Name: Un protocollo per Mice Housing in un ambiente arricchito (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Impara a creare un ambiente arricchito per topi che promuove la salute metabolica e riduce il rischio di cancro. Questo protocollo dettagliato mostra come configurare e mantenere l'allestimento per ottenere benefici anti-obesità.

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Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concede CA163640, CA166590, e AG041250 a LC.

Le procedure descritte di seguito sono stati approvati dalla cura e l&#39;uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC), della Ohio State University. 1. Preparazione di Enriched Ambiente Prima Mice Housing <ol><li> Pulizia e manutenzione degli strumenti. <ol><li> Eseguire il bidone grande arricchimento (120 centimetri x 90 centimetri x 76 cm) attraverso un lavaggio gabbia. Un protocollo di lavaggio gabbia tipico stabulario include 5-6 cicli di lavaggio, con l&#39;ultimo ciclo di raggiungere 82 ° C. L&#39;intero lavaggio dovrebbe durare circa 40 minuti. Asciugare il bidone. <ol><li> Se il bidone grande arricchimento, e tutti gli altri strumenti di alloggio, non possono essere inviati tramite lavaggio gabbia, quindi spruzzare e pulire l&#39;interno del bidone con disinfettanti sporicidi seguito le istruzioni del produttore. Pulire il contenitore con acqua di rubinetto imbevuto tovagliolo di carta o il 30% di etanolo e asciugare con un tovagliolo di carta per sbarazzarsi di qualsiasi profumo dal disinfettante precedente. </li></ol></li><li> Utilizzare plastubi tic, igloo con ruote tipo piattino, e altri giocattoli hutch simili vario di plastica nel EE. Lavare questi giocattoli attraverso un lavaggio gabbia. Se non si ha accesso a un follow lavaggio gabbia passo 1.1.1.1. </li><li> Utilizzare le ruote da corsa del metallo in EE. Lavare ruote attraverso un lavaggio gabbia. Se la vernice sulle ruote inizia a svanire in modo che la ruota diventa rumoroso quando gli animali corrono su di essa, applicare una piccola quantità di vaselina in cui la ruota e Axel collegano. </li><li> Utilizzare ceppi di legno in EE. Pulire i log rimuovendo qualsiasi lenzuola o altri detriti a mano. Poi sterilizzare i registri da essi autoclave su un ciclo o tessili ciclo di asciugatura, che raggiunge una temperatura di 121 ° C per 15 min. </li><li> Utilizzare gabbie tra le dimensioni di 29 cm x 18 cm x 12,5 centimetri e 30,5 cm x 19 centimetri x 14 cm per tenere un filo di alimentazione e bevendo rack.Cut un foro almeno 5 cm di diametro dalla parte anteriore-inferiore della gabbia per topi di andare dentro e fuori dal EE. Pulire queste gabbie di alimentazione attraverso lavaggio gabbia. </li></ol></li><li> Configurazione dell&#39;ambiente <ol><li> Versare pannocchia biancheria da letto degli animali da laboratorio ¼ di pollice nel bidone grande arricchimento. Coprire tutta la superficie del pavimento del contenitore ad una profondità di 2-2,5 cm di biancheria. </li><li> Mettere due o tre tronchi in un angolo del bidone. Posizionare i registri in un angolo di sequestrare una superficie di circa 1225 centimetri 2. Nell&#39;area sequestrata dai tronchi, mettere tre igloo con ruote piattino in cima. Accertarsi che le ruote non tocchino le pareti del contenitore, i registri, o di ogni altro, in modo che ci sia abbastanza spazio per le ruote di girare liberamente. </li><li> Mettere insieme il tubo di plastica in modo che si diramano molteplici braccia dal raccordo centeral. Posizionare questi tubi nel mezzo del bidone. </li><li> Alle due angoli del bin, posizionare un gabbia alimentazione ognuno riempito con la stessa biancheria come raccoglitore, e il foro nella parte anteriore della gabbia di alimentazione deve essere rivolto verso il centro del contenitore. In cima a queste gabbie che alimentano un filo di cibo e acqua pulitadeve essere posto per contenere cibo e acqua. Non appoggiare il coperchio sulla gabbia. Mettere cibo e acqua nei fili gabbia. </li><li> Inserire tre ruote metalliche nel bidone, anche se non tutti accanto all&#39;altra. I tre diversi tipi di ruote sono una ruota 11,5 centimetri, una ruota 20,5 centimetri, ed una ruota 28 centimetri. Poi posto più 4-5 giocattoli di plastica hutch simile o gallerie in tutto il bidone arricchimento. </li><li> Coprire il contenitore con carta da filtro micro-isolante. Utilizzare clip legante per tagliare la carta da filtro nel raccoglitore. </li><li> La novità è importante per EE. Utilizzare questa configurazione come quadro della EE e variare il posizionamento delle gabbie summenzionati, oggetti e giocattoli per creare un nuovo ambiente per gli animali. </li></ol></li></ol> 2. accogliere gli animali <ol><li> Allevano animali per esperimenti in laboratorio abitazioni regolari e non EE. Facoltativamente, inserire gli animali in EE già a 21 giorni di età, al momento dello svezzamento. Genotipo e orecchio pugno / tag animali prima EE alloggi. </li><li> Quando si posizionanoanimali nel contenitore di arricchimento da una gabbia standard posizionare la gabbia in bin su un lato in modo che gli animali possono muoversi liberamente dalla gabbia standard alla bin arricchimento. Evitare che i materiali per i nidi da trasferire nel cestino