Name: Il Swim test forzato come modello di depressione-come Behavior (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: Impara il test di nuoto forzato per studiare comportamenti simili alla depressione nei roditori. Questo metodo valuta l'efficacia di potenziali trattamenti antidepressivi misurando l'immobilità come indicatore di disperazione comportamentale.

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Questa ricerca è stata supportata dalla Israel Science Foundation (sovvenzione n. 738/11), dall'Istituto Nazionale di Psicobiologia in Israele (NIPI-7-2011-12) e dalla Open University Foundation

NOTA: Tutti i protocolli sperimentali sono stati approvati dal Comitato Internazionale per cura degli animali e uso in Israele. Sono stati fatti tutti gli sforzi per ridurre al minimo il numero di animali utilizzati e le loro sofferenze. 1. Preparazione per la Swim test forzato <ol><li> Utilizzare due stanze adiacenti. Utilizzare una camera come una &quot;sala d&#39;attesa&quot; per trattenere gli animali prima della prova comportamentale, e l&#39;altra per l&#39;esecuzione della procedura. </li><li> Preparare contenitori di vetro cilindrico trasparente (l&#39;unica limitazione per il numero di contenitori è lo spazio disponibile) misura 50 cm di altezza e un diametro di 20 cm. NOTA: E &#39;possibile eseguire più animali contemporaneamente nella stessa stanza. Se è così, separare i contenitori tra loro con uno schermo scuro in modo che gli animali non vedranno l&#39;altro durante la procedura. </li><li> Preparare videocamera (s) di fronte dei contenitori in modo che ogni telecamera percepisce uno o più contenitori in un modo che will consentire la chiara osservazione del comportamento degli animali in seguito durante la visualizzazione del filmato. </li><li> Preparare gabbie essiccazione pulite, lampade di calore e pastiglie di calore per gli animali che hanno terminato la procedura per evitare l&#39;ipotermia. Assicurarsi che il fondo della gabbia è carta assorbente e cambiarlo quando si bagna. Non mettere le gabbie in sala prove. NOTA: Assicurarsi di non mescolare gli animali provenienti da diverse gabbie a casa, mentre hanno la dimora nelle gabbie di essiccazione transitori. </li></ol> 2. Animal Handling prima del test <ol><li> Animali domestici in una stanza con una luce 12 ore / ciclo scuro. </li><li> Durante i giorni della procedura sperimentale invia animali libero accesso a cibo e acqua, tranne per il tempo specifico trascorso in camera procedimento. </li><li> Quando si usano ratti, gestire gli animali per circa 2 minuti al giorno, 5 giorni prima dell&#39;inizio della procedura sperimentale. </li></ol> 3. Procedura di formazione IlSi opera in modo diverso per ratti e topi. NOTA: Per entrambi i topi e ratti, osservare gli animali mentre sono in acqua in ogni momento. In caso di un animale appare in grave difficoltà (ad esempio molto stanco, non può rimanere fino float) togliere l&#39;animale dall&#39;acqua e la esclude dalla dell&#39;esperimento. <ol><li> Per i topi - C&#39;è una sessione 6 min lungo, diviso in pre-test (la prima 2 min) e test (l&#39;ultimo 4 min). <ol><li> Affinché i topi per abituarsi all&#39;ambiente di test, trasportare gli animali nelle loro gabbie a casa almeno 30 minuti prima del test comportamentali per la sala d&#39;attesa. </li><li> Riempire i cilindri con acqua di rubinetto a 25 ° C e regolare la profondità dell&#39;acqua in base alle dimensioni del mouse &#39;, in modo che non può toccare il fondo del contenitore con le zampe posteriori. </li><li> Segnare il cilindro con il numero di animali ai fini dell&#39;identificazione dell&#39;animale in seguito durante la visualizzazione del filmato. </li><li>Accendere il video della telecamera / s e quindi inserire ogni topo nel contenitore cilindro riempito d&#39;acqua per 6 min. </li><li> Trascorsi 6 minuti, spegnere la fotocamera / s, rimuovere il mouse dal contenitore e metterlo nella gabbia di essiccazione transitorio con la lampada di calore sopra di esso e il pad di calore sotto. I topi deve essere attentamente e costantemente monitorato, mentre il recupero in questa gabbia. A questo scopo è possibile collocare un termometro a livello dei topi per assicurarsi che la temperatura nella gabbia non superi 37 ° C. Inoltre, posizionare la gabbia tale che non tutto cade sotto la lampada o sul pad; questo permette al mouse per spostarsi in una zona più fredda se lo si desidera. </li><li> Cambiare l&#39;acqua dopo ogni sessione per evitare qualsiasi influenza sul successivo mouse. </li></ol></li><li> Per i ratti - Ci sono 2 sessioni, 24 ore di distanza. La prima sessione è la fase di