Name: The Double-H labirinto: una prova comportamentale robusto per lapprendimento e la memoria nei roditori (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Scopri il test del doppio-H per studiare memoria spaziale e apprendimento nei roditori. Questo metodo permette di valutare strategie comportamentali egocentriche e allocentriche in modo rapido e controllato.

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Questo lavoro è stato sostenuto dall&#39;Università di Strasburgo e Neurex-Neuroscienze Alto Reno rete (post-doc fellowship per RP) e BrainLinks-BrainTools Cluster di eccellenza finanziate dalla Fondazione di ricerca tedesco (DFG, concedere numero EXC 1086). Ringraziamo Nadja Martini per l&#39;assistenza tecnica di esperti.

1. Considerazioni generali Questo protocollo è approvato dalla cura e l&#39;uso di animali Comitato University Hospital Friburgo (lo stesso per Strasburgo). L&#39;acuità visiva è necessaria per le prestazioni nei test di apprendimento spaziale. I roditori con sistemi di visione ridotta non sono idonee. Inoltre, l&#39;illuminazione deve essere sufficiente in modo che i topi per vedere i diversi spunti situati sulle pareti circostanti. E &#39;utile utilizzare spunti (quadrato, cerchio, triangolo) a forma di base ma ben contrastate (ad esempio, segnali a vernice nera su uno sfondo dipinto di bianco). Allo stesso modo, gravi deficit motorie sono criteri di esclusione, perché è necessaria nuoto per questo test e annegamento possono verificarsi. Infine, roditori iper-ansiosa in grado di visualizzare un comportamento di ricerca fortemente sbilanciata, che incide sulle prestazioni. 2. Apparato Set Up <ol><li> Costruire un labirinto doppio H costituito da un vicolo centrale 160 cm, che si interseca ad entrambe le estremità e nel centroda tre bracci paralleli eseguire 160 centimetri (vedi Figura 1). Assicurarsi che il vicolo centrale e le sue perpendicolari braccia sono larghe 20 centimetri, e sono circondati di 35 cm di altezza pareti in plexiglass trasparente. Spessore del plexiglas è di 6 mm per tutte le parti. </li><li> Fissare le pareti in luogo utilizzando colla e viti, e impermeabile il labirinto con giunti in silicone a tutti gli angoli interni. Questi giunti possono essere sostituiti facilmente dovrebbero perdere la loro impermeabilità. Inserire un foro di scarico all&#39;estremità di uno dei bracci angolari (o nel mezzo del labirinto) per lo svuotamento. </li><li> Posizionare il labirinto in un 80 cm di altezza tavolo, con uno spazio adeguato intorno ad esso per a) passeggiare per il labirinto, e b) il deposito di spunti ben contrastate. Designare ogni braccio nel labirinto dalla sua posizione, vale a dire, nord-ovest (NW), a nord (N), nord-est (NE), sud-ovest (SW), sud (S), e sud-est (SE). </li><li> Posizionare una telecamera montata a soffitto sopra il labirinto per l&#39;analisi post-test del comportamento animale, con manuale o aut(Video-tracking) metodi OMATIC (vedi § 5). </li></ol> 3. Osservazioni generali <ol><li> Prima dell&#39;uso, riempire il labirinto con acqua ad un&#39;altezza di circa 18 centimetri (200 L). Questo è abbastanza alta per impedire che i topi di toccare il fondo del labirinto con i piedi, ma sufficiente per evitare la fuga superficiale. </li><li> Dopo la pre-formazione, rendere l&#39;opaca acqua mescolando 250 g di latte scremato in polvere. Cambiare l&#39;acqua ogni giorno per evitare che il latte-acqua dal diventare rancido. Mantenere la temperatura dell&#39;acqua tra 21 - 23 ° C per fornire incentivo per i topi a cercare la piattaforma di fuga. NOTA: Come ratti diventano conoscenza della posizione della piattaforma durante la pre-formazione, la sua posizione viene spostata ad un braccio differente durante l&#39;allenamento. </li><li> Prima dell&#39;uso, immergere un cm 10 piattaforma alto 17 cm di diametro all&#39;estremità di uno dei bracci angolari (NE, NW, SE o SW). Garantire l&#39;altezza per essere sommersa è di 1 cm sotto la superficie della superficie dell&#39;acqua. Formare i ratti per raggiungerela piattaforma di destinazione utilizzando un allocentrica o strategia di apprendimento egocentrica, che dipende dal tipo di paradigma utilizzato (vedi § 4). </li></ol> 4. Protocolli di formazione di base NOTA: I ratti sono in genere dotati di un primo giorno di pre-formazione, che permette loro di familiarizzare con il labirinto. <ol><li> Per pre-formazione rilasciare il ratto dall&#39;estremità di uno dei bracci centrali (ad esempio, il braccio S) e posizionare la piattaforma porta all&#39;estremità di uno dei bracci angolari (ad esempio, NE), quindi invia i ratti 4 consecutive 60 sec prove in cui per raggiungere la piattaforma di destinazione. </li><li> Raggiunta la piattaforma di fuga, permettono il ratto di aspettare lì per 15 secondi, in modo che possano riposare e osservare l&#39;ambiente circostante. Indipendentemente dalla posizione iniziale, bloccare sempre il braccio opposto con una porta a ghigliottina trasparente, che impedisce l&#39;ingresso. NOTA: Durante la pre-formazione, lasciare l&#39;acqua trasparente e regolare la piattaforma cheight tale che sporga 1 cm sopra la superficie dell&#39;acqua, rendendo così visibile al ratto. </li><li> Eseguire allenamento quotidiano costituito da un massimo di 4 prove consecutive, separate da uno spazio 10 sec almeno (formazione discreta, cioè, con intervalli di diversi minuti tra le prove, è un&#39;alternativa). </li><li> Per la formazione, riposizionare la piattaforma dalla sua posizione