arricchimento. </li><li> Casa 10-20 animali della stessa età, sesso, e la tensione genetica nel EE. </li></ol> 3. Il mantenimento dell&#39;ambiente e Osservando il Mice durante gli studi <ol><li> Quotidiano <ol><li> Osservare Tranquillamente gli animali per i segni di malattia o disagio. In caso di necessità, di gestire con delicatezza gli animali per controllare ulteriormente le condizioni di salute. Registra osservazioni anomale e consultare un tecnico sanitario o personale veterinario se le condizioni visualizza animali che richiedono la rimozione dall&#39;esperimento. </li><li> Fornire trattamento topico con tripla pomata anti-biotici per piccole ferite o croste. Se un animale deve essere rimosso a causa di una malattia cronica o di infortuni, rimuovere l&#39;animale dalla sperimentazione per l&#39;eutanasia. Se gli animalisoddisfare i criteri di rimozione precoce per la sorveglianza degli animali di ricerca comitato cura o veterinario, non tornare indietro per gli animali EE. </li></ol></li><li> Due volte a settimana <ol><li> Controllare i livelli di alimentazione e dell&#39;acqua. Assicurare che i mangimi e acqua durerà per i prossimi 3-4 giorni. Raddrizzare ruote girevoli e giocattoli arricchimento modo che siano distribuite e possono essere utilizzati da topi. Sostituire quelle che sono troppo sporchi. </li></ol></li><li> Settimanale <ol><li> Sostituire bottiglie d&#39;acqua con bottiglie d&#39;acqua pulita. Riorganizzare dispositivi di arricchimento in un modo che segue l&#39;installazione nella sezione 1.2. ma è diverso dal setup della settimana precedente. NOTA: Se un esperimento richiede gli animali da rimuovere dall&#39;ambiente arricchito per una attività (registrazione del peso corporeo, prelievo di sangue, prova di comportamento, ecc) è meglio riorganizzare l&#39;ambiente, gli animali sono lontani dal raccoglitore di arricchimento. </li><li> Pulire le gabbie di alimentazione in EE a mano o inviarlo tramite lavaggio gabbiacome descritto nella Sezione 1.1.5. Sostituire le griglie che tengono il cibo e l&#39;acqua con rastrelliere pulite pure. </li><li> Seguire le istruzioni nella sezione 2.2. quando si posiziona gli animali nel arricchimento. Spot controllare il resto della grande bidone di arricchimento e pulito, se necessario, scavando lettiera sporca e diffondendo giù nuove lenzuola pulite. </li></ol></li><li> Bi-settimanale <ol><li> Durante l&#39;esecuzione la zootecnia settimanale, pulire i giocattoli a mano o inviare tramite lavaggio gabbia come descritto nella Sezione 1.1.2. Se necessario, posizionare i topi in una gabbia micro-Isolatore standard per il tempo richiesto per pulire. </li></ol></li><li> Mensile <ol><li> Pulire la maggior parte della cucciolata spostando giocattoli di arricchimento e di alimentazione gabbie e scavare fuori la lettiera. Sostituire con lettiera fresca. Assicurarsi che vi sia un pollice di assestamento in tutti i settori della gabbia. Se necessario, posizionare i topi in una gabbia micro-Isolatore standard per il tempo richiesto per pulire. </li></ol></li><li> Ogni treMesi (o al termine di Experiment) <ol><li> Rimuovere tutte le lenzuola e giocattoli e pulire e disinfettare il bidone di arricchimento come descritto nella Sezione 1.1.1. Se l&#39;esperimento è in corso, sostituirli con nuovi letti, alimentando gabbie, assortimento di giocattoli e poi restituire i topi al bidone. </li></ol></li><li> Disinfettare l&#39;intero bidone di arricchimento più frequentemente che ogni tre mesi se richiesto dal istituto di ricerca in cui l&#39;EE è ospitato. Se ciò è necessario e un altro grande contenitore di arricchimento è disponibile, impostare il contenitore ulteriore arricchimento come descritto nella Sezione 1.2. e trasferire gli animali per il nuovo contenitore, mentre il precedente è stato pulito. </li></ol> 4. Controllo delle condizioni di abitabilità <ol><li> Animali Casa nel gruppo di controllo in gabbie micro-isolatore di dimensioni 30,5 centimetri x 19 cm x 14 cm. Include una griglia nella gabbia per lo svolgimento di cibo e una bottiglia d&#39;acqua, se la gabbia non è collegato a un sistema di irrigazione automatica. </li><li>Fornire la stessa biancheria da letto pannocchia di mais nella gabbia di controllo, come è nella EE. Fornire un 4 centimetri x 4 cm nestlet per i topi per fare un nido di. </li><li> Sostituire e / o pulire le gabbie, nutrire i fili, il cibo e l&#39;acqua una volta alla settimana. Gabbie e griglie Clean attraverso lavaggio gabbia o come dettagliato nella Sezione 1.1.1.1. Pulire le gabbie più spesso se gli animali urina più frequentemente o se le perdite di acqua potabile sul la biancheria da letto. </li><li> Monitorare la salute degli animali in custodia di controllo quotidiano. Assicurare gli animali hanno un sacco di cibo e acqua. </li><li> Casa 3 ~ 5 topi dello stesso sesso in gabbia regolare del mouse. Non fornire alcun giocattolo, tubo, o hutch nella gabbia. </li><li> Struttura di laboratorio cura degli animali tecnici sanitari di laboratorio e istituzionali possono fornire allevamento di questi topi di controllo. </li><li> Tenere gli animali su un 12 ore di luce / buio ciclo come è per i topi in EE. </li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interesse.