pre-test (15 min) e la seconda sessione è la fase di prova (5 min). <ol><li> Affinché i ratti per ottenere acclimatati allatest ambiente, trasportare gli animali nelle loro gabbie a casa almeno 30 minuti prima del test comportamentali per la sala d&#39;attesa. </li><li> Riempire i cilindri con acqua di rubinetto a 23 ± 1 ° C e regolare la profondità dell&#39;acqua in base alle dimensioni del ratto, in modo che non può toccare il fondo del contenitore con le zampe posteriori. </li><li> Segnare il cilindro con il numero di animali ai fini dell&#39;identificazione dell&#39;animale in seguito durante la visualizzazione del filmato. </li><li> Inserire ogni ratto nel contenitore cilindro riempito di acqua per 15 min. </li><li> Dopo 15 min sono trascorsi rimuovere il ratto dal contenitore e posizionarlo nella gabbia essiccazione transitoria con la lampada di calore sopra di esso e il pad di calore sotto. Il ratto deve essere attentamente e costantemente monitorato, mentre il recupero in questa gabbia. A questo scopo è possibile collocare un termometro a livello del topo per assicurarsi che la temperatura nella gabbia non superi 37 ° C. Inoltre, posizionare la gabbia tale che non tutto falls sotto la lampada o sopra il pad; questo permette il ratto per spostarsi una zona più fredda se desiderato. </li><li> Cambiare l&#39;acqua dopo ogni sessione per evitare qualsiasi influenza sul successivo ratto. NOTA: Questa è la fine della fase di pre-test. </li><li> Ventiquattro ore più tardi, in modo che i topi per ottenere acclimatati per l&#39;ambiente di test, trasportare gli animali nelle loro gabbie a casa almeno 30 minuti prima del test comportamentali per la sala d&#39;attesa. </li><li> Riempire i cilindri con acqua di rubinetto a 23 ± 1 ° C e regolare la profondità dell&#39;acqua in base alle dimensioni del ratto, in modo che non può toccare il fondo del contenitore con le zampe posteriori. </li><li> Segnare il cilindro con il numero di animali ai fini dell&#39;identificazione dell&#39;animale in seguito durante la visualizzazione del filmato. </li><li> Accendere il video della telecamera / s e quindi inserire il topo nel contenitore cilindro riempito d&#39;acqua per 5 minuti. Assicurarsi che ogni ratto è testato nello stesso contenitore e la posizione nella stanza come il giorno precedente. </li&gt; <li> Dopo 5 minuti sono trascorsi accendere la fotocamera / s, rimuovere il ratto dal contenitore e metterlo nella gabbia di essiccazione transitorio con la lampada di calore sopra di esso e il pad di calore sotto. Il ratto deve essere attentamente e costantemente monitorato, mentre il recupero in questa gabbia. A questo scopo è possibile collocare un termometro a livello del topo per assicurarsi che la temperatura nella gabbia non superi 37 ° C. Inoltre, posizionare la gabbia tale che non tutto cade sotto la lampada o sul pad; questo permette il ratto per spostarsi una zona più fredda se desiderato. </li><li> Cambiare l&#39;acqua dopo ogni sessione per evitare qualsiasi influenza sul successivo ratto. NOTA: Questa è la fine della fase di test. </li></ol></li></ol> 4. La codifica Behavioral Per i topi, codificare l&#39;ultima 4 min definita come la fase di test. Per ratti, codificare il 5 min della fase di test. <ol><li> Codice la durata del tempo trascorso come &quot;Immobile&quot;, se il mouse è mobilecon l&#39;assenza di qualsiasi movimento tranne quelli necessari per mantenere il naso sopra l&#39;acqua. </li><li> Codice la durata del tempo trascorso come &quot;Lottando / arrampicata&quot; se si osservano rapidi movimenti degli arti anteriori in modo che le zampe anteriori rompono la superficie dell&#39;acqua. </li><li> Codice la durata del tempo trascorso come &quot;Swimming&quot; Se il movimento di arti anteriori o posteriori degli arti in maniera bambini si osserva. NOTA: È possibile utilizzare un modo alternativo per codificare questi comportamenti, questo include un metodo di tempo-di campionamento. Il tasso di nuoto, lotta o l&#39;immobilità come la frequenza degli episodi a 5 sec intervalli per tutta la sessione di test. </li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il FST è utilizzato per monitorare il comportamento depressivo simile e si basa sul presupposto che l&#39;immobilità riflette una misura di disperazione comportamentale 3. I principali vantaggi di questa procedura risiede nella sua relativamente facile funzionamento e risultati veloci. Inoltre, la sua sensibilità ad una vasta gamma di farmaci antidepressivi che lo rende un test di screening adatto è una delle caratteristiche più importanti che conducono alla sua elevata validità predittiva 29. È im...

