Name: Istituzione di un clinicamente rilevanti Ex Vivo Mock chirurgia della cataratta modello per indagare epiteliale Wound Repair in un microambiente Native (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Scopri un modello ex vivo di chirurgia della cataratta per studiare la riparazione delle ferite epiteliali nel loro microambiente nativo utilizzando embrioni di pollo. Questo metodo consente di osservare in tempo reale i meccanismi di guarigione.

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Questo lavoro è stato supportato dal National Institutes of Health Grant ad A.S.M. (EY021784).

Il seguente protocollo è conforme alle Istituzionale Animal Care and Use Committee linee guida Thomas Jefferson University e con la dichiarazione ARVO per l&#39;uso di animali in Vision Research. 1. Configurazione e preparazione di lenti per la Cultura Ex Vivo Wound <ol><li> Mettere tre 100 piatti mm Petri in una, cappa a flusso laminare sterile. Riempire due dei piatti petri metà con tampone Tris / destrosio (buffer TD; 140 mM NaCl, KCl 5 mM, 0,7 mM Na 2 PO 4, 5 mM D-glucosio, 8,25 mM Tris Base, pH a 7,4 con HCl) a RT , lasciando il terzo vuoto. Terreni di coltura pre-caldo (Media 199 integrato con, 1% di L-glutamina e 1% di penicillina / streptomicina) a 37 ° C. Nota: La ferita norma di guarigione di coltura è senza siero, come avviene in vivo; tuttavia, le culture ferita di riparazione possono essere coltivate con successo in condizioni di media definiti che includono siero o altri fattori. </li><li> Rimuovere fertile d embrionaleay 15 bianco Livorno pulcino uovo da incubatrice (tenutasi a 37,7 ° C, con dolce dondolio) </li><li> Inserire uovo selezionato nella cappa a flusso laminare e pulita all&#39;esterno della scocca con etanolo al 70% da una bottiglia di lavaggio. Condurre tutte le procedure qui di seguito, in condizioni asettiche in cappa a flusso laminare, con soluzioni e strumenti sterili. </li><li> Crack uova e posizionare il contenuto in 100 millimetri Petri vuota. Decapitare embrione con pinze standard e forbici sottili. Mettere la testa pulcino embrione in una capsula di Petri contenente tampone TD e smaltire il resto dell&#39;embrione. Opzionalmente evitare che le testine di embrione di pollo in tampone TD per un breve periodo di tempo, non più di 15 min. </li><li> Mettere la testa embrionali di pollo su un coperchio capsula di Petri. Utilizzando pinze alta precisione, rimuovere l&#39;obiettivo insieme al suo vitreo allegata dall&#39;occhio nella seguente sequenza. Pizzicare la parte posteriore dell&#39;occhio con la pinza per creare una piccola apertura nella parte posteriore dell&#39;occhio. </li><li> Quindi, cogliere l&#39;umore vitreo wesimo pinze e tirare delicatamente il vitreo, con un moto di rollio, il vitreo con l&#39;obiettivo montato saranno sloggiati dall&#39;occhio. Luogo obiettivo / vitreo nella capsula di Petri rimanente contenente tampone TD. Lasciare le lenti di rimanere in tampone TD per non più di 30 minuti. </li><li> Spostare la lente per un nuovo coperchio Petri sotto un microscopio da dissezione. Da questo punto in poi eseguire tutti i passaggi sotto un microscopio da dissezione. Con pinze ad alta precisione lavarsi attentamente tutta corpo ciliare (cellule pigmentate) che sono stati sloggiato con la lente utilizzando il bordo della pinza, facendo attenzione a non danneggiare il tessuto dell&#39;obiettivo. Nota: Rimozione del corpo ciliare assicura che i tipi di cellule che non sono endogeni alla lente non sono inclusi nella cultura riparazione della ferita. </li><li> Separare l&#39;obiettivo dalla vitreo con una pinza ad alta precisione pizzicando fuori dal corpo vitreo dalla sua associazione con la capsula posteriore. </li><li> Usando l&#39;alta precisione Pinza trasferire l&#39;obiettivo in una piccola gocciadi tampone TD (circa 200 ml) in un piatto di coltura di tessuti 35 mm. </li></ol> 2. Esecuzione Mock chirurgia della cataratta <ol><li> Orientare la lente nella goccia di tampone TD nel piatto da 35 mm, con la faccia anteriore della lente rivolta verso l&#39;alto. Nota: Il anteriore della lente è facilmente identificabile dalla presenza di un anello denso nel tessuto che rileva il confine tra anteriore e regione equatoriale dell&#39;epitelio lente. Al contrario, vi è una mancanza di marcature sul posteriore della capsula del cristallino a cui le cellule di fibre lente sono allegati. </li><li> Utilizzando due pinze alta precisione fanno una piccola incisione (circa 850μm) al centro della capsula anteriore della lente, la membrana basale spessa che circonda il tessuto dell&#39;obiettivo, e la sua associata epitelio della lente anteriore, afferrando il tessuto con una pinza in ogni mano e tirando delicatamente in direzioni opposte. </li><li> Rimuovere la massa cellulare fibra, che costituisce la maggior parte del tessuto dell&#39;obiettivo, dislodging dai suoi allegati al epitelio lente e circostante capsula del cristallino da idro-eluizione (un approccio utilizzato nella chirurgia della cataratta classico, modellato in Figura 1A). </li><li> Riempire una siringa da 1 ml con una punta dell&#39;ago 27,5 G con 300 ml di tampone TD. Inserire la punta dell&#39;ago nella incisione fatta nella capsula anteriore del cristallino, e circa a metà strada nella lente. </li><li> Deprimere delicatamente la siringa per iniettare il buffer di TD nella massa cellulare fibra lente. Iniettare fra 50 e 200 microlitri TD, e mai