Name: Tumore primario e isolamento delle cellule MEF per studiare Lung Metastasi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Impara a isolare cellule primarie da tumori mammari murini e fibroblasti embrionali per studiare la tumorigenesi e le metastasi polmonari nel cancro al seno.

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Vorremmo ringraziare NIH, LACaTS e la fondazione clinica Ochsner per il sostegno finanziario.

Tutti gli esperimenti di topo sono stati fatti secondo protocolli approvati dalla cura degli animali e Istituzionale Usa Comitati (IACUC) di LSU School of Medicine. Tutti gli strumenti devono essere sterilizzati in autoclave prima della dissezione. 1. Preparazione di cellule primarie di tumore al seno del mouse <ol><li> Utilizzare un modello di topo che è stato geneticamente con il Tumor Virus mouse mammaria Polyoma Medio T-Antigen (topo MMTV-PyMT transgenico), che si sviluppano spontaneamente tumori come descritto in precedenza 6. </li><li> Sacrificare topi con isoflurano (99,9%) e spruzzare il 75% di etanolo per assicurare un ambiente sterile (Figura 1A). </li><li> Aprire la pelle dalla superficie dell&#39;orifizio uretrale al collo con le forbici. Pin la pelle verso il basso per consentire un facile accesso agli organi (Figura 1B). </li><li> Isolare il tumore al seno mammaria e lavare con freddo fosfato sterile salina tamponata (PBS) (pH 7,4) (Figura 1C). </li><li> Trasferire il tumoreuna piastra di coltura tissutale sterili 10 centimetri e tritare con una lama di rasoio sterile e forbici a circa 1 mm 3 pezzi. Fasi successive devono essere eseguite in una cappa a flusso laminare sterile. </li><li> Incubare il tessuto tumorale tritato con collagenasi disciolto nel siero mezzi DMEM ad una concentrazione finale di 1 mg / ml su un bilanciere per 2 ore a 37 ° C. Centrifugare la sospensione tessuto tumorale per 3 min a 200 x g. NOTA: L&#39;incubazione Collagenase è essenziale per la dissociazione enzimatica del tessuto. </li><li> Eliminare il supernatante e lavare il precipitato 3 volte con PBS (pH 7,4) per centrifugazione per 3 min a 200 x g. Dopo l&#39;ultimo lavaggio, decantare il surnatante. </li><li> Risospendere il tessuto con 2 ml di tripsina EDTA per 5 min a 37 ° C mentre oscillante. Centrifugare la sospensione per 3 min a 200 xg e ripetere i lavaggi. </li><li> Risospendere il pellet in tessuto normale terreno di coltura (DMEM, 10% FBS, penna 2X / strep) su un piatto 10 cm. Cambiamentoi media ogni giorno per i prossimi 3 giorni. Cellule coltura fino numero di cellulare desiderato si ottiene. NOTA: circa 1x10 7 cellule saranno isolati da questa procedura. Altri modelli tumorigenesi del mouse mammari, come MMTV-Neu, danno minore resa delle celle rispetto a MMTV-PyMT. Quando si utilizzano i modelli che producono un rendimento inferiore, è utile cominciare con una più grande cellule tumorali e cultura più lunghi. </li></ol> 2. polmone mouse estrazione di visualizzare Lung Metastasi <ol><li> Prima di procedere all&#39;estrazione del polmone, rimuovere il fegato e il diaframma. Rimuovere le costole senza disturbare i polmoni. </li><li> Con un bel paio di forbici, aprire la parte superiore della trachea che è più vicino alla vena giugulare. </li><li> Utilizzando un catetere, iniettare un agente chimico come 1 ml di Z-fix o inchiostro India attraverso la trachea per riempire i polmoni (Figura 2A). Incorpora la Z-fix Polmoni in paraffina. </li><li> De-macchia polmoni iniettati con inchiostro di china in soluzione di Fekete(100 ml 70% alcool, 10 ml di 10% formalina tamponata, e 5 ml di acido acetico glaciale) per 5 min. Definire noduli tumorali nei siti secondari con un ≥ 0,5 mm di diametro, determinare i noduli come metastasi. NOTA: a causa di un blocco bronchi e bronchioli dal tumore, noduli tumorali non possono assorbire il 15% inchiostro di china, e quindi normale tessuto polmonare sarà in nero, e noduli tumorali saranno di colore bianco 7. Questo permetterà la visualizzazione dei noduli tumorali individuali (Figura 2B). </li></ol> 3. Preparazione embrionali fibroblasti di topo (MEF) da embrioni di topo <ol><li> Sacrificio topi in gravidanza con isoflurano (99,9%) e spruzzare il 75% di etanolo per garantire un ambiente sterile. </li><li> Aprire la pelle dalla superficie dell&#39;orifizio uretrale al collo con le forbici e isolare gli embrioni dall&#39;utero. </li><li> Fare attenzione a non disturbare gli embrioni quando si apre la pelle. </li><li> Rimuovere le corna uterine e sciacquarli sotto ste freddorile PBS (pH 7,4). </li><li> Separare l&#39;embrione dalla sua placenta con molta attenzione e mettere gli embrioni in un piatto 10 centimetri contenente ghiaccio freddo PBS (pH 7,4). </li><li> Togliere la testa, fegato e intestino dall&#39;embrione e posizionare la parte restante in una piastra di coltura tissutale 12 pozzetto contenente PBS (pH 7,4). </li><li> Trasferire il corpo dell&#39;embrione ad un altro 12 pozzetti contenente tripsina EDTA e tagliato in piccoli pezzi (~ 1 mm 3) con una lama di rasoio sterile e forbici. Incubare il materiale tagliato con 5 ml di tripsina EDTA per 5 min a 37 ° C. </li><li> Inattivare tripsina aggiungendo 1 ml di siero fetale bovino (FBS) per gli embrioni tritate. Centrifugare la sospensione a 200 velocità xg per 10 minuti, rimuovere con attenzione il surnatante, risospendere il pellet con 1 ml di terreno DMEM caldo e trasferire tutti i contenuti per un piatto di 10 centimetri contenente 10 ml di DMEM (con il 20% FBS e 2X penicillina / streptomicina ). </li><li> Cambia il mezzo ogni giorno per due giorni. Coltivare le cellule fino cella desideratail numero è raggiunto. </li></ol>