La depressione è un disturbo psichiatrico pericolo di vita e un importante problema di salute pubblica in tutto il mondo, con una incidenza del 5% e una prevalenza una tantum del 15-20%. Inoltre, si stima che entro il 2020 la depressione sarà tra i primi tre contribuenti l&#39;onere della malattia 1,2. La depressione è associata a disabilità, riduzione della qualità della vita, l&#39;aumento dei costi relativi alla salute ed è considerato un fattore di rischio principale per molte malattie, tra cui cardiovascolari, metaboliche e disturbi neuropsichiatrici 3,4 .Current trattamenti farmaco-terapeutica hanno limitato l&#39;efficacia e sono associati con molti effetti collaterali deleteri 5,6. Pertanto, una migliore comprensione della fisiopatologia di questo disturbo insieme con lo sviluppo di trattamenti innovativi e migliorati rimane fondamentale. Quindi, modelli animali sono essenziali per promuovere la ricerca in questo campo. Ci sono molti modelli utilizzati per lo studio di questo disturbo (&lt;em&gt; eg test di preferenza saccarosio test di sospensione coda) con il test del nuoto forzato (FST, noto anche come test di Porsolt dopo l&#39;autore di questo modello 7,8) essendo uno dei test più comunemente utilizzati 7,9-12. Durante la FST un animale viene posto in un contenitore pieno d&#39;acqua da cui non può sfuggire. L&#39;animale sarà in primo luogo cercare di scappare, ma alla fine sarà presente l&#39;immobilità (cioè galleggiante con l&#39;assenza di qualsiasi movimento ad eccezione di quelli necessari per mantenere il naso sopra l&#39;acqua). La FST è un modello molto popolare in ricerca animale per una serie di motivi. Innanzitutto, essa comporta l&#39;esposizione degli animali a stress, che è stato dimostrato di avere un ruolo nella tendenza depressione maggiore 12-14. Inoltre la depressione è spesso visto come una mancanza di capacità di gestire lo stress 15-17. In secondo luogo, il trattamento farmacologico con antidepressivi prima della prova, è stato dimostrato per ridurre immobilità nel FST &lt;sup&gt; 18-23. Pertanto, è spesso utilizzato come test di screening per i nuovi composti con potenziali proprietà antidepressive 15-17,24. Inoltre, la FST ha dimostrato di condividere alcuni dei fattori che sono influenzati o alterati da depressione negli esseri umani, come ad esempio i cambiamenti dei consumi alimentari, alterazioni del sonno e anedonia 15-17,24 droga-ritiro-indotta. Questo è anche il motivo per cui questo test è talvolta usato per valutare il comportamento depressivo-simile nei topi mutanti, con aumento o diminuzione della immobilità basale (rispetto al &#39;wild-type&#39; topi) 25,26.

