Name: Un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Impara a misurare la sensibilità al freddo e l'adattamento nei topi con il Cold Plantar Assay. Questo metodo semplice e poco costoso valuta l'ipersensibilità e l'analgesia in modelli animali di neuroscienza.

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Gli autori desiderano ringraziare i contributi dell'intero Gereau Lab per l'editing del manoscritto. Questo lavoro è supportato dai fondi NINDS 1F31NS078852 a DSB e dal fondo NINDS NS42595 a RWG.

Tutti i protocolli topo erano in conformità con le linee guida del National Institutes of Salute e sono state approvate dal comitato Animal Studies di Washington University School of Medicine (St. Louis, MO). 1. Preparare la piastra di prova e Contenitori <ol><li> Pulire la superficie del vetro. </li><li> Fissare la T-tipo di sonda termocoppia filamento alla superficie al centro della lastra di vetro con il nastro di laboratorio. </li><li> Posizionare dello stabulario sulla lastra di vetro in una singola linea lungo il centro del piatto. </li><li> Infilare la sonda della termocoppia attraverso il recinto degli animali centro e collegarlo alla data logger. Girare il data logger sulla mentre disattivare la funzione di spegnimento automatico, e collegare il logger al computer con il cavo fornito. <ol><li> Se si registra la temperatura della piastra durante l&#39;esperimento, aprire il software datalogger per iniziare a registrare le temperature della piastra. </li><li> Se necessario, modificare il software di ricavo la temperatura della piastra ogni secondo. </li><li> Iniziare il rilevamento della temperatura utilizzando il software fornito con il data logger termico. </li></ol></li><li> Separare il recinto con inserti neri per impedire l&#39;interazione visiva tra i topi. </li><li> Posizione rispecchia sotto il vetro in modo tale che la parte inferiore delle recinzioni è visibile da una posizione seduta comoda. </li></ol> 2. riscaldamento / raffreddamento della lastra di vetro <ol><li> Riempire scatole di alluminio con acqua riscaldata, ghiaccio umido, o ghiaccio secco e posizionare in modo appropriato sulla lastra di vetro (pacchetti di stagnola alluminio riempiti con ghiaccio secco può essere utilizzato anche per raffreddare il vetro; Figura 1) 2. <ol><li> Per la prova a 30 ° C, posizionare le scatole di alluminio circa 0,25 &#39;&#39; lontano dai recinti degli animali (Figura 2b) 2. <ol><li> Impostare un circolatore acqua riscaldata su entrambi i lati della piastra di vetro. Impostare il circolatore a 45 - 60 ° C, e civia e per riempire le scatole di alluminio, con un flusso costante di acqua calda (Figura 1C) 2. </li><li> Posizionare i circolatori tale che l&#39;acqua calda dalle scatole di alluminio drena direttamente nel serbatoio del circolatore su ciascun lato (Figura 1C) 2. </li></ol></li><li> Per il test a temperatura ambiente, lasciare le caselle vuote (Figura 2) 2. </li><li> Per la prova a 17 ° C, posizionare le caselle circa 0,25 &#39;&#39; lontano dai recinti di animali su entrambi i lati e riempire con ghiaccio umido (Figura 2) 2. </li><li> Per la prova a 12 ° C, posizionare le caselle circa 1,25 &#39;&#39; di distanza dalle recinzioni su entrambi i lati e riempire con ghiaccio secco (Figura 2) 2. </li><li> Per le prove a 5 ° C, posizionare le caselle circa 0,25 &#39;&#39; distanti custodie su entrambi i lati e riempire con ghiaccio secco (Figura 2) 2.