Name: Test per Odore Discriminazione e assuefazione nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Impara a valutare la funzione olfattiva nei topi con il test di abitudine/dishabitudine agli odori. Questo metodo misura la discriminazione tra odori sociali e non sociali per studi di neuroscienza comportamentale.

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Questo lavoro è supportato da una sovvenzione del Baylor University Research Council e da una borsa di ricerca della Epilepsy Foundation.

I topi maschi adulti utilizzati per la seguente esperimento sono stati generati e ospitati presso la Baylor University ad una temperatura ambiente di 22 ° C, con una luce 14 ore e 10 ore scuro (20:00-6:00 h) ciclo diurno. I topi sono stati dati ad libitum l&#39;accesso al cibo e all&#39;acqua. Tutte le procedure per i topi erano in conformità con il National Institutes of linee guida sanitarie per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio e il protocollo di origine animale è stato approvato dal Baylor University Animal Care and Use Committee. I topi sono stati testati nella tarda mattinata / primo pomeriggio. Per tutte le procedure sotto l&#39;investigatore deve indossare i guanti per eliminare gli odori e prevenire la contaminazione. 1. Preparazione di odori Non-sociali <ol><li> Preparare gli odori non sociali freschi ogni giorno di test. Nota: L&#39;investigatore dovrebbe usare i guanti per preparare gli odori. <ol><li> Riempire 3 tubi da centrifuga con 10 ml di acqua ciascuno. </li><li> Dispensare 100 ml di estratto di banana in un 15 ml &amp; #160; tubo conico e 100 ml di estratto di mandorle in un secondo tubo da 15 ml di una diluizione 1: 100. Nota: Il terzo tubo 15 ml contiene solo acqua. </li></ol></li></ol> 2. Preparazione di odori sociali <ol><li> Preparare gli odori sociali fresche sul avverrà il test mattina. Ottenere odori sociali da due gabbie che non sono stati puliti per almeno tre giorni e contengono numeri uguali di topi. Ottenere odori sociali da topi dello stesso sesso come cavia. Nota: questi devono essere conservati a temperatura ambiente e deve essere utilizzato entro 4-6 ore per mantenere l&#39;odore forte e coerente. <ol><li> Determinare quanti odore sociale tamponi di cotone devono essere creati: ogni topo in fase di test si presenterà con tre tamponi da odori sociali 1, e tre da odori sociali 2. </li><li> Preparare gli odori sociali strofinando un tampone di cotone in un zig-zag attraverso il fondo di una gabbia sporca. Scrollarsi di dosso qualsiasi biancheria da letto in eccesso aggrappato alla punta. </li><li> Conservare tamponi in grandi vasi di vetro con coperchi o in bicchieri coperto con parafilm. Designare un contenitore per l&#39;odore sociale 1 e un secondo per l&#39;odore sociali 2. </li></ol></li><li> Mantenere gabbie fonte dell&#39;odore al di fuori della sala prove sperimentali. </li></ol> 3. acclimatazione del mouse test <ol><li> Indossare guanti e pesare il mouse per essere testato e posizionare singolarmente in una gabbia pulita con un coperchio filo sulla parte superiore e la bottiglia d&#39;acqua rimossa. </li><li> Lasciare che il mouse si adatti alla nuova gabbia per 45 minuti in una stanza diversa da quella sala prove. Verificare che non vi siano odori insoliti o rumori nella stanza. </li><li> Come test dura circa 45 minuti, scaglionare i tempi di acclimatazione mettendo il prossimo mouse per essere testato in una gabbia pulita di acclimatare destra prima di testare il mouse corrente. </li></ol> 4. Preparazione della camera Testing <ol><li> Posizionare tamponi freschi di cotone, nastro di laboratorio, le bottiglie contenenti tamponi odore sociali, i tubi di non-sociali odori, una micropipetta, due timer, e una bottiglia di rifiuti con un coperchio in sala prove. </li><li> Assicurarsi che la sala prove è ragionevolmente privo di odori, rumori forti, e la luce brillante. Non indossare colonia profumate o lozioni. Nota: L&#39;osservatore non deve essere gomme da masticare o caramelle durante il periodo di prova e dovrebbe cercare di limitare la loro esposizione a forti alimenti odori. </li></ol> 5. Procedura di test <ol><li> Portare il mouse acclimatati nella sua gabbia nella stanza di prova e posizionare la gabbia sul banco ad una altezza che è comodo per la visualizzazione da seduti. </li><li> Presentare ogni odore 3 volte di fila per 2 minuti ogni volta. Utilizzare l&#39;ordine di presentazione che si può trovare nella tabella 1. <ol><li> Pipettare 50 ml di odorizzante nel profumo, da sottoporre alla punta del tampone di cotone e tappare la fonte dell&#39;odore. Sollevare la parte superiore del filo della gabbia e inserire il inodore, fine di legno del tampone nell&#39;apertura bottiglia d&#39;acqua, pushing lunghezza attraverso dalla parte inferiore del filo verso l&#39;alto. Evitare di toccare la punta di cotone per qualsiasi cosa, anche le dita, in modo che la contaminazione odore è evitata. </li><li> Continuare a disegnare il tampone attraverso l&#39;apertura della bottiglia di acqua fino a circa 1 pollice di fine cotone pende nella gabbia. Fissare la fine di legno del tampone a lato della gabbia con del nastro laboratorio. Nota: Fare attenzione a non lasciare che il coperchio ricadere sulla gabbia, provocando un forte rumore che possa disturbare il mouse test. </li><li> Iniziare immediatamente la sincronizzazione per 2 min. Utilizzare uno timer per cronometrare il 2 min presentazione. Registrare il tempo totale trascorso