<table><tbody><tr><td>Computer</td><td>Dell</td><td></td><td>Intel&#174; Nucleo&#153; CPU i3-2120 @ 3,30 GHz, 4 GB di RAM</td></tr><tr><td>Fotocamera</td><td>VIDO</td><td>AU-CB422</td><td>TELECAMERA CCD B/N&nbsp; http://www.vido-europe.com/products_detail.asp?id=33&pcategory=2</td></tr><tr><td>Software di codifica</td><td>Biobserve</td><td></td><td>FST Analysis http://www.biobserve.com/products/fst/index.html</td></tr><tr><td>Lampada riscaldante</td><td>Ikea</td><td>AA-19025-3</td><td>ESPRESSIVIO 400.504.46&nbsp;- Lampadina G4 da 20W&nbsp; http://www.ikea.com/ms/en_US/customer_service/assembly/E/E00050467.pdf</td></tr><tr><td>Riscaldamento&nbsp; cuscino</td><td>Sachs</td><td>EF-188B</td><td>38*38cm Riscaldamento&nbsp; cuscino http://www.sachs.co.il/eng/lego_tree.php?instance_id=21&actions=show&id= 604</td></tr></tbody></table>

il swim test forzato come modello di depressione-come behavior

The Forced Swim Test as a Model of Depressive-like Behavior

L'obiettivo del presente protocollo è descrivere il test di nuoto forzato (FST), che è uno dei test più comunemente usati per lo studio del comportamento depressivo nei roditori. La FST si basa sul presupposto che quando mette un animale in un contenitore pieno d'acqua, prima farà sforzi per scappare, ma alla fine mostrerà un'immobilità che può essere considerata come un riflesso di una misura di disperazione comportamentale. Questo test è stato ampiamente utilizzato perché prevede l'esposizione degli animali allo stress, che ha dimostrato di avere un ruolo nella tendenza alla depressione maggiore. Inoltre, è stato dimostrato che l'FST condivide alcuni dei fattori che sono influenzati o alterati dalla depressione negli esseri umani, tra cui i cambiamenti nel consumo di cibo, le anomalie del sonno e l'anedonia indotta dall'astinenza da farmaci. I principali vantaggi di questa procedura sono che è relativamente facile da eseguire e che i suoi risultati sono facilmente e rapidamente analizzati. Inoltre, la sua sensibilità a un'ampia gamma di farmaci antidepressivi che lo rende un test di screening adatto è una delle caratteristiche più importanti che portano alla sua elevata validità predittiva. Nonostante il suo fascino, questo modello presenta una serie di svantaggi. In primo luogo, la questione dell'aumento cronico è problematica in questo test perché nella vita reale i pazienti devono essere trattati per almeno diverse settimane prima di provare sollievo dai loro sintomi. Infine, a causa dell'avversità dell'FST, è importante prendere in considerazione le possibili influenze che potrebbe avere sulla struttura/funzione cerebrale se le analisi cerebrali devono essere effettuate seguendo questa procedura.

I seguenti risultati si basano su dati pubblicati dal nostro laboratorio. In questo esperimento, i topi femmina adulta ICR sono stati testati dopo 3 settimane di trattamento con l&#39;inibitore selettivo della ricaptazione della serotonina (SSRI) escitalopram o nuovo trattamento a base di erbe anti-depressivi e anti-ansia (NHT) (per ulteriori informazioni in merito al trattamento a base di erbe, vedere 12 , 27,28). One-way ANOVA ha rivelato che il trattamento ha ridotto comportamento depressivo-come nel FST [...

Questo protocollo descrive il test di nuoto forzato, che viene utilizzato per lo studio del comportamento depressivo nei roditori. Questa procedura consiste nel mettere un animale in un contenitore pieno d'acqua che alla fine porterà all'esibizione di un comportamento di immobilità, che è considerato riflettere la disperazione comportamentale.

Il Swim test forzato come modello di depressione-come Behavior

The goal of the present protocol is to describe the forced swim test (FST), which is one of the most commonly used assays for the study of depressive-like ...