<ol><li> Quando il raffreddamento del bicchiere con ghiaccio secco, assicurarsi che vi sia sufficiente ventilazione per evitare l&#39;accumulo di CO 2 nella stanza. </li></ol></li></ol></li><li> Attendere che il vetro per raggiungere il campo di temperatura desiderata. </li><li> Aggiungere i topi ai contenitori sulla piastra. NOTA: Un generatore di rumore bianco può essere utilizzato per ridurre i disturbi acustici. </li><li> Attendere che i topi si adatti. NOTA: Nella nostra struttura questo richiede circa 2,5 ore, ma puo &#39;variare notevolmente in base stabulazione degli animali e le condizioni di manipolazione. </li><li> Mantenere vetro nel range di temperatura desiderato garantendo che le scatole siano pieni di acqua riscaldata, ghiaccio umido o ghiaccio secco. NOTA: Con il nostro apparato le caselle devono essere riempite con ghiaccio circa ogni 90 min. NOTA: Per la condizione di 17 ° C, è utile svuotare la maggior parte dell&#39;acqua dalle scatole di alluminio attraverso i fori di scarico prima di riempire con ghiaccio. Ciò stabilizzare la temperatura migliore e prtroppopieno evento NOTA: La quantità esatta del ghiaccio secco varia stagionalmente, ma in generale mantenendo caselle più di ¼ completi lungo tutta la lunghezza della scatola manterrà costante la temperatura. </li></ol> 3. Test del Mice a temperature fisse <ol><li> Al di fuori della sala del comportamento, riempire un secchio di ghiaccio pieno per metà di ghiaccio secco. </li><li> Con un martello o mazzuolo, schiacciare il ghiaccio secco in una polvere finissima. NOTA: eccessivo del secchio renderà difficile schiacciare completamente il ghiaccio secco in polvere. </li><li> Utilizzando una lama di rasoio o forbici, tagliare la parte superiore di una siringa da 3 ml. </li><li> Utilizzando un ago 21 G, colpire 3 fori ai lati opposti della siringa (totale di 6 buche). NOTA: Questi fori diminuirà la pressione generata dalla sublimazione comprimendo il ghiaccio secco. La siringa cut-off può essere riutilizzato per diversi esperimenti. </li><li> Prendere la siringa, polvere ghiaccio secco, e un cronometro portatile nella stanza comportamentale. </li><li> Riempire la camera di siringa di mezzo pieno di polvere di ghiaccio secco. Tenere l&#39;estremità tagliata del siringa contro un oggetto piatto, e saldamente comprimere la polvere utilizzando lo stantuffo. Stai attento; lo stantuffo di plastica può piegarsi o rompersi dalla pressione. Se questo accade, sostituire lo stantuffo di una nuova siringa. </li><li> Estendere la punta del pellet ghiaccio secco compressa oltre il bordo della siringa. </li><li> Topi di prova che sono completamente a riposo. <ol><li> A 30 ° C, 23 ° C e 17 ° C, i topi che hanno tutte 4 zampe sul vetro e non si muove, ma non completamente addormentato 19. </li><li> Al 12 ° C e 5 ° C, i topi di prova che sono su 2 zampe o 4 zampe e non in movimento o saltare. </li></ol></li><li> Utilizzando gli specchi per il targeting, delicatamente ma con fermezza premere il filo pellet piatto contro la superficie di vetro sotto il mouse hindpaw (Figura 1A) 2. Avviare la mano-timer. </li><li> Arrestare il timer e rimuovere il pellet quando il mouse si allontana dal vetro raffreddato. NOTA: Lo spostamento di retrocessione può essere verticale o orizzontale. <ol><li> Se il mouse si muove molto brevemente la zampa e poi ritorna alla superficie di raffreddamento, continuano i tempi e stimolando il mouse fino a quando fa una mossa permanente di distanza. NOTA: Il nostro laboratorio utilizza un tempo massimo di 20 sec stimolo per topi nella maggior parte dei casi. </li></ol></li><li> Ripetere questa procedura di test fino a quando vengono raccolti almeno 3 valori per ogni zampa di ciascun animale. Prove separate test zampe opposte sulla stessa mouse almeno 7 min, e prove consecutive separati per ciascuna zampa di almeno 15 min. </li><li> Se necessario, utilizzare diversi spessori di vetro per generare differenti tassi di raffreddamento (Figura 3) 1. NOTA: Il tasso di raffreddamento è inversamente correlato con lo spessore del vetro. </li></ol> 4. Verifica del Mice Durante fredda Adattamento NOTA: Questo è un protocollo alternativo che consente di testare la piattaforma di vetroe si raffredda, piuttosto che una volta che il piatto si è stabilizzata ei topi hanno completamente adattato per l&#39;ambiente freddo. <ol><li> Seguire le istruzioni di cui alla sezione 1 per impostare l&#39;apparecchio. </li><li> Seguire le istruzioni riportate nella sezione 3 di prendere misurazioni di base a RT (Figura 7A) 2. </li><li> Pre-raffreddare le scatole in alluminio con ghiaccio secco. </li><li> Una volta latenze ritiro di base sono stati misurati, posizionare le caselle preraffreddato sul piatto circa 1,25 &#39;&#39; di distanza dalle recinzioni su entrambi i lati (Figura 7A, freccia etichettato come &quot;ghiaccio secco ha aggiunto&quot;) 2. </li><li> Seguire le istruzioni riportate nella sezione 3 di prendere misure come la lastra di vetro si raffredda, le misurazioni il più spesso possibile. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare

Il CPA può essere utilizzato per valutare la sensibilità al freddo e l'adattamento al freddo nei topi. Fornisce un modo economico ed efficiente per misurare le risposte al freddo in animali acclimatati e non trattenuti in un'ampia varietà di intervalli di temperatura. Fornisce inoltre una risposta comportamentale inequivocabile con una variabile di output facilmente quantificabile e analizzabile. È già stato utilizzato per valutare i cambiamenti nella sensibilità al freddo indotti dall'infiammazione1, dal ...

Misurare reattività freddo nei roditori è importante per migliorare la comprensione dei potenziali meccanismi di sensibilità freddo negli esseri umani sia in condizioni normali e patologiche. The Cold plantare Assay (CPA), originariamente sviluppato diversi anni fa 1, è stato progettato per generare risposte riproducibili, inequivocabili murine comportamentali a uno stimolo freddo consegnato a RT. Miglioramenti più recenti di questo test hanno permesso la misurazione riproducibile di sensibilità fredda in un ampio intervallo di temperature 2. Entrambe le versioni sono inoltre progettati per essere relativamente alto rendimento, e poco costoso da utilizzare. Una grande quantità di progressi sono stati compiuti nella comprensione dei meccanismi di sensibilità a freddo utilizzando altri metodi comportamentali. Un metodo è il test di evaporazione acetone, che comporta tamponando o spruzzando acetone sulla zampa mouse e misurando la quantità di tempo che il mouse spende portando l&#39;3,4 zampa. Purtroppo,le risposte alla acetone evaporazione sono confusi dalla sensazione umida e l&#39;odore del acetone. Inoltre, lo stimolo fredda che viene applicato durante la prova di evaporazione acetone può variare in base alla quantità di acetone applicata, ed è difficile da quantificare. Infine, i topi hanno risposte indenni minime quantità di acetone al basale, rendendo impossibile misurare l&#39;analgesia in assenza di ipersensibilità con questo metodo. Un altro test classico per le risposte a freddo è il test coda flick, dove la latenza di recesso viene misurata dopo la coda è immerso in 5,6 acqua fredda. Mentre le risposte comportamentali in questo saggio sono inequivocabili e il test misurano risposte ad una temperatura specifica, gli animali devono essere trattenuti durante la prova, che possono alterare la risposta fredda attraverso ben definite meccanismi analgesici da stress 7. Un altro strumento comunemente usato è il test della piastra fredda, che misura il comportamentorisposte di topi dopo che sono posti su una piastra di Peltier raffreddato 8-10. Mentre questo strumento fornisce informazioni sulle risposte animale a temperature specifiche, è stato anche utilizzato incoerente; diversi gruppi hanno misurato diversi tipi di risposte incluso il numero di salti 8,11, la latenza alla prima risposta 8,11- 13, e il numero di ascensori paw 11,13,14 con risultati molto diversi. Il saggio piastra fredda è relativamente bassa capacità, come solo un animale può essere testato per volta, e richiede un dispositivo Peltier costosi e fragili. Il test preferenza temperatura 2-piastra è un derivato comunemente usato per il test della piastra fredda che misura la quantità relativa di tempo che gli animali passano su 2 piastre collegate delle diverse temperature 9,15- 17. Un altro simile test comunemente usato è il saggio