Name: Th17 Infiammazione Modello di orofaringea candidosi in topi immunodeficienti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Scopri un modello di infiammazione orofaringea mediata da cellule Th17 in topi immunodeficienti con Candida albicans. Questo metodo permette di studiare l'immunopatologia T-cellulare e le potenziali terapie immunologiche orali.

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Ringraziamo la dottoressa Helene Bernstein per averci fornito l'accesso al suo citometro a flusso. Ringraziamo anche la struttura di citometria a flusso CFAR per i servizi di citometria a flusso. Questo progetto è stato in parte supportato dai finanziamenti CTSC per l'utilizzo del core e dalla sovvenzione STERIS corporation/University Hospitals-Division of Infectious diseases a PP.

NOTA: Gli esperimenti con i topi sono stati eseguiti in conformità al comitato benessere degli animali istituzionale (IACUC) le linee guida. 1. Ricostituzione della Rag-1 - / - I topi con cellule I n Vitro Colta Th17 (Tre giorni prima di infezione) <ol><li> Per stabilire le cellule Th17, cultura CD4 + CD44low CD62Lhigh CD25- cellule T naive (3 x 104) in U-bottom 96 pozzetti da soli, o co-coltura con 3 x 104 CD4 + CD25 + Foxp3 + Tregs in presenza di solubile α-CD3 (1 mg / ml), α-CD28 (2 mg / ml) anticorpi e cellule presentanti l&#39;antigene, in condizioni Th17 (polarizzati utilizzando IL-6 (25 ng / ml), β TGF- (2 ng / ml) , α-IFN-γ (2 mg / ml) e α -IL-4 (2 mg / ml)) per tre o quattro giorni. NOTA: le cellule T reg ingenuo e sono stati ordinati con la fluorescenza delle cellule attivate (FACS) unad procedure di isolamento delle cellule magnetiche e coltivate come descritto in precedenza 19-22. </li><li> Il giorno 4, dopo risospendere le cellule Th17 con la pipetta, raccogliendoli da culture, e li centrifugare in condizioni sterili. <ol><li> Prendete una piccola aliquota di queste cellule per esaminare la loro vitalità e per fenotipizzazione. Li Risospendere in 500 ml di RPMI media, aggiungere ioduro di propidio (200 ng / ml) e valutare immediatamente la loro redditività mediante citometria a flusso. Eseguire fenotipizzazione mediante citometria di flusso valutazione della produzione di IL-17A dopo restimolazione (vedere paragrafo 6.3). </li></ol></li><li> Centrifugare e lavare la parte più consistente delle cellule in PBS sterile a 480 xg per 6 minuti a 4 ° C in tutte le fasi se non diversamente specificato. </li><li> Utilizzare queste cellule per il trasferimento adottivo in 6-8 settimane di età CD45.2 Rag1 - / - topi immunodeficienti. <ol><li> Risospendere le cellule a densità cellulare 1 x 10 7 cellule / ml usando freddo sterile PBS. </li><li> Iniettare 100 ml di cellule di intrapiniezione eritoneal, con 25 aghi G su 1 ml siringhe tubercolina, tale che un mouse riceve 1 x 10 6 cellule. Alcuni topi riceveranno cellule Th17 o PBS solo, e altri topi riceveranno cellule Th17 che erano co-coltura con cellule Treg. NOTA: Eseguire tutte le operazioni in modo asettico. </li></ol></li></ol> 2. Crescere C. albicans per infezione (un giorno prima infezione) <ol><li> Prima di inoculazione, disperdere cinque colonie della CAF2-1 C. albicans ceppo di laboratorio in 100 ml di sospensione sterile PBS, e aggiungere la sospensione al brodo sterile. </li><li> Seminare 5 colonie di C. albicans in 50 ml della base di azoto di lievito (YNB senza amminoacidi) / Peptone / Destrosio brodo e incubare in un incubatore shaker a 30 ° C per 15-18 ore a 130 rpm. </li><li> Monitorare il brodo per nuvolosità, dato che è un&#39;indicazione per la crescita del fungo. </li></ol> 3. CandidaRaccolta e procedura di conteggio (Nel giorno di infezione) <ol><li> Raccogliere 10 ml di brodo di Candida in provette da 15 ml. Per volumi maggiori, raccogliere Candida in 50 ml provette. </li><li> Centrifugare le blastospores a 1900 xg per 