Name: Rene Murine Tecnica trapianto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Impara una tecnica modificata di anastomosi arteriosa per trapianti renali nel topo, utilizzando un cuff a tallone e punta dall'aorta addominale del donatore. Questo metodo riduce significativamente la trombosi arteriosa.

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Tutti i topi sono stati acquistati da The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME), e sono stati alloggiati in condizioni di libero patogeni presso l&#39;Università del Colorado Denver, Facility Barbara Davis Animal Center secondo Linee Guida NIH e con l&#39;approvazione della University of Colorado Denver IACUC. 1. Trapianto renale Harvest <ol><li> Sterilizzare tutti gli strumenti, indossare guanti sterili durante tutta la procedura e mantenere un campo sterile. Eseguire tutti gli interventi chirurgici con l&#39;uso di un microscopio operatorio. </li><li> Rimuovere chirurgicamente reni topo donatore da (kg IP 60mg /) donatori pentobarbital-anestetizzati. Accertare profondità dell&#39;anestesia da punta pizzico, e osservare la frequenza respiratoria. </li><li> Agganciare la pelliccia quindi immobilizzare il mouse da vincoli a 4 vie. Preparare la pelle con iodio-povidone e drappeggio il mouse in modo sterile. </li><li> Fare un 2 centimetri linea mediana verticale incisione addominale e entrare nella cavità addominale. Ritrarre l&#39;intestino superiormente ed esternare laal petto. Mantenere l&#39;intestino avvolto in una garza sterile umido durante tutta la procedura. </li><li> Identificare i grossi vasi addominali e mobilitare, identificare eventuali rami lombari e sia cauterizzare o legare con 10/0 sutura in nylon. </li><li> Immediatamente distale vasi renali sinistra stuzzicare la vena cava inferiore (IVC) e aorta addominale (AA) a parte per via smussa su circa 2mm. Legare con 10/0 nylon e dividere piccolo arterioso e rami venosi dai vasi renali. </li><li> Ora separare la vena renale dalla arteria renale attentamente per via smussa di queste strutture. Questo consente la creazione accurata di una patch Carrel all&#39;estremità prossimale della vena renale, che verrà utilizzata per formare una anastomosi end-to-side ai destinatari IVC. </li><li> Identificare, legare e sezionare i vasi surrenali sinistra. Questo consente l&#39;accesso all&#39;aorta surrenale e una sutura di seta 6-0 è collocato intorno l&#39;aorta in preparazione per legatura, ma non legato in questo momento. </li&gt; <li> Mobilitare il rene, i vasi e dell&#39;uretere dalla plancia circostante. Ruotare il rene a destra e legare / dividere i rami posteriori. Quindi tornare il rene di sinistra. </li><li> Ora dirigere l&#39;attenzione per l&#39;uretere. Senza scomodare l&#39;ilo renale liberare l&#39;uretere dal circostante plancia facendo attenzione a preservare i vasi ureterali. Dividere l&#39;uretere a livello del dotto deferente. Il rene è ora pronto per il recupero. </li><li> Iniettare lentamente 300 unità di eparina nel distale IVC heparinizing così il donatore. Fissare la sutura di seta 6-0 disposte intorno al AA surrenale e profumato rene sinistro tramite l&#39;aorta addominale distale con 0.8ml di soluzione di eparina salina (100 U / ml). </li><li> Una volta che la perfusione ha cessato creare una patch Carrel venoso immediatamente per eliminare il riflusso nel rene. Ritrarre la vena renale verso il rene rivelando l&#39;AA e dell&#39;arteria renale sotto. </li><li> Dividere l&#39;aorta adiacente dell&#39;arteria renale creando un tacco ee bracciale come mostrato in Figura 1. Rimuovere i reni, vasi e dell&#39;uretere dal donatore. </li><li> Rimuovere il rene direttamente a un destinatario pre-preparati (0 min tempo di ischemia fredda) o conservati a 4 ° C in una soluzione di scelta per un tempo predeterminato fino al momento dell&#39;impianto. Eutanasia donatori di exsanguanation e dislocazione cervicale. Il tempo totale per il recupero del rene del donatore è di circa. 15-20 min. </li></ol> 2. Rene tecnica di impianto <ol><li> Anestetizzare il mouse destinatario con pentobarbital (60 mg / kg IP dose iniziale, 25 mg dose supplementare / kg IP se richiesto). Accertare profondità dell&#39;anestesia da punta pizzico, e osservare la frequenza respiratoria. Clip della pelliccia quindi immobilizzare il mouse da vincoli a 4 vie e applicare pomata oftalmica per gli occhi. Preparare la pelle con iodio-povidone e drappeggio il mouse in modo sterile. </li><li> Fare un 2 centimetri linea mediana verticale incisione addominale e entrare nella cavità addominale. Ritrarre l&#39;intestinosuperiormente e externalize al petto. Mantenere l&#39;intestino avvolto in una garza sterile umido durante tutta la procedura. </li><li> A questo punto eseguire una nefrectomia destra. Legare l&#39;arteria e la vena renale con 6-0 punti di sutura in seta. Accise distale rene per le suture. Legare l&#39;uretere con 6-0 seta e poi dividere prossimale al rene. </li><li> Isolare l&#39;aorta addominale e vena cava inferiore (IVC) sotto i vasi renali. Mettere 4-0 