Gli effetti esaurienti di EE sull&#39;espressione genica nel cervello, diminuzione l&#39;adiposità e la crescita del cancro nei topi dipendono fortemente dalla capacità del ricercatore di mantenere l&#39;ambiente romanzo e gestire gli animali in modo da promuovere l&#39;attività fisica, l&#39;interazione sociale, e le sfide cognitive, ma non fa di soccorso agli animali. Ci sono due principali fasi procedurali da ricordare. In primo luogo, ricordatevi di modificare la posizione dei giocattoli, oggetti e gabbie ogni settimana. Anche se i giocattoli e gli oggetti potrebbero essere la stessa rispetto alla settimana precedente, i topi percepiscono l&#39;ambiente come romanzo. Modificare i giocattoli e oggetti stessi con quelle diverse ogni due settimane. In secondo luogo, ricordarsi di mantenere l&#39;ambiente pulito. Se la biancheria sporca non ottiene rimosso, l&#39;aumento dei livelli di azoto possono essere una fonte di stress per gli animali. In aggiunta, ci sono molte tecniche da notare in questo protocollo EE. L&#39;uso di giocattoli e diversi differenti o unicidisegni di labirinti di tubi in plastica è incoraggiata. L&#39;ambiente può essere impegnativo, ma non dovrebbe costituire una minaccia per la salute degli animali. Inoltre, fai attenzione ai giocattoli che sono disfunzionali, perché i giocattoli disfunzionali aumentano il rischio di essere scoperti membra del mouse, o potrebbero essere tossici per gli animali, se consumati da masticare su di esso. Una costante per la EE è l&#39;uso di tre ruote piattino in cima a igloo, sequestrati in un angolo o il lato del contenitore per 2-3 registri. Questa configurazione di correre piattini dietro i registri è presente in tutti i nostri studi di arricchimento. In termini di uso e la collocazione degli altri oggetti, la descrizione del layout di cui sopra è una stampa blu fondamentale della configurazione EE. Variazione della messa a punto con questo quadro fondamentale di tubi di plastica, ruote, correre piattini, gabbie e registri dovrebbe fornire un nuovo ambiente sufficiente a riprodurre i risultati riportati. Se si lavora con gli animali transgenici che hanno il diabete o altre metabolicamalattie, prestare molta attenzione al consumo di cibo e acqua per assicurare che gli animali non a corto di cibo e acqua. Se gli animali hanno il diabete, si urinare più, quindi la biancheria dell&#39;alloggiamento EE potrebbero dover essere posto controllato e pulito più frequentemente. I posti nella custodia EE che hanno bisogno di letti rimosso il più delle volte sono gli angoli. Ricordare di regolare le ruote e altri giocattoli, in modo che possano essere utilizzati dagli animali. Gli animali sono in grado di eseguire ruote piattino nella biancheria da letto e bussare ruote in esecuzione oltre. Se gli animali sono giovani, da 3 a 5 settimane di età, potrebbero scavare sotto le gabbie della EE e nascondono insieme lì sotto, lasciando il ricercatore all&#39;oscuro di dove gli animali sono. Quando si rimuove biancheria sporca, sostituendo giocattoli o gabbie pulizia, si suggerisce di mettere gli animali in gabbia serie pulito in modo da non sollecitare fuori durante la regolazione loro ambiente. E &#39;più facile per ottenere tutti gli animali in una gabbia se hanno un minor numero di posti per nascondersi nella environment. Pertanto, la rimozione giocattoli prima sequestrare gli animali in gabbia rende il processo più facile. Inoltre, non mettere più di 5-6 animali in un&#39;unica gabbia standard di attesa per la pulizia o la regolazione del loro ambiente EE. Gli animali maschi della EE possono essere aggressivi in ​​particolare quando EE è iniziata in età adulta. Pertanto, è importante osservare l&#39;ambiente per tutti gli animali feriti o morti. Inoltre, il tipico numero di animali abbiamo casa in EE per questo grandi dimensioni del contenitore è 10-20 topi. Il numero di animali altri ricercatori utilizzano per EE variare, utilizzando circa 10 o meno topi, e le dimensioni della gabbia o bin devono essere presi in considerazione per determinare il numero di animali da casa in EE. Avere troppi animali in un ambiente di vita può portare alla aggressione nei topi maschi. I topi che abbiamo ospitato in EE sono stati di C57BL / 6 sfondi. Topi di altri ceppi può essere più o meno aggressivo, o più soggetto a problemi di salute inquesta configurazione EE. Questo dovrebbe essere preso in considerazione nella determinazione del piano allevamento per i topi e per l&#39;ambiente