Name: Isolamento di cellule mononucleate dal Sistema Nervoso Centrale di ratti con EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Scopri l'isolamento di cellule mononucleate dal sistema nervoso centrale di ratti con EAE. Questo protocollo utilizza perfusione cardiaca e gradiente Percoll per ottenere cellule vitali per citometria a flusso e coltura.

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<ol><li> Profondamente anestetizzare ratti. Spruzzare con il 70% di etanolo e fare una perfusione cardiaca con PBS per 10 minuti per rimuovere le cellule dai vasi sanguigni (taglio atri destro e profumato attraverso il ventricolo sinistro). </li><li> Togliere il cervello e il midollo spinale e posto in una provetta da 50 ml contenente ghiacciata PBS. Tagliare il cervello e il midollo spinale in un colino cella di 70 millimetri collocati in un piatto da 10 cm di Petri contenente 10 ml di PBS ghiacciata. Premere ogni pezzo di organo attraverso il filtro delle cellule utilizzando il retro di una sterile uno stantuffo della siringa ml. Raccogliere la sospensione singola cella in una provetta da 50 ml su ghiaccio. Lavare le cellule con PBS colino e aggiungere al tubo fino a quando la soluzione è limpida. </li><li> Centrifugare per 8-10 minuti a 390 g. </li><li> Risospendere le cellule in 20 ml di Percoll PBS + 30% e sovrapposizione su 10 ml di Percoll PBS + 70%. </li><li> Centrifugare a 390 g per 20 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Togliere il grasso sulla parte superiore del tubo. Raccogliere le cellule dall&#39;interfaccia e lavare due volte con PBS. Conte. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Questa procedura, come tutte le procedure che coinvolgono gli animali vivi, devono essere approvati da un uso animale vostra istituzione e sul comitato per la cura. Si consiglia un veterinario o un tecnico veterinario essere presente quando si esegue la perfusione cardiaca prima per assicurare un sufficiente livello di anestesia viene data l&#39;animale prima e durante la procedura, e che gli animali non sottoposti a inutili sofferenze o angoscia.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, sterile</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Filtro cellulare, 70 µm</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule mononucleate dal sistema nervoso centrale di ratti con eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Se lo studio di una malattia autoimmune rivolta al sistema nervoso centrale (CNS), come encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE, 1), o la risposta immunitaria ad un&#39;infezione del sistema nervoso centrale, come ad esempio la poliomielite, Lyme neuroborreliosi, o neurosifilide, è spesso necessario isolare il CNS-infiltrazione delle cellule immunitarie. In questo video-protocollo dimostriamo come isolare le cellule mononucleate (MNC), dal sistema nervoso centrale di un topo con EAE. Il primo passo di questa procedura richiede un perfusione cardiaca del roditore con una soluzione salina per garantire che nessun sangue rimane nei vasi sanguigni irrigazione del sistema nervoso centrale. Ogni contaminazione sangue aumentare artificialmente il numero di apparente SNC infiltrazione multinazionali e può modificare la composizione apparente del sistema immunitario infiltrarsi. Abbiamo poi dimostrare come rimuovere il cervello e il midollo spinale del ratto per dilaceration successive per preparare un cella singola sospensione. Questa sospensione è separato su un doppio strato gradiente Percoll per isolare il multinazionali. Dopo il lavaggio, queste cellule sono poi pronti a sottoporsi a qualsiasi procedura richiesta. Cellule mononucleate isolate utilizzando questa procedura è realizzabile e può essere utilizzato per elettrofisiologia, citometria a flusso (FACS), o biochimica. Se la tecnica viene eseguita in condizioni sterili (utilizzando strumenti sterili in una cappa di coltura di tessuti), le cellule possono essere coltivate in terreni di coltura. Una popolazione di cellule dato può essere ulteriormente purificato utilizzando le procedure di separazione magnetica o una FACS.

In questo video ci mostrano come isolare le cellule mononucleate del sistema nervoso centrale di topi con encefalomielite autoimmune sperimentale.

Isolamento di cellule mononucleate dal Sistema Nervoso Centrale di ratti con EAE

Sia che si studi una malattia autoimmune diretta contro il sistema nervoso centrale (SNC), come l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE, 1), sia il...

Ok. Salve, sono Christine Beaton. Sono un ricercatore assistente nel laboratorio di George Chen del Dipartimento di Fisiologia e Biofisica dell'Università della California di Irvine. Oggi vi mostrerò come isolare le cellule mononucleate dal sistema nervoso centrale dei ratti.Questa procedura prevede l'anestesia profonda del ratto per eseguire una perfusione cardiaca, in modo da non avere sangue contaminante nel sistema nervoso centrale. Una volta rimosso, preleveremo il cervello e il midollo spinale, prepareremo una sospensione di singole cellule utilizzando un filtro cellulare e quindi, mediante un gradiente a doppio strato di percoll, isoleremo le cellule mononucleate. Cominciamo dunque.Ora sono pronto per eseguire la perfusione cardiaca, quindi mostrerò tutti i materiali necessari. La prima cosa di cui abbiamo bisogno è un barattolo di Bel, e qui sotto abbiamo messo dei fazzoletti di carta inzuppati con anestetico volatile. È possibile utilizzare halane o iso fluorine.La prossima cosa di cui abbiamo bisogno è qualcosa per trattenere il ratto e qualcosa per raccogliere il sangue. Abbiamo quindi questa apparecchiatura improvvisata per perfondere i ratti. Userete un ago da 21 gauge

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L'articolo attuale descrive un protocollo rapido per isolare in modo efficace le cellule mononucleate da tessuti cerebrali e del midollo spinale che può essere efficacemente utilizzato per le analisi di citometria a flusso.