ad annusare l&#39;odore durante il processo 2 min. Contare il comportamento sniffing dell&#39;animale utilizzando un cronometro separato. Sniffing attivo viene definita quando il naso dell&#39;animale è orientata verso la punta di cotone con il suo naso ~ 2 cm più vicino alla punta. </li><li> Dopo il completamento di ogni prova, sollevare il coperchio filo e rimuovere il tampone di cotone tirandolo verso il basso attraverso l&#39;ONUderside del coperchio (questo evita la contaminazione odore impedendo la punta di cotone di toccare il filo). Sigillare il tampone utilizzato in bottiglia rifiuti una da 500 ml. </li><li> Preparare e inserire il successivo tampone e iniziare il cronometraggio. Lasciare circa 1 minuto tra ogni intervallo inter-trial. Continuare fino a quando ogni profumo è stato presentato per tre volte di fila, per 2 minuti ogni volta. </li></ol></li><li> Una volta che il mouse ha completato tutte le prove, svuotare il flacone rifiuti contenenti i tamponi di cotone usati in un cestino al di fuori della sala prove. Ritorna il mouse per sua gabbia casa. </li></ol> 6. Analisi <ol><li> Analizzare i dati per ogni gruppo per condizione odore utilizzando due ANOVA seguito da Newman-Keuls o un test simile post hoc per determinare significativi assuefazione (meno tempo sniffing stessi odori successivi), e dishabitutation (più tempo annusando un odore nuovo). </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor-guided+behavior+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Odor-guided behavior in mammals.</a> Experientia. 42, 257-271 (1986).</li>
<li>Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+views+on+the+distinct+but+related+roles+of+the+main+and+accessory+olfactory+systems+in+responsiveness+to+chemosensory+signals+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice.</a> Horm Behav. 46, 247-256 (2004).</li>
<li>Keverne, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+olfactory+and+vomeronasal+systems+for+male+sexual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function.</a> Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).</li>
<li>Gregg, B., Thiessen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+olfactory+discrimination+of+urines+for+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+unguiculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus.</a> Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).</li>
<li>Yang, M., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+behavioral+assessment+of+mouse+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Simple behavioral assessment of mouse olfaction.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).</li>
<li>Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+and+targeted+deletion+of+the+ERK5+MAP+kinase+in+adult+neurogenic+regions+impairs+adult+neurogenesis+in+the+olfactory+bulb+and+several+forms+of+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior.</a> PLoS ONE. 7, e49622(2012).</li>
<li>Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+dysfunction+correlates+with+amyloid-beta+burden+in+an+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer's disease mouse model.</a> J Neurosci. 30, 505-514 (2010).</li>
<li>Fadool, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+channel+gene-targeted+deletion+produces+%27Super-Smeller+Mice%27+with+altered+glomeruli%2C+interacting+scaffolding+proteins%2C+and+biophysics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces 'Super-Smeller Mice' with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics.</a> Neuron. 41, 389-404 (2004).</li>
<li>Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scent+marking+behavior+in+male+C57BL%2F6J+mice%3A+sexual+and+developmental+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination.</a> Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).</li>
<li>Baum, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differentiation+of+pheromone+processing%3A+links+to+male-typical+mating+behavior+and+partner+preference%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference.</a> Horm Behav. 55, 579-588 (2009).</li>
<li>Ferguson, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+amnesia+in+mice+lacking+the+oxytocin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene.</a> Nat Genet. 25, 284-288 (2000).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+sociability+in+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice+is+independent+of+partner+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain.</a> Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).</li>
<li>Best, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-associative+learning+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Non-associative learning in larval zebrafish.</a> Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).</li>
<li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nat Methods. 11, 629-632 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I risultati forniti nel presente documento sono ottimali per i topi. I topi dimostrano una forte risposta ad un romanzo odore, quindi abituare rapidamente. Una delle fasi principali di questo metodo è la preparazione degli odori. L&#39;investigatore deve fare molta attenzione per isolare gli odori gli uni dagli altri per evitare contaminazioni. Un altro aspetto fondamentale è la presentazione del tampone di cotone. L&#39;investigatore deve risolvere la migliore posizione della punta di cotone in modo che il mouse può in...