arricchito. Quattro settimane EE abitazioni è sufficiente per indurre riduzione delle adiposità, calo del livello di leptina, e l&#39;inibizione della crescita B16 melanoma. Longer EE può portare a forti effetti sul metabolismo e l&#39;inibizione del cancro. Se topi sottoposti a procedure chirurgiche durante o prima dell&#39;esposizione EE, possono essere alloggiati con suture intatti. O meno gli animali rispondono bene a questa particolare impostazione EE con graffette chirurgiche o cateteri intatto non è stato studiato. Inoltre, stiamo studiando come questo particolare EE influisce sulla durata della vita o healthspan di animali anziani. I dati preliminari suggeriscono che C57BL femmina / 6 topi, 10 mesi di età, risponde a EE in modo simile a topi giovani. Una limitazione della custodia EE è accomodante un grande bidone del genere nello spazio stabulario, e preferibilmente in un locale specifico genere. Così studi futuri sulla effetti di EE su scala più piccola, così come trovare i giocattoli che sono facili da pulire, resistere pulizia ad alta temperatura e sono sicuri per la salute degli animali, miglioreranno le applicazioni della EE in metabolico e la ricerca sul cancro.

L&#39;arricchimento ambientale (EE) è un paradigma sperimentale utilizzato per esplorare gli effetti di un ambiente complesso e impegnativo che non sottolinei gli animali 1. EE è una tecnica di stabulazione degli animali, composto di una maggiore spazio, l&#39;attività fisica, e le interazioni sociali, che a sua volta aumenta sensoriali, cognitive, motorie, e la stimolazione sociali 2. Igloo, ruote girevoli, ruote piattino, labirinti di tubi e altri oggetti presenti nell&#39;ambiente custodia promuovere questo cognitivo sensoriale, sociale, e la stimolazione del motore attraverso la promozione di esplorazione e interazione. La disposizione degli oggetti nei cambiamenti di stabulario regolarmente per presentare un nuovo ambiente, a cui i topi sono costretti ad adattarsi. Questa strategia offre sfide lievi e brevi che inducono una risposta adattativa benefica, benigno, e sano, noto come eustress, al contrario di un ambiente ostile, più repulsivo o angoscia disadattivi 3,4. Promuovendo eustress e distress limitare dannose, topimostrano una varietà di fenotipi favorevoli. EE è un modello sperimentale affidabile con una vasta gamma di applicazioni, pur essendo privo di elementi tradizionalmente pensato come stressanti 1. Gli effetti di EE su roditori sono stati studiati per più di mezzo secolo. Nei primi anni 1960 studi hanno dimostrato che i livelli di colinesterasi corticali diminuzione ei livelli di colinesterasi sottocorticali sono aumentati in ratti che sono stati alloggiati in ambienti con maggiore spazio di vita, aumento del numero di ratti, e una varietà di giocattoli di legno, labirinti e piattaforme 5,6. Inoltre, EE è associato con molti cambiamenti adattativi nel cervello, il comportamento e il metabolismo in topi di diverse età e background genetico. Pertanto, EE è un paradigma utile per un ampio spettro di esperimenti studiare gli effetti dell&#39;ambiente sui topi. Effetti EE possono essere osservati in topi più rapidamente di una settimana di esposizione, e può essere visto in animali come vecchio diciotto mesi 7. EE è spesso used negli esperimenti di neuroscienze e neurocomportamentali a studiare il recupero della funzione, l&#39;apprendimento e la memoria 2. Inoltre, EE ha un notevole impatto sul fenotipo di una varietà di tossina indotta e modelli animali transgenici di malattie neurologiche umane, tra cui la malattia di Huntington, malattia di Alzheimer, il morbo di Parkinson, epilessia, ictus, e altri 2. Tuttavia, nel corso degli anni si è incoerenza con il disegno di arricchimento fare confronti tra studi da diversi laboratori difficili. Ad esempio, ciascuno degli studi sugli effetti EE relativi a malattie neurologiche umane di cui sopra erano variando parametri arricchimento. Lo studio sulla malattia di Huntington ospitato 4-6 topi in grandi gabbie (44 x 28 x 12.5 cm 3) contenenti scatole di cartone, tunnel, e fogli, così come gli oggetti in legno e plastica che sono stati modificati ogni due giorni 8,9. Uno degli studi condotti su Alzheimer &amp;# 8217; s ospitati 20 topi in una gabbia più grande (1 m 3) contenente 2 ruote corsa, tubi di plastica, scatole di cartone e materiale di nidificazione che sono stati modificati o riorganizzato settimanale 10. Molte configurazioni di EE hanno temi simili, come oggetti da eseguire su