Name: Valutazione Ecografia base di coronaropatia Flow e flusso coronarico Reserve Utilizzando la pressione Sovraccarico modello nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Impara a monitorare la riserva di flusso coronarico nei topi mediante ecocardiografia Doppler transtoracica. Questo metodo non invasivo consente il rilevamento precoce delle alterazioni del flusso coronarico prima dell'insorgenza della malattia.

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Ringraziamo Fred Roberts per l'esemplare supporto tecnico e apprezziamo anche l'aiuto del nucleo istologico del Beth Israel Hospital. Ringraziamo il Brigham Women's Hospital Cardiovascular Physiology Core per aver fornito la strumentazione e i fondi per questo lavoro. Questo lavoro è stato sostenuto in parte da un fondo vario del Dipartimento di Medicina.

NOTA: Tutte le procedure sono state eseguite in topi in accordo con American Veterinary Medical Association (AVMA) le linee guida e approvati Istituzionale cura degli animali e Usa Comitati (IACUC) protocolli. 1. Disegno dello studio <ol><li> Utilizzare 8-10 settimana vecchio maschio C57BL / 6 topi (BW ~ 25 g) nello studio. </li><li> Randomizzare topi (n = 11) in due gruppi, il gruppo di studio selezionato per bande aortico (n = 8), e il gruppo di controllo (n = 3) sottoporsi operazione sham via toracotomia. </li><li> Preparare l&#39;animale per l&#39;imaging dalla depilazione petto con crema depilatoria che è di grado medico. </li><li> Eseguire una prima ultrasuoni (sezione 2) 24 ore prima bendaggio aortico per determinare i parametri di base al giorno -1, tra una gamma di 1% e 2,5% isoflurano (miscelato con 100% O 2 tramite nosecone) anestesia indotta. </li><li> Scegli un anestetico medicalmente approvato (cioè isoflurano) e monitorare il grado di anestesia (2-3% a induce, e 1,0% per mantenere). NOTA: anestesia corretta è fondamentale per il mantenimento della battito cardiaco a tassi fisiologici normali (circa 500 battiti / min). </li><li> Conferma la profondità di anestesia da perdita di movimento dall&#39;animale in risposta ad un riflesso pedale recesso. Utilizzare paralube pomata veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia. </li><li> Eseguire l&#39;intervento chirurgico al Giorno 0 20,21. </li><li> Per banding aortico, legare l&#39;aorta con una sutura 7-0 seta intorno ad un rastremato 26 G ago inserito sull&#39;arco. NOTA: I dettagli riguardanti il protocollo sperimentale, comprese le procedure chirurgiche bendaggio aortiche, sono stati descritti in precedenza 20,21. </li><li> Eseguire post-chirurgia ad ultrasuoni di imaging (sezione 2) a Day (s) 2, 6 e 13. </li><li> Eutanasia i topi al giorno 14 e raccogliere i cuori per la valutazione istologica. Euthanize gli animali con una overdose di pentobarbital seguita dalla rimozione di un organo vitale come il cuore. Arrestate i cuori in diastole e fissare con formalina. Utilizzare la procedura di raccolta del cuore che è stato descritto in precedenza 22. </li><li> Fissare tutti i tessuti del cuore con tamponata formalina al 10%. Per la colorazione tricromica, incorporare tessuti in paraffina prima sezionamento. Utilizzare i dettagli di colorazione tricromica che sono stati ben illustrato in precedenza 14,23. </li><li> Analizzare i dati utilizzando il software offline (sezione 3). </li></ol> 2. Imaging Protocol <ol><li> Immagini lunghe e corte degli assi del setto coronarica (SCA) (Modalità B-) <ol><li> Utilizzando la sonda MS550D con frequenza centrale di 40 MHz collegati alla porta attiva, impostare il preset applicazione di &quot;imaging cardiaco&quot;. </li><li> Con la supina animale sulla piattaforma riscaldata, sotto anestesia e controllato tramite cono, posizionare la sonda con il sistema ferroviario avere la vista parasternale asse