5 minuti a temperatura ambiente in tutte le fasi, se non diversamente specificato. Agglomerare le blastospores mediante centrifugazione, seguita dalla rimozione del supernatante. </li><li> Se vi è più di un tubo, in comune i blastospores Candida da più tubi, aggiungendo PBS sterile al pellet e risospendere in 10 ml di PBS per il conteggio. </li><li> Prendere 20 ml di blastospores in provette da 1,5 ml microcentrifuga, aggiungere 20 ml di paraformaldeide 2X e incubare a temperatura ambiente per 15-20 minuti. Contare le blastospores fissi utilizzando il emocitometro sotto il microscopio. NOTA: Paraformaldeide è cancerogeno. Aprire la soluzione diluita solo nella cappa. </li><li> Nel frattempo, ripetere lavare i blastospores almeno due volte, per centrifugazione them in PBS, e pellet le blastospores. Tenere il pellet in 15 ml provette a RT, nella cappa ABSL1, pronto per l&#39;infezione. </li><li> Lascia un po &#39;sterile PBS a temperatura ambiente per risospendere le blastospores di infezione. </li><li> Dopo conteggio, aggiungere PBS sterile al pellet Blastospora per regolare il numero di cellule di lievito Blastospora a 2 x10 8 del lievito cellule / ml. Questa è la sospensione Blastospora che verrà utilizzato per infettare i topi. NOTA: Eseguire tutte le operazioni in modo asettico. </li></ol> 4. Topi Infezione (3-5 giorni dopo il trasferimento Cell) NOTA: La procedura di infezione di base viene eseguita come descritto in precedenza 19,23-25. <ol><li> Pesare il Rag-1 - / - topi che hanno ricevuto PBS o le cellule tre giorni prima. </li><li> Calcolare la dose di agenti anestetici che utilizzano il loro peso corporeo. Anestetizzare topi somministrando ketamina / xilazina miscela (16,1 mg / ml e 1,6 mg / ml), con 25 aghi G su 1 ml siringhe tubercolina, da intriniezione aperitoneal. <ol><li> Somministrare 50 ml per 10 g di peso corporeo. (Cioè, 0,8 mg di ketamina e 0,08 mg di xilazina / 10 g di peso corporeo o 80 mg di ketamina e 8 mg di xilazina per kg di peso corporeo, rispettivamente). Osservare per la risposta pizzico punta ogni 15 minuti dopo l&#39;anestesia. NOTA: Questo dosaggio indurrà 60-90 min di anestesia, che è sufficiente per la procedura di infezione. </li><li> Applicare il lubrificante pomata oftalmica negli occhi dei topi per evitare le cornee si secchi. Come il lubrificante occhio potrebbe seccarsi, ripetere la lubrificazione oftalmica ogni 45 min. </li></ol></li><li> Iniettare 1 ml di soluzione fisiologica (NaCl 0,9%) per via sottocutanea sul dorso adiacente alla zampa anteriore, per aiutare reidratazione dei topi durante l&#39;anestesia. </li><li> Ottenere un nuovo, gabbia pulita. Seguire la procedura di infezione un mouse alla volta, posizionando ciascun topo nella nuova gabbia volta infettati. Eseguire il / infezione farsa PBS prima, e poi passare alle gro infezione da Candidaups. </li><li> Prendete il mouse anestetizzato e aprire la bocca per rivelare la base della lingua. <ol><li> Inserire una sfera di diametro 3 millimetri di cotone saturato con 50 ml di PBS o Blastospora sospensione, sublinguale nella cavità orale per 90 min. Capovolgere il mouse ogni 15 minuti parte anteriore e posteriore per evitare congestione polmonare, assicurando che i batuffoli di cotone non si muovono. </li></ol></li><li> Impostare un timer per ogni topo per garantire 90 min di Sham o Candida inoculazione nella cavità orale. </li><li> Tenerli in una gabbia sotto la lampada di calore (4 metri di distanza), e ogni mouse su cuscinetti di gel di calore. </li><li> Assicurarsi che la lingua è ritirata all&#39;interno e lontano dai denti, per evitare i denti lacerano lingua. </li><li> Alla fine di 90 min, rimuovere il batuffolo di cotone dalla bocca del mouse. Guarda per qualsiasi mouse che può recuperare da anestesia prima di 75 minuti. In tal caso, le anestetizzare nuovo con ketamina (40 mg / kg) soltanto. </li></ol> 5. Posta immissioe Monitoraggio (durante la 90 min Anesthesia) <ol><li> Usare tamponi di gel di calore durante la 90 min anestesia. <ol><li> Per mantenere la temperatura corporea e per prevenire il soffocamento, non permettere topi per recuperare il normale assestamento del mouse corn-cob. </li></ol></li><li> Dopo il recupero dall&#39;anestesia, amministrare un ulteriore 1 ml di sterile 0,9% NaCl per via sottocutanea in due posizioni sul retro. </li><li> Tieniti cinque PBS (sham) topo inoculato per gabbia. Solo 1-2 Casa topi infettati per gabbia. </li><li> Compilare la scheda di procedura con le iniziali ogni giorno dopo la procedura di annotare i cambiamenti nel peso corporeo, governare le abitudini e la salute generale. </li></ol> 6. Valutare l&#39;infiammazione 6.1) La perdita di peso <ol><li> Pesare i topi ogni giorno durante l&#39;infezione, a partire dal giorno precedente procedura di infezione. NOTA: in genere, i topi immunodeficienti iniettati con le cellule Th17 e senza regs T soccombono 20-30% Di perdita di peso a causa di maggiore onere fungina 19 e aggravata infiammazione. </li></ol> 6.2) Istologia punteggio della lingua <ol><li> Sacrifica i topi da CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale. </li><li> Aprire le ganasce e sezionare fuori la lingua con le forbici e pinze. Utilizzare pinze smussato per tenere la lingua, e utilizzando le forbici protendono verso il retro della bocca di incidere all&#39;estremità posteriore della lingua. </li><li> Per ematossilina immunocitochimica e eosina (H &amp; E) colorazione dei tessuti lingua, lavare i tessuti lingua con ghiaccio freddo PBS. Aggiungere 5 ml di formalina al 10% per 2-3 lingue e fissarli O / N in provette da 15 ml. <ol><li> Il giorno successivo, togliere formalina e immergere i tessuti in 5 ml di etanolo al 70% per evitare iper-fissazione. Send them out al servizio commerciale per continuare con paraffina, sezionamento e colorazione delle sezioni di paraffina. NOTA: istologia servizio commerciale viene utilizzato per eseguire questa procedura. </li&gt; </ol></li><li> Una volta che le diapositive sono tornati dal servizio istologia commerciale, di grado l&#39;infiammazione osservando le sezioni di tessuto al microscopio ottico. <ol><li> Punteggio da 0 a 5, con 0 essendo senza infiammazione, e 5 è l&#39;infiammazione più grave. Nota l&#39;infiammazione utilizzando Tabella 1. </li></ol></li></ol> 6.3) la produzione di citochine da parte delle cellule Th17 NOTA: L&#39;eccessiva produzione di TNF-α è una delle letture per eccessiva immunopatologia. Quando i topi sono adoptively trasferiti con cellule Th17 solo, provoca immunopatologia associato eccessiva produzione di TNF-α nelle cellule Th17. <ol><li> Raccogliere una sospensione singola cellula da milza, linfonodi cervicali, linfonodi ascellari, e la lingua, usando i metodi descritti in precedenza 19,26. </li><li> Restimolare le cellule con acetato di forbolo miristato (PMA) (50 ng / ml) e Ionomicina (500 ng / ml) per 4 ore con Brefeldina A (10 mg / ml) aggiunto nella last 2 hr. Lavare le cellule con PBS e fissare utilizzando un kit di fissaggio / permeabilizzazione commerciale secondo le istruzioni del produttore. </li><li> Eseguire intra citochine cellulari colorazione utilizzando il fluorocromo coniugato anti-TNF-α, anti-IL-17A e anticorpi ROR-γt come descritto in precedenza 19. </li><li> Brevemente, risospendere le cellule nel buffer permeabilizzazione 1X con il cocktail anti-TNF-α, anti-IL-17A e anticorpi ROR-γt, ciascun anticorpo a 2 - 3 g / ml concentrazione finale. </li><li> Incubare le cellule per 1 ora a RT. </li><li> Dopo l&#39;incubazione, lavare le cellule con tampone permeabilizzazione 1X. </li><li> Risospendere il pellet cellulare in 500 ml di PBS con 0.5% albumina sierica bovina per citometria a flusso. </li></ol>

