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DOI: 10.3791/52475-v
Maria Weinert1, Tharakeswari Selvakumar2, Travis S. Tierney2, Kambiz N. Alavian1,3
1Division of Brain Sciences, Department of Medicine,Imperial College London, 2Department of Neurosurgery,Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 3Department of Internal Medicine, Endocrinology,Yale University School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Le cause della degenerazione dei neuroni dopaminergici del mesencefalo durante il morbo di Parkinson non sono completamente comprese. I sistemi di coltura cellulare forniscono uno strumento essenziale per lo studio delle proprietà neurofisiologiche di questi neuroni. Qui presentiamo un protocollo ottimizzato, che può essere utilizzato per la modellazione in vitro della neurodegenerazione.
L'obiettivo di questa procedura è isolare e coltivare in modo efficiente i neuroni primari dal mesencefalo ventrale dei roditori. Ciò si ottiene sezionando prima il mesencefalo degli embrioni di roditori. Il secondo passo consiste nell'isolare attentamente il mesencefalo ventrale.
Successivamente, il tessuto neuronale deve essere dissociato per produrre una sospensione a singola cellula. Il passaggio finale consiste nel placcare i neuroni primari in un piccolo volume su vetrini coprioggetti prima di trasferire le cellule attaccate in una piastra a 24 pozzetti. Infine, la microscopia anticorpale e immunofluorescenza viene utilizzata per identificare i neuroni dopaminergici all'interno della coltura.
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