o nascondere in, ma il numero di topi per abitazioni EE, la zona giorno, e il periodo di cambiare l&#39;ambiente variano molto. I disegni inconsistenti di EE hanno portato alla replica fallito effetti EE. I nostri dati sul cancro e metabolismo insieme suggeriscono che la combinazione di stimoli forniti nella seguente custodia dettagliata EE protocollo portare a significative anti-cancro e anti-obesità 14,15. Tuttavia, la differenza di impostazioni EE adottate dai diversi laboratori potrebbero influenzare i risultati di EE, come si vede in un tentativo fallito di riprodurre effetti EE sulla crescita di tumori specifici impiantati in topi 11. I diversi risultati potrebbero essere dovuti a una serie di motivi che vanno from diversi tassi di crescita delle colture di cellule tumorali al tipo di detersivo utilizzato per la pulizia di attrezzature abitazioni 11. Al fine di replicare i risultati osservati nei nostri esperimenti, è richiesto un particolare disegno di arricchimento e zootecnia. Dettagli La seguente procedura custodia EE che permetterà altri ricercatori di replicare con successo il nostro modello di arricchimento efficace.

<table><tbody><tr><td>Grande contenitore di arricchimento (120 cm x 90 cm x 76 cm)</td><td>Realizzato su misura.</td><td>Realizzato su misura.</td><td>Realizzato in polipropilene. I bordi del cestino hanno uno spessore di 1,5 cm.</td></tr><tr><td>Alternativa al contenitore per l'arricchimento grande (120 cm x 110 cm x 76 cm)</td><td>Global Industrial</td><td>155202</td><td>Se necessario, questo cestino funziona come alternativa a quello sopra.</td></tr><tr><td>Habitrail Mini tubi</td><td>Habitrail</td><td>62720; 62705; 62725; 62715; 62054-Igloo</td><td></td></tr> <tr><td>in plastica con ruote a piattino</td><td>Bio</td><td>Serv K3327; K3250-Ruote</td><td></td></tr> da <tr><td>corsa in metallo</td><td>Super Pet</td><td>61392; 61394; 61396-Manzanita</td><td></td></tr> <tr><td>Legno Rosicchiare Bastoni, 3 "</td><td>Bio Serv</td><td>W0016</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Tunnels</td><td>Bio Serv</td><td>K3322-Gabbie</td><td></td></tr> <tr><td>per topi che vanno nel grande bidone EE.</td><td>Prodotti di laboratorio Inc</td><td>10027 Mouse Cage-Cage</td><td></td></tr> <tr><td>Klenz 180 Detergente alcalino per il lavaggio della gabbia, Cage Klenz 250 Detergente acido</td><td>Steris Life Sciences</td><td>1K1802; 1K2502</td><td>Questi detergenti vengono utilizzati nel lavaggio della gabbia per i giocattoli, i grandi contenitori di arricchimento e le gabbie.</td></tr><tr><td>Sporklenz</td><td>Steris Life Sciences</td><td>6526Q8</td><td>Sporicida/disinfettante alternativo al lavaggio di giocattoli, bidoni e gabbie nel lavaggio della gabbia.</td></tr><tr><td>Bed-O-Cobs 1/4" biancheria da letto</td><td>The Andersons, Inc.</td><td>La</td><td>lettiera della pannocchia di mais 4B ha un diametro di 1/4</td></tr>".<tr><td>Nidi per il controllo dei topi alloggiati Ancare</td><td></td><td></td><td>Cotton squares</td></tr></tbody></table>

un protocollo per mice housing in un ambiente arricchito

A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment

L'arricchimento ambientale (EE) è un ambiente di stabulazione per topi che migliora la salute mentale e fisica rispetto all'alloggio standard del laboratorio. I nostri studi recenti dimostrano che l'arricchimento ambientale riduce l'adiposità, aumenta il dispendio energetico, resiste all'obesità indotta dalla dieta e provoca la remissione e l'inibizione del cancro nei topi. L'EE consiste in genere in uno spazio abitativo più ampio, una varietà di "giocattoli" con cui interagire, ruote da corsa e può includere una serie di altri nuovi cambiamenti ambientali. Tutto ciò favorisce un coinvolgimento sociale più complesso, stimoli cognitivi e fisici. È importante sottolineare che la posizione e il tipo di giocattolo vengono cambiati regolarmente, il che incoraggia i topi ad adattarsi a un ambiente nuovo e in continua evoluzione. Molte variabili possono essere manipolate nell'EE per promuovere effetti sulla salute nei topi. Pertanto, questi approcci sono difficili da controllare e devono essere gestiti correttamente per replicare con successo i fenotipi associati. Pertanto, l'obiettivo di questo video è dimostrare come l'EE sia correttamente impostata e mantenuta per garantire un ambiente complesso, stimolante e controllato in modo che altri ricercatori possano facilmente riprodurre gli effetti protettivi dell'EE contro l'obesità e il cancro.