di pre-formazione al braccio prescelto (ad esempio, NW), e immergerla alla sua estremità 1 cm sotto la superficie dell&#39;acqua. Ora rendere l&#39;opaca acqua con l&#39;aggiunta di latte di potere e di eseguire la seguente formazione (sezione 4). </li><li> Per i ratti che non raggiungono la piattaforma di destinazione entro 60 sec, loro ritornano alla posizione di partenza, e delicatamente li guidano alla piattaforma dallo sperimentatore. </li><li> Misurare diverse variabili durante le sessioni di formazione e sonda, come, distanza nuotato, latenza braccio porta / piattaforma, il tempo trascorso in ogni braccio, così come il numero di errori iniziali / ripetitive (vedere Figura2). Tenete a mente che latenze possono essere influenzati da difficoltà motorie. Se la si verificasse, la distanza e gli errori appaiono come variabili più affidabili per quanto riguarda le prestazioni cognitive. </li><li> Allocentrica Training Strategy: <ol><li> 1 ° giorno - Pre-Training: <ol><li> Non aggiungere il latte in polvere per questo passo. Posizionare piattaforma fuga sporgente 1 cm sopra la superficie dell&#39;acqua in una posizione fissa. Ratti treno in 4 prove consecutive per raggiungere la piattaforma. </li></ol></li><li> Giorni 2-5 - Formazione: <ol><li> Aggiungere 250 g di latte scremato in polvere in acqua per renderla opaca. Spostare la piattaforma ad un braccio diverso (ad esempio, da NE a NW) e aggiungere acqua in modo che la piattaforma è di 1 cm sotto la superficie dell&#39;acqua. Ratti di uscita da entrambi braccio N o S in sequenze imprevedibili per ogni sessione, in modo che entrambe le braccia sono utilizzati due volte come inizio di prova in una sola seduta (4 prove / giorno, per esempio, SNNS, NSNS; vedi figura 3). </li></ol></li><li>Giorno 6 - Sonda Sessione: <ol><li> Rimuovere la piattaforma per il processo sonda. Rilasciare ratti da un braccio di diverso a quelli utilizzati durante l&#39;allenamento (ad esempio, SW), e permettere loro di nuotare per 60 sec. Vedere la Figura 4 per le tracce di nuoto rappresentativi. Analisi del tempo trascorso nel braccio di destinazione (ex posizione della piattaforma) fornisce un&#39;indicazione sul fatto ratti utilizzano una strategia spaziale, un altro tipo di strategia, una combinazione sequenziale di differenti strategie (vedi sotto), o un modello di ricerca disorganizzato. </li></ol></li></ol></li><li> Training Strategy Egocentric: <ol><li> 1 ° giorno - Pre-Training: <ol><li> Questo è lo stesso come il primo passo nella formazione strategia allocentrico (passo 4.1). Non aggiungere il latte in polvere per questo passo. Posizionare piattaforma fuga sporgente 1 cm sopra la superficie dell&#39;acqua in una posizione fissa. Ratti treno in 4 prove consecutive per raggiungere la piattaforma. </li></ol></li><li> Giorni 2-5 - Formazione: <ol><li> Aggiungere 250 g dilatte scremato in polvere in acqua per renderla opaca. Spostare la piattaforma ad un braccio diverso e aggiungere acqua in modo che la piattaforma è 1 cm sotto la superficie dell&#39;acqua. Ratti di uscita dello stesso braccio di partenza (S o N; vedi Figura 5) per ogni prova (4 prove / giorno). </li></ol></li><li> Giorno 6 - Sonda Sessione: <ol><li> Rimuovere la piattaforma per il processo sonda. I ratti sono liberati da un braccio diverso da dove sono stati rilasciati durante la formazione. Lasciare i ratti di nuotare per 60 sec. Bloccare il braccio opposto con una porta a ghigliottina trasparente. NOTA: Modificare le strategie di formazione di cui sopra per in base alle esigenze del particolare esperimento, ad esempio, effetti di prova della droga, ecc. </li></ol></li></ol></li><li> Asciugare il ratto fuori con asciugamani assorbente dopo ogni sessione in acqua. </li></ol> 5. Analisi <ol><li> Eseguire misure di latenze, errori iniziali e ripetitivi, prime scelte e il tipo di risposta Manually registrando queste variabili dai video ripresi dalla telecamera dall&#39;alto. </li><li> In alternativa, se disponibile, utilizzare disponibile in commercio software video-monitoraggio e configurati per registrare queste variabili automaticamente. </li><li> Analisi Statistica: NOTA: La specifica implementazione di analisi statistica dipende lo studio, che si sta svolgendo. <ol><li> Eseguire un uno, due o tre vie ANOVA per quanto riguarda gli errori iniziali / ripetitivi, la latenza di rete del braccio / piattaforma, e il tempo trascorso nel braccio di destinazione; con fattori che includono il giorno del test, e gruppo di trattamento (s). </li><li> Se necessario, procedere con ANOVA post hoc-Newman-Keuls confronti multipli prove. Per confrontare le prestazioni, utilizzare un valore di riferimento (ad esempio, il tempo trascorso nel braccio bersaglio durante una prova della sonda rispetto al livello di probabilità), ed eseguire il test t. </li><li> Se necessario, utilizzare le statistiche non parametriche in aggiunta (per esempio, χ², vedi sotto) o invece quando le condizioni per parametquelli ric non sono soddisfatte. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Commenti su Studio Progettazione e analisi Fin dalla sua creazione, la doppia H labirinto è stato utilizzato in una serie di esperimenti comportamentali nei ratti, che insieme sono stati progettati per studiare le risposte egocentriche e / o allocentrica nei ratti in condizioni normali 24,25 e alterato 26-29 stati cerebrali. Gli ultimi studi includono striato stimolazione cerebrale profonda (DBS) 26, modelli animali di disturbi neurologici 27,28, così...