lungo (PSLAX) (Figura 1A). Verificare sempre che l&#39;animale è tenuto caldo sul platfor preriscaldatam e la temperatura corporea è mantenuta a livelli fisiologici. </li><li> Ruotare la sonda (con tacca rivolta caudalmente) in senso orario in modo che l&#39;angolo della sonda è di 15 ° rispetto alla linea di sinistra parasternale (lungo l&#39;asse view) (Figura 1B). </li><li> Regolare l&#39;angolo della sonda inclinando leggermente lungo l&#39;asse y della sonda per ottenere un full-length vista longitudinale della SCA al centro dello schermo (Figura 1B). </li><li> Una volta che i punti di riferimento adeguati (valvola aortica e l&#39;arteria polmonare) sono visti, negozio cine l&#39;immagine utilizzando il più alto frame-rate possibile. </li><li> Usando il &quot;xy&quot; assi micro-manipolatori (Figura 1D), regolare la posizione della sonda per ottenere l&#39;immagine più chiara della SCA. </li><li> Ruotare la sonda di 90 ° (con tacca rivolta caudalmente) in senso orario in modo che estremità del modulo sonda è a sinistra della linea mediana (asse corto) (Figura 1C). </li></ol></li><li> Immagini lunghe e corte assi di SCA (Color-Doppler Mode) <ol><li> Una volta che l&#39;immagine modalità B viene catturata o memorizzato cine-fare clic sul tasto di colore Doppler sulla tastiera per attivare il color Doppler finestra acustica (Figura 2). NOTA: Questo aiuta ad isolare coronarica (freccia bianca indica SCA) sia a lungo (Figura 2A) o in asse corto (Figura 2C). Colore rosso è come visto in tempo reale ed è indicativo della direzione del flusso (lontano dalla valvola aortica). </li><li> Assicurarsi che il centro di profondità (indicato da una freccia gialla sulla destra dello schermo dell&#39;immagine), si trova nel centro di arteria coronaria. </li><li> Assicurarsi che i dati vengono registrati, con il tasto cine-store, al più alto frame rate possibile (&gt; 100 fotogrammi / sec). </li></ol></li><li> PW Doppler Imaging di SCA (Pulsed-Wave o modalità PW) <ol><li> In modalità color-Doppler, clicca sul tasto PW per aprire una linea gialla-indicatore coronaria (Figura 2, mostrato in rosso). </li><li> Posizionare il gialloLinea PW nel mezzo dell&#39;arteria coronaria in vista, ad un angolo che porta alla direzionalità del flusso. Si noti che le misure di velocità sono altamente dipendente dall&#39;angolo di acquisizione dell&#39;immagine. </li><li> Regolare l&#39;angolo di flusso (Rif angolo PW) e il volume del campione (Rif SV) tale che l&#39;angolo di chiave PW è di 60 ° o meno ed il volume del campione cattura fluire nel centro della SCA. </li><li> Utilizzare deposito cine per catturare le forme d&#39;onda che indicano la velocità del flusso coronarico al picco sistole (S) e diastole (D) (Figure 3A e 3B), usando 1% e 2,5% isoflurano. </li></ol></li></ol> 3. Calcolo dei dati e analisi <ol><li> Selezionare il tempo di velocità integrale (VTI) strumento per ottenere la sistolica di picco e velocità diastolica rispetto alle immagini riportate nelle Figure 3A e 3B. </li><li> Calcolare l&#39;indice di riserva di flusso coronarico (CFR) come il rapporto di iperemia (2,5% isoflurano) di picco diastolico fbassa velocità di linea di base (1% isoflurano) velocità di flusso diastolica di picco. </li><li> Calcolare il rapporto S / D, come la velocità di picco di velocità di flusso coronarico sistolica / diastolica picco flusso coronarico. Determinare il rapporto al basale (1% isoflurano) e iperemia (2,5% isoflurano). </li><li> Per i parametri standard cardiaci funzionali quali FS, FAC, LVM, consultare i manuali del costruttore per eseguire l&#39;analisi dei dati utilizzando il software proprietario o fare riferimento a Giove carta di Cheng 2. </li></ol>

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Gli autori non riportano alcuna divulgazione.

