Generazione efficiente di reporter knockin specifici per il lignaggio neurale hiPSC utilizzando il sistema CRISPR/Cas9 e Cas9 Double Nickase

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28 maggio 2015

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Gli strumenti di editing del genoma come il sistema CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated) hanno notevolmente migliorato l'efficienza del targeting genico nelle cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC). Questo manoscritto descrive un protocollo per la generazione di reporter hiPSC specifici per il lignaggio utilizzando la ricombinazione omologa assistita dal sistema CRISPR/Cas.

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Generazione di reporter knock-in

Chapters in this video

0:05

Titolo

1:54

Progettazione dei vettori di targeting

2:41

Progettazione e costruzione dei vettori sgRNA per il sistema CRISPR/Cas9

5:20

Progettazione e costruzione di sgRNA per la doppia nickasi Cas9n

8:06

Valutazione degli sgRNA tramite endonucleasi T7 1

11:03

Predizione in silico di potenziali siti off-target

12:32

Risultati: Il saggio T7E1 viene utilizzato per valutare gli sgRNA prima della trasfezione delle hiPSC

13:56

Conclusione

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