Negli animali, l&#39;apprendimento è principalmente mediata dai sistemi hippocampal- e basati striatali di memoria 1,2, che svolgono un ruolo centrale per quanto riguarda posto- e procedurale memoria, rispettivamente. Il rapporto tra questi due sistemi è complessa, e sono noti per interagire tra loro in modi cooperative o competitive 1,3. Inoltre, studi hanno dimostrato che l&#39;influenza di uno di questi sistemi di memoria sul comportamento animale può aumentare a seguito dell&#39;assenza o danni dell&#39;altro sistema 4-7. Entrambi questi sistemi sono collegati alla corteccia prefrontale via talamo. Numerosi disturbi neurologici e le malattie neurodegenerative possono influenzare cognizione spaziale negli esseri umani, che si basano sull&#39;interazione tra sistemi di memoria procedurale e dichiarativa. Gli esempi includono il morbo di Parkinson (PD), la malattia di Huntington (HD) 8-10, il morbo di Alzheimer (AD) 11-14, nonchéLa sclerosi laterale amiotrofica (SLA) 15. I modelli animali, che sono rilevanti per questi disturbi possono essere indotte attraverso vari trattamenti farmacologici che bloccano alcuni recettori 16, così come attraverso le lesioni mirate. Quando tali animali vengono utilizzati con compiti di memoria spaziale, una preziosa può essere acquisita nei meccanismi sottostanti relative a questi disturbi, nonché alle varie opzioni di trattamento. Ci sono molti diversi tipi di compiti di memoria spaziale nei roditori, che collettivamente sono progettati per valutare gli aspetti specifici di apprendimento e memoria, nonché gli effetti di potenziali trattamenti per vari disturbi 17,18. Questi compiti possono essere distinti dal numero di obiettivi e percorsi, il grado di flessibilità comportamentale nel risolvere il compito, la durata di memoria o ritardo, così come la scelta della strategia utilizzata per risolvere il compito. Una buona prestazione possono essere acquistate in base a stimoli esterni o punti di riferimento che sono usati per orientarel&#39;animale verso l&#39;obiettivo (una strategia allocentrica o luogo). In alternativa, un roditore può sviluppare una strategia che si basa sulla direzione del corpo e spunti per quanto riguarda la direzione per spostarsi in (una strategia egocentrica o procedurale), ad esempio, se un topo sa che l&#39;obiettivo è un giro sinistra seguita da una svolta a destra , allora c&#39;è poco bisogno di una strategia allocentrico o luogo. Compiti Maze spesso variano a seconda del grado di flessibilità offerto al roditore di risolverli. Ad esempio, nel Morris water maze, una versione a secco di quest&#39;ultimo (per esempio, 19) o il labirinto Barnes (ad esempio, 20), ci sono potenzialmente rotte infinite ratto può adottare per raggiungere l&#39;obiettivo. Nel Morris Water Maze, ad esempio, la posizione della porta può essere appreso basato su punti di riferimento o segnali (strategia allocentrico) esterni, o semplicemente nuotare in cerchio verso il centro fino a quando la piattaforma si trova (strategia egocentrica) 21. Alcuni compiti hanno obiettivi multiplie un alto grado di flessibilità, per esempio il task cono campo 22 o radiale di Olton labirinto 23. All&#39;altra estremità della scala sono compiti che offrono flessibilità limitata per raggiungere l&#39;obiettivo, ad esempio, il labirinto di pietra, o la versione alternato del T-labirinto. Queste attività forniscono solo un modo corretto di raggiungere l&#39;obiettivo e facilitano l&#39;emergere di routine cognitive che sono principalmente disciplinate dal sistema di memoria procedurale basato striato-. Il doppio-H labirinto è un dispositivo di test della memoria spaziale romanzo, che è stato progettato per consentire lo sperimentatore di dirigere il tipo di strategia che si impara dai roditori per risolvere il compito 24. Composto da tre bracci paralleli run intersecate da un vicolo centrale perpendicolare, la doppia H labirinto è un compito d&#39;acqua di fuga in cui i roditori imparano a raggiungere una piattaforma di fuga che è immerso in una delle posizioni labirinto. Durante l&#39;allenamento, una strategia processuale può essere sviluppata mantenendo tlui stesso inizio e sedi in tutto obiettivo. In alternativa, una strategia allocentrica può essere sviluppato alternando la posizione iniziale in un ordine casuale, richiedendo così il ratto di apprendere la posizione della piattaforma nascosta basato su segnali ambientali come deve fare in un labirinto acquatico. Questo risolve un ostacolo presente in molte attività labirinto differenti, in cui lo sperimentatore altrimenti ha poco controllo sul tipo di strategia che utilizzano roditori. Questo è importante se si considera che gli effetti di alcuni farmaci candidati-cognizione migliorare basano sul sistema place-memoria basata ippocampale-, così l&#39;emergere di routine o procedure cognitive può confondere l&#39;interpretazione delle osservazioni comportamentali quando gli animali, ad esempio passare da allocentrica alla memoria procedurale durante il corso di formazione. Allo stesso modo, può essere desiderabile per valutare gli effetti dei farmaci e trattamenti su memoria procedurale, senza l&#39;influenza della memoria posto a base allocentrica. Infine, questo dispositivopuò essere utilizzata per studiare le interazioni cooperative o competitive tra questi sistemi di memoria, e le condizioni in cui i roditori possono passare da un sistema all&#39;altro.