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre un comportamento simile alla depressione nei roditori e testare l'effetto di terapie per lo studio della depressione. Questo viene ottenuto preparando innanzitutto contenitori cilindrici trasparenti in vetro riempiti d'acqua fino a una profondità tale per cui il topo non possa toccare il fondo con le zampe posteriori. Il secondo passaggio consiste nell'inserire ogni animale in un contenitore cilindrico pieno d'acqua e registrare il comportamento dei topi per un totale di sei minuti.L'ultimo passaggio consiste nel codificare la durata del tempo trascorso in movimenti di lotta e di nuoto utilizzando un software di analisi del test del nuoto forzato. In definitiva, il test del nuoto forzato viene utilizzato per dimostrare che, quando un animale viene posto in un contenitore pieno d'acqua, alla fine mostrerà un comportamento di immobilità, che potrebbe rappresentare un indice di disperazione comportamentale.Il trattamento con farmaci antidepressivi e ansiolitici può alterare questi comportamenti. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il test di preferenza per il saccarosio, è che è relativamente semplice da eseguire e i risultati possono essere analizzati in modo facile e rapido. La duplicazione di questa tecnica si estende alla terapia o alla diagnosi della depressione.La sua sensibilità verso un'ampia gamma di antidepressivi lo rende un test di screening adatto per il test della nuotata forzata. Utilizzare due stanze adiacenti, una come stanza d'attesa per il contenimento degli animali prima dei test comportamentali, e l'altra per l'esecuzione della procedura.Preparare contenitori cilindrici di vetro trasparenti alti 50 centimetri e con un diametro di 20 centimetri. Successivamente, posizionare delle videocamere davanti ai contenitori in modo che ogni videocamera inquadri uno o più contenitori permettendo un'osservazione chiara del comportamento dell'animale durante la visione delle riprese. Inoltre, preparare gabbie asciutte, lampade riscaldanti e tappetini riscaldanti per gli animali che hanno terminato la procedura.Per evitare l'ipotermia, assicurarsi che il fondo della gabbia sia ricoperto di carta assorbente e sostituirla quando si inumidisce. Per eseguire la procedura di addestramento nei topi, si effettua una sessione della durata di sei minuti, suddivisa in pretest per i primi due minuti e test per gli ultimi quattro minuti, al fine di abituare i topi all'ambiente di prova. Trasportare gli animali nella stanza di attesa nelle loro gabbie di provenienza almeno 30 minuti prima dell'inizio dei test comportamentali.Riempire i cilindri con acqua di rubinetto a 25 gradi Celsius e regolare la profondità dell'acqua in base al peso del topo, in modo che non possa toccare il fondo del contenitore con le zampe posteriori. Contrassegnare il cilindro con il numero dell'animale al fine di identificare l'animale durante la visione delle riprese; quindi accendere le telecamere video e immergere ciascun topo nel cilindro pieno d'acqua per sei minuti. Trascorsi sei minuti, spegnere le telecamere ed estrarre il topo dal contenitore.Posizionare il topo nella gabbia di asciugatura transitoria con la lampada a infrarossi posizionata sopra e il tappetino riscaldante posizionato sotto. Cambiare l'acqua dopo ogni sessione per evitare qualsiasi influenza sul topo successivo. La valutazione del comportamento può essere effettuata da un sperimentatore in cecità rispetto alle condizioni dei topi oppure mediante un software di analisi del test della nuotata forzata.Codificare innanzitutto la durata del tempo trascorso in immobilità. Se il topo galleggia senza alcun movimento, eccetto quelli necessari a mantenere il naso al di sopra dell'acqua, allora registrare la durata del tempo trascorso in attività di lotta o arrampicata. Se si osservano movimenti rapidi dei quattro arti tali che gli artigli anteriori fuoriescano dalla superficie dell'acqua, infine codificare la durata del tempo trascorso in nuoto.Se in questo esperimento si osservano movimenti degli arti anteriori o posteriori in stile nuoto a crawl. Topi femmine adulti ICR sono stati trattati dopo tre settimane di trattamento con l'inibitore selettivo della ricaptazione della serotonina, la citalopram, o con il nuovo trattamento erboristico antidepressivo e ansiolitico NHT. Sia il trattamento con citalopram sia quello con NHT hanno ridotto l'immobilità e quindi il comportamento simile alla depressione nel test di nuoto forzato. Inoltre, il trattamento con citalopram ha determinato livelli più elevati di comportamento di lotta nel test di nuoto forzato.Al contrario, il trattamento con citalopram o con il NHT non ha avuto alcun effetto sul comportamento natatorio dopo questa procedura. Altri metodi, come l'analisi istologica e biochimica, possono essere eseguiti per rispondere ad ulteriori domande, ad esempio sulla natura del meccanismo neuronale alla base di questo comportamento simile alla depressione.