<ol><li>Minn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to lung.</a> Natur. 436 (7050), 518-524 (2005).</li>
<li>Poste, G., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of cancer metastasis.</a> Natur. 283 (5743), 139-146 (1980).</li>
<li>Wan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Metastasis+Moving+New+Biological+Insights+into+the+Clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor Metastasis Moving New Biological Insights into the Clinic.</a> Nat Med. 19 (11), 1450-1464 (2013).</li>
<li>Bergers, G., Benjamin, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenesis+and+the+angiogenic+switch%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumorigenesis and the angiogenic switch.</a> Nat Rev Cancer. 3 (6), 401-410 (2003).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 654-658 (2007).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12 (3), 954-961 (1992).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Identification+of+Experimental+Pulmonary+Metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Accurate Identification of Experimental Pulmonary Metastases.</a> J Natl Cancer Inst. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
<li>Boczkowski, D., Nair, S. K., Nam, J. H., Lyerly, H. K., Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tumor+immunity+and+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+using+dendritic+cells+transfected+with+messenger+RNA+amplified+from+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Induction of tumor immunity and cytotoxic T lymphocyte responses using dendritic cells transfected with messenger RNA amplified from tumor cells.</a> Cancer Res. 60 (4), 1028-1034 (2000).</li>
<li>Vargo-Gogola, T., Rosen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer%3A+one+size+does+not+fit+all%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer: one size does not fit all.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 659-672 (2007).</li>
<li>Watts, A. M., Kennedy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+Tumor+Foci+in+an+Experimental+Murine+Tumor+Model+Using+Computer-Assisted+Video+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioche%22%5BJournal%5D)">Quantitation of Tumor Foci in an Experimental Murine Tumor Model Using Computer-Assisted Video Imaging.</a> Anal Bioche. 256 (2), 217-219 (1998).</li>
<li>Rosenberg, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+Established+Pulmonary+Metastases+and+Subcutaneous+Tumor+Mediated+by+the+Systemic+Administration+of+High-Dose+Recombinant+Interleukin+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Me%22%5BJournal%5D)">Regression of Established Pulmonary Metastases and Subcutaneous Tumor Mediated by the Systemic Administration of High-Dose Recombinant Interleukin 2.</a> J Exp Me. 161 (5), 1169-1188 (1985).</li>
<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Re%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Re. 8 (4), 212(2006).</li>
<li>Veer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+predicts+clinical+outcome+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer.</a> Nature. 415 (6871), 530-536 (2002).</li>
</ol>

Gli autori non hanno informativa.