<table><tbody><tr><td>Ratti o topi</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Asciugamani per asciugare</td><td>Ospedale</td><td></td> universitario <td>1 / animale</td></tr><tr><td>Acqua</td><td></td><td></td> <td>~ 200 L / giorno</td></tr><tr><td>Latte scremato in polvere</td><td>Negozio</td><td></td> di alimentari <td>250 g / 200 L acqua</td></tr><tr><td>Tubo da giardino</td><td>Negozio</td><td></td><td></td>di ferramenta</tr><tr><td>Stendibiancheria per asciugamani</td><td>Negozio</td><td></td> <td>di ferramenta</td></tr><tr><td>Computer</td><td>Kinect</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>any</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Double H Maze, (plexiglass) (Custom-Built)</td></tr><tr><td>Pareti laterali esterne, 1600 &volte; 350 &volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>Pareti laterali interne, 706 &volte; 350 &volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>8</td></tr><tr><td>Pannelli del corridoio centrale, 500 &volte; 350 &volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>4</td></tr><tr><td>estremità del braccio, 188 &volte; 350 &volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>6</td></tr><tr><td>porte a ghigliottina, 187 &volte; 350 &volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>3</td></tr><tr><td>coperture delle estremità, 200 &volte; 250 mm</td><td></td><td></td><td>6</td></tr><tr><td>Traverse, 200 &volte; 40 mm</td><td></td><td></td><td>6</td></tr><tr><td colspan="4">[intestazione]</td></tr><tr><td colspan="4">Piattaforma labirinto a doppia H (da zavorrare) (Costruita su misura)</td></tr><tr><td>Piattaforma in metallo, diametro 100 mm & volte; 150 mm</td><td></td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>Copertura piattaforma, diametro 100 mm & volte; 6 mm</td><td></td><td></td><td>2</td></tr></tbody></table>