gradiente termico, in cui la quantità di tempo che i topi passano in differenti zone di temperaturacompresa tra 5 ° C e 45 ° C su una piastra metallica lunga 16 viene misurata. Mentre questi test permettono il confronto delle temperature, non è chiaro se il comportamento rappresenti avversione temperatura o di preferenza temperatura. Infine, la dinamica dosaggio piastra fredda è stato usato per misurare quanto topi rispondono alle mutevoli temperatura ambiente 18. Questo metodo prevede il posizionamento mouse su un dispositivo Peltier RT e rampa verso il basso per 1 ° C durante la misurazione di quanto i topi saltano o leccarsi le zampe a temperature diverse placche. Mentre questo test come topi adattarsi ad un ambiente di raffreddamento, non fornisce un modo per testare come topi rispondono ad uno stimolo freddo nella cornice di una temperatura ambiente più fresco. Inoltre, richiede attrezzature costose effettuare e non fornisce un modo per acclimatare topi all&#39;apparecchiatura prova prima di misurare la loro sensibilità fredda. Per completare questi test, il CPA testa il ACCLIMAted risposte ad uno stimolo fredda ben definito in una varietà di campi di temperatura, o durante il processo di adattamento a temperature ambiente freddo. Si può testare fino a 14 topi alla volta con il nostro apparato attuale, con la possibilità di essere a buon mercato in scala per i test high-throughput.

<table><tbody><tr><td>Sonda a termocoppia di tipo T</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Utilizzato per misurare la temperatura superficiale del vetro (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td></tr><tr><td>Lastra di vetro</td><td>Azienda vetraria locale (a St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>Utilizziamo vetro pyrex (galleggiante borosilicato). Il nostro laboratorio utilizza generalmente 1/4'', ma anche 3/16'' e 1/8'' sono utili</td></tr><tr><td>Registratore di dati termici</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Termologger per tenere traccia della temperatura del vetro (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)</td></tr><tr><td>Siringa da 3 ml</td><td>BD</td><td>309657</td><td>La parte superiore viene tagliata e il ghiaccio secco viene compresso nella siringa per generare una sonda fredda</td></tr><tr><td>Computer</td><td>Se si utilizza il logger Extech, qualsiasi Pcwill funzionerà</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scatole di alluminio</td> Washington <td>University a St. Louis le scatole dell'officina</td><td></td> meccanica <td>sono lunghe 3 ', larghe 4,5 '' e alte 3 '' con un coperchio sigillato. C'è un foro da 1/2" praticato in un lato corto di ogni scatola, vicino al fondo. Questi fori vengono riempiti con rubinetti di gomma quando le scatole sono riempite con ghiaccio umido o acqua calda.</td></tr><tr><td>Circolatore d'acqua riscaldato</td><td>VWR</td><td></td><td>Qualsiasi modello di circolatore d'acqua con pompa funzionerà</td></tr><tr><td>Ago da 21 G</td><td>BD</td><td>305165</td><td>La dimensione esatta dell'ago non è importante</td></tr><tr><td>Timer</td><td></td><td></td> manuale <td>Qualsiasi timer manuale funzionerà</td></tr><tr><td>Specchio</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi specchio piatto funzionerà</td></tr></tbody></table>

un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

L'ipersensibilità al freddo è un problema clinico serio, che colpisce un ampio sottogruppo di pazienti e causa una significativa diminuzione della qualità della vita. Il test plantare a freddo consente la valutazione oggettiva ed economica della sensibilità al freddo nei topi e può quantificare sia l'analgesia che l'ipersensibilità. I topi vengono acclimatati su una lastra di vetro e una pallina di ghiaccio secco compressa viene tenuta contro la superficie di vetro sotto la zampa posteriore. La latenza al prelievo dal vetro di raffreddamento viene utilizzata come misura della sensibilità al freddo.