legami di cotone attorno l&#39;aorta e vena cava inferiore superiore poi inferiore al sito anastomosi. Identificare e legare eventuali vasi lombari all&#39;interno del campo con 10-0 sutura in nylon. </li><li> Annodare i legami di cotone, prima l&#39;inferiore, seguito dal superiore. In questo modo viene mantenuta del sangue nell&#39;aorta rendendo il aortotomy facile. </li><li> Formare la aortotomy con un ago 30G per entrare nel lume dell&#39;aorta. Estendere l&#39;incisione con sottili forbici micro ad una lunghezza di circa 2 mm. </li><li> Effettuare la fine anastomosi lato della cuffia aortico donatore tacco e punta al&#39;aorta destinatario nel seguente modo. Inserire un 10-0 nylon soggiorno suture stitch nell&#39;aorta donatore e all&#39;angolo inferiore dell&#39;incisione nell&#39;aorta destinatario e cravatta. </li><li> Posizionare un secondo 10-0 nylon opposto al primo nell&#39;aorta donatore e l&#39;angolo superiore dell&#39;incisione in aorta addominale e cravatta. Fare una linea sutura continua da superiore a inferiore nella parete laterale dell&#39;aorta e legare contro la permanenza punto precedentemente posizionato. Poi suturare la parete mediale in modo esecuzione e cravatta. </li><li> Effettuare la fine anastomosi lato della vena renale donatore al ricevente IVC nel seguente modo. Forare il IVC con un ago 30G ed estendere l&#39;incisione con sottili forbici micro. Legare la vena renale donatore verso l&#39;angolo inferiore della incisione nel IVC con 10-0 di nylon. Fare una linea di sutura che corre tra la vena renale e l&#39;IVC e cravatta. NOTA: E &#39;di vitale importanza che tutto spessore passa l&#39;ago di sutura tra cui il adventit vascolareia e l&#39;intima sono raggiunti. Eversion dei bordi assicura anche che c&#39;è intima-to-intima contatto, che aiuta nella chiusura e guarigione delle anastomosi. Mentre un agente di coagulazione emostatico può essere utile per ridurre le perdite, si raccomanda che un chirurgo invece contare su una buona tecnica. </li><li> Assicurarsi che le anastomosi sono &quot;puliti&quot;. Vale a dire, che le pareti opposte, non sono catturati durante il posizionamento di punti. Questo provocherà un restringimento significativo di fluire che si tradurrà in un innesto fallito e, in casi estremi arto posteriore paralisi. NOTA: Un altro fattore estremamente importante è garantire che la tensione delle linee di sutura anastomotica anche ottimale. Troppo lenta e non ci saranno perdite irreversibili, troppo stretto e stenosi di fluire si tradurrà. Se sul lato arterioso questo si tradurrà in scarsa perfusione dell&#39;innesto, se sul lato venoso comporterà un rene congestionata. </li><li> Rilasciare il distale flusso venoso 4-0 cotone tie ristabilire. Una volta emostasi del venonoi anastomosi è stata osservata gradualmente allentare la prossimale pareggio 4-0 in cotone e osservare la anastomosi arteriosa per l&#39;emostasi. </li><li> Rimuovere le fascette di cotone dal mouse una volta entrambe le anastomosi sono considerati sicuri. Pierce vescica con un ago 20 G creando due fori. </li><li> Far passare la punta delle pinze curve attraverso i fori e tirare l&#39;uretere donatore attraverso la vescica con la pinza con l&#39;estremità prossimale dell&#39;uretere essere ancorato alla parete della vescica con due 10-0 suture in nylon. Tagliare la lunghezza in eccesso dell&#39;uretere sporge dal secondo foro permettendo l&#39;uretere ritragga all&#39;interno della vescica e chiudere il foro con due 10-0 suture in nylon. </li><li> Ritorna l&#39;intestino all&#39;addome. Chiudere la parete addominale in due strati con 5-0 sutura di seta in modo esecuzione. </li><li> Somministrare un bolo 1,0 ml di soluzione sterile, caldo normale soluzione fisiologica nell&#39;addome come rianimazione fluido alla chiusura, e iniettare 0,8 ml di soluzione fisiologica normale per via sottocutanea nel post-operatorio. Nessun altro Supportigiocare cinque misure durante l&#39;intervento sono obbligatori. </li><li> Recuperare l&#39;animale su una coperta di riscaldamento. Tempo totale dell&#39;impianto è di circa. 35-45 min. Somministrare analgesici come buprenorfina, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml all&#39;inizio della procedura e ogni 6-12 ore per 72 ore post-op. </li></ol> 3. controlaterale Nefrectomia <ol><li> A seconda dei requisiti di protocollo, diversi giorni dopo la procedura di impianto, eseguire una nefrectomia controlaterale sotto anestesia isoflurano (5% isoflurano inalato per induzione, 1,5-2,0% per la manutenzione). </li><li> Inserire la cavità addominale e ritrarre delicatamente l&#39;intestino al diritto degli animali. Esporre il rene sinistro e sezionare smussato dalla fascia circostanti. </li><li> Legare l&#39;arteria renale, vena e dell&#39;uretere con 6-0 punti di sutura in seta e poi asportare il rene sopra le suture e rimuovere il rene. Tempo operatorio totale è di circa. 10 min. </li></ol> 4. Graft Assessment <ol><li> Misura siero Creatinove utilizzando il metodo del picrato alcalino (reazione Jaffe). </li></ol>