the double-h labirinto: una prova comportamentale robusto per l&#39;apprendimento e la memoria nei roditori

The Double-H Maze: A Robust Behavioral Test for Learning and Memory in Rodents

Ricerca cognizione spaziale nei roditori impiega tipicamente l&#39;uso di compiti labirinto, le cui caratteristiche variano da un labirinto all&#39;altro. Questi compiti variano in base al loro flessibilità comportamentale e durata memoria richiesta, il numero di obiettivi e percorsi, e anche la complessità generale compito. Una caratteristica confusione in molte di queste attività è la mancanza di controllo sulla strategia adottata dai roditori per raggiungere l&#39;obiettivo, ad esempio, allocentrica (procedurali) strategie basate (dichiarative-like) o egocentrici. Il doppio-H labirinto è un compito di memoria di acqua-escape romanzo che risolve questo problema, consentendo lo sperimentatore per dirigere il tipo di strategia appreso durante il periodo di formazione. Il doppio-H labirinto è un dispositivo trasparente, che consiste in un vicolo centrale con tre bracci sporgenti da entrambi i lati, con una piattaforma di fuga sommersa all&#39;estremità di uno di questi bracci. I ratti possono essere addestrati con una strategia allocentrica alternando la stposizione dell&#39;arte nel labirinto in modo imprevedibile (vedi protocollo 1; §4.7), richiedendo così loro di conoscere la posizione della piattaforma basata sui riferimenti allothetic disponibili. In alternativa, una strategia di apprendimento egocentrica (protocollo 2; §4.8) può essere impiegato rilasciando i ratti dalla stessa posizione durante ogni prova, finché non imparano il modello procedurale necessario per raggiungere l&#39;obiettivo. Questo compito è stato dimostrato per consentire la formazione di tracce di memoria stabili. La memoria può essere sondato dopo il periodo di formazione in un processo sonda fuorviante, in cui la posizione di partenza per i topi alterna. A seguito di un paradigma dell&#39;apprendimento egocentrica, ratti generalmente ricorrono ad una strategia basata allocentrica-, ma solo quando la loro vista iniziale sui riferimenti extra-labirinto si differenzia nettamente dalla loro posizione originale. Questo compito è ideale per esplorare gli effetti di farmaci / perturbazioni sulle prestazioni della memoria allocentrica / egocentrico, così come le interazioni tra °ese due sistemi di memoria.