La sensazione di freddo è importante anche per la sopravvivenza nelle regioni con sbalzi di temperatura stagionali e, per mantenere la sensibilità, gli animali devono essere in grado di regolare le loro soglie di risposta termica in modo che corrispondano alla temperatura ambiente. Il Cold Plantar Assay (CPA) consente anche lo studio dell'adattamento ai cambiamenti della temperatura ambiente testando la sensibilità al freddo dei topi a temperature comprese tra 30 °C e 5 °C. I topi vengono acclimatati come descritto sopra, ma la lastra di vetro viene raffreddata alla temperatura iniziale desiderata utilizzando scatole di alluminio (o pacchetti di fogli di alluminio) riempite con acqua calda, ghiaccio umido o ghiaccio secco. La temperatura della piastra viene misurata al centro utilizzando una sonda a termocoppia a filamento T. Una volta che la piastra ha raggiunto la temperatura di partenza desiderata, gli animali vengono testati come descritto sopra.
Questo test permette di testare i topi a temperature che vanno da innocue a nocive. Il CPA produce risposte comportamentali inequivocabili e coerenti nei topi non feriti e può essere utilizzato per quantificare sia l'ipersensibilità che l'analgesia. Questo protocollo descrive come utilizzare il CPA per misurare l'ipersensibilità al freddo, l'analgesia e l'adattamento nei topi.

Le risposte comportamentali indotte da topi a partire da 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, e 12 ° C sono altamente riproducibili (Figura 4A) 20. Per misurare lo stimolo freddo generato sotto il hindpaw, i topi sono stati anestetizzati con ketamina / xilazina / acepromazina cocktail e le zampe sono state fissate sul vetro sulla cima di una termocoppia di tipo T filamento (Figura 4B) 20. Il vetro è stato raffreddato o riscaldato alla gamma di test desiderato. Sebbene la piastr...

Il Cold Plantar Assay (CPA) misura la risposta al freddo tra 30 °C e 5 °C e può anche misurare l'adattamento al freddo. Questo protocollo descrive come utilizzare il CPA per misurare l'ipersensibilità al freddo, l'analgesia e l'adattamento nei topi.