Questo protocollo è per isolare cellule primarie di un tumore del mouse fresca. I lisati preparati da questo metodo sono utili per le proteine, DNA e RNA analisi. Le cellule tumorali del tumore mammario primario spesso metastatizzano al cervello, polmoni e ossa 1. Incluso è una tecnica per estrarre il polmone per il rilevamento di metastasi. Colorazione polmone con una macchia di inchiostro permetterà la visualizzazione dei noduli tumorali, come mostrato nella Figura 2B. Fissaggio dei polmoni...

La metastasi è il passo finale nella progressione del cancro al seno 1. Comporta una serie di passaggi in cui le cellule maligne vengono rilasciate dal tumore primario e disseminate ad altri organi 2. Le cellule devono essere in grado di intravasare, sopravvivere in circolo, stravasare in organi distanti e sopravvivere in quel nuovo sistema di organi 3. Ogni fase della tumorigenesi è strettamente controllata dalle cellule attraverso vari cambiamenti genetici ed epigenetici 4. Per studiare i meccanismi della tumorigenesi del cancro al seno, sono stati utilizzati sistemi modello murini a causa della loro breve durata di vita, delle piccole dimensioni e del rapido tempo di riproduzione. Alcuni dei principali vantaggi dell'utilizzo di modelli murini nella ricerca sul cancro sono le somiglianze molecolari e fisiologiche che condividono con gli esseri umani 5. 
Le linee cellulari umane e di topo consolidate sono state ampiamente utilizzate nella ricerca sul cancro al seno. Sebbene sia possibile ottenere alcune informazioni sulle fasi delle metastasi utilizzando queste cellule, i modelli animali geneticamente manipolati con oncosoppressori/oncogeni forniranno molte più informazioni sullo sviluppo e sulle metastasi del tumore a partire dallo stadio embrionale. Pertanto, con questi modelli murini, possiamo ottenere la regolazione genetica e dello sviluppo della crescita tumorale. Inoltre, anche il microambiente tumorale svolge un ruolo importante nell'espressione genica delle cellule tumorali e può essere difficile imitare lo stesso scenario con studi che utilizzano linee cellulari consolidate. I tumori mammari umani primari possono anche essere utilizzati per studiare la tumorigenesi mammaria del topo. Il principale svantaggio dell'utilizzo di tumori al seno isolati è che questo tumore appena impiantato non ha la vascolarizzazione e il tessuto linfatico del topo. Mentre i sistemi modello genetici murini per lo studio della tumorigenesi mammaria ci permetteranno di monitorare le fasi delle metastasi, analizzare il microambiente tumorale e l'accesso all'intero corpo 5.
L'obiettivo generale di questo protocollo è studiare la tumorigenesi mammaria nei topi. È noto che i tumori al seno in genere metastatizzano al cervello, ai polmoni e alle ossa. Questo protocollo consente l'isolamento delle cellule tumorali mammarie primarie e lo studio delle metastasi del cancro al seno al polmone. Inoltre, è incluso un altro protocollo per l'analisi dei fibroblasti embrionali di topo (MEF) dall'embrione di topo. Insieme, queste tecniche sono utili nello studio della tumorigenesi mammaria del topo.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30243.01</td><td>Negozio a 4 gradi C</td></tr><tr><td>0,05% Tripsina-EDTA</td><td>Tecnologie per la vita</td><td>25300-062</td><td>Conservare a &ndash; 20 C</td></tr><tr><td>Collagenasi Tipo IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td>Negozio a &ndash; 20 &deg; C</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Negozio a &ndash; 20 &deg; C</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Life tecnologie</td><td>15140-122</td><td>Negozio a 4 gradi C</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td>Negozio a &ndash; 80 ° deg; C</td></tr><tr><td>Z-fix</td><td>ANATECH</td><td>#174</td><td>Negozio presso RT</td></tr><tr><td>India Ink</td><td>Yasutomo</td><td></td><td>Negozio presso RT</td></tr><tr><td>AERRANE (Isoflurano)</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-773-60</td><td>Negozio presso RT</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>EMD</td><td>AX0441-3</td><td>Negozio presso RT</td></tr></tbody></table>