più di 300 microlitri. Osservare la massa cellulare fibra stessa allentando dalla capsula epitelio e la lente. </li><li> Utilizzando pinze ad alta precisione, rimuovere la massa cellulare fibra allentato dalla lente attraverso il sito di incisione anteriore. Nota: Questa procedura lascia il posteriore della lente membrana basale capsula per cui le cellule della fibra erano stati allegati denudati delle cellule, e di un epitelio lente infortunato proprio adiacente a questo sito. </li></ol> 3. Preparing dell&#39;obiettivo Ferito per Ex Cultura Vivo <ol><li> Appiattire il sacco capsulare obiettivo che risulta dalla chirurgia della cataratta sopra descritto sul piatto di coltura, lato della cella su, facendo cinque tagli nella faccia anteriore del sacco capsulare. </li><li> Tagliare perpendicolare al sito di incisione originale attraverso all&#39;equatore della lente. Appiattire le risultanti cinque &quot;sportelli&quot; di capsula del cristallino con epitelio attaccato sul lato cultura piatto capsula giù, cellula verso l&#39;alto. Nota la lente ex vivo ferito ora dovrebbe assumere una stella o una forma a fiori (vedi Figura 1B). </li><li> Per fissare la capsula al piatto, premere dolcemente con le pinze in ogni punto della stella. Questo farà una piccola rientranza a cinque punte più esterne del espianto e il risultato in attacco sostenuto al piatto. Nota: È possibile danneggiare la capsula durante questa procedura e quindi è importante garantire la capsula al piatto più vicino alle punte del flaps possibile, così da rendere il minor numero di punti di fissaggio come possibile (in genere due, massimo di tre per falda). </li><li> Rimuovere il buffer TD dal piatto 35mm e sostituirlo con 1,5 ml di mezzi di pre-riscaldato. Coprire il piatto 35 millimetri con il suo coperchio e posto in incubatrice (37 ° C, 5% di CO 2). </li></ol> 4. Separazione della centrale migrazione Zone (CMZ), dove riepitelizzazione dell&#39;Area ferito della capsula posteriore si verifica, dal Attachment Originale della Zona (OAZ) delle cellule epiteliali lente, per l&#39;analisi quantitativa. Nota: le cellule iniziano a muoversi nella regione CMZ immediatamente in risposta al danno. Di giorno una cultura abbastanza cellule migrano attraverso la CMZ per l&#39;analisi molecolare e biochimica, dopo la separazione della CMZ e la OAZ da micro-dissezione 23. Questo protocollo comporta la rimozione di un lembo (OAZ) alla volta dalla zona ferita della capsula. <ol><li> Osservare una demarcatione, chiaramente visibili al microscopio da dissezione, tra OAZ e CMZ (vedi Figura 2A). Utilizzando due pinze alta precisione, afferrare con entrambe le pinze a bordo della linea OAZ / CMZ, quella appena adiacente all&#39;altra, su entrambi i lati della linea (vedere la Figura 2A, B, freccia). </li><li> Usando una mano / una pinza sul lato CMZ continuano a tenere su la cultura feriti, mentre con l&#39;altra mano / pinza, tirare delicatamente il OAZ lungo la linea OAZ / CMZ. La CMZ separa facilmente dalla OAZ lungo questa linea. Continuare lungo questa linea intorno all&#39;intera cultura finché le due regioni sono completamente separati. </li><li> Studiare i separati OAZ e CMZ frazioni per l&#39;analisi molecolare, come 24 o biochimica analisi di RNA-Seq quali Western Blot o co-immunoprecipitazione 23,25. </li></ol>

<ol><li>Walker, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+precursors+for+the+mesenchymal+cells+involved+in+injury+response+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).</li>
<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+laboratory+automation%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).</li>
<li>Khalil, A. A., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+leader+cells+in+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+biology+%3A+quantitative+biosciences+from+nano+to+macro%22%5BJournal%5D)">Determinants of leader cells in collective cell migration.</a> Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).</li>
<li>Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+SRC+kinases+signals+induction+of+posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).</li>
<li>Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+basement+membrane+after+corneal+debridement%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Disruption of the basement membrane after corneal debridement.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+the+study+of+recurrent+corneal+epithelial+erosions%3A+alpha9beta1+integrin+implicated+in+progression+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sliding+of+the+epithelium+in+experimental+corneal+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds.</a> Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).</li>
<li>Sherrard, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+corneal+endothelium+in+vivo%3A+its+response+to+mild+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma.</a> Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).</li>
<li>Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+controlling+the+fibrotic+repair+phenotype+in+cornea%3A+implications+for+surgical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).</li>
<li>Escamez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+keratinocyte+growth+factor+expression+is+reduced+and+delayed+during+wound+healing+in+the+genetically+diabetic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse.</a> The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).</li>