Egocentric strategia di apprendimento Uno studio è stato condotto per determinare se la strategia di memoria scelto ratti modifiche in base alle alterazioni della loro prospettiva di stimoli ambientali esterni, seguendo un paradigma egocentrica-learning 25. I ratti sono stati formati in 4 giorni (4 prove / giorno) per raggiungere un braccio obiettivo situato a NE, e sono stati successivamente testati il quinto giorno utilizzando un processo sonda fuorviante, in cui il braccio partenz...

L'obiettivo di questo protocollo è studiare la cognizione spaziale nei roditori. Il labirinto d'acqua a doppia H è un test innovativo, particolarmente utile per chiarire le diverse componenti dell'apprendimento, del consolidamento e della memoria, nonché l'interazione dei sistemi di memoria.

The Double-H labirinto: una prova comportamentale robusto per l&#39;apprendimento e la memoria nei roditori

Spatial cognition research in rodents typically employs the use of maze tasks, whose attributes vary from one maze to the next. These tasks vary by their ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è studiare la memoria di lavoro spaziale nei roditori e valutare le loro strategie di apprendimento e comportamentali. Questo viene raggiunto innanzitutto costruendo un labirinto a doppia H per valutare le prestazioni di apprendimento e memoria. Come secondo passaggio, gli animali vengono abituati all'ambiente del labirinto prima dell'addestramento comportamentale.In seguito, gli animali vengono addestrati quotidianamente nel labirinto utilizzando un paradigma di apprendimento egocentrico al fine di sviluppare una risposta abituale. In alternativa, può essere utilizzato un paradigma allocentrico per sviluppare una risposta di posizione. L'ultimo passaggio consiste nel valutare la strategia di apprendimento dell'animale in una prova sperimentale in cui la posizione iniziale viene modificata e il modello rimosso.I risultati forniscono un'analisi sulla scelta della strategia di apprendimento utilizzata nel labirinto, basata sui dati registrati del comportamento animale. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il labirinto a otto bracci o il labirinto acquatico di Morris, è che può essere acquisita rapidamente in soli due giorni e consente all'esperimentatore di guidare il tipo di strategia che l'animale deve imparare. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo del comportamento, come l'interazione dinamica tra i sistemi di memoria procedurale e dichiarativa, e il modo in cui questi sistemi sono influenzati da diverse modalità di trattamento.La dimostrazione di questa procedura sarà effettuata dal Dott. Richard Pinnell, un ricercatore postdottorato del laboratorio di sistemi neuroelettronici. Il primo passo consiste nel costruire il labirinto a doppia H. Il labirinto è composto da un corridoio centrale intersecato da tre bracci paralleli.Ogni corridoio ha una larghezza di 20 centimetri ed è circondato da pareti alte in plexiglass trasparente. Le pareti sono fissate con una colla speciale, ad esempio agri fix, e viti, e impermeabilizzate in tutti gli angoli interni. In primo luogo, il plexiglass viene tagliato su misura e i giunti interni vengono bloccati.Il rivestimento protettivo in plastica viene rimosso vicino alla giunzione da incollare e tutte le particelle di polvere vengono eliminate con un solvente pulente. I due lati vengono posizionati in una forma a 90 gradi e un nastro speciale viene utilizzato per sigillare le estremità, prevenendo la fuoriuscita della colla. Durante il processo di polimerizzazione, la colla viene preparata mescolando un agente polimerizzante e mescolata delicatamente; la colla Croix viene quindi applicata utilizzando una siringa azionata ad aria.Il giunto viene quindi fissato e impermeabilizzato e si lascia polimerizzare. All'interno del labirinto deve essere posizionato un punto di scarico per il drenaggio. Posizionare il labirinto su un tavolo che permetta l'accesso a tutti i lati.Segnali ben contrastati devono essere posizionati sulle pareti circostanti. Successivamente, etichettare i bracci nord e sud per facilitare l'orientamento durante l'analisi video. Infine, posizionare una telecamera sopra il labirinto per l'analisi post-test del comportamento dell'animale.Accendere la telecamera per registrare i movimenti dell'animale prima di ogni prova. Per preparare la fase di pre-addestramento, riempire il labirinto con acqua trasparente fino a un'altezza approssimativa di 17 centimetri. La fase di pre-addestramento può avvenire un giorno prima o nello stesso giorno delle sessioni di addestramento.Mantenere la temperatura dell'acqua tra 21 e 23 gradi Celsius per incentivare i ratti a cercare la piattaforma di fuga. Riempire il labirinto con acqua il giorno