Isolamento del cervello e cellule mononucleari del midollo spinale Uso dei gradienti Percoll

In questo video, eseguiamo l'isolamento di cellule mononucleate dal cervello di un topo utilizzando la centrifugazione a gradiente di densità. La sospensione di cellule mononucleate isolate può essere utilizzata per ulteriori analisi a valle.

Isolamento di cellule mononucleate dal cervello di topo: una tecnica di centrifugazione a gradiente di densità per isolare le cellule mononucleate residenti nel cervello

Questo video mostra il processo di isolamento dei microvasi cerebrali dai ratti soppressi. Comprende la dissezione del cervello, la pulizia del tessuto e la digestione meccanica, seguita da centrifugazione ripetuta per isolare la frazione pura dei microvasi.

Un metodo per l'isolamento delle unità neurovascolari dal cervello di ratto

Questo manoscritto descrive i metodi per l'induzione e il punteggio del modello sperimentale di encefalomielite autoimmune (EAE), insieme alla valutazione della distribuzione delle cellule immunitarie e dei livelli di citochine mRNA nei linfonodi, nella milza, nel sangue e nel midollo spinale utilizzando la citometria a flusso e la PCR quantitativa, rispettivamente, in varie fasi della malattia.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale nei topi e valutazione della distribuzione delle malattie-dipendente delle cellule immunitarie in vari tessuti

Sforzi per comprendere la funzione di microglial in dettaglio sono stati ostacolati dalla mancanza di modelli di cultura microglial che ricapitolano le proprietà di microglia maturo in vivo . Questo protocollo descrive un metodo di isolamento e coltura progettato per mantenere la sopravvivenza robusto di ratto maturo altamente ramificato microglia in condizioni definite e medie.

Isolamento e coltura di Microglia roditore per promuovere una dinamica ramificate morfologia in Medium senza siero

L'obiettivo di questo protocollo è quello di isolare i microvasi da più regioni del sistema nervoso centrale dei vertebrati lissencefalici e gyrencephalic.

Isolamento affidabile dei micronavi del sistema nervoso centrale in cinque gruppi di vertebrati

Forniamo un protocollo per l'isolamento della microglia da diverse regioni sezionate di un emisfero cerebrale adulto, seguito dalla preparazione della libreria semiautomatica per il sequenziamento profondo dell'RNA unicellulare di trascrittomi a lunghezza intera. Questo metodo aiuterà a chiarire l'eterogeneità funzionale della microglia in salute e malattia.

Isolamento di Microglia specifico della regione da un emisfero cerebrale di topi adulto per il sequenziamento profondo dell'RNA a singola cellula

Questo manoscritto presenta un protocollo per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale attiva (EAE) nei topi. Viene inoltre presentato un metodo per l'isolamento e la caratterizzazione dei linfociti infiltrati nel sistema nervoso centrale (CNS) per mostrare come i linfociti siano coinvolti nello sviluppo della malattia autoimmune del SNC.

Analisi citometrica del flusso dell'infiltrazione di linfociti nel sistema nervoso centrale durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Un metodo per l'isolamento di cellule staminali neurali e cellule progenitrici di oligodendrociti dal cervello di ratti vivi è presentato qui in dettaglio sperimentale. Permette di raccogliere più cellule dagli stessi animali senza comprometterne il benessere.

Il metodo di "mungitura del cervello" per l'isolamento di cellule staminali neurali e cellule progenitrici di oligodendrociti da ratti vivi

Questa ricerca delinea due tecniche per isolare abbondanti trappole extracellulari neutrofile (NET) dal midollo osseo di ratto. Un metodo combina un kit commerciale di isolamento dei neutrofili con la centrifugazione a gradiente di densità, mentre l'altro impiega solo la centrifugazione a gradiente di densità. Entrambi gli approcci producono NET funzionali che superano quelli dei neutrofili del sangue periferico.

Approccio unico per l'isolamento di neutrofili del midollo osseo di ratto con capacità comparabili

Ad oggi, i protocolli per l'isolamento simultaneo di tutti i principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale dallo stesso topo sono una richiesta insoddisfatta. Il protocollo mostra una procedura applicabile nei topi con encefalomielite autoimmune naïve e sperimentale per studiare reti cellulari complesse durante la neuroinfiammazione e contemporaneamente ridurre il numero di topi richiesti.

Isolamento simultaneo dei principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale da topi adulti con encefalomielite autoimmune

Scopri l'isolamento di cellule mononucleate dal sistema nervoso centrale di ratti con EAE. Questo protocollo utilizza perfusione cardiaca e gradiente Percoll per ottenere cellule vitali per citometria a flusso e coltura.

Isolamento di cellule mononucleate dal Sistema Nervoso Centrale di ratti con EAE

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