EE colpisce fattore espressione di crescita, aumenta neurogenesi e sopravvivenza delle cellule all&#39;interno del sistema nervoso centrale (CNS) 12,13. Studi più recenti hanno dimostrato che questa tecnica di EE porta ad una notevole soppressione della crescita tumorale in modelli di cancro tre topi compreso B16 melanoma, cancro del colon MC38 e APC min / + topo che contiene una mutazione germinale ed è altamente sensibile alla formazione adenoma spontanea l&#39;intestino 14. I risultati in figura 2 confermano la soppressione della crescita tumorale B16 melanoma impiantati in topi esposti a EE per 5 settimane (~ 80% diminuzione della massa tumorale). Soppressione della crescita del cancro è stata anche osservata nei topi quando EE è stata avviata dopo che il tumore era stato stabilito il 14. EE ha evidenziato una maggiore inibizione della crescita del melanoma in alto contenuto di grassi dieta indotta topi obesità (~ 70% di diminuzione della massa tumorale) che che nei topi di peso normale (~ 50% di diminuzione della massa tumorale) 14. EE ind<html> cambiamenti firma uced nei biomarcatori sierici compreso robusto calo della leptina, diminuzione di IGF-1, e l&#39;aumento dei livelli di adiponectina 14. Inoltre, questa tecnica di EE diminuisce adiposità, aumenta il dispendio energetico, porta alla resistenza contro l&#39;obesità indotta dalla dieta, e induce un bianco al marrone interruttore grasso fenotipica attivando ipotalamo-sympathoneural-adipociti all&#39;asse 15. La diminuzione delle adiposità è stato osservato già a sei giorni esposti a EE (figura 3A, B) e di nuovo confermato in animali esposti a EE per quattro settimane (Figura 3C, D). E &#39;anche importante notare che, uno, l&#39;anti-cancro e anti-obesità associato EE non possono essere spiegate da sola attività fisica, e, due, gli effetti EE possono essere riprodotti dalla sovraespressione del fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF ) nell&#39;ipotalamo 14,15. <html> 2874fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1: arricchito ambiente bin impostare l&#39;ambiente arricchito ha una superficie di 120 cm x 90 cm e comprende due gabbie modificate, ruote girevoli, igloo con ruote piattino, tubi di plastica, tronchi di legno, e altri giocattoli in plastica di arricchimento.. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig2.jpg" /> Figura 2: ambiente arricchito riduce la crescita del tumore nei topi maschi C57BL / 6 Tre settimane di età topi maschi erano in casa EE o gabbie di controllo per 5 settimane prima di tumore inoculazione.. B16 pesi tumorali di melanoma a 17 giorni dopo l&#39;inoculazione di 10 5 cellule per via sottocutanea animale sopra il fianco destro (n = 10 per gruppo. T-test di Student, * p &lt;0,05). <img alt="Figura 3a" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3a.jpg" /> <img alt="Figura 3b" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3b.jpg" /> s / ftp_upload / 52874 / 52874fig3c.jpg &quot;/&gt; <img alt="Figura 3d" src="/files/ftp_upload/52874/52874fig3d.jpg" /> Figura 3: arricchito ambiente diminuisce adiposità in C57BL / 6 topi maschi Tre settimane di età i topi sono stati sottoposti a EE;. un gruppo per 6 giorni, un altro per quattro settimane. (A) Sei giorni a EE una riduzione del peso cuscinetto di grasso (n = 5 per gruppo. T-test di Student, * p &lt;0,05). (B) Sei giorni a EE una riduzione del peso cuscinetto adiposo rispetto al peso corporeo (n = 5 per gruppo. T-test di Student, * p &lt;0,05). (C) Quattro settimane in EE riduzione del peso cuscinetto di grasso (n = 5 per gruppo. T-test di Student, * p &lt;0,05). (D) Quattro settimane in EE diminuito pesi cuscinetto adiposo rispetto al peso corporeo (n = 5 per gruppo. T-test di Student, * p &lt;0,05). BAT: tessuto adiposo bruno, IWAT: inguinale bianco tessuto adiposo, EWAT: epididymal tessuto adiposo bianco,RWAT: retroperitoneale tessuto adiposo bianco.