<ol><li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Padroneggiare questa tecnica di trapianto è difficile, ma una volta realizzato, è uno strumento di ricerca molto potente. Il paziente chirurgo / ricercatore sarà ricompensato dalla cura dei dettagli e la coerenza della tecnica, che è la chiave per padroneggiare qualsiasi procedura chirurgica, a maggior ragione nei piccoli modelli animali. Le difficoltà tecniche di padroneggiare il trapianto di rene di topo sono molte pieghe, ed è molto probabile che l&#39;esperienza in altri modelli di piccole dimensioni trapianto anima...

Dal 1973 il modello di trapianto di rene nei topi è stato un valido strumento di ricerca, ma problemi tecnici hanno ostacolato la sua diffusione. Nel corso degli anni numerosi lavori sono stati pubblicati in dettaglio i miglioramenti / perfezionamenti a questa procedura. Come modello di principalmente vascolarizzato trapianto di organo solido questa procedura è probabilmente secondo solo al modello di trapianto di cuore eterotopico che è stato anche ideato dal laboratorio di Russell nel 1973 6. Entrambi i modelli si prestano alla ricerca sulle risposte di rigetto allogenico, lo sviluppo di ritardata funzionalità del trapianto e danno da ischemia riperfusione. Uno dei problemi più comuni da segnalare con trapianto renale è relativamente alta incidenza di trombosi arteriosa 4,5,7 che abbiamo anche sperimentato nel nostro laboratorio. Pertanto abbiamo deciso di effettuare una revisione della letteratura di formazione di trombi e forse trovare la causa di questo problema tecnico e di elaborare anche unapossibile soluzione. La causa più probabile di trombosi è il percorso alquanto tortuosa sangue prende dall&#39;aorta destinatario, nell&#39;aorta renale donatore poi all&#39;arteria renale donatore. Questo percorso provoca turbolenza nella arteria renale che può portare all&#39;attivazione delle piastrine e formazione di trombi. Sulla base delle recenti osservazioni e una ricerca di letteratura 8-14 siamo arrivati ​​a una nuova tecnica che ha ridotto la trombosi a 0%. La tecnica qui descritta varia da tecniche precedentemente riportati nella formazione di un bracciale tallone e punta arteriosa che strutture migliorate flusso sanguigno e riduce notevolmente la formazione di trombi. Il polsino è formata dividendo dell&#39;aorta infra-renale attraverso la faccia della ostio arterioso renale con un angolo inferiore a 45 ° rispetto all&#39;asse longitudinale dell&#39;aorta (Figura 1A e 1B). Ciò si traduce in un bracciale circa 2mm di lunghezza. Una patch Carrel venoso è formata da sezionare la rvena Enal nella IVC aumentando il diametro del bracciale. Il donatore addominale dell&#39;aorta polsino tacco e punta infra-renale è end-to-side anastomizzata all&#39;aorta addominale destinatario e la vena renale donatore / patch IVC è end-to-side anastomizzata al destinatario addominale vena cava inferiore (IVC) . L&#39;uretere viene poi introdotto in ed ancorata alla vescica come descritto da Han et al 3. Per questo studio i trapianti non trattati con soli tempi di ischemia calda (es., Senza di ischemia fredda) si confrontano. In questo caso ischemia calda si riferisce al tempo dalla cessazione del flusso di sangue attraverso il rene donatore (passo 1.11) e riperfusione del graft nel ricevente (passo 2.11 sotto). Ischemia fredda si riferisce al tempo che il rene non è perfuso e si mantiene in celle frigorifere fino all&#39;inizio della procedura di impianto.

