Un poco costoso, test comportamentale scalabile per la misurazione etanolo sedazione sensibilità e tolleranza Rapid in Drosophila

L'obiettivo generale del seguente esperimento è valutare la sensibilità alla sedazione con etanolo nei moscerini della frutta. Ciò si ottiene mettendo le mosche in fiale ed esponendole al vapore di etanolo. Il secondo passo consiste nel determinare il numero di mosche che vengono sedate in ciascuna fiala in punti temporali ricorrenti fino a quando tutte le mosche non vengono sedate.

Successivamente, il punto temporale viene interpolato. Quando il 50% dei moscerini viene sedato per ogni fiala, i risultati mostrano un indice del tempo necessario per sedare i moscerini della frutta con l'etanolo. A dimostrazione di questa procedura oggi sarà Simran Sindu, uno studente del mio laboratorio. Per iniziare l'esperimento, raccogliere le mosche in fiale di cibo fresco in gruppi di 11 di un solo sesso per un massimo di cinque minuti di CO2, lasciare che le mosche si riprendano durante la notte in fiale di cibo in uno spazio controllato dall'ambiente.

Preparare la soluzione di etanolo diluendo etanolo puro al 100% in acqua purificata a una concentrazione finale dell'85% Lasciare che la soluzione torni a temperatura ambiente per una notte prima del test Preparare una fiala di cibo pulita e vuota, che servirà come fiala di prova. Un nuovo tappo in acetato di cellulosa, un tappo in silicone e un millilitro di soluzione di etanolo per ogni fiala di mosche da testare, regolare la temperatura ambiente da 20 a 25 gradi Celsius e l'umidità relativa dal 55 al 65%Designare un altro lavoratore per assegnare un codice univoco a ciascun gruppo di fiale e registrare il codice per posizionare successivamente le fiale codificate con le mosche nella sala prove per acclimatarle per alcuni minuti. Quindi, etichettare le fiale di test vuote in modo che corrispondano ai codici sulle fiale volanti.

Costruisci un registro di test cartaceo inserendo i codici in colonne con una colonna per fiala in un foglio di calcolo. Utilizzando il registro dei test come guida. Disporre le fiale di cibo codificate con le mosche e le fiale di test vuote in array corrispondenti nella sala di prova, trasferire le mosche dalle fiale di cibo alle fiale di test abbinate ed etichettate, una alla volta.

Quindi inserire immediatamente i tappi di acetato di cellulosa nelle fiale di test fino a quando i tappi di acetato di cellulosa non si trovano due centimetri sotto la parte superiore delle fiale. Per la valutazione del tempo zero. Afferrare ogni fiala singolarmente con il pollice e l'indice.

Picchiettare delicatamente sul tavolo tre volte per far cadere le mosche sul fondo della fiala. Attendi 30 secondi e conta il numero di mosche immobili e/o morte. Registra il numero di mosche morte immobili per ogni fiala alla volta.

Zero minuti nel registro dei test cartacei. Avviare il timer al tempo zero e aggiungere immediatamente un millilitro di etanolo all'acetato di cellulosa. Inserisce un movimento circolare a intervalli di cinque secondi per la prima serie di quattro fiale nell'ordine.

Saranno testati quando l'etanolo sarà stato aggiunto a tutte e quattro le fiale di test del set. Inserire un tappo di silicone in ogni flaconcino per sigillarlo a 1, 2, 3, 4 e cinque minuti. Aggiungere un millilitro di etanolo rispettivamente al secondo, terzo, quarto, quinto e sesto set di quattro fiale.

Continuare a inserire i tappi in silicone dopo aver aggiunto etanolo a ciascun set di quattro fiale LS a sei minuti. Testa il primo set di quattro fiale afferrando ciascuna fiala con un pollice e un indice e picchiettando delicatamente sul tavolo tre volte per far cadere le mosche sul fondo della fiala. Attendi 30 secondi, quindi conta e registra il numero totale di mosche che vengono sedate.

Score vola come sedato se, uno, sta sul pavimento della fiala, ma non cammina o due si sdraiano sulla schiena con o senza sbattere le ali. Maneggiare ogni fiala all'interno del set a intervalli di cinque secondi utilizzando questo programma alla volta. 7, 8, 9, 10 e 11 minuti.

Testare rispettivamente il secondo, terzo, quarto, quinto e sesto set di fiale come fatto per il primo set a 12 minuti. Testare nuovamente il primo set di quattro fiale e continuare a testare il secondo, terzo, quarto, quinto e sesto set di fiale rispettivamente a 13, 14, 15, 16 e 17 minuti. Continua a testare le mosche fino a quando non sono tutte sedate.

Inserire il numero totale di mosche in ogni fiala nel test cartaceo. Sensore log mosche immobili o morte al tempo zero dal numero totale di mosche. I dati grezzi del test di sedazione con etanolo sono stati convertiti nella percentuale di mosche attive in funzione del tempo.

La sensibilità alla sedazione con etanolo dai dati primari è stata quantificata come tempo di sedazione 50 o ST 50. Il tempo necessario affinché il 50% delle mosche diventi sedato o si trovi sotto la curva o una CU. Il test rileva gli effetti dell'RNAi contro la calnexina 14 D nel sistema nervoso, che attenua la sensibilità all'etanolo rispetto ai controlli, la mutazione della crosta e dell'agitatore, l'aumento della sensibilità alla sedazione dell'etanolo e la mutazione dell'happy hour. Sensibilità alla sedazione con etanolo smussata rispetto ai controlli Una volta padroneggiato.

Questa tecnica può essere eseguita in un'ora e mezza se eseguita correttamente.