tumore primario e isolamento delle cellule mef per studiare lung metastasi

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

Nella tumorigenesi mammaria, lo stadio metastatico della malattia rappresenta la più grande minaccia per l'individuo affetto. Le cellule mammarie normali con genotipi alterati ora possiedono la capacità di invadere e sopravvivere in altri tessuti. In questo protocollo, i tumori mammari di topo vengono rimossi e le cellule primarie vengono preparate dai tumori. Le cellule isolate da questa procedura sono quindi disponibili per esperimenti di profilazione genica. Per una metastasi di successo, queste cellule devono essere in grado di intravasare, sopravvivere in circolo, stravasare in organi distanti e sopravvivere in quel nuovo sistema di organi. I polmoni sono il bersaglio tipico delle metastasi del cancro al seno. È stato scoperto un insieme di geni che media la selettività delle metastasi al polmone. Qui descriviamo un metodo per studiare le metastasi polmonari da un modello murino geneticamente modificato. Inoltre, è incluso un altro protocollo per l'analisi dei fibroblasti embrionali di topo (MEF) dall'embrione di topo. Le cellule MEF dello stesso tipo animale forniscono un indizio dell'espressione genica delle cellule non tumorali. Insieme, queste tecniche sono utili nello studio della tumorigenesi mammaria del topo, dei meccanismi di segnalazione associati e delle vie delle anomalie negli embrioni.

Lo stadio progressione tumorale in cui sacrificare l&#39;animale dipende dalla particolare studio e orientamenti IACUC. Nella Figura 1A, un 100 giorni vecchio C57BL / 6 del mouse con il Tumor Virus mouse mammaria Polyoma Medio T-antigene (MMTV-PyMT) è stato sacrificato a tre mesi. La pelle è stata aperta dalla zona dell&#39;orifizio uretrale al collo con le forbici e la pelle era immobilizzato per consentire un facile accesso agli organi come mostrato nella Figura 1B. Questo ha permesso...

L'obiettivo di questo protocollo è studiare la tumorigenesi mammaria. Con questa tecnica, i tumori mammari di topo vengono rimossi e le cellule primarie vengono preparate dai tumori. È incluso un protocollo di estrazione polmonare per lo studio delle metastasi polmonari. Inoltre, è incluso un altro protocollo per l'analisi dei fibroblasti embrionali di topo dall'embrione di topo.