In questo studio basato ultrasuoni, la valutazione non invasiva del flusso coronarico è riproducibile eseguita in tempo reale, per giorni, nei topi sperimentali vivi; Inoltre, il protocollo ha dimostrato la capacità di rilevare la disfunzione coronarica arteria che era presente in una fase iniziale ed è stata associata a deficit di perfusione miocardica. Questo metodo potrebbe in definitiva essere sfruttato come strumento clinico per la stratificazione del rischio cardiovascolare e / o la risposta a valutare un interven...

Clinical stenosi aortica (AS) è ben noto per promuovere un progressivo aumento del ventricolo sinistro (LV) post-carico. Per compensare questo carico emodinamico cronicamente in aumento, ipertrofia ventricolare sinistra (IVS) ne consegue come 1,2 risposta adattativa. Lo sviluppo di IVS è spesso associata ad anomalie nel microcircolo coronarico. Si pensa che la disfunzione microvascolare contribuisce a ischemia cronica in questi pazienti 5. Oltre a flusso coronarico 3,4, riserva di flusso coronarico (CFR) rappresenta modifica funzionale delle arterie coronarie 1,3 ed è definito come il rapporto tra la velocità di flusso massima in iperemia alla velocità di flusso basale o di riposo flusso velocità 4,6,7. CFR diminuisce durante LV rimodellamento 1-3,5-9 ed è usato come indice del grado di severità funzionale della disfunzione coronarica 1,10,17. E &#39;noto per essere compromessa in molte forme di cardiomiopatia dilatativa 10 e anche s coronarichetenosis 6. CFR è anche un marker prognostico per i poveri risultati clinici 12. Rimodellamento LV nella cornice di una disfunzione cardiaca, come ischemia o LVH è accompagnato anche da una fibrosi, cambiamenti nel microcircolo coronarico e l&#39;ispessimento delle arterie coronarie 1,2. Come risultato di questi cambiamenti nella fisiologia coronarica, è probabile rimodellamento delle arterie coronarie. Questo aiuta a mitigare gli effetti della bassa diffusione di ossigeno e disfunzione diastolica ventricolare sinistra che potrebbe provocare suscettibilità alla miocardica ischemia 1,2,13. I topi geneticamente modificati sono ormai uno strumento di sperimentazione ampiamente prevalente per mimare patologie umane, come l&#39;aterosclerosi coronarica 5,7,10,12,17. Particolarmente il modello sovraccarico pressorio nei topi è stato ampiamente studiato 14,17. Il modello di costrizione trans-aortica (TAC) ha dimostrato di essere associato con estesa fibrosi, e coronary stenosi conseguente, in parte, da ispessimento mediale delle arterie coronarie e con accompagnamento di cambiamenti nei modelli di flusso coronarico 1,11,17,19 simile a ciò che si vede nel setting di IVS in esseri umani. Mentre è noto che il sovraccarico di pressione prolungata porta a insufficienza cardiaca scompensata in circa 4-8 settimane, gli effetti sulla dinamica del flusso coronarico e riserva di flusso in questi modelli, nelle prime fasi del processo di progressione della