Un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

L'obiettivo generale di questa procedura è misurare la risposta al freddo nei topi. Questo viene ottenuto raffreddando o riscaldando inizialmente il vetro alla temperatura desiderata. Il secondo passaggio consiste nell'abituare i topi fino a quando non sono a riposo.Il terzo passaggio consiste nel comprimere la polvere di ghiaccio secco in un pellet all'interno di una siringa. L'ultimo passaggio prevede di testare i topi utilizzando il pellet di ghiaccio secco e un cronometro per misurare la latenza del riflesso di ritrazione. In definitiva, il test del pianter freddo viene utilizzato per misurare la sensibilità al freddo e l'adattamento in topi completamente liberi di muoversi.Il principale vantaggio del nostro saggio rispetto ai saggi attualmente esistenti, come il test con l'acetone e il test della piastra fredda, è che possiamo valutare sia l'ipersensibilità che l'analgesia a livello basale in diverse condizioni ambientali. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla risposta al freddo dei topi, può essere utilizzato anche in altri sistemi, come la scimmia, il ratto e l'uomo. La procedura sarà dimostrata da Daniel Brenner, uno studente laureato del mio laboratorio.Dopo aver pulito la superficie di vetro, fissare la sonda del termocoppia di tipo T al centro della piastra di vetro utilizzando nastro da laboratorio. Posizionare le recinzioni per gli animali sulla piastra di vetro in una singola fila lungo la linea centrale. Quindi far passare la sonda del termocoppia attraverso la recinzione centrale per gli animali e collegarla al registratore di dati.Accendere il registratore di dati e disattivare la funzione di spegnimento automatico. Collegare il registratore di dati al computer utilizzando il cavo fornito. Separare gli alloggiamenti per gli animali con inserti neri per impedire interazioni visive tra i topi e posizionare specchi sotto il vetro per consentire la visualizzazione della parte inferiore degli alloggiamenti.Per iniziare i test, posizionare delle scatole di alluminio sul piatto di vetro su entrambi i lati dell'animale, a una distanza fissa dalle recinzioni. Se il test viene effettuato a 30 gradi Celsius, collegare circolatori d'acqua riscaldati alle scatole di alluminio posizionate a 0,25 pollici di distanza dalla recinzione dell'animale. Riempire le scatole d'acqua fino a metà, tenendo tappate le aperture di scarico.Posizionare i circolatori in modo che l'acqua calda proveniente dalle scatole di alluminio defluisca direttamente nel serbatoio del circolatore su ciascun lato. Sarà necessario aggiungere acqua a ciascun circolatore. Una volta riempite le scatole metalliche, impostare i circolatori su una temperatura compresa tra 45 e 60 gradi Celsius e riempire le scatole di alluminio con un flusso costante di acqua calda.Quando i vetri raggiungono il range di temperatura desiderato, posizionare i topi nei recinti sulla piastra. Lasciare che i topi si abituino all'apparecchiatura e alla temperatura. Questi topi si abitueranno per 2,5 ore.Quando si è quasi alla fine del periodo di ambientamento, riempire un secchiello per ghiaccio per circa metà con anidride carbonica solida (ghiaccio secco) e utilizzare un martello o un mazzuolo per ridurre il ghiaccio secco in polvere. Eseguire questa operazione all'esterno della stanza comportamentale per evitare di disturbare i topi. Successivamente, utilizzare una lametta o delle forbici per tagliare la parte superiore di una siringa da tre millilitri.Quindi utilizzare un ago da 21 gauge per praticare due serie di tre fori su lati opposti della siringa al fine di ridurre la pressione generata dalla sublimazione, mentre si comprime la polvere di ghiaccio secco nuovamente nella stanza comportamentale; riempire la camera della siringa per metà con polvere di ghiaccio secco. Tenere l'estremità tagliata della siringa contro una superficie piana e comprimere con fermezza la polvere utilizzando lo stantuffo. Estendere la punta della paletta di ghiaccio secco compresso oltre il bordo della siringa.Ora, testare quei topi che hanno tutte e quattro le zampe sul vetro e non si muovono, ma non sono completamente addormentati. Utilizzando gli specchi per prendere la mira, premere con decisione ma delicatamente il pellet piatto contro la superficie di vetro al di sotto della zampa posteriore del topo. Contemporaneamente, premere il pulsante di avvio del cronometro.Quando il mouse si