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<li>Quintin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+role+of+NK+cells+against+Candida+albicans+infection+in+immunocompetent+or+immunocompromised+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Differential role of NK cells against Candida albicans infection in immunocompetent or immunocompromised mice.</a> Eur J Immunol. 44 (8), 2405-2414 (2014).</li>
<li>Ramirez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+and+cancer%3A+Can+this+yeast+induce+cancer+development+or+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+In+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression.</a> Critical Reviews In Microbiology. , 1-13 (2014).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Questo modello è basato su indurre orale C. infezione albicans dipendente infiammazione Th17. A causa della mancanza di T reg, l&#39;infiammazione delle cellule Th17 indotta è sfrenato e porta a immunopatologia mal risolto. In vitro derivato cellule CD4 naive polarizzate come le cellule Th17 sono stati utilizzati per il trasferimento adottivo. 40 - 50% della coltura CD4 + cellule mostrano rilevabile espressione di IL-17A intorno al giorno 3 (cellule Th17), e quindi sono stati utiliz...

Le infezioni orali e l'infiammazione sono state correlate al cancro e alle malattie cardiovascolari e hanno un impatto drammatico sulla salute umana generale2,3. Le infezioni opportunistiche e l'infiammazione causate da C. albicans sono associate a immunodeficienze primarie (PID)4,5, disturbi infiammatori come la parodontite 6,7, la sindrome di Sjogren e la malattia delle ghiandole salivari8,9, nonché il carcinoma orale a cellule squamose 10-12. C. albicans è un fungo commensale dimorfico che colonizza la bocca del 60% degli esseri umani sani in modo asintomatico, ma è il patogeno fungino più comune che causa infezioni quando la difesa dell'ospite è indebolita13-15. Provoca infezioni e infiammazioni ricorrenti e croniche nei pazienti con AIDS e PID, e anche in altri individui immunocompromessi. Come commensale, il suo carico di colonizzazione è associato al cambiamento nella diversità del microbioma orale complessivo16. Come agente patogeno provoca diverse forme di candidosi orofaringea come la pseudomembranosa acuta, l'atrofica acuta, l'atrofica cronica, l'ipertrofica/iperplastica cronica e la cheilite angolare. 
La protezione contro C. albicans è determinata non solo dalla resistenza immunitaria dell'ospite, ma anche dalla capacità di controllare in modo appropriato l'immunopatologia indotta dalla Candida. Sebbene i commensali come C. albicans contribuiscano alla modulazione e all'esacerbazione di altre condizioni infiammatorie orali, i meccanismi attraverso i quali si verifica la disbiosi durante le infezioni opportunistiche non sono chiari. Oltre al ruolo noto delle cellule Th17 adattative nella risposta alla memoria a C. albicans17, il loro ruolo nell'inizio e nella perpetuazione della patologia infiammatoria durante le infezioni croniche rimane poco chiaro. Inoltre, le malattie infiammatorie orali come la sindrome di Sjogren e la parodontite sono associate alla patologia mediata da Th17. È interessante notare che queste malattie sono anche fortemente associate a frequenti OPC. Tuttavia, le interazioni tra le cellule Th17, l'immunopatologia orale dell'OPC e altre malattie infiammatorie orali non sono studiate. 
Sebbene siano disponibili modelli murini di infezione primaria e secondaria da candidosi orale, non è disponibile un modello murino per studiare l'infiammazione Th17 associata all'infezione da Candida, specialmente nel contesto dell'immunodeficienza. Questo studio presenta un metodo per stabilire l'infiammazione orale Th17 associata all'infezione orale da Candida nei topi. L'infezione da Candida nei topi è caratterizzata da lesioni fungine, infiammazione della lingua, diminuzione dell'assunzione di cibo, perdita di peso e, infine, uno stato moribondo. La patologia orale assomiglia alle lesioni da infezione candidale cronica, così come alla displasia epiteliale nei modelli murini di cancro orale12,18.