<table><tbody><tr><td>Strumento</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Pinza per microdissezione diritta #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per microdissezione curva #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per</td> microdissezione curva <td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per microdissezione Vannas, corte</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>Forbici per microdissezione, dritte, affilate, lunghe</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi con manico a molla micro</td><td>11.549.15</td><td></td><td></td></tr><tr>Pinza <td></td><td>per zanzare diritta</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per microdissezione, diritte, smussate</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per microdissezione, curve, smussate</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro divaricatore</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vassoio portastrumenti, 10" x 6 &frac12; &rdquo; x &frac34; "</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura in seta, 5/0, bobina da 22,5 m</td><td>18020-50</td><td></td>Sutura 10/0 in nylon T4A10Q07 5/0 in seta E19A05N Guanti Drappeggi Biogel da Medex Supply Precept, #64-9012-9 Siringhe <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>Applicatori in</td><td></td>cotone</tr><tr><td>BD 1cc insulina, #329424</td><td></td><td>Fisher-brand, #23-400-100</td><td></td></tr><tr>Tamponi <td></td><td></td><td></td><td>di iodio povidone</td></tr><tr><td>PDI, #B40600</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4/0 Cravatte</td><td></td><td></td><td></td>in cotone</tr><tr><td>Cotone domestico autoclavato con strumenti</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rene murine tecnica trapianto

Murine Kidney Transplant Technique

La prima tecnica di trapianto di rene di topo è stata pubblicata nel 19731 dal laboratorio Russell. Sebbene ci siano voluti alcuni anni prima che altri laboratori diventassero esperti e utilizzassero questa tecnica, ora è ampiamente utilizzata da molti laboratori in tutto il mondo. Un significativo perfezionamento della tecnica originale che utilizzava l'aorta del donatore per formare l'anastomosi arteriosa al posto dell'arteria renale è stato sviluppato e riportato nel 1993 da Kalina e Mottram 2 con un ulteriore progresso proveniente dallo stesso laboratorio nel 1999 3. Sebbene si possa diventare esperti in questo modello, una ricerca in letteratura rivela che molti laboratori sperimentano ancora un'alta percentuale di perdita di innesto a causa di trombosi arteriosa. Descriviamo qui una tecnica che è stata ideata nel nostro laboratorio che riduce notevolmente il trombo arterioso riportato da altri 4,5. Ciò si ottiene formando una cuffia del tallone e della punta dell'aorta infra-renale del donatore che facilita un'anastomosi più ampia e un flusso sanguigno più diretto nel rene.

Questa tecnica chirurgica consente sia per i semplici studi di sopravvivenza / rigetto dell&#39;organo o protocolli sperimentali piuttosto complessi. Nelle figure di seguito dimostriamo i vantaggi di utilizzare questo miglioramento tecnica anastomosi arteriosa. Utilizzando questa tecnica abbiamo ridotto significativamente l&#39;incidenza di trombosi arteriosa dal 35% allo 0%, aumentando così la produttività. Abbiamo usato questa tecnica per oltre un anno con lo stesso risultato trombosi 0% mantenuto. La...

L'obiettivo di questo manoscritto è descrivere i passaggi necessari per eseguire un trapianto di rene in un topo, prestando particolare attenzione ai dettagli dell'anastomosi arteriosa.