I topi sono dipendenti olfatto per la navigazione nuovi ambienti, trovare cibo, per riconoscere gli altri individui, e il comportamento sessuale 1-3. È essenziale che gli investigatori stabilire se animali da esperimento hanno un senso dell&#39;olfatto funzionamento prima di somministrare test comportamentali che coinvolgono il cibo, interazione sociale, o eventuali odori destinati a provocare una risposta dal mouse. Anosmia o l&#39;incapacità di distinguere tra diversi odori, potrebbe causare falsi positivi o negativi in ​​una vasta gamma di paradigmi comportamentali, quindi la capacità di un mouse per rilevare e distinguere gli odori devono essere stabiliti prima che vengano eseguiti altri tipi di test comportamentali. Il test assuefazione / Dishabituation olfattivo è stato descritto nel 1980 4. Il test è stato adattato per l&#39;uso nei topi da DRS. Mu Yang e Jacqueline Crawley 5. Questo è un test semplice ed economico che permette al ricercatore di estáblish che un mouse in grado di rilevare e distinguere tra gli odori. Oltre ai test olfattivo, questo test permette al ricercatore di osservare il comportamento generale del mouse e dovrebbe avvenire precocemente in un regime di test. Osservazioni qualitative riguardanti la locomozione del topo, segni di ansia, livello di attività, e la risposta agli odori sociali contro gli odori degli alimenti possono segnalare nuovi settori in cui il test potrebbe essere effettuata. In questo test, tamponi di cotone immerso in vari odori sono presentati a un mouse per tre volte consecutive. Con ogni presentazione ripetuta di un odore, il mouse abituarsi al tampone di cotone, spendendo meno tempo indagando con ogni presentazione successiva. Quando un nuovo odore è presentata, Dishabituation si verifica, e un tipico mouse trascorrere più tempo indagando il tampone, indicando che può discriminare tra gli odori attuali e precedenti 5. Questa prova viene somministrato a un topo alla volta e comprende un 45 min accperiodo limation seguita da 45 minuti di prove. Anche se questo test è di facile esecuzione può essere usato per studiare domande sofisticate sul sistema del mouse olfattivo. Altri test popolari dell&#39;olfatto, come il test di cibo sepolto, semplicemente stabilire la presenza o l&#39;assenza di anosmia. Tuttavia, la discriminazione e assuefazione prova olfattiva permette al ricercatore di determinare che un mouse ha non solo la capacità di rilevare gli odori ma può discriminare tra differenti odori. Il modello di assuefazione e Dishabituation è stato utilizzato per stabilire che i nuovi mutanti possono discriminare tra odori 6,7. In uno studio sorprendente, Fadool e colleghi hanno usato miscele complesse di odori per dimostrare che i topi con delezione del gene targeting del canale Kv1.3 sono &quot;super smellers&quot; che possono discriminare gli odori molto simili meglio di topi normali 8. Nell&#39;esaminare un nuovo modello di topo knockout è utile establish presenza di un comportamento normale per compiti sensoriali di base. Una volta fatto presto in un regime di test, la discriminazione odore e prova assuefazione dà un investigatore la possibilità di osservare eventuali comportamenti insoliti. Queste osservazioni potrebbero prevenire risultati falsi positivi o negativi in ​​prove successive che sono attribuibili a confondere caratteristiche del mutante. Come i ricercatori continuano a studiare il comportamento sociale la necessità di verificare la funzione olfattiva di base diventa sempre più importante. Oltre a esaminare l&#39;olfatto in linee mutanti, questo test può essere utilizzato per affrontare questioni specifiche, come se un trattamento farmacologico specifico aumenta la risposta di un animale a stimoli sociali odore o se i loro aumenti di risposta a tutti gli stimoli odore.

