Name: Un piccolo volume Bioassay per valutare batterica / fitoplancton Co-cultura Utilizzando WATER-Pulse-modulata in ampiezza (WATER-PAM) fluorometria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Scopri un bioassay miniaturizzato per lo screening rapido di co-culture alga/batterio usando la fluorometria WATER-PAM. Questo metodo valuta la salute fotosintetica del sistema e identifica effetti patogeni, simbiotici o neutrali.

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Crescita delle alghe in un formato miniaturizzato. La miniaturizzazione di colture algali ad un volume coltura 1 ml in una piastra microtiter consente di replicare in un esperimento possa essere aumentata. È importante garantire l&#39;alga è sano durante un esperimento; eseguire una curva di crescita (figura 2), utilizzando il formato micropiastre per valutare vari media algali, al fine di garantire la conformità ai requisiti nutrizionali del alghe. Inoltre, può essere importan...

Il fitoplancton fisiologia è stato tradizionalmente studiato in esperimenti meso-scala che va da 20 ml in beute a 5 L in damigiane 1-7. Questa scala sperimentale richiede subsampling per il monitoraggio sperimentale, come sacrificare campioni replicati per ogni punto di tempo crea un apparato sperimentale ingestibile. La possibilità di aumentare il numero di esperimenti indipendenti mentre si utilizza lo stesso spazio incubatore diurna dalla miniaturizzazione del volume sperimentale per esperimenti di fisiologia alghe sarà ridurre o eliminare le limitazioni di subsampling e pseudo-replica da grandi volumi. Un formato micropiastra è stata sviluppata per biosaggi algali utilizzando un volume di coltura 1 ml per manipolare sperimentalmente alghe in condizioni variabili. Questo piccolo volume sperimentale consente il numero di repliche per aumentare, aumenta la riproducibilità sperimentale a causa di una variabilità diminuita tra i campioni replicati eesperimenti, e consente la vera replica mantenendo controlli sperimentali (ad esempio, colture algali axeniche) per 140 giorni (Figura 2) 12. Questo formato micropiastra è facilmente adattato per una varietà di questioni sperimentali, come ad esempio: un batterio non ha un&#39;interazione simbiotico, neutro o patogeni con il suo ospite algale? È l&#39;aggiunta di un composto o stimolante tossico per un&#39;alga? Queste e altre domande possono essere affrontate in maniera rapida high-throughput con questo nuovo formato 9-11. Una piastra di coltura microtitolo 48 pozzetti permette ogni 1 ml e di essere un apparato sperimentale indipendente che viene campionato ad una sola volta-point. I vari parametri si possono degustare da questo volume 1 ml compreso, ma non solo: fluorescenza della clorofilla e parametri fotochimici utilizzando-modulata in ampiezza WATER-Pulse (WATER-PAM) fluorometria (vedi Materiali e tavolo Equipment) 13. ACQUA-PAM fluorometria è una tecnica rapida e non invasiva che può essere utilizzato per monitorare esperimenti effettuati con alghe 13. Esso consente di misurare l&#39;efficienza fotosintetica e la salute PSII da un piccolo volume di cultura (150-300 ml di cultura diluito in mezzo a un 2 - volume di 4 ml per WATER-PAM) 14,15. Oltre all&#39;acqua-PAM fluorimetria, questa configurazione può essere usata per misurare una varietà di altri parametri tra cui, ma non limitato a: microscopio per visualizzare i batteri attaccati alle cellule algali e cambiamenti nella morfologia cellulare algale; colonia batterica formando unità (CFU) conta; e citometria a flusso per la conta delle cellule algali e sottopopolazioni di identificazione.

<table><tbody><tr><td>10 piedi cubi Incubatore diurno (6012-1)</td><td>Caron Corporate</td><td>112310-6012-1-11</td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>Nunc EasYFlask 25 cm2, Tappo di sfiato/chiusura, volume di lavoro 7 ml, 200/cs</td><td>Thermo Fisher Scientific N156340</td><td></td><td><a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>Piastre TC multipozzetto &ndash; 48 pozzetti</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>353078</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com/">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>P1000 Gilson The Pipetting Standard&mdash; Gilson's Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F123602</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>P10mL Gilson Lo standard di pipettaggio&mdash; Gilson's Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F161201</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>Punte con orifizio largo non sterili [100&ndash; 1.250 &micro; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-468</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Puntali ultrafini non sterili [100&ndash; 1.250 &micro; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-470</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Finntip 10 ml [Vol: 1 - 10 ml]</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>9402151</td><td><a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>WATER-Pulse Amplitude Modulation (Water-ED)</td><td>Heinz Walz GmbH, Effeltrich, Germania</td><td>EDEE0232</td><td><a href="http://www.walz.com">www.walz.com</a></td></tr><tr><td>cuvetta in vetro di quarzo diametro 15 mm (WATER-K)</td><td>Caron Corporate</td><td></td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (cristallino/certificato ACS), Fisher Chemical</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td><a href="http://www.fishersci.ca"> www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>BD Difco Marine Broth 2216</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>BD Bacto Agar</td><td>BD Biosciences Discovery</td><td>Labware BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>Kit medio L1, 50 L</td><td>NCMA [Centro nazionale per le alghe marine e il microbiota</td><td>NCMA [Centro nazionale per le alghe marine e il microbiota</td><td><a href="http://www.ncma.bigelow.org">www.ncma.bigelow.org</a></td></tr></tbody></table>

un piccolo volume bioassay per valutare batterica / fitoplancton co-cultura utilizzando water-pulse-modulata in ampiezza (water-pam) fluorometria