prima della prova per permettere alla temperatura dell'acqua di stabilizzarsi. Indipendentemente dalla posizione di partenza, bloccare sempre l'ingresso nel braccio opposto con una porta a saracinesca trasparente.Quando pronto, rilasciare il ratto dall'estremit&agrave; di uno dei bracci centrali. Una volta raggiunta la piattaforma di fuga, permettere al ratto di riposare e osservare l'ambiente circostante per circa 15 secondi. Eseguire quattro prove consecutive con un intervallo di riposo di almeno 10 secondi tra una prova e l'altra.Per iniziare l'addestramento, spostare la piattaforma di fuga dalla sua posizione precedente all'addestramento al braccio scelto e aggiungere acqua per immergere la piattaforma di un centimetro sotto la superficie dell'acqua. Successivamente, rendere l'acqua opaca mescolando 250 grammi di latte in polvere scremato. Prima, preparare un miscuglio di latte in polvere e acqua in una bottiglia separata e distribuire questa miscela in diversi punti intorno al labirinto.Mescolare aiuta a raggiungere più rapidamente l'omogeneità dell'acqua nel labirinto. Rilasciare i ratti da un corridoio centrale come dimostrato in precedenza, assicurandosi che l'ingresso al braccio opposto sia bloccato. Una volta rilasciati, osservare il comportamento dell'animale e registrare la sua prestazione manualmente o mediante videocamera.Se la piattaforma bersaglio non viene raggiunta entro 60 secondi, guidare delicatamente il ratto verso la piattaforma di fuga e permettergli di riposare lì e osservare l'ambiente circostante. Dopo circa 15 secondi, il ratto viene rimosso e asciugato strofinando con un asciugamano prima della prova successiva. Questo passaggio è importante per evitare che i ratti si raffreddino eccessivamente nei successivi quattro giorni.Seguire il protocollo di addestramento di base. Rilasciare i ratti dall'uno o dall'altro braccio di partenza, nord o sud, in una sequenza imprevedibile, in modo che entrambi i bracci vengano utilizzati due volte. Rimuovere la piattaforma di fuga per eseguire le prove di sonda al sesto giorno.Rilasciare il ratto da un braccio diverso rispetto a quello utilizzato durante l'addestramento. Ad esempio, se rilasciato nel braccio nord, rilasciarlo dal braccio nord-est con il braccio sud-est chiuso, permettendo al ratto di nuotare per un massimo di 60 secondi. Rilasciare il ratto dallo stesso braccio iniziale per ciascuna delle quattro prove di addestramento giornaliere.Al sesto giorno, rimuovere la piattaforma di fuga per la prova di sonda. Rilasciare il ratto da un braccio diverso rispetto a quello da cui era stato rilasciato durante la prova. Consentire ai ratti di nuotare per 60 secondi.Dopo il test, esaminare le registrazioni effettuate con la telecamera sopraelevata, rilevare manualmente le risposte, le latenze, gli errori iniziali e ripetuti, le prime scelte e i tipi di risposta. Infine, eseguire un'analisi statistica riguardante gli errori di risposta, le latenze per raggiungere l'obiettivo e il tempo trascorso nel braccio bersaglio.In questo diagramma, le zone di errore del labirinto sono evidenziate in grigio, mentre i bracci chiusi sono evidenziati in nero sia per la posizione di partenza sud che per quella nord. La linea tratteggiata rappresenta un esempio di percorso natatorio in cui il ratto visita tutte e quattro le zone di errore. Prima di raggiungere la piattaforma di fuga, questi percorsi natatori rappresentativi illustrano il movimento durante la prova di prova.Dopo un addestramento allocentrico, e dopo un addestramento egocentrico, i ratti addestrati a partire dal braccio nord o sud mostrano prevalentemente risposte procedurali quando la loro posizione iniziale viene spostata a sinistra. Tuttavia, i ratti a cui il braccio di partenza è stato ruotato di 180 gradi hanno mostrato una maggiore quantità di risposte di tipo spaziale. Le risposte che non erano né di tipo spaziale né procedurali sono state classificate come altre, e tracce di nuoto tipiche sono mostrate sia per il gruppo con intervento fittizio sia per quello con lesione neonatale dell'ippocampo ventrale durante la fase di addestramento.Osservare la differenza nelle prestazioni. Al quarto tentativo di addestramento durante la sessione di prova, il braccio iniziale originale è stato chiuso e i ratti sono stati rilasciati dal braccio sudovest. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in meno di cinque minuti se effettuata correttamente.Nel tentativo di eseguire questa procedura, è importante ricordarsi di cambiare l'acqua del latte ogni giorno, altrimenti diventerà rancida. Da quando è stata sviluppata, questa procedura ha aperto la strada ai ricercatori nel campo del comportamento per esplorare i sistemi di memoria procedurale e dichiarativa in animali svegli.

