti e disinfettati con un agente igienizzante appropriato.Se necessario, i trucioli di legno devono coprire completamente il fondo dell'apparato. Durante la sessione di ambientamento, tutte le luci della stanza vengono spente alla fine della terza sessione di ambientamento. Alloggiare gli animali singolarmente in nuove gabbie con trucioli di legno freschi, cibo e acqua.L'interazione sociale viene registrata il giorno successivo, 24 ore dopo che gli animali sono stati separati, al fine di valutare il comportamento sociale. Iniziare pulendo l'apparato e sostituendo i trucioli di legno. Posizionare una o più telecamere per registrare l'interazione. Nel nostro laboratorio, utilizziamo le caratteristiche uniche dei disegni del pelo come metodo per identificare gli animali singolarmente; alternative per la marcatura degli animali sono descritte nel testo. Al termine della ripresa dell'interazione sociale, identificare i comportamenti di interesse nel nostro laboratorio.Abbiamo quantificato i comportamenti diretti verso il partner e altri comportamenti diretti verso l'ambiente. Nei nostri studi precedenti, il wrestling e altre misure di investigazione sociale, come l'annusamento di area anale e genitale o l'allelica grooming, hanno distinto in modo affidabile gli animali esposti all'etanolo da quelli esposti al saccarosio. Nei seguenti spezzoni video, vengono mostrati esempi di ciascun comportamento di interesse.La lotta avviene quando uno o entrambi gli animali tentano di balzare addosso al compagno e spesso porta a un membro della coppia che immobilizza l'altro animale su un fianco o sulla schiena. La lotta è spesso preceduta da inseguimenti e può essere preceduta anche da altri comportamenti come boxe, passaggio sotto, nonché annusamento genitale. La registrazione dei comportamenti termina quando gli animali si separano.Occasionalmente, gli animali possono iniziare rapidamente un altro round di lotta se si sono chiaramente separati l'uno dall'altro. Il secondo round verrebbe annotato come un'istanza distinta. Poiché la lotta richiede la partecipazione di entrambi gli animali della coppia, le misurazioni dovrebbero essere equivalenti per la coppia durante l'annotazione.Si potrebbe inoltre desiderare di annotare quali animali hanno finito per immobilizzare gli altri rispetto a quelli che sono stati immobilizzati, così come quale animale ha effettuato inseguimenti e balzi. Potrebbe inoltre essere utile codificare separatamente i comportamenti che compongono gli episodi di lotta. Se è necessaria un'analisi più dettagliata della boxe, entrambi gli animali si alzano sulle zampe posteriori e si spingono a vicenda con le quattro zampe.In episodi di superamento o di passaggio sotto, un animale si arrampica deliberatamente sopra o si immerge sotto il partner. In questo comportamento, un animale annusa la regione ano-genitale del partner. Una funzione dell'annusamento ano-genitale è l'identificazione.Annusare il corpo consiste nell'annusare il corpo del partner ed è spesso diretto verso il fianco o la parte laterale del compagno. L'allo-accudimento animale è l'accurarsi dell'alle del partner. L'accurarsi è tipicamente diretto verso la nuca e la zona della testa.Nell'alzarsi in piedi, l'animale si solleva sui arti posteriori; comportamenti simili all'alzarsi in piedi, come scavare e annusare nella lettiera, sono comuni attività orientate verso l'ambiente che forniscono un indice del comportamento diretto verso il substrato utilizzato nell'apparato. Per la codifica e la quantificazione dei comportamenti, utilizziamo un programma MATLAB personalizzato sviluppato nel nostro laboratorio. Le caratteristiche principali di questo programma includono la riproduzione del video a velocità variabile, pulsanti di attivazione/disattivazione associati a ciascun comportamento di interesse, in cui lo stato acceso o spento indica la presenza o l'assenza del comportamento, la codifica temporale automatica dell'inizio e della fine di ciascun comportamento e l'uscita dei dati, compresi la durata totale, la frequenza e la latenza rispetto alla prima occorrenza di ciascun comportamento. Al termine della codifica per tutti gli animali, i dati risultanti su durata, frequenza e latenza vengono analizzati mediante un pacchetto statistico. Nell'esempio qui mostrato, si può osservare che la frequenza, la durata e la latenza rispetto alla prima occorrenza di lotta, nonché la durata dell'annusamento anogenitale, differivano in modo significativo tra animali esposti a saccarosio ed animali esposti all'etanolo.Altre misurazioni comportamentali non hanno evidenziato differenze tra i gruppi. I metodi presentati in questo video hanno semplificato il processo di analisi del comportamento sociale in seguito all'esposizione prenatale all'etanolo, trasformandolo in un protocollo semplice ed efficiente. Oltre all'utilità di questo approccio per distinguere i ratti esposti a livelli moderati di etanolo durante lo sviluppo prenatale da quelli non esposti, questi metodi potrebbero essere facilmente adattati per la valutazione di altri protocolli di esposizione all'etanolo, inclusi le variazioni nel momento, nella dose, nella durata e nell'età al momento dell'analisi comportamentale.Inoltre, i comportamenti specifici quantificati durante l'analisi possono essere personalizzati per cogliere gli effetti principali dell'esposizione all'etanolo in varie fasi dello sviluppo.