malattia, e nelle diverse fasi dopo banding, sono ancora essere chiaramente delineata. Numerosi ceppi di topi sono attualmente disponibili per scopi di ricerca, tra cui ben caratterizzato LDLR - / - o ApoE - / - mice 10-12, e questi hanno spinto lo sviluppo di tecniche sensibili per valutare la funzione cardiovascolare e la morfologia nei topi che vivono 11-15. Tali tecniche includono MRI, PET, contrasto CT, ultrasuoni ad alta frequenza e fascio elettronico tomografia 2,9,17,19, tutti che forniscono alternative promettenti invasivametodi come catheterizations cardiaco e angiografia coronarica 12. Tuttavia, in topi con dimensioni molto piccole delle arterie coronarie e frequenza cardiaca elevata (HR), l&#39;imaging di circolazione coronarica costituisce ancora una sfida tecnica per molte tecniche attualmente disponibili 4,12. È interessante notare che c&#39;è stato un aumento esponenziale progressi tecnici nel campo della transtoracica Doppler (TTDE), compreso lo sviluppo di teste di scansione gamma ad alta frequenza con frequenze centrali da 15 a 50 MHz permette risoluzioni assiali di circa 30-100 micron, a profondità di 8-40 mm, e frame rate superiore a 400 fotogrammi catturati / sec. A sua volta, tecniche basate TTDE-sono emersi come uno strumento potenzialmente potente per l&#39;imaging grandi 2 o ancora più piccoli vasi, come le arterie coronarie 5,12. Un altro progresso fondamentale che ha permesso ai ricercatori di condurre studi di diagnostica per immagini del sistema vascolare in piccolo unnimals è l&#39;uso attentamente controllata di anestetici che mantengono il cuore e la frequenza respiratoria degli animali durante l&#39;imaging 11. Manutenzione dell&#39;anestesia controllata è particolarmente importante per gli studi relativi alla vasodilatazione nei topi, e l&#39;effetto dell&#39;anestesia deve inoltre essere ulteriormente esplorato in questo contesto 10,11. Nell&#39;uomo, invece, misurazioni CFR TTDE-derivati ​​sono diventati uno strumento più comunemente usato per la valutazione delle arterie coronarie epicardiche stenotiche e non ostacolato, prevalentemente discendente anteriore sinistra (LAD) arteria coronaria 5,16. Tuttavia, il ruolo prognostico di CFR e cambiamenti flusso coronarico nei pazienti asintomatici o topi con preservata funzione sistolica LV a riposo è stato molto meno esplorato 16. Pertanto, lo scopo dello studio era quello di stabilire prima un protocollo chiaro passo-passo, per valutare le variazioni di flusso coronarico utilizzando TTDE in un modello di topo di pressione di sovraccarico; secondo, questo studio ha esaminato il segno prognosticoificance di CFR e cambiamenti del flusso coronarico in risposta alla pressione di stress da sovraccarico in questi topi. Abbiamo ipotizzato che la valutazione in base TTDE di CFR e del flusso coronarico può essere utile per la diagnosi precoce di disfunzione coronarica che può precedere disfunzione ventricolare sinistra.