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Comportamento

Il test di nuoto forzato è convalidato come un approccio sperimentale per valutare il potenziale efficacia antidepressiva nei roditori. Animali da laboratorio sono collocati in una vasca di acqua e fuga comportamento relativo alla mobilità è quantificato. Le procedure comuni per la versione del mouse di questa prova sono descritti.

La forzata mouse test Swim

La coda-sospensione in esame è convalidato come una procedura sperimentale per valutare l'efficacia di trattamenti farmacologici antidepressivi nei topi. I topi sono sospesi per la coda per sei minuti e la fuga comportamenti correlati sono valutati. Si descrivono le modalità utilizzate nella conduzione della prova sospensione coda.

La coda di test Sospensione

Questo video dimostra il metodo per indurre lo stress cronico in un topo attraverso l'immobilizzazione ripetuta, che porta al rilascio di corticosterone e alla riduzione dell'attività del recettore del glutammato nei neuroni, che si traduce in un comportamento simile alla depressione.

Indurre un comportamento simile alla depressione in un topo attraverso lo stress da immobilizzazione

Questo protocollo descrive un nuovo modello con cui ratti sani potrebbero contrarre la depressione in un dato tempo periodthrough contagio dall'esposizione all'imprevedibile cronico ha sottolineato ratti (CUS).

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Qui, presentiamo un protocollo per introdurre un modello del ratto di affaticamento centrale utilizzando la modifica metodo di piattaforma multiplo (MMPM).

Un ratto di modello di affaticamento centrale utilizzando una versione modificata più piattaforma metodo

Una batteria di test del comportamento globale delle capacità motorie, umore — tra cui l'interazione sociale, depressione e ansia — e cognizione è progettato per la valutazione ripetuta di cambiamenti comportamentistici neurodegeneration in topi.

Una batteria di Test comportamentali per la valutazione ripetuta di abilità motorie, l'umore e cognizione in topi

Questo articolo fornisce un protocollo semplificato e standardizzato per l'induzione del comportamento depressivo in topi cronicamente immobilizzati utilizzando un rimboschimento. Inoltre, vengono spiegati il comportamento e le tecniche fisiologiche per verificare l'induzione della depressione.

Un protocollo di stress cronico per indurre comportamenti simili alla depressione nei topi

Il modello murino di disperazione cronica (CDM) della depressione consiste in sessioni di nuoto forzate ripetitive e un'altra fase di nuoto ritardata come lettura. Rappresenta un modello idoneo per l'induzione di uno stato depressivo cronico stabile per almeno 4 settimane, modificabile per valutare interventi di trattamento subcronico e acuto.

Modelli animali di depressione - Modello di disperazione cronica (CDM)

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Effetto della prescrizione di Yi-Nao-jie-Yu sulla depressione post-ictus nei ratti utilizzando l'occlusione dell'arteria cerebrale media combinata con la contenzione comportamentale

Questo protocollo fornisce un quadro per valutare i cambiamenti comportamentali indotti dallo stress in Drosophila melanogaster. Combinare saggi complementari consente la quantificazione dell'attività, dell'esplorazione e del processo decisionale per singole mosche. L'approccio è flessibile e può essere adattato a una vasta gamma di studi che indagano la biologia dello stress, il metabolismo e la funzione neurocomportamentale.

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