<table><tbody><tr><td>CAF-2</td><td>Università di Pittsburgh (Sarah Gaffen)</td><td>-</td><td>Coltura Candida</td></tr><tr><td>U-fondo 96 piastre pozzetti&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>055588</td><td>Utilizzato per colture cellulari</td></tr><tr><td>a-CD3&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-0031-85</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>a-CD28&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-0281-85</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>m-IL-6</td><td>Bio Basic</td><td>RC232</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>h-TGF-b&nbsp;</td><td>R& D</td><td>240-B</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>a-IFN-g&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-7311-85</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>a-IL-4&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-7041-85</td><td>Polarizzazione delle cellule alle condizioni Th17</td></tr><tr><td>&alpha;-IL17A ef660</td><td>eBiosciences</td><td>50-7177-82</td><td>Utilizzato per la coltura cellulare - 1:50</td></tr><tr><td>&alpha;-TNFa-PE-Cy7</td><td>eBiosciences</td><td>25-7423-41</td><td>Utilizzato per la coltura cellulare - 1:100</td></tr><tr><td>&alpha;-RORgt PE&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>12-6981-82</td><td>Utilizzato per colture cellulari - 1:50</td></tr><tr><td>YNB senza aminoacidi)/Peptone/Destrosio brodo di terreno&nbsp;</td><td>Bio Base</td><td>S507. TAGLIA</td><td>Mediium per la crescita della candida</td></tr><tr><td>Incubatore Shaker&nbsp;</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Innova 4300</td><td>Crescita di incubazione per candida</td></tr><tr><td>Provette da 15 ml</td><td>Bio Basic</td><td>BT888-SY</td><td>Utilizzato per la coltura cellulare e la crescita della candida</td></tr><tr><td>Provette da 50 ml</td><td>Bio Basic</td><td>CT 788-YS</td><td>Utilizzato per la coltura cellulare e la crescita della candida</td></tr><tr><td>Centrifuga da tavolo</td><td>VWR International LLC</td><td>82017-654</td><td>Per la pellettatura della candida -900 g</td></tr><tr><td>Allegra Centrifuga</td><td>Beckman Coulter</td><td>392302</td><td>Colture cellulari - 480 g</td></tr><tr><td>1,5 ml di provette eppendorf</td><td>Bio Basic</td><td>BT620-NS</td><td>Preparazione della concentrazione finale di candida</td></tr><tr><td>2x paraformaldeide Microscopia</td><td>elettronica Scienze</td><td>15710</td><td>Fissaggio della candida per il conteggio</td></tr><tr><td>Emocitometro</td><td>VWR International LLC</td><td>15170-172</td><td>Conteggio delle cellule</td></tr><tr><td>PBS - Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Bio Basic</td><td>PD8117</td><td>Preparazione di tamponi</td></tr><tr><td>Ketamina/xilazina&nbsp;</td><td>Case Western Reserve University - Animal Resource</td> <td>Center-Ottenuto</td> <td>dal protocollo approvato ARC per l'anestesia</td></tr><tr><td>Unguento lubrificante oftalmico&nbsp;</td><td>Unguento allergan-Eye</td><td></td> <td>per animali per prevenire la secchezza</td></tr><tr><td>Soluzione salina (0,9% NaCl)</td><td>G Biosciences</td><td>786-561</td><td>Somministrato agli animali per prevenire la disidratazione</td></tr><tr><td>batuffolo di cotone da 3 mm di diametro&nbsp;</td><td>VWR International LLC</td><td>BP7603</td><td>Sfere da 3 mm per l'infezione da candida</td></tr><tr><td>Cuscinetti in gel termico</td><td>Case Western Reserve University - Animal Resource</td> <td>Center-per</td> <td>il mantenimento della temperatura corporea e un rapido recupero</td></tr><tr><td>Colorazione con ematossilina ed eosina</td><td>Histoserv - MD-Istologia</td><td></td> <td>tissutale</td></tr><tr><td>10% formalina&nbsp;</td><td>Scienze della microscopia elettronica</td><td>JC1111 / MC</td><td>Istologia tissutale</td></tr><tr><td>70% etanolo&nbsp;</td><td>VWR International LLC</td><td>97064-490</td><td>Scopo di sterilizzazione</td></tr><tr><td>PMA - Forbolo 12-miristato 13-acetato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585-1MG</td><td>Restimolazione delle cellule</td></tr><tr><td>Ionomicina</td><td>Life Technologies</td><td>124222 1mg</td><td>Restimolazione delle cellule</td></tr><tr><td>Kit di permeabilizzazione di fissazione</td><td>eBiosciences</td><td>E16913-106</td><td>Cellule di fissaggio per citometria a flusso</td></tr><tr><td>Siringhe per tubercolina</td><td>BD Biosciences</td><td>309659</td><td>Iniezione di topi</td></tr><tr><td>25 G x 3/8 aghi</td><td>BD Biosciences</td><td>309626</td><td>Iniezione di topi</td></tr><tr><td>Rag1 -/- topi</td><td>Jackson laboratories</td><td>Codice prodotto: 002216</td><td>Topi riceventi</td></tr><tr><td>CD45.1 topi congenici</td><td>Jackson laboratories</td><td>Codice prodotto:002014&nbsp;</td><td>Cellule Th17 del donatore</td></tr><tr><td>CB17-SCID topi</td><td>Jackson laboratories</td><td>Codice prodotto: 001303</td><td>Topi riceventi Topi</td></tr><tr><td>Balb/c Jackson</td><td>laboratories</td><td>Codice prodotto: 000651</td><td>Cellule Th17 donatrici</td></tr></tbody></table>