<table><tbody><tr><td>Crema depilatoria</td><td>Miltex, Inc.</td><td>Surgi-Prep</td><td>Applicare 24 ore prima dell'imaging</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter International Inc.</td><td>NDC 10019-773-40</td><td>2-3% per induzione e 1-1,5% per mantenimento; i battiti cardiaci saranno mantenuti a una velocità superiore a 500 battiti al minuto</td></tr><tr><td>Ultrasuoni ad alta frequenza</td><td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td>Trasduttore meccanico ad alta frequenza <td>Vevo 2100</td><td></td></tr><tr><td></td><td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td><td>MS250, MS550D, MS400</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione ecografia base di coronaropatia flow e flusso coronarico reserve utilizzando la pressione sovraccarico modello nei topi

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

L'ecocardiografia Doppler transtoracica (TTDE) è uno strumento clinicamente utile e non invasivo per studiare la velocità del flusso dell'arteria coronarica e la riserva di flusso coronarico (CFR) nell'uomo. La riduzione della CFR è accompagnata da una marcata fibrosi intramiocardica e pericoronarica e viene utilizzata come indicazione della gravità della disfunzione. Questo studio esplora, passo dopo passo, le variazioni in tempo reale misurate nella velocità del flusso coronarico, CFR e nel rapporto tra velocità di picco sistolica e diastolica (S/D) nell'impostazione di un modello di bande aortiche nei topi. Utilizzando una tecnica di imaging transtoracico Doppler che fornisce dati riproducibili e affidabili, il metodo valuta le variazioni del flusso nell'arteria coronaria settale (SCA), per un periodo di oltre due settimane nei topi, che in precedenza erano stati sottoposti a bande aortiche o toracotomia. 
Durante l'imaging, l'iperemia in tutti i topi è stata indotta dall'isoflurano, un anestetico che aumentava la velocità del flusso coronarico rispetto al flusso a riposo. Tutte le immagini sono state acquisite da un singolo imager. Due rapporti, (1) CFR, il rapporto tra le velocità di flusso iperemica e basale, e (2) il flusso sistolico (S) e diastolico (D) sono stati determinati, utilizzando un software proprietario e da due osservatori indipendenti. È importante sottolineare che i cambiamenti osservati nel flusso coronarico hanno preceduto la disfunzione del ventricolo sinistro, come evidenziato dalla massa ventricolare sinistra normale e dall'accorciamento frazionato (FS). 
Il metodo è stato confrontato con l'attuale gold standard di valutazione coronarica, l'istopatologia. Quest'ultima tecnica ha mostrato evidenti alterazioni patologiche dell'arteria coronaria sotto forma di fibrosi peri-coronarica correlate alle variazioni di flusso valutate mediante ecocardiografia. 
Lo studio sottolinea il valore dell'utilizzo di una tecnica non invasiva per monitorare la circolazione coronarica nei cuori dei topi. Il metodo riduce al minimo l'uso ridondante di animali da ricerca e dimostra che indici avanzati basati su ultrasuoni, come i rapporti CFR e S/D, possono fungere da strumenti diagnostici praticabili in una varietà di protocolli sperimentali, tra cui studi farmacologici e lo studio di ceppi geneticamente modificati.

Delle 11 topi che sono stati studiati (hanno legato, n = 8 e fittizie, n = 3), sono stati ottenuti immagini adeguate e riproducibili da un singolo osservatore in diversi punti temporali: al basale (D-1), D2, D6 e D13 . Inoltre, la velocità di flusso nel sito costrittiva è stata misurata come 2225 ± 110,9 millimetri / s, rispetto a 277,5 ± 10,51 millimetri / s nei topi sham il giorno dopo l&#39;intervento (p &lt;0.05). L&#39;aumento della velocità è la verifica dello stabilimento successo del modello sovraccarico di pres...

La riserva di flusso coronarico (CFR) è utile per la valutazione della domanda di ossigeno del miocardio e la valutazione del rischio cardiovascolare. Questo studio stabilisce un metodo ecocardiografico Doppler transtoracico (TTDE) passo-passo per il monitoraggio longitudinale delle variazioni del CFR, misurate dall'arteria coronaria nei topi, sotto il sovraccarico di pressione sperimentale del bandaggio aortico.

Valutazione Ecografia base di coronaropatia Flow e flusso coronarico Reserve Utilizzando la pressione Sovraccarico modello nei topi

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

L'obiettivo generale di questa procedura è monitorare in modo non invasivo e longitudinalmente le fluttuazioni della dinamica del flusso coronarico che si verificano in risposta a variazioni del flusso arterioso coronarico. Questo viene ottenuto acquisendo innanzitutto immagini in asse lungo e in asse corto dell'arteria coronarica settale, o SCA, in topi adulti maschi sottoposti a bendaggio aortico. Successivamente, vengono ottenute immagini in doppler colorato della SCA prima e dopo l'applicazione di un'onda pulsata, al fine di rilevare le velocità del flusso basale e massima.In definitiva, le velocità del flusso coronarico sistolico e diastolico vengono confrontate in condizioni di iperemia e a livello basale per determinare la riserva di flusso coronarico. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla diagnostica basata sull'imaging, poiché il rilevamento in tempo reale, che sfrutta immagini ad alta risoluzione, consente di individuare variazioni piccole ma significative nel flusso coronarico prima dell'insorgenza completa della malattia. Questo metodo può fornire informazioni sulla dinamica della crescita coronarica nei topi.Si può applicare anche ad altri sistemi MAR, co

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Alta frequenza Doppler è una nuova tecnologia per la valutazione della funzione miocardica regionale. Questo lavoro presenta prima prova che dimostrano l'applicabilità di questa piattaforma di imaging versatile per la misura ripetuta di ceppo del miocardio, insufficienza dp / dt, e mitralica nella ischemia-riperfuso (IR) cuore murini.