L'arricchimento ambientale per i topi richiede una configurazione complessa e impegnativa, nonché tecniche complete di allevamento e manipolazione per garantire robusti effetti metabolici e anti-cancro nei topi. Questo protocollo fornisce procedure dettagliate per riprodurre gli effetti sopra menzionati nei topi.

Un protocollo per Mice Housing in un ambiente arricchito

Environmental enrichment (EE) is a housing environment for mice that boosts mental and physical health compared to standard laboratory housing. Our recent ...

L'obiettivo di questa procedura è fornire i dettagli necessari per l'alloggiamento e la gestione degli animali in un ambiente arricchito, che produce effetti metabolici e antitumorali significativi nei topi. Questo risultato si ottiene innanzitutto allestendo un ambiente di alloggio arricchito all'interno di un contenitore di grandi dimensioni, dotato di oggetti come ruote, fonti per la corsa, ricoveri, tubi, tronchi e gabbie. Il secondo passaggio consiste nell'introdurre gli animali in questo nuovo ambiente.Successivamente, l'ambiente arricchito viene mantenuto cambiando la posizione e il tipo di oggetti all'interno del contenitore e fornendo cibo e acqua freschi con regolarità. L'ultimo passaggio consiste nel pulire gli oggetti che sono stati sostituiti nell'ambiente, in modo che siano pronti per essere riutilizzati in futuro. Infine, dopo l'eutanasia e l'analisi dei tessuti animali.Questa tecnica di arricchimento ambientale mostra una riduzione dell'adiposità, un aumento del dispendio energetico e una maggiore resistenza all'obesità indotta dalla dieta, nonché un passaggio fenotipico da grasso bianco a grasso bruno, attivando l'asse adipocitario simpatico ipotalamico. Questo metodo descrive nel dettaglio l'allestimento di un ambiente arricchito per roditori da laboratorio, che potenzia la resistenza a cancro e malattie metaboliche. Per prima cosa, spruzzare e pulire l'interno di un contenitore grande per l'arricchimento con disinfettanti a base di sporicidina.Seguire le istruzioni del produttore: pulire il contenitore con un foglio di carta assorbente imbevuto di etanolo al 30% o acqua del rubinetto, quindi asciugare con un panno di carta per eliminare qualsiasi odore residuo del disinfettante precedente. Utilizzare igloo in tubo di plastica con ruote di tipo SOR e altri giocattoli simili a casette in plastica nell'ambiente arricchito. Lavare questi giocattoli come in precedenza e utilizzare ruote per correre in metallo che siano state lavate allo stesso modo.Se la vernice sulla ruota inizia a sbiadire al punto che la ruota emette rumore quando gli animali ci corrono sopra, applicare una piccola quantità di vaselina nel punto in cui la ruota si collega all'asse. Utilizzare tronchi di legno nell'ambiente arricchito. Pulire i tronchi rimuovendo manualmente qualsiasi lettiera o altri detriti.Quindi sterilizzare i tronchi sottoponendoli ad autoclave con un ciclo secco o un ciclo per tessuti, che raggiunge una temperatura di 121 gradi Celsius per 15 minuti. Utilizzare gabbie per l'alimentazione di dimensioni comprese tra 29 centimetri per 18 centimetri per 12,5 centimetri e 30,5 centimetri per 19 centimetri per 14 centimetri. Una griglia metallica per alimentazione e abbeveraggio richiede un foro di almeno cinque centimetri di diametro nella parte anteriore inferiore della gabbia, in modo che i topi possano entrare e uscire.Per iniziare, versare un quarto di pollice di lettiere per animali da laboratorio in pannocchia di mais nel contenitore pulito per l'arricchimento ambientale, fino a una profondità di due a 2,5 centimetri. Successivamente, posizionare due o tre dei precedenti tronchetti di aortic clave in un angolo del contenitore, in modo da delimitare un'area di circa 1.225 centimetri quadrati.Quindi, nell'area delimitata dai tronchi, posizionare tre collanti con ruote SOR in cima. Assicurarsi che le ruote abbiano spazio sufficiente per ruotare liberamente. Ora assemblare il tubo di plastica in modo che più bracci si diramino dal pezzo centrale di collegamento.Posizionare questo tubo al centro del contenitore in due angoli del contenitore. Posizionare una gabbia alimentare riempita con la stessa lettiera del contenitore. Il foro sulla parte anteriore di ciascuna gabbia alimentare deve essere rivolto verso il centro del contenitore.Posizionare un filo contenente mangime per topi per alimentazione e acqua sopra ciascuna gabbia di alimentazione. Aggiungere la bottiglia dell'acqua. Inserire una ruota da 11,5 centimetri, una ruota da 20,5 centimetri e una ruota da 28 centimetri nel contenitore.Quindi posizionare quattro o cinque giocattoli o tunnel in plastica simili a gabbie in tutto il contenitore per l'arricchimento. Coprire il contenitore con carta filtrante micro