th17 infiammazione modello di orofaringea candidosi in topi immunodeficienti

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

'La candidosi orofaringea (OPC) è causata non solo dalla mancanza di resistenza immunitaria dell'ospite, ma anche dall'assenza di un'appropriata regolazione dell'immunopatologia indotta dall'infezione. Sebbene le cellule Th17 siano implicate nella difesa antifungina, il loro ruolo nell'immunopatologia non è chiaro. Questo studio presenta un metodo per stabilire l'immunopatologia orale Th17 associata all'infezione orale da candida nei topi immunodeficienti. Il metodo si basa sulla ricostituzione di topi linfopenici con cellule Th17 coltivate in vitro, seguita da un'infezione orale con Candida albicans (C. albicans). I risultati mostrano che le cellule Th17 non trattenute provocano infiammazione e patologia ed è associata a diverse letture misurabili tra cui la perdita di peso, la produzione di citochine pro-infiammatorie, l'istopatologia della lingua e la mortalità, dimostrando che questo modello può essere prezioso nello studio dell'immunopatologia OPC. Il trasferimento adottivo di cellule regolatorie (Treg) controlla e riduce la risposta infiammatoria, dimostrando che questo modello può essere utilizzato per testare nuove strategie per contrastare l'infiammazione orale. Questo modello può essere applicabile anche nello studio dell'immunopatologia orale Th17 in generale nel contesto di altre malattie orali.

In questo modello, sia i topi -infected Candida e topi non infetti in Rag-1 - / - sfondo immunodeficienti sono state adoptively trasferiti con le cellule Th17 3-5 giorni prima l&#39;infezione. Un totale di 10-12 topi sono stati utilizzati per gli esperimenti, con 2 topi in ciascun sham infettati gruppi, e 4-5 in ciascuno dei gruppi infetti Candida. Cellule naive sono stati ottenuti da congenici Thy1.1 o CD45.1 topi, in modo che le cellule Th17 iniettate sono stati monitorati in vivo...

Sebbene siano disponibili modelli di infezione da Candida per studiare la resistenza immunitaria dell'ospite, è assente un modello per studiare l'immunopatologia mediata dalle cellule T nel contesto dell'infezione da Candida. Qui descriviamo un metodo per stabilire l'immunopatologia Th17 associata all'infezione orale da Candida nei topi immunodeficienti.

Th17 Infiammazione Modello di orofaringea candidosi in topi immunodeficienti

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

L'obiettivo generale di questa procedura è sviluppare un modello di infiammazione orale dipendente da infezione mediata da cellule TH17 patologiche. Questo viene ottenuto innanzitutto iniettando cellule TH17 in topi immunodeficienti. Il passaggio successivo consiste nel coltivare il fungo Candida albicans, raccogliere le blastospore e prepararle in soluzione salina tampone al fosfato (PBS).L'ultimo passaggio consiste nell'iniettare oralmente nei topi le spore di blasto per indurre la proliferazione delle cellule TH17 iniettate e provocare un'infiammazione orale. I risultati mostrano che i topi iniettati con TH17 sviluppano perdita di peso e infiammazione della lingua, come evidenziato dall'analisi mediante citometria a flusso e immunohistochemia del tessuto linguale. Le implicazioni di questa tecnica si estendono pertanto alla immunoterapia orale, grazie a questo modello murino.Il modello di infiammazione TH17 può essere utilizzato anche per studiare l'infiammazione TH17 nel contesto di altre malattie orali, dimostrando che la procedura sarà me e vascolare azotato, e un ricercatore post-dottorato nel mio laboratorio. Questa procedura richiede cellule T naive precedentemente selezio