<table><tbody><tr><td>Gabbia per topi</td><td>Allentown</td> Gabbia <td></td><td>per topi standard</td></tr><tr><td>Coperchio in filo metallico</td><td>Allentown</td><td>BCU Mouse WBL 2500</td><td></td></tr><tr><td>Biancheria da letto</td><td>Harlan</td><td>7090 Sani-Chips</td><td></td></tr><tr><td>Cotton fioc</td><td>VWR</td><td>89031-270</td><td>Manico in legno da 6"</td></tr><tr><td>Estratto di banana</td><td>McCormick</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estratto di mandorle</td><td>McCormick</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nastro da laboratorio</td><td>VWR</td><td>89098-062</td><td></td></tr><tr><td>Cronometro</td><td>VWR</td><td>62374-000</td><td></td></tr><tr><td>Guanti in nitrile</td><td>VWR</td><td>82026</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo di cronometraggio</td><td>VWR</td><td>61161-350</td><td></td></tr><tr><td>Tubi conici da 15 ml</td><td>VWR</td><td>89003-294</td><td></td></tr><tr><td>Bicchieri da 2 L</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm</td><td>PM-992</td><td>4" x 250'</td></tr><tr><td>Bottiglia da 1 L con tappo</td><td>VWR</td><td>89000-240</td><td></td></tr></tbody></table>

test per odore discriminazione e assuefazione nei topi

 Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

Questo video dimostra una tecnica per stabilire la presenza di un sistema olfattivo normalmente funzionante in un topo. Il test aiuta a determinare se il topo è in grado di discriminare tra odori non sociali e odori sociali, se il topo si abitua a un odore presentato ripetutamente e se il topo dimostra disabitudine quando gli viene presentato un nuovo odore. Poiché molti test di comportamento sociale misurano la risposta dell'animale sperimentale a un topo familiare o nuovo, i falsi positivi possono essere evitati stabilendo che gli animali possono rilevare e discriminare tra gli odori sociali. Ci sono considerazioni simili nei test di apprendimento, come il condizionamento della paura, che utilizzano l'odore per creare un nuovo ambiente o segnali olfattivi come stimolo associativo. I deficit nel sistema olfattivo comprometterebbero la capacità di distinguere tra i contesti e di formare un'associazione con un segnale olfattivo durante il condizionamento della paura. 
Nel test di abitazione/disassuefazione degli odori, al topo vengono presentati ripetutamente diversi odori. Ogni odore viene presentato tre volte per due minuti. L'investigatore registra il tempo di sniffing diretto verso l'odore come misura della risposta olfattiva. Un topo tipico mostra una diminuzione della risposta all'odore nel corso di presentazioni ripetute (assuefazione). Lo sperimentatore presenta quindi un nuovo odore che suscita un aumento dell'annusare verso il nuovo odore (disassuefazione). Dopo ripetute presentazioni del nuovo odore, l'animale mostra di nuovo assuefazione. Questo protocollo prevede la presentazione di acqua, due o più odori non sociali e due odori sociali. Oltre a ridurre i confondi sperimentali, questo test può fornire informazioni sulla funzione dei sistemi olfattivi di nuove linee di topi knockout, knock-in e knockout condizionale.