Rene Murine Tecnica trapianto

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare una tecnica modificata di anastomosi arteriosa per trapianti renali nel topo. Questo viene realizzato innanzitutto dissezionando con attenzione i vasi pertinenti nel donatore. Il secondo passaggio consiste nel creare un manicotto distale e prossimale dell'aorta addominale del donatore adiacente all'arteria renale.Successivamente, questo manicotto a tallone e punta viene utilizzato per formare l'anastomosi arteriosa nel ricevente. In definitiva, questa tecnica dovrebbe portare a un'incidenza molto bassa di trombosi arteriosa. Questo video mostrerà come creare un manicotto arterioso a tallone e punta per facilitare i trapianti renali in bocca.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi tradizionali è che il percorso del flusso sanguigno dall'aorta del ricevente all'arteria renale del donatore viene raddrizzato, riducendo così l'attivazione delle piastrine e la formazione di trombi. Utilizzando una tecnica sterile al microscopio operatorio, prelevare il rene del donatore eseguendo correttamente l'intervento. Il tempo di prelievo sarà compreso tra 15 e 20 minuti. Rimuovere il pelo e quindi immobilizzare l'animale.Preparare il sito chirurgico lavando la cute con iodopovidone, drappeggiare il topo e iniziare l'intervento con un'incisione addominale mediana di due centimetri. Retrarre l'intestino sul torace e avvolgerlo in garza umida. Mantenere la garza umida per tutta la durata della procedura.Ora, individuare i grossi vasi addominali e mobilizzarli. Eventuali rami lombari devono essere cauterizzati o legati con sutura in nylon 10 zero. Successivamente, dissezionare in modo ottuso un segmento di due millimetri della vena cava inferiore e dell'aorta a valle dei vasi renali sinistri.Quindi legare e dividere tutti i piccoli rami arteriosi e venosi che si attaccano al vaso renale. Proseguire con la dissezione ottusa per separare la vena renale dall'arteria renale, consentendo così la successiva creazione di una patch di Carroll all'estremità prossimale della vena renale, che verrà utilizzata per la formazione dell'anastomosi venosa. Successivamente, legare e dividere i vasi surrenalici sinistri per accedere all'aorta soprarenale.Una volta raggiunta, formare un cappio con seta 6-0. Suturare attorno all'aorta soprarenale per un successivo utilizzo. Mobilizzare ora i vasi renali e l'uretere dalla fascia circostante.Ruotare il rene verso destra sulla faccia posteriore, legare e dividere tutti i rami vascolari concentrandosi sull'uretere. Liberare con attenzione l'uretere dalla fascia circostante. Non disturbare l'ilo renale e preservare i vasi eretici.Successivamente, dividere l'uretere a livello del dotto deens. Il rene può ora essere recuperato. Per prima cosa, iniettare lentamente 300 unità di eparina nella vena cava inferiore distale per eparinizzare il donatore.In secondo luogo, fissare il punto di sutura zero intorno all'aorta soprarenale. Successivamente, perfondere il rene sinistro dall'aorta addominale, iniettando 0,8 millilitri di soluzione salina eparinizzata a 100 unità per millilitro. Al termine della perfusione, creare immediatamente la toppa venosa in carile, evitando così il reflusso nel rene.Ritrarre la vena renale verso il rene per evidenziare l'aorta addominale e l'arteria renale. Ora dividere l'aorta adiacente all'arteria renale. Creare un tallone e una cuffia.Quindi, se è richiesto un tempo di ischemia fredda pari a zero minuti, trasferire il rene recuperato in un ricevente preparato. In alternativa, trasferire gli organi in una camera di conservazione a quattro gradi Celsius e quindi praticare l'eutanasia ai donatori come indicato nel protocollo testuale. Questa procedura richiederà da 35 a 45 minuti, come effettuato per l'anestesia del donatore.Il ricevente integra anche la bolo iniziale secondo necessità. Fornire al ricevente una crema oftalmica. Quindi somministrare all'animale un'iniezione di buprenorfina e continuare la somministrazione dopo l'intervento; dopo aver effettuato l'incisione iniziale e spostato l'intestino come fatto con il donatore, procedere con una nefrectomia destra, legare l'arteria e la vena renale con sutura 6-0, legare e dividere l'uretere in prossimità del rene con sutura 6-0.Quindi escindere il rene a valle della sutura vascolare. Ora al di sotto dei vasi renali, isolare l'aorta addominale (AA) e la vena cava inferiore (IVC) quindi al di sopra del sito di anastomosi. Posizionare un legaccio in cotone quattro zero intorno