Ad alta frequenza ad alta risoluzione Ecocardiografia: Prima Prova a non invasiva misura ripetuta di deformazione miocardica, contrattilità, e rigurgito mitralico in Ischemia-riperfuso Cuore Murine

Questo articolo fornisce un protocollo per la valutazione ecocardiografica delle dimensioni del ventricolo destro e l'ipertensione polmonare nei topi. Le applicazioni includono la determinazione del fenotipo e la valutazione seriale transgenici e modelli murini tossina-indotta di cardiomiopatia e la malattia vascolare polmonare.

La valutazione ecocardiografica del cuore destro in topi

L'obiettivo di questo protocollo è quello di valutare in modo non invasivo i cambiamenti strutturali e funzionali cardiaci in un modello murino della malattia di cuore creato da trasversali costrizione aortica, con B e M-mode ecocardiografia e colore / impulsi di imaging onda Doppler.

Valutazione del Cardiac morfologiche e funzionali Variazioni modello murino di trasversale aortica costrizione da parte ecocardiografica Imaging

Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata dell'approccio ecocardiografico per la fenotipizzazione completa della funzione cardiaca e valvolare nei topi.

Approcci ecocardiografici e protocolli per completa caratterizzazione fenotipica di malattia valvolare cardiaca nei topi

La riserva di flusso coronarica (CFR) è definita come il rapporto tra il flusso massimo del sangue coronario e il flusso sanguigno coronarica a riposo. Vi presentiamo un protocollo per la valutazione del CFR nei ratti tramite ultrasuoni, che offre l'opportunità di prevedere i fattori di rischio cardiovascolare in assenza di malattia coronarica ostruttiva.

Valutazione della riserva del flusso coronario dopo la miaocardia Ischemia Reperfusione nei ratti

Presentato qui è un protocollo per studiare il microcircolo coronarico nel tessuto cardiaco murino vivente monitorando ex vivo la pressione e il flusso di perfusione arteriosa che mantiene la pressione, così come i componenti dell'albero vascolare tra cui i letti capillari e i periciti, poiché l'arteria settale è cannulata e pressurizzata.

Misurazione dinamica e imaging di capillari, arterioli e periciti nel cuore del topo

Il presente protocollo descrive la valutazione ecocardiografica della morfologia, della funzione e del flusso sanguigno coronarico del ventricolo sinistro in topi neonati di 7 giorni.

Caratterizzazione ecocardiografica della struttura, della funzione e del flusso coronarico del ventricolo sinistro in topi neonati

Il presente protocollo descrive una vista parasternale modificata dell'asse lungo per una localizzazione rapida e precisa dell'arteria discendente anteriore sinistra. Questo approccio è stato progettato per essere più semplice e facile da usare, facilitando al contempo l'esame dei cambiamenti dinamici nella riserva di flusso coronarico a seguito di ischemia-riperfusione miocardica nei topi.

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Un modello murino di ischemia miocardica e precondizionamento ischemico è un importante strumento di studio dei meccanismi...

L&#39;uso di un sistema di peso per appendere l&#39;occlusione dell&#39;arteria coronarica nei topi

Numerose manipolazioni genetiche e / o iniezioni intramiocardiche di geni, proteine, cellule e / o biomateriali si sovrappongono la dimensione del tempo negli studi di acuta ischemia / riperfusione e rimodellamento cronica nel topo. Questo video illustra le procedure di microchirurgia per ischemia / riperfusione, permanente legatura delle arterie coronarie, e gli studi di iniezione intramiocardico.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Impara a monitorare la riserva di flusso coronarico nei topi mediante ecocardiografia Doppler transtoracica. Questo metodo non invasivo consente il rilevamento precoce delle alterazioni del flusso coronarico prima dell'insorgenza della malattia.

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