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Research

Ricerca

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Il labirinto Lashley III è un percorso di apprendimento-lavoro che non si basa su stimoli avversi o segnali visivi. E 'quindi una scelta molto attraente per la valutazione dell'apprendimento e della memoria, soprattutto nei topi l'invecchiamento o in altro modo in cui lo stress è una considerazione.

Low-stress Learning percorso con la Maze Lashley III nel Mice

Questo articolo presenta un protocollo di T-labirinto test utilizzando un apparecchio modificato automatizzato per la valutazione delle funzioni di apprendimento e di memoria nei topi.

T-labirinto alternanza forzata e sinistra-destra Attività discriminazione per la Valutazione di lavoro e la memoria di riferimento nel Mice

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La terraferma Barnes labirinto è ampiamente usato per misurare la capacità di navigazione spaziale in risposta a stimoli leggermente avversi. Nei giorni successivi, le prestazioni (ad esempio, la latenza per individuare gabbia fuga) dei soggetti di controllo migliora, indicativo di apprendimento normale e la memoria. Differenze tra ratti e topi richiedono apparecchi e metodologia cambiamenti che sono dettagliate qui.

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Questo articolo introduce un apparato di t-labirinto automatizzato che abbiamo inventato e un protocollo basato su questo apparecchio per l'analisi decisionale basato su ritardo e sforzo processo decisionale nei roditori di movimento liberi.

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Un compito di memoria di lavoro spaziale appetitivo per topi in un labirinto radiale semiautomatico a 8 bracci, che riduce l'associazione di memoria paurosa nel labirinto

Questo video mostra il paradigma residente-intruso nei ratti. Questo test è un metodo standardizzato per misurare l'aggressività offensiva, comportamento difensivo e la violenza in un ambiente semi-naturale. L'uso del paradigma per gli esperimenti di stress sociale è spiegato pure.

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