allontana dal vetro raffreddato, sia verticalmente che orizzontalmente, fermare il cronometro e rimuovere il pellet di ghiaccio secco. Tuttavia, se il mouse sposta brevemente la zampa e la riporta subito sulla superficie di raffreddamento, continuare la temporizzazione e la stimolazione fino a quando il mouse non si allontana definitivamente. Se il mouse non si allontana dal vetro raffreddato, interrompere lo stimolo dopo 20 secondi.Ripetere questa procedura di prova fino a quando non vengono raccolti almeno tre valori per ogni zampa dell'animale per testare i topi a 17 gradi Celsius. Ripetere l'esperimento come appena mostrato, ma invece di riempire le scatole di alluminio con acqua riscaldata, utilizzare ghiaccio bagnato e posizionare le scatole a circa 0,25 pollici di distanza dalle gabbie per testare i topi. A 12 gradi Celsius si utilizza ghiaccio secco, ma le scatole vengono posizionate a 1,25 pollici di distanza dalle gabbie.Questo protocollo alternativo prevede il test dei topi durante la diminuzione della temperatura della piastra, anziché dopo che questa si è stabilizzata. Ciò ci consente di valutare l'adattamento dei topi mentre avviene, dopo aver allestito l'apparato. Come in precedenza, eseguire l'esperimento seguendo la procedura descritta per effettuare le misurazioni a temperatura ambiente.Dopo aver misurato le latenze di base a temperatura ambiente, utilizzando la procedura precedentemente illustrata, riempire le scatole di alluminio vuote con ghiaccio secco e posizionarle a 1,25 pollici dalle strutture su entrambi i lati. Infine, ripetere l'esperimento per rilevare le misurazioni della latenza mentre la piastra di vetro si raffredda.Effettuare le misurazioni il più spesso possibile. Questo grafico mostra la latenza media del riflesso di ritrazione nei topi a partire da 12 gradi Celsius, 17 gradi Celsius, 23 gradi Celsius o 30 gradi Celsius. Le latenze di ritrazione sono costanti a tutte le temperature.Gli effetti analgesici possono essere misurati utilizzando il test del pianter freddo come mostrato qui. L'iniezione sottocutanea di 1,5 milligrammi per chilogrammo di morfina aumenta la latenza del ritiro nei topi a 30 minuti dall'iniezione, come misurato da un test innova a due vie con test post-hoc di Bonferroni a 60 minuti dall'iniezione. Non vi è alcuna differenza significativa tra i topi iniettati con morfina e quelli iniettati con soluzione salina.È inoltre possibile misurare l'ipersensibilità nei topi. L'iniezione intra-plantare di 10 microlitri di adiuvante completo di Freund riduce significativamente la latenza del riflesso di ritrazione nei topi due e tre ore dopo l'iniezione, come misurato da un'analisi a due vie ANOVA con test post-hoc di Bonferroni. Gli stessi topi hanno ricevuto iniezioni sottocutanee di morfina a quattro ore e tutte le latenze di ritrazione alle 4,5 ore sono risultate significativamente maggiori rispetto a quelle alle tre ore, come misurato da un'analisi a una via ANOVA con test post-hoc di Dunnett.Una volta che la morfina &egrave; stata metabolizzata, a 5,5 ore dall'iniezione, i topi a cui era stato somministrato CFA presentavano comunque latenze di ritiro inferiori rispetto ai topi a cui era stato somministrato soluzione salina, come misurato da un test ANOVA a due vie con test post-hoc di Bonferroni. L'adattamento ai cambiamenti ambientali di raffreddamento pu&ograve; essere misurato in tempo reale con questo saggio. I topi di tipo selvatico presentano la stessa latenza di ritiro man mano che la piastra di vetro si raffredda, suggerendo che si adattano alle temperature pi&ugrave; fredde pi&ugrave; rapidamente di quanto possa essere misurato con il CPA, nel quale non si sono osservate differenze significative tra i gruppi.Tuttavia, quando i topi sono stati iniettati con U 7 3 1 2 2 per bloccare l'idrolisi del PIP due, la loro latenza diminuisce al diminuire della temperatura della piastra, il che suggerisce un adattamento compromesso. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in cinque ore, compreso il tempo di acclimatazione. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come misurare la sensazione al freddo e l'adattamento in topi svegli e liberi di comportarsi naturalmente. Non dimenticare che lavorare con la neve carbonica può essere estremamente pericoloso e che è necessario garantire un'adeguata ventilazione e il libero passaggio dell'aria durante questo metodo.

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