Metodi per confrontare nutrienti in beebread Made by africanizzate e miele europeo api e gli effetti sulla I titoli emolinfa Protein

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quantificare i nutrienti nel polline e nel pane d'api, prodotti da due sottospecie di api mellifere e misurare il consumo di titoli proteici. Ciò si ottiene presentando alle api europee e africane la stessa fonte di polline in un'area ristretta e consentendo alle api di immagazzinare il polline nelle loro colonie come pane d'api. Successivamente, il pane d'api viene somministrato in gabbie alle api europee e africane appena emerse.

Quindi le api nelle gabbie vengono campionate dopo quattro, sette e 11 giorni di alimentazione e viene misurata la quantità di pane d'api rimanente in ciascuna gabbia per stimare il consumo. Infine, viene misurata e confrontata la concentrazione di nutrienti, tra cui proteine e aminoacidi, nel polline e nel pane d'api prodotto dalle api europee e africanizzate. I risultati mostrano che il pane d'api differisce dal polline per le proteine e alcune concentrazioni di aminoacidi, nonché per i titoli proteici dell'emolinfa.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave negli studi sulla nutrizione delle api, come il ruolo della fonte di polline sui nutrienti nel pane d'api e il modo in cui tali nutrienti vengono acquisiti dalle api di diverse sottospecie, tutori e genotipi. A dimostrare le tecniche è Emily Watkins de Young, che è un tecnico studente nel mio laboratorio Per iniziare dopo aver posizionato trappole per polline su colonie di api, raccogliere il polline, usare un macinacaffè per macinare il polline in una polvere fine, stabilire cinque colonie, ciascuna di api africane o un HB e api mellifere europee, o EHB in un'area di volo chiusa o EFA, in modo che le api si nutrano solo del polline fornito per evitare che le operaie vadano alla deriva tra le colonie EHB e A HB. Dividere l'EFA in sezioni separate in modo che le api non possano incrociarsi tra di loro in ciascuna sezione dell'EFA posizionare singole colonie EHB o HB con 3.500-4.000 api operaie pettine di cera con miele di nettare, covata immatura e favo vuoto nutrire le colonie con polline macinato posizionando un vassoio in ciascuna sezione dell'EFA e distribuendo circa 60 grammi di polline sui vassoi.

In questo modo, le api forgiatrici possono raccogliere il polline sotto forma di carichi curriculari e conservarlo nelle loro colonie come pane d'api per nutrire le api in gabbia. Posizionare i telai della covata operaia sigillata da colonie HB ed EHB in gabbie di emergenza separate in una stanza ambientale impostata a 32-24 gradi Celsius e al 40% di umidità relativa. Quando le operaie emergono nel nostro bambino di circa 24 ore, ha stabilito 12 gabbie di biodosaggio in plexiglass e aggiunge 100 api operaie EHB o HB appena emerse a ciascuna gabbia, posiziona una sezione di favo con un numero noto di pane europeo bbr o EBB o pane B africanizzato o A B, B in ogni gabbia per generare le seguenti condizioni di trattamento.

A HB fed A-B-B-E-H-B fed A B, BAHB Fed EBB e EHB Fed. EBB aggiunge fiale di acqua e una soluzione di saccarosio al 30% formulata in volume a ciascuna gabbia. Sostituire lo sciroppo di zucchero e le fiale d'acqua ogni giorno per il periodo di studio di 11 giorni.

Campione 10, lavoratori EHB appena emersi e A HB prima di metterli nelle gabbie. Riferirsi a questi come B del giorno zero e farli servire come base per le concentrazioni di proteine emolinfatiche. Rimuovi 10 api da ogni gabbia dopo che si sono nutrite con EBB o a B, B per quattro, sette e 11 giorni.

Posizionare le api vive su tubi individuali di falco e adagiarle su impacchi di ghiaccio. Selezionare il sottocampione di quattro api per l'analisi della concentrazione di proteine emolinfatiche dopo aver campionato le api l'11° giorno, contare il numero di cellule del favo che contengono ancora pane d'api. Rimuovere il pane d'api rimanente dalle celle di ogni gabbia e conservarlo in provette da microcentrifuga separate per gabbia.

Conservare i campioni BBR a una temperatura negativa di 80 gradi Celsius fino all'analisi della concentrazione di proteine solubili in pH e del contenuto di aminoacidi. Per eseguire l'analisi delle proteine, prelevare sei campioni di polline e un campione di EBB e A BB da ciascuna gabbia. Mescolare 20 milligrammi di polline o bbr con un millilitro di vortice PBS molare da 0,1 molari alla miscela per 10 secondi e centrifugare a 571,2 G per un minuto.

Rimuovere un campione da 25 microlitri del surnatante S e metterlo in un pozzetto di una piastra di polistirene E-I-A-R-I-A a fondo piatto a 96 pozzetti. Replicare ogni campione in tre pozzetti. Riscaldare l'estremità di un tubo capillare da 20 microlitri e tirare la sezione riscaldata fino a formare una punta aghiforme.

Quindi prelevare l'emolinfa dalle api raccolte da ciascuna gabbia inserendo il tubo capillare nella porzione laterale destra del torace vicino al punto di attacco dell'ala. Raccogliere ulteriore linfa, se necessario, inserendo lo stesso tubo nella membrana tra le guide dell'addome. Aggiungere un microlitro di emolinfa a nove microlitri di PBS molare da 0,1

Utilizzare un kit per il dosaggio delle proteine Bradford e seguire le istruzioni del produttore per determinare la proteina solubile totale. Le concentrazioni effettuano l'analisi degli amminoacidi secondo il protocollo di testo come mostrato in questi grafici, sia il valore del pH che la concentrazione proteica erano inferiori nel bbr rispetto al polline. Sia l'EHB che l'A HB consumavano più A BB che EBB, come dimostrato qui.

I livelli di proteina solubile nell'emolinfa di A HB erano significativamente più alti dell'EHB, indipendentemente dal tipo di bbr che consumavano. Queste differenze nei livelli di proteina emolinfatica si sono verificate anche se EHB e A HB consumavano quantità simili di ciascun tipo di bbr. Dei 10 aminoacidi essenziali per le api, tutti tranne l'istamina sono stati rilevati nel polline.

Nella maggior parte dei casi, le concentrazioni di aminoacidi misurate nel pane d'api erano più alte che nel polline. Ad esempio, le concentrazioni di leucina e tionina erano circa il 60% più alte in bbr rispetto al polline e le concentrazioni di valina erano circa il 25% più alte. Anche i livelli di glutammina dell'acido aspartico alanina erano più alti nel bbr che nel polline.

Le concentrazioni di aminoacidi non differivano molto tra A, B, B ed EBB, ad eccezione della fenilalanina e della cistina. I livelli di fenilalanina erano circa il doppio in A BB rispetto all'EBB o al polline. Le concentrazioni di cistina erano più basse nell'EBB rispetto ad A, B, B o polline.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare le concentrazioni proteiche nel pane d'api, nel polline e nell'emolinfa delle api. Con queste tecniche, è possibile determinare se la conservazione e il consumo di alimenti e le concentrazioni di proteine emolinfatiche sono influenzate da fattori genetici o ambientali.