<li>Tarin, D., Croft, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin.+II.+Dermo-epidermal+interrelationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships.</a> Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).</li>
<li>Croft, C. B., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin+I.+Epithelial+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour.</a> Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).</li>
<li>Winstanley, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+reaction+in+the+healing+of+excised+cutaneous+wounds+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+pathology%22%5BJournal%5D)">The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog.</a> Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).</li>
<li>Wormstone, I. M., Wride, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+lens%3A+a+classic+model+for+development%2C+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).</li>
<li>Danysh, B. P., Duncan, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lens+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The lens capsule.</a> Experimental eye research. 88, 151-164 (2009).</li>
<li>Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsular+opacification%3A+a+problem+reduced+but+not+yet+eradicated%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated.</a> Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).</li>
<li>Walker, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+attempts+to+reduce+posterior+capsule+opacification+after+cataract+surgery--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review.</a> Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).</li>
<li>Schmidbauer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22International+ophthalmology+clinics%22%5BJournal%5D)">Posterior capsule opacification.</a> International ophthalmology clinics. 41, 109-131 (2001).</li>
<li>Menko, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+vimentin+in+regulating+repair+function+during+healing+of+the+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium.</a> Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).</li>
<li>Chauss, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+state-specific+mitochondrial+dynamic+regulatory+networks+are+revealed+by+global+transcriptional+analysis+of+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens.</a> G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+N-Cadherin+linked+c-Src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).</li>
<li>Sieg, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FAK+integrates+growth-factor+and+integrin+signals+to+promote+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration.</a> Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).</li>
<li>Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Required+role+of+focal+adhesion+kinase+%28FAK%29+for+integrin-stimulated+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cell+science%22%5BJournal%5D)">Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration.</a> Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).</li>
<li>Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+focal+adhesion+kinase--a+regulator+of+cell+migration+and+invasion%29%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+life%22%5BJournal%5D)">The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion).</a> IUBMB life. 53, 115-119 (2002).</li>
<li>Zhao, X., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+kinase+and+its+signaling+pathways+in+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+drug+delivery+reviews%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis.</a> Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).</li>
<li>Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional-specific+alterations+in+cell-cell+junctions%2C+cytoskeletal+networks+and+myosin-mediated+mechanical+cues+coordinate+collectivity+of+movement+of+epithelial+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury.</a> Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).</li>
<li>Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing--aiming+for+perfect+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Wound healing--aiming for perfect skin regeneration.</a> Science. 276, 75-81 (1997).</li>
<li>Ferguson, M. W., O'Kane, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar-free+healing%3A+from+embryonic+mechanisms+to+adult+therapeutic+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).</li>
<li>Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+inflammation%3A+embryos+reveal+the+way+to+perfect+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).</li>
<li>Nodder, S., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+in+embryos%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+embryology%22%5BJournal%5D)">Wound healing in embryos: a review.</a> Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Qui viene descritta una tecnica per la preparazione di un modello di coltura di riparazione delle ferite che prevede l'esecuzione di un intervento di cataratta ex vivo su lenti di embrioni di pollo dopo la loro rimozione dall'occhio. L'epitelio del cristallino risponde a questa ferita clinicamente rilevante con un processo di riparazione che imita da vicino quello che si verifica in vivo e condivide le caratteristiche con la riparazione delle ferite in altri tessuti epiteliali2,4. Sebbene il ...