isolante e utilizzare fermagli per fissare la carta filtrante al contenitore. Quando si introducono animali nel contenitore di arricchimento partendo da una gabbia standard, posizionare la gabbia all'interno del contenitore su un lato, in modo che gli animali possano muoversi liberamente dalla gabbia standard al contenitore di arricchimento.Non consentire che i materiali per il nido vengano trasferiti nel contenitore di arricchimento. Da 10 a 20 animali della stessa età, sesso e ceppo genetico possono essere ospitati contemporaneamente in un ambiente arricchito. Assicurarsi che gli animali vengano osservati quotidianamente per rilevare segni di malattia o di malessere.Se necessario, manipolare delicatamente gli animali per ispezionarne ulteriormente le condizioni due volte alla settimana. Controllare i livelli di cibo e acqua, assicurandosi che siano sufficienti per i prossimi due giorni. Inoltre, riordinare le ruote per correre e i giocattoli arricchenti in modo che siano disposti in modo uniforme e facilmente utilizzabili.Sostituire ogni settimana gli oggetti di arricchimento che sono sporchi, idealmente quando i topi vengono rimossi dall'ambiente. A scopo sperimentale, rimuovere le gabbie per l'alimentazione e i supporti in filo metallico e sostituirli con gabbie e supporti puliti riempiti con cibo fresco. Sostituire le bottiglie dell'acqua con bottiglie pulite contenenti acqua pulita.Riorganizzare in modo fondamentale gli elementi di arricchimento in modo da preservare gli aspetti chiave dell'allestimento, ma posizionando gli elementi di arricchimento in maniera diversa. Controllare il resto del contenitore grande per l'arricchimento e pulirlo se necessario, rimuovendo la lettiera sporca e spargendo nuova lettiera pulita ogni due settimane.Quando si esegue la manutenzione settimanale, lavare i giocattoli a mano o inviandoli attraverso il lavaggio delle gabbie. Ogni mese, rimuovere la maggior parte della lettiera eliminando i giocattoli arricchitivi e le gabbie per l'alimentazione, quindi raccogliere la lettiera. Sostituirla con lettiera fresca, assicurandosi che ci siano due centimetri di lettiera in tutte le aree della gabbia; ogni tre mesi, o secondo quanto richiesto dal protocollo per gli animali, rimuovere tutta la lettiera e i giocattoli e disinfettare il contenitore per l'arricchimento lavandolo come in precedenza. Mantenere i gruppi di animali sullo stesso ciclo luce/buio di 12 ore.Come nei topi mantenuti in gabbie micro-isolate con ambiente arricchito, fornire lo stesso letto di pannocchie di mais nella gabbia di controllo e aggiungere un nido di quattro centimetri per quattro centimetri con un nido in materiale Maister Maker, ospitando da tre a cinque topi dello stesso sesso in una gabbia per topi standard. Non fornire alcun tubo giocattolo o riparo nella gabbia. Includere nella gabbia un supporto a griglia metallica per il cibo e una bottiglia d'acqua, qualora la gabbia non sia collegata a un sistema di abbeveraggio automatico.Monitorare quotidianamente lo stato di salute degli animali, assicurandosi che abbiano cibo e acqua in abbondanza. Sostituire o pulire le gabbie, i fili per l'alimentazione, il cibo e l'acqua. Una volta alla settimana, pulire le gabbie e i supporti a griglia come in precedenza.Topi maschi di tre settimane sono stati allevati in un ambiente arricchito o in gabbie di controllo per cinque settimane prima dell'inoculazione sottocutanea di tumore con 10 alla quinta cellule per animale. I risultati mostrano i pesi dei tumori melanoma B16 a 17 giorni dall'inoculazione. Ogni gruppo era composto da 10 animali.L'asterisco rappresenta un valore P inferiore a 0,05 calcolato mediante il test t di Student. Topi di tre settimane sono stati sottoposti a arricchimento ambientale per sei giorni. Sei giorni in un ambiente arricchito hanno ridotto il peso del tessuto adiposo bianco retroperitoneale.Questo grafico mostra che sei giorni in un ambiente arricchito riducono i pesi relativi al peso corporeo del tessuto adiposo bruno, del tessuto adiposo bianco epidermico e del tessuto adiposo bianco retroperitoneale. I prossimi due grafici riportano i risultati ottenuti con topi allevati in un ambiente arricchito per quattro settimane: come mostrato qui, quattro settimane di arricchimento ambientale riducono i pesi dei cuscinetti adiposi in tutti i tipi di grasso tranne che nel tessuto adiposo bruno. Quattro settimane di arricchimento ambientale riducono i pesi dei cuscinetti adiposi relativi al peso corporeo per tutti i tipi di grasso, ad eccezione del tessuto adiposo bruno.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come allestire e mantenere un ambiente arricchito che induca effetti anti-cancro e anti-obesità nei topi.

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