Utilizzando il Elettroretinogramma per valutare la funzione in roditori Retina e gli effetti protettivi del Remote Limb ischemico precondizionamento

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di testare la funzione visiva in ratti con lesioni normali alla luce e precondizionati ischemici remoti e con lesioni leggere utilizzando l'ERG e dimostrando così gli effetti protettivi dell'ischemia remota degli arti sulla retina. Ciò si ottiene dal primo buio, adattando i ratti per 12 ore. Il secondo passo consiste nel registrare l'ERG adattato al buio di base utilizzando stimoli luminosi a LED e un amplificatore digitale.

Successivamente, sottoponi i ratti a uno stress retinico esponendolo a una luce continua e intensa. Il passo finale consiste nel confrontare le registrazioni ERG dei ratti con danno luminoso e quelle precondizionate con ischemia remota degli arti, e misurare le risposte dei fotorecettori come visto nell'onda A e le risposte della retina interna come visto nell'onda B. In definitiva, l'ERG adattato al buio viene utilizzato per valutare la funzione visiva scotopica.

Quindi questo metodo può fornire informazioni sulla neuroprotezione ischemica remota. Può essere applicato anche ad altre forme di lesioni retiniche e test farmacologici per malattie e per lo screening di animali con difetti visivi. Per iniziare questa procedura, adattare il ratto al buio per 12 ore, quindi anestetizzarlo con l'iniezione di ketamina xilazina cocktail.

Una volta che l'animale è incosciente, controlla la profondità dell'anestesia pizzicando leggermente il piede per assicurarti che la risposta riflessa sia assente. Successivamente, applicare una goccia di atropina e una goccia di metano prox sulla cornea. Tagliato a filo nero di 10 centimetri di lunghezza.

Quindi fai un cappio con il filo e fai scivolare l'anello sopra l'equatore dell'occhio, a maglia leggermente stretta in modo da tirare il bulbo oculare leggermente in avanti e mantenere la cornea libera dalla palpebra. Successivamente, applicare il collirio carmer sulle cornee. Posizionare il ratto sulla lettiera assorbente sopra la piattaforma riscaldata con la testa posizionata nell'apertura del ganzfeld.

Quindi inserire la sonda di temperatura interna nel retto per assicurarsi che la temperatura corporea sia mantenuta a 37 gradi Celsius e fissare la sonda di temperatura in posizione fissando il cavo alla coda del ratto. Quindi, inserire l'elettrodo di riferimento per via sottocutanea nell'arto posteriore. Posizionare saldamente l'elettrodo negativo nella bocca per evitare che l'elettrodo scivoli fuori dalla bocca.

Fissare il cavo di collegamento su una superficie stabile. Quindi posizionare l'elettrodo positivo al centro della cornea e assicurarsi che l'elettrodo tocchi delicatamente la cornea utilizzando un manipolatore microm. Una volta posizionati gli elettrodi, drappeggiare il foro predisposto, compreso il ganzfeld e l'animale con un materiale opaco per preservare l'adattamento al buio.

Nel software di acquisizione. Impostare due kilohertz come frequenza di campionamento con cinque millisecondi per il campionamento pre-raccolta e un tempo di raccolta compreso tra 100 e 1000 millisecondi. Quindi impostare i filtri passa-banda su uno a 1000 hertz e assicurarsi che il campionamento venga attivato per un periodo di 100 millisecondi dopo un flash.

Ora, controlla la linea di base della registrazione. Dovrebbe essere privo di rumori estranei, ma mostrare il rumore dell'amplificatore e l'oscillazione respiratoria. Quindi eseguire un flash di prova.

Questa è una tipica forma d'onda ERG in risposta al flash di prova. Al termine, lasciare che l'animale si riadatti al buio per 10 minuti. Quindi ricontrollare la linea di base per verificare la stabilità del segnale.

Successivamente, iniziare la registrazione Al termine della sessione di registrazione, verificare la stabilità della temperatura corporea dell'animale. Rimuovere gli elettrodi, quindi riapplicare il polimero Carmer sulle cornee. Successivamente, lascia che l'animale si riprenda su un termoforo fino a quando non è completamente mobile e attivo prima di tornare alla stabulazione degli animali.

Questa figura mostra la misurazione di un'onda e di un'onda B da un ERG adattato al buio. La traccia qui mostrata è registrata dalla cornea di un occhio scuro adattato a un lampo di luce brillante dato al momento indicato come T zero. L'ampiezza di un'onda viene misurata dalla linea di base al primo avvallamento.

L'ampiezza dell'onda B viene misurata dal minimo dell'onda A al successivo picco positivo. La latenza viene misurata dall'artefatto dello stimolo al punto di interesse sulla traccia, come il minimo dell'onda A. Il segnale ERG grezzo dominato aumenta con l'aumentare dello stimolo luminoso.

Un'onda diventa evidente a circa 0,4 log di candela scotopica secondo per metro quadrato, e il paradigma del doppio flash è stato utilizzato per separare il segnale ERG misto in risposte a cono e a bastoncello. Una volta padroneggiato. Questa tecnica può essere eseguita in 30 minuti.