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Al fine di comprendere i meccanismi molecolari del danno indotto da etanolo di sviluppo, abbiamo sviluppato un modello di esposizione zebrafish etanolo e stanno esplorando le caratteristiche fisiche, alterazioni cellulari e genetiche che si verificano dopo l'esposizione...

Valutare i cambiamenti teratogeni in un modello di Zebrafish di esposizione alcolica fetale

I disegni sperimentali proposti qui concentrarsi sullo studio degli effetti dell'esposizione alcol in apoptosi e l'applicazione del peptide neurotrofico durante la gravidanza nel cervello del feto. Una descrizione dettagliata dall'allevamento alla raccolta di cervelli fetali è descritto. Tecniche per la determinazione di apoptosi sono anche descritte in dettaglio.

Metodi sperimentali per testare gli effetti del peptide neurotrofico, ADNF-9, Contro L&#39;apoptosi indotta da alcol durante la gravidanza in topi C57BL / 6

Dimostriamo la costruzione di camere di vapori dell'alcol utilizzando materiali facilmente reperibili che ospitano contemporaneamente 6 gabbie del mouse. Descriviamo ulteriormente il loro utilizzo in un modello murino di esposizione fetale da alcol equivalente a tutti i 3 trimestri di gravidanza umana. Questo paradigma espone gli animali durante la gestazione e giorni postnatali 1-12.

Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante l&#39;equivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano

Esercizio cardiovascolare ed esperienze stimolanti in un ambiente complesso hanno effetti positivi su più misure di neuroplasticità nel cervello dei roditori. Questo articolo discuterà l'attuazione di tali interventi come "superintervention", che combina in esecuzione ruota e complessità ambientale e affronterà i limiti di questi interventi.

Esecuzione ruota e complessità ambientale come un intervento terapeutico in un modello animale di FASD

Traccia eyeblink condizionamento classico (ECC) è stata usata per valutare apprendimento associativo hippocampal-dipendenti nei ratti adulti che sono stati somministrati un'alta concentrazione (11,9% v/v) di alcol durante lo sviluppo iniziale del cervello neonatale. In generale, le procedure ECC sono suoni strumenti diagnostici per la rilevazione di disfunzione del cervello attraverso molti contesti psicologici e biomedicale.

L'uso di traccia Eyeblink condizionamento classico per valutare la disfunzione Hippocampal in un modello del ratto dei disturbi dello spettro fetale alcol

Questo lavoro descrive un protocollo per quantificare i livelli di etanolo in un embrione di pesce zebra utilizzando la cromatografia del gas dello spazio della testa da metodi di esposizione adeguati alla lavorazione degli embrioni e all'analisi dell'etanolo.

Quantificazione dei livelli di etanolo negli embrioni di pesce zebra utilizzando la cromatografia dello spazio della testa

Presentato qui è un protocollo per il modello 2BC/CIE della dipendenza da alcol nei topi per studiare il disturbo da uso di alcol.

Esposizione cronica intermittente ai vapori di etanolo abbinata alla scelta di due bottiglie per modellare il disturbo da uso di alcol

L'obiettivo dell'attuale protocollo è quello di delineare i passaggi necessari per stabilire e utilizzare un test di preferenza sociale per il pesce zebra adulto e dimostrare che può essere utilizzato per caratterizzare i difetti sociali indotti dall'etanolo.

Modellazione dei disturbi dello spettro alcolico fetale nel pesce zebra per caratterizzare l'impatto di un ambiente embrionale avverso sul comportamento sociale adulto

Questo protocollo descrive un paradigma standard di consumo in gabbia domestica con accesso intermittente a due bottiglie per modellare il consumo di alcol nei ratti. Inoltre, fornisce istruzioni dettagliate per aumentare il protocollo standard con un sistema di rilevamento delle leccate fai-da-te che consente l'analisi microstrutturale del comportamento nel bere.

Modellazione del consumo di alcol nei roditori utilizzando l'uso di due bottiglie di alcol in gabbia domestica e l'analisi microstrutturale

Poiché le restrizioni legislative cambiano, con conseguente aumento dell'accessibilità dei prodotti a base di cannabinoidi, è di fondamentale importanza sviluppare modelli per studiare l'impatto di queste esposizioni, in particolare durante la gravidanza. È stato sviluppato un modello preclinico di esposizione prenatale moderata ai cannabinoidi attraverso l'ingestione volontaria, che consente indagini più approfondite.

Modello preclinico di esposizione prenatale al delta-9-tetraidrocannabinolo per valutarne l'impatto sugli esiti dello sviluppo neurologico

Scopri come esporre ratti a alcol prenatale moderato e quantificare i comportamenti sociali nell'età adulta. Questo metodo aiuta a studiare gli effetti dello sviluppo prenatale sul cervello.

Moderata esposizione prenatale di alcool e quantificazione di comportamento sociale in ratti adulti

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