La clinicamente rilevante, la chirurgia della cataratta finto, ex vivo epiteliale modello guarigione delle ferite qui descritto è stato sviluppato per fornire uno strumento per indagare i meccanismi che regolano la riparazione dei tessuti epiteliali in risposta ad un infortunio. Le caratteristiche principali che sono state finalizzate per nella creazione di questo modello inclusi 1) creare condizioni che strettamente replicato la risposta in vivo a ferire in un ambiente culturale, 2) la facilità di modulare gli elementi regolatori di riparazione, e 3) capacità di immagine il processo di riparazione, nella sua interezza, in tempo reale. La sfida, quindi, è stato quello di creare un modello di cultura in cui è stato possibile studiare e manipolare, riparazione della ferita epiteliale in microambiente nativo delle cellule. La disponibilità di questo modello ferita riparazione apre nuove possibilità per individuare gli spunti di segnalazione endogeni di matrice proteine, citochine e chemochine che regolano il processo di riparazione. Inoltre, il modello è ideale per l&#39;esame come unn epitelio è in grado di muoversi come un foglio collettivo per ri-epithelialize della ferita 2,3, e per la determinazione della stirpe di cellule mesenchimali capo sul bordo della ferita che funzionano nel dirigere la migrazione collettiva dell&#39;epitelio feriti 4. Questo modello offre anche una piattaforma con cui identificare terapie che potrebbero promuovere efficace la guarigione delle ferite e prevenire ferita aberrante riparazione 5. Ci sono già un certo numero di modelli disponibili ferita riparazione, sia nella cultura e in vivo, che hanno fornito la maggior parte di ciò che si conosce il processo di riparazione delle ferite oggi. In modelli animali di lesioni, come cornea 6-12 e 13-17 della pelle, vi è la possibilità di studiare la risposta del tessuto al ferimento nel contesto di tutti i mediatori riparazione che potrebbero essere coinvolti nel processo, compresi i contributi dal vascolarizzazione e del sistema nervoso. Tuttavia, vi sono limitazioni per manipolare il expericondizioni mentali in vivo, e non è ancora possibile condurre studi di imaging della risposta di riparazione in vivo, continuamente nel tempo. Al contrario, la maggior parte dei modelli di coltura in vitro ferita riparazione, come la ferita graffiatura, possono essere facilmente manipolati e seguiti nel tempo ma mancano contesto ambientale di studiare guarigione delle ferite nel tessuto in vivo. Mentre ex vivo modelli offrono il vantaggio di studiare il processo di riparazione pregiudizio continua nel tempo nel contesto del microambiente delle cellule associata alla capacità di modulare i regolatori molecolari di riparazione in qualsiasi punto di tempo nel processo, ci sono alcuni modelli che si adattano questi parametri. Qui è descritto una procedura per generare altamente riproducibile ex vivo epiteliali guarigione della ferita culture che riproducono la risposta di un tessuto epiteliale di un ferimento fisiologico. Utilizzando la lente pulcino embrione come fonte di tessuto, un ex vivo mocviene eseguita la chirurgia della cataratta k. L&#39;obiettivo è un tessuto ideale da utilizzare per questi studi dal momento che è indipendente all&#39;interno di una spessa capsula membrana basale, avascolare, non è innervato, e priva di qualsiasi stroma associato 18,19. Nella malattia umana, chirurgia della cataratta Indirizzi perdita della vista a causa opacizzazione della lente, e comporta la rimozione della massa cellulare fibre lente, che comprende la maggior parte della lente. Dopo visione chirurgia della cataratta viene ripristinata mediante l&#39;inserimento di una lente intraoculare artificiale. La procedura di chirurgia della cataratta, attraverso la