A Small Volume Bioassay to Assess Bacterial/Phytoplankton Co-culture Using WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) Fluorometry

I metodi convenzionali per la manipolazione sperimentale di microalghe hanno impiegato grandi volumi di coltura (20 ml a 5 L), in modo che la cultura può essere sotto-campione durante l&#39;esperimento 1-7. Subsampling di grandi volumi può essere problematico per diverse ragioni: 1) provoca variazione del volume totale e la superficie: rapporto in volume della coltura durante l&#39;esperimento; 2) pseudo-replica (cioè, più campioni dello stesso pallone trattamento 8) è spesso impiegato piuttosto che vere e proprie repliche (cioè, il campionamento da trattamenti ripetute); 3) la durata dell&#39;esperimento è limitata dal volume totale; e 4) colture axeniche o il solito microbiota batterica sono difficili da mantenere durante gli esperimenti a lungo termine, come la contaminazione si verifica comunemente durante sottocampionamento. L&#39;uso di micropiastre consente 1 volumi di coltura ml da utilizzare per ogni replica, con un massimo di 48 trattamenti separati all&#39;internouna piastra di 12,65 cm x 8,5 x 2,2, diminuendo in tal modo il volume sperimentale e consentendo vasta replica senza sottocampionamento alcun trattamento. Inoltre, questa tecnica può essere modificato per adattarsi a una varietà di formati sperimentali tra cui: batterico-alghe co-culture, test algale fisiologia, e la tossina di screening 9-11. Pozzi individuali con un&#39;alga, batterio e / o co-colture possono essere prelevati per numerose procedure di laboratorio, tra cui, ma non solo: WATER-Pulse-modulata in ampiezza (WATER-PAM) fluorometria, microscopia, colonia batterica formando unità (CFU) conti e citometria a flusso. La combinazione del formato micropiastra e WATER-PAM fluorometria consente misurazioni multiple rapide di rendimento fotochimico e di altri parametri fotochimici con bassa variabilità tra i campioni, alta riproducibilità ed evita le tante insidie ​​di sottocampionamento una damigiana o beuta nel corso di un esperimento .

Letture fluorometria WATER-PAM. WATER-Pulse-modulata in ampiezza (PAM) fluorometria è un metodo rapido ed efficace per determinare la fluorescenza (un proxy per il contenuto di clorofilla) e la resa fotosintetica (salute PSII) di colture algali. Il software PAM WinControl genera un foglio di calcolo di valori di dati grezzi per (i seguenti sono i parametri fondamentali per scuri adattato campioni algali): F 0 = fluorescenza delle cellule adattati al buio ...

L'obiettivo di questa procedura è dimostrare la riproducibilità e l'adattabilità dell'utilizzo di un formato di piastra per microtitolazione per lo screening delle microalghe. Questo screening rapido combina la fluorimetria WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) per misurare la resa fotosintetica come indicatore della salute del fotosistema II (PSII) con co-colture batteriche-algali di piccolo volume.

Un piccolo volume Bioassay per valutare batterica / fitoplancton Co-cultura Utilizzando WATER-Pulse-modulata in ampiezza (WATER-PAM) fluorometria

Conventional methods for experimental manipulation of microalgae have employed large volumes of culture (20 ml to 5 L), so that the culture can be ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è presentare un bioassay algale miniaturizzato volto a screening rapido di colture algali per identificare simbiosi microbiche e/o patogeni che potrebbero influenzare la salute o la fisiologia della coltura algale. Questo viene ottenuto innanzitutto preparando miscele di controllo di alghe e batteri con il mezzo di coltura, e creando colture miste sperimentali di alghe e batteri a diverse concentrazioni. Il passaggio successivo consiste nel preparare piastre a 48 pozzetti con aliquote delle miscele per uno screening robusto, riproducibile e rapido.In seguito, le piastre vengono incubate e monitorate mediante fluorimetria a modulazione dell'ampiezza dell'impulso, che effettua misurazioni atte a valutare lo stato fotosintetico del sistema. I risultati di questo esperimento in corso di tempo rivelano un effetto patogeno, simbiotico o neutro dei batteri sulle alghe. Durante l'esperimento in corso di tempo possono essere effettuati anche ulteriori test su piccolo volume.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi convenzionali che utilizzano grandi volumi per i bioassay algali è che il bioassay miniaturizzato consente l'uso

a-small-volume-bioassay-to-assess-bacterialphytoplankton-co-culture

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Questo articolo descrive diversi metodi di...

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Il protocollo introduce un metodo ad alto rendimento per misurare il rilassamento della tempra non fotochimica mediante fluorometria clorofilliana modulata in ampiezza di impulso. Il metodo viene applicato alla glicina max coltivata sul campo e può essere adattato ad altre specie per lo screening della diversità genetica o delle popolazioni riproduttive.

Analisi ad alto rendimento della tempra non fotochimica nelle colture utilizzando la fluorometria clorofilla modulata con ampiezza di impulso

Scopri un bioassay miniaturizzato per lo screening rapido di co-culture alga/batterio usando la fluorometria WATER-PAM. Questo metodo valuta la salute fotosintetica del sistema e identifica effetti patogeni, simbiotici o neutrali.

Un piccolo volume Bioassay per valutare batterica / fitoplancton Co-cultura Utilizzando WATER-Pulse-modulata in ampiezza (WATER-PAM) fluorometria (Video) | JoVE Journal

Un piccolo volume Bioassay per valutare batterica / fitoplancton Co-cultura Utilizzando WATER-Pulse-modulata in ampiezza (WATER-PAM) fluorometria

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