all'aorta e alla vena cava inferiore, fare lo stesso al di sotto del sito.Tutti i vasi lombari presenti nella zona devono essere cauterizzati o legati con sutura in nylon 10 zero, stringendo prima il punto di sutura inferiore e successivamente quello superiore. Questo permetterà di mantenere una certa quantità di sangue nell'aorta, facilitando l'autotomia AOR. Eseguire l'autotomia con un ago da 30 gauge, quindi estendere l'incisione fino a una lunghezza di circa due millimetri utilizzando forbici microchirurgiche fini.Il passo successivo consiste nell'eseguire un'anastomosi endo da entrambi i margini (tallone e punta) del manicotto del donatore all'aorta del ricevente. In primo luogo, posizionare un punto di ritenzione nel tallone dell'aorta del donatore utilizzando sutura 10 zero. Proseguire quindi attraverso l'estremità inferiore dell'incisione nell'aorta del ricevente e annodare.In secondo luogo, posizionare un punto di sutura 10-0 all'estremit&agrave; superiore dell'incisione aortica e proseguire attraverso la punta del manicotto del donatore, quindi annodare. In terzo luogo, partendo dall'estremit&agrave; superiore, eseguire una sutura continua nella parete laterale dell'aorta e annodare contro il punto di ritenzione inferiore precedentemente posizionato. Quindi ruotare il rene e proseguire con una sutura continua lungo la parete mediale, annodando contro il punto di ritenzione superiore.Completare l'anastomosi venosa pungendo la vena cava inferiore con l'ago e quindi estendendo l'incisione con forbici microchirurgiche fini. Utilizzando nylon 10/0, legare la vena renale del donatore all'angolo inferiore della vena cava inferiore. Posizionare un altro punto di sutura 10/0 all'estremità superiore della vena cava inferiore e della vena del donatore ed eseguire una sutura continua lungo entrambi i lati.Come nell'anastomosi arteriosa, l'eversione dei margini dei tessuti favorisce la sigillatura e la guarigione. Ora, controllate il lavoro svolto. Le pareti opposte non devono essere catturate dai punti, altrimenti il flusso sanguigno risulterebbe troppo ristretto.Un altro fattore estremamente importante garantisce che la tensione della linea di sutura anastomotica sia ottimale: se troppo lenta, si avrà una fuoriuscita irreversibile; se troppo stretta, si verificherà una stenosi al flusso. Se a livello arterioso, ciò comporterà una scarsa perfusione del trapianto. Se a livello venoso, si otterrà un rene congestionato.Una volta completate le anastomosi, rilasciare il legaccio di cotone distale per stabilire il flusso venoso. Quindi allentare gradualmente il legaccio prossimale e lavare per ottenere emostasi all'anastomosi arteriosa. Quando entrambe le anastomosi sono confermate sicure, perforare la vescica del ricevente con un ago da 20 gauge, creando due fori, far passare la pinza attraverso i fori e tirare l'uretere del donatore all'interno della vescica.Quindi fissare l'estremit&agrave; prossimale dell'uretere alla parete della vescica con 2 suture da 10 0. Tagliare l'eccesso di lunghezza dell'uretere sporgente in modo che si ritragga all'interno della vescica. Chiudere quindi l'altro foro nella vescica con una sutura da 10 zero.Completare l'intervento chirurgico riposizionando l'intestino, chiudendo l'addome in due strati con sutura continua in seta cinque zero e iniettando un microlitro di soluzione salina nell'addome prima della chiusura. Dopo la chiusura dell'addome, iniettare altri 0,8 millilitri di soluzione salina per via sottocutanea e ripristinare l'animale su una coperta calda. In un anno di raccolta dati, questa tecnica ha ridotto in modo significativo l'incidenza di trombosi arteriosa dal 35% allo 0%, e questa percentuale dello 0% di trombosi è stata mantenuta da allora. L'immunohistochimica è stata eseguita su un rene non trapiantato e su un rene trapiantato. Utilizzando la tecnica descritta, una colorazione con acido periodico di Schiff ha rivelato cellule tubulari prossimali normali nel rene di controllo e nel rene donatore.Le cellule sono cuboidali con un citoplasma chiaro e un nucleo rotondo chiaro al centro della cellula in entrambi i casi indicati dalle frecce. Indicare evidenze di un lieve danno al bordo a spazzola, ma la maggior parte dei bordi a spazzola è regolare e ben conservata. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come eseguire un'anastomosi arteriosa a coppa tra tallone e dita del piede, che porterà a una riduzione dei casi di trombosi e a trapianti renali più riusciti.

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