A "paziente-Like" ortotopico Singenico modello murino della carcinoma epatocellulare Metastasi

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di stabilire un sistema modello murino ortotopico singeneico per lo studio dei meccanismi delle metastasi nel carcinoma epatocellulare. Ciò si ottiene preparando prima le cellule di carcinoma epatocellulare di topo per l'impianto. Nella seconda fase, l'addome di un animale singeneico ricevente viene aperto e le cellule vengono iniettate con cura nel lobo destro del fegato.

In definitiva, il successo e la riproducibilità di questa metodologia ne raccomandano un uso diffuso nel chiarire i meccanismi biologici delle metastasi del carcinoma epatocellulare. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto alle tecniche esistenti come i modelli tumorali di xenotrapianto di topo, è che il nostro sistema di modelli tumorali singenetici consente lo studio del ruolo della risposta immunitaria nelle metastasi tumorali. A dimostrare questa procedura con me sarà Michelle Nadu, una studentessa universitaria del nostro laboratorio. Per preparare le cellule per l'impianto, iniziare lavando due volte una coltura confluente al 60-70% di cellule di carcinoma epatocellulare con cinque millilitri di PBS.

Incubare la coltura cellulare con due millilitri di tripsina a 37 gradi Celsius. Dopo cinque minuti, contare le cellule e diluirle a cinque volte da 10 a 5 cellule per millilitro di PBS. Quindi, trasferire 100 microlitri di aliquote di cellule in una provetta sterile da microcentrifuga da 1,5 millilitri per topo e posizionare le cellule sul ghiaccio.

Prima di iniziare la procedura chirurgica, confermare il corretto livello di anestesia con le dita dei piedi. Pizzicare, applicare l'unguento sugli occhi di un topo adulto sano da 16 a 20 grammi e radersi in un'area di circa un pollice intorno alla linea mediana dell'addome dell'animale. Quindi indossa un paio di guanti in lattice e lava più volte la pelle esposta con uno scrub disinfettante saponoso, seguito da un risciacquo PBS sterile per circa cinque minuti.

Quando la pelle è stata preparata, gettare i guanti e indossare gli appositi dispositivi di protezione individuale. Fornire una fonte di calore esterna per prevenire l'ipotermia anestetica durante la procedura, quindi posizionare il nastro chirurgico sull'animale, sugli arti e sulla coda per fissare il topo in posizione supina. Quindi, praticare un'incisione diritta immediatamente inferiore allo xifos sterno e utilizzare un divaricatore chirurgico sterile autobloccante per aprire l'addome.

Quando il fegato è visibile, aspirare un'aliquota di cellule in una siringa da un millilitro dotata di un ago calibro 20 e iniettare lentamente e con attenzione tutti i 100 microlitri di cellule di carcinoma epatocellulare nel lobo destro del fegato. Dopo aver rimosso l'ago, applicare un batuffolo di cotone sterile per almeno un minuto per fermare l'emorragia. Quindi utilizzare una sutura riassorbibile per chiudere il tessuto sottocutaneo, seguita dalla chiusura della pelle.

Con clip chirurgiche, pulire la ferita con un altro scrub disinfettante e per via sottocutanea somministrare 100 microlitri di soluzione fisiologica normale. Quindi, subito dopo l'intervento, trasferire il topo in una gabbia pulita senza compagni e con lettiera di carta per almeno 24 ore. Questi fegati di topo BSY sono stati impiantati con cinque volte 10 a sei ME. Un topo cellule di carcinoma epatocellulare come appena dimostrato.

L'evidenza clinica dello sviluppo del carcinoma epatocellulare era osservabile 63 giorni dopo, come indicato dalla freccia in un topo. È stato osservato un tumore superficiale sulla superficie del fegato con un certo attaccamento alla parete addominale. I polmoni di questo topo mostravano anche una morfologia anormale e aree di necrosi emorragica visibile.

In un secondo topo, il fegato appariva grossolanamente anormale con l'anomalia molto simile a un tumore superficiale come controllo atteso. I topi che non sono stati impiantati non hanno sviluppato tumori né nel fegato né nei polmoni. Una volta padroneggiato, questo modello murino singenetico ortotopico può fornire una buona piattaforma per chiarire i meccanismi biologici delle metastasi e del carcinoma epatocellulare.