Seguendo il protocollo descritto, i risultati sono stati registrati usando dieci adulti (giorno postnatale 90-120) maschi C57BL / 6J e otto FVB misto sfondo ceppo maschio (giorno postnatale 50-70). Il test è stato effettuato da un singolo operatore su più giorni. Ogni punto sui grafici rappresenta il tempo medio trascorso investigare un odore. Quando viene introdotto il tampone di cotone imbevuto di acqua, i topi trascorrono gran parte del tempo a studiare questo nuovo oggetto (Figur...

Questo manoscritto descrive un protocollo per esaminare il sistema olfattivo dei roditori. Il test di assuefazione/disassuefazione olfattiva consentirà agli investigatori di determinare se un topo si abitua a un odore presentato ripetutamente e se il topo dimostra disassuefazione quando gli viene presentato un nuovo odore.

Test per Odore Discriminazione e assuefazione nei topi

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

L'obiettivo generale di questa procedura è fornire un metodo per studiare la capacità dei topi di rilevare, abituarsi e disabituarsi a odori sia nuovi che sociali. Questo viene ottenuto innanzitutto preparando una serie di odori non sociali nuovi, come estratti a base di frutta e noci, e odori sociali, come la lettiera della gabbia. Il secondo passaggio consiste nell'esporre gli odori ai topi, iniziando con tre odori nuovi e proseguendo con due odori sociali diversi.Ad ogni prova, viene valutato e registrato il comportamento olfattivo dei topi. In definitiva, il test di olfazione per la discriminazione e l'abituazione agli odori viene utilizzato per dimostrare che l'animale è in grado di rispondere a un odore nuovo, di abituarsi all'odore e successivamente di disabituarsi quando gli viene presentato un altro odore nuovo o un odore sociale. Questo metodo può essere impiegato per rispondere a domande fondamentali nel campo delle neuroscienze, ad esempio se l'animale non risponde a un animale nuovo o a uno stimolo nuovo perché è incapace di rilevare l'odore.Iniziare a preparare gli odori non sociali indossando i guanti e riempiendo tre provette coniche da 15 millilitri con 10 millilitri di acqua. Pipettare 100 microlitri di estratto di mandorla nella prima provetta, 100 microlitri di estratto di banana nella seconda provetta e lasciare la terza provetta con solo acqua da utilizzare come controllo. Successivamente, procurarsi due gabbie diverse di topi non pulite da almeno tre giorni e contenenti un numero uguale di topi dello stesso sesso dei soggetti in prova.Utilizzare un bastoncino di cotone per pulire il fondo della gabbia sporca con un movimento a zigzag. Rimuovere eventuali materiali di lettiera attaccati al bastoncino e posizionarlo con la punta in giù in un barattolo di vetro grande dotato di coperchio ermetico. Ripetere questa procedura fino a ottenere tre bastoncini da entrambe le gabbie per ogni topo da sottoporre a test.Conservare i barattoli a temperatura ambiente e utilizzare i tamponi entro quattro-sei ore. Per mantenere un odore intenso e costante, spostare le gabbie con i campioni odorosi in una stanza al di fuori dell'area di prova il giorno dell'esperimento. Non indossare profumi o lozioni profumate ed evitare di mangiare cibi con odore forte.Posizionare gli odori sociali e non sociali preparati nella stanza di prova, insieme a batuffoli di cotone freschi, un contenitore per rifiuti con coperchio e due cronometri, immediatamente prima della procedura di prova. Indossare guanti puliti e pesare il primo topo. Successivamente, trasferire il topo in una gabbia pulita con coperchio a griglia metallica e senza bottiglia dell'acqua.Posizionare la gabbia in un'area