Tumore primario e isolamento delle cellule MEF per studiare Lung Metastasi

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

L'obiettivo generale di questa procedura è studiare l'agenesi tumorale del cancro al seno nei topi. Innanzitutto, viene illustrata la preparazione di cellule primarie da tumori mammari murini. Successivamente, viene presentato come estrarre il polmone del topo per visualizzare le metastasi polmonari.Infine, viene mostrata la preparazione di fibroblasti embrionali di topo a partire da embrioni di topo, poiché questi metodi dimostrano che i topi transgenici per l'antigene T medio del polioma del virus del tumore mammario del topo possono essere utilizzati per studiare la tumorigenesi del cancro al seno. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul carcinoma mammario, può essere applicato anche allo studio di altri tumori solidi. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché è importante isolare esclusivamente il tessuto tumorale e non altri tessuti durante i passaggi di dissezione del tumore. Iniziare utilizzando le forbici per aprire la pelle dall'orifizio uretrale fino al collo di un topo transgenico per l'antigene T medio del polioma del virus del tumore mammario del topo.Quindi fissare la pelle e isolare il tumore mammario. Lavare il tumore in situ con PBS freddo e collocare il tumore in una piastra sterile per colture cellulari da 10 centimetri. Successivamente, trasferire la piastra in una cappa a flusso laminare sterile e utilizzare una lametta sterile e delle forbici per tagliare il tumore in pezzi di un millimetro cubo.Incubare i frammenti con la collagenasi su un agitatore a 37 gradi Celsius. Dopo due ore, centrifugare la sospensione di tessuto tumorale ottenuta. Lavare il pellet altre tre volte in PBS Resus, sospendendo il pellet in due millilitri di tripsina EDTA dopo l'ultimo lavaggio per cinque minuti a 37 gradi Celsius con agitazione.Quindi lavare le cellule altre tre volte e risospendere in mezzo di crescita normale. Infine, incubare le cellule in una piastra da coltura tissutale da 10 centimetri, cambiando il mezzo ogni giorno per i prossimi tre giorni fino a raggiungere il numero desiderato di cellule. Prima di estrarre il polmone, rimuovere il fegato e il diaframma e staccare le costole.Quindi aprire la parte superiore della trachea, vicino alla vena giugulare, e utilizzare un catetere per iniettare l'agente appropriato attraverso la trachea al fine di riempire i polmoni, rimuovere i polmoni e, se si utilizza Z fix, includere il tessuto in paraffina. Se si utilizza l'inchiostro di India, trattenere il tessuto nella soluzione inec per cinque minuti; il tessuto polmonare normale apparirà di colore nero, mentre i noduli tumorali risulteranno bianchi. Classificare come metastasi tutti i noduli tumorali visualizzati in sedi secondarie con un diametro maggiore o uguale a 0,5 millimetri al fine di generare fibroblasti embrionali murini.Per prima cosa, aprire la pelle di un topo gravido dalla porzione uretrale fino al collo, come appena dimostrato, avendo cura di non disturbare gli embrioni. Successivamente, rimuovere le corna uterine e risciacquarle in PBS sterile. Quindi, separare con attenzione gli embrioni dalla placenta, uno alla volta.Posizionare ogni embrione in una piastra di coltura da 10 centimetri contenente PBS freddo su ghiaccio. Dopo aver rimosso la testa, il fegato e l'intestino, risciacquare la porzione rimanente dell'embrione in un pozzetto di una piastra per colture cellulari a 12 pozzetti contenente PBS, quindi tagliare il corpo in pezzi di un millimetro cubo. Trasferire in un altro pozzetto contenente cinque millilitri di tripsina-EDTA e incubare il tessuto a 37 gradi Celsius.Dopo cinque minuti, aggiungere un millilitro di FBS per inattivare la digestione. Quindi centrifugare la sospensione cellulare ottenuta e risospendere il pellet in un millilitro di DMEM tiepido. Infine, trasferire le cellule in una piastra da coltura da 10 centimetri contenente 10 millilitri di DMEM integrato con antibiotici e coltivare le cellule fino al raggiungimento del numero cellulare desiderato.La fase della progressione del tumore in cui sacrificare l'animale dipende dallo studio specifico e dalle linee guida del comitato I-A-C-U-C. Ad esempio, questo topo FVB di 100 giorni con il virus del tumore mammario murino polioma antigene medio T è stato sacrificato a tre mesi dall'isolamento di un tumore, come appena dimostrato nel topo femmina. Sono state ottenute cellule tumorali primarie.Poiché molti geni regolano la metastasi del cancro al seno nei polmoni, anche i polmoni sono stati prelevati come appena illustrato per studiare il processo metastatico. I polmoni sono stati quindi gonfiati con Z fix e colorati con inchiostro di India per visualizzare le nodularità tumorali. Qui vengono mostrati fibroblasti embrionali di topo, isolati da embrioni di topo della linea FVB.Dopo aver visionato questo video, si dovrebbe avere una buona conoscenza di come isolare cellule tumorali primarie da topo e fibroblasti embrionali di topo, nonché di come estrarre il polmone del topo. Non dimenticare che lavorare con il fluoro ISO può essere estremamente pericoloso, quindi è fondamentale adottare precauzioni adeguate, come lavorare sempre sotto cappa chimica F durante l'esecuzione di questa procedura.

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Ex vivo dal vivo Imaging di polmone metastasi e il loro micro

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Studiare il ruolo dei macrofagi alveolari in Breast Cancer metastasi

L'obiettivo di questo articolo è di fornire una descrizione dettagliata del protocollo per il dosaggio di metastasi polmonare (PuMA). Questo modello permette ai ricercatori di studiare la crescita delle cellule di osteosarcoma metastatico (OS) nel tessuto del polmone usando un widefield fluorescenza o il microscopio confocale a scansione laser.

Considerazioni pratiche nello studio di colonizzazione del polmone metastatico nell'Osteosarcoma usando l'analisi di metastasi polmonare

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L'istituzione di un'analisi di colonizzazione del polmone per la visualizzazione di cellule del tumore nei tessuti polmonari di circolazione

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Modello del polmone acellulare e cellulari per lo studio di metastasi del tumore

Questo documento mira a fornire un protocollo per l'isolamento e la coltura di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di carcinoma mammario triplo negativo e la loro applicazione per lo studio preclinico di nuove nanoparticelle progettate per colpire il microambiente tumorale.

Isolamento di fibroblasti primari associati al cancro da un modello murino singeneico di cancro al seno per lo studio di nanoparticelle mirate

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