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Protocolli per l&#39;inoculazione vaginale e Prelievo dei campioni nel modello murino sperimentale di Candida Vaginite

Con le funzioni effettrici distinto da altri sottoinsiemi di cellule T, le cellule Th17 sono stati implicati nel centro di autoimmunità infiammatoria. Questo protocollo vitro la differenziazione in Th17 fornisce un mezzo per determinare se naïve linfociti T CD4 + in grado di differenziarsi in cellule Th17, e di esaminare ulteriormente il loro ruolo nella autoimmunità e risposta dell'ospite.

Isolamento e differenziazione di Th17 Naïve linfociti T CD4

La risposta immunitaria dell'ospite all'infezione patogeno è un processo strettamente regolata. Utilizzando un polmone modello di esposizione lipopolisaccaride nei topi, è possibile effettuare valutazioni ad alta risoluzione dei complessi meccanismi associati alla patogenesi della malattia.

L&#39;utilizzo di orofaringea intratracheale PAMP Amministrazione e lavaggio broncoalveolare per valutare la risposta immunitaria nei topi Host

Galleria mellonella serve come un modello di invertebrati marini per candidosi diffusa. Qui, abbiamo dettaglio l'infezione protocollo e fornire dati di supporto per l'efficacia del modello.

Il modello di infezione del Waxworm di Galleria mellonella per candidosi disseminata

Qui, presentiamo un metodo efficace ed efficiente per le iniezioni di vene della coda dei roditori utilizzando un dispositivo di riscaldamento / contenimento dal design unico. Semplificando l'avvio di processi di vasodilatazione e contenimento, questo protocollo consente iniezioni endovenose accurate e tempestive di grandi gruppi di animali con un disagio minimo.

Un dispositivo di riscaldamento / contenimento contemporaneo per iniezioni efficienti della vena della coda in un modello di sepsi fungina murina

L'infezione dell'articolazione periprotesica (PJI) causata da agenti patogeni pericolosi è comune in ortopedia clinica. I modelli animali esistenti non sono in grado di simulare accuratamente la situazione reale della PJI. Qui, abbiamo stabilito un modello murino di PJI associato al biofilm di Candida albicans per la ricerca e lo sviluppo di nuove terapie per la PJI.

Un modello di infezione da Candida albicans articolare periprotesica nel topo

Stabiliamo un modello murino di infezione correlata al catetere (CRI) associata a C.albicans, in cui si forma un biofilm sul catetere e l'interazione tra C.albicans e l'ospite è ben correlata con l'IRC clinico. Questo modello aiuta a selezionare le terapie per l'IRC associato al biofilm di C.albicans , gettando le basi per la trasformazione clinica.

Un modello di infezione da Candida albicans correlato al catetere nel topo

Questo protocollo descrive l'applicazione della terapia fotodinamica antimicrobica (aPDT) in un modello murino di candidosi orale. L'aPDT è stata eseguita utilizzando una miscela solubile in acqua di curcuminoidi e luce LED blu.

Terapia fotodinamica antimicrobica mediata da curcuminoidi su un modello murino di candidosi orale

Questo protocollo descrive la differenziazione di cellule T CD4+ naive in cellule Th17 patogene in vitro. In particolare, se combinato con un approccio basato sulla citometria a flusso multiparametrica, è possibile ottenere una purezza del 90% delle cellule Th17 patogene da cellule T CD4+ naive utilizzando questo metodo di differenziazione.

Differenziazione in vitro di cellule T CD4+ naive in cellule Th17 patogene nel topo

Il presente protocollo delinea l'applicazione di modelli tissutali organotipici per lo studio delle interazioni ospite-patogeno in vitro. In particolare, il sistema modello descritto utilizza un epitelio orale multistrato esposto a microrganismi associati a biofilm (placca dentale) nel contesto della salute orale rispetto alla malattia.

Sistemi modello di tessuto organotipico per lo studio delle interazioni ospite-patogeno in vitro

Scopri un modello di infiammazione orofaringea mediata da cellule Th17 in topi immunodeficienti con Candida albicans. Questo metodo permette di studiare l'immunopatologia T-cellulare e le potenziali terapie immunologiche orali.

Th17 Infiammazione Modello di orofaringea candidosi in topi immunodeficienti

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