priva di odori o rumori insoliti e lasciare che il topo si abitui alla nuova gabbia per 45 minuti. Al termine del periodo di abituazione, spostare il topo nella sua gabbia nell'area di prova e iniziare ad abituare un altro topo. Posizionare il topo abituato nella sua gabbia sul banco a un'altezza comoda per l'osservazione quando si è seduti.Successivamente, preparare uno degli odori nell'ordine descritto nel protocollo testuale per gli odori non sociali, applicando 100 microlitri della sostanza odorosa sulla punta di un bastoncino nuovo. Utilizzare immediatamente prima dell'uso. Per gli odori sociali, estrarre e utilizzare uno dei bastoncini precedentemente preparati dai rispettivi barattoli.Sollevare la parte superiore in filo metallico della gabbia e inserire l'estremità non profumata del bastoncino di cotone nell'apertura della bottiglia dell'acqua dal lato inferiore del coperchio in filo. Evitare di toccare l'estremità di cotone con qualsiasi superficie, comprese le dita, per prevenire contaminazioni odorose. Quando rimane circa un pollice di bastoncino profumato all'interno della gabbia, fissare l'estremità di legno del bastoncino al lato inferiore della gabbia utilizzando nastro adesivo da laboratorio.Quindi abbassare delicatamente il coperchio sulla gabbia. Per evitare di disturbare il topo sottoposto al test, iniziare immediatamente a cronometrare per due minuti. Utilizzando il primo cronometro insieme al secondo orologio, registrare il tempo cumulativo che il topo sottoposto al test trascorre a fiutare l'odore.Lo sniffing attivo è definito come l'orientamento del naso del topo verso il batuffolo di cotone quando si trova entro due centimetri dal batuffolo. Al termine della prova, sollevare il coperchio di filo metallico e rimuovere con attenzione il batuffolo di cotone tirandolo verso il basso attraverso la parte inferiore del coperchio. Per evitare di toccare il coperchio con l'estremità del batuffolo contenente l'odore, sigillare il batuffolo usato nella bottiglia dei rifiuti, permettendo al topo di riposare per un minuto, quindi preparare il successivo batuffolo del donatore.Presentare ogni profumo tre volte di seguito per due minuti. Al termine di tutte le prove, svuotare il flacone dei rifiuti contenente i bastoncini di cotone usati in un cestino fuori dalla stanza dei test e riportare il topo nella sua gabbia di provenienza. Ciascuno degli odoranti è stato inizialmente presentato ai topi con background C 57 black six J mediante presentazioni successive di ciascun odore.I topi hanno trascorso meno tempo a investigare l'odore che suggeriva l'abitazione. Lo stesso schema di abitazione e discriminazione può essere osservato con gli odori sociali così come con quelli non sociali. Tuttavia, i topi hanno trascorso più tempo a investigare gli odori sociali.Quando gli stessi odori non sociali sono stati presentati a un maschio della linea FVB con background misto, è stato osservato un modello simile di abituazione. Ogni nuovo odore introdotto ha determinato un aumento dell'annusamento attivo, che diminuiva con ogni presentazione dello stesso odore. Tuttavia, i topi FVB hanno mostrato un modello diverso con gli odori sociali, poiché non si è verificata una diminuzione significativa del tempo trascorso ad annusare con l'esposizione ripetuta.I dati indicano che i topi non sviluppano abitudine a ripetute presentazioni dei due odori sociali. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una chiara comprensione di come testare la capacità di un topo a rilevare un odore nuovo o sociale, ad abituarsi a tale odore e successivamente a disabituarsi quando viene presentato un nuovo odore.

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Comportamento

Fondamentali, le proprietà ancora unica del sistema olfattivo dei roditori hanno portato al suo studio in aumento tra i biologi. Una valutazione relativamente semplice della sua funzione è poi anche necessario. Qui si descrive test sensibili per la caratterizzazione della sensibilità del mouse olfattivo e preferenza.

Olfattivo test comportamentali nel topo adulto

La compromissione della funzione olfattiva è una caratteristica comune in molte malattie neurodegenerative tra cui il Parkinson, l'Alzheimer e le malattie di Huntington. Nel presente articolo, descriviamo una serie di test per valutare la discriminazione e il rilevamento dell'olfatto nei topi che possono essere utilizzati per misurare le capacità olfattive in modelli murini di malattie neurodegenerative.

Saggi olfattive per modelli murini di malattia di Neurodegenerative

Presentiamo un test olfattivo semplice e imparziale nei topi. Con questo protocollo la discriminazione olfattiva, la preferenza, l'evitamento e la sensibilità a un nuovo odore rispetto all'acqua possono essere valutati in singole sessioni comportamentali. Questo metodo è indicato per un singolo sperimentatore e l'analisi si basa sull'elaborazione video assistita da computer.

Semplice e assistita da computer Olfattivo Test per Mice

Le anomalie cognitive di spostamento dell'insieme attentivo sono una caratteristica fondamentale di molte malattie psichiatriche. Qui, presentiamo lo sviluppo di un nuovo sistema automatico per lo studio efficace delle capacità di set-shifting attenzionale, delle funzioni esecutive e di altre abilità cognitive nei topi con un'elevata validità traslazionale per gli studi sull'uomo.

Un operante intra / extra-dimensionale Set-shift attività per Mice

Qui, ci alleniamo topi su un compito di apprendimento associativo per testare la discriminazione di odore. Questo protocollo consente inoltre di studi sui cambiamenti strutturali indotti su apprendimento nel cervello.

Una prova oggettiva e riproducibile di apprendimento olfattivo e discriminazione nei topi

Questo articolo fornisce una descrizione dettagliata di un nuovo protocollo di bias di giudizio del topo. Vengono anche dimostrate le prove della sensibilità di questo compito di scavo olfattivo allo stato affettivo e viene discussa la sua utilità in diversi campi di ricerca.

Valutazione del pregiudizio del giudizio del topo attraverso un'attività di scavo olfattivo

Questo articolo fornisce una descrizione dettagliata del test del cibo sepolto e dell'esperimento di discriminazione degli odori sociali per valutare gli effetti dell'esposizione agli inquinanti ambientali inalati sulla funzione olfattiva nei topi.

Studio degli effetti degli inquinanti ambientali inalati sulla funzione olfattiva nei topi

Questo protocollo descrive la costruzione di un olfattometro per esperimenti di comportamento olfattivo go/no-go. Vengono fornite istruzioni dettagliate, insieme alle immagini, per garantire il successo della costruzione dell'olfattometro. Sono incluse anche informazioni per la risoluzione dei problemi riscontrati durante il processo.

Costruzione di un olfattometro per studi sul comportamento olfattivo dei roditori

Qui, presentiamo un protocollo di un test di preferenza olfattiva che consente la valutazione dei pregiudizi olfattivi negativi verso gli stimoli olfattivi sia appetitivi che avversi in modelli murini di depressione.

Un test delle preferenze olfattive per misurare i pregiudizi edonistici olfattivi in modelli murini di depressione

Questo articolo presenta un protocollo di prova paura condizionata contestuale e cued utilizzando un sistema di video analisi per valutare paura apprendimento e memoria nei topi.

Contestuali e Cued paura condizionata test utilizzando un sistema di video Analizzare in topi

Impara a valutare la funzione olfattiva nei topi con il test di abitudine/dishabitudine agli odori. Questo metodo misura la discriminazione tra odori sociali e non sociali per studi di neuroscienza comportamentale.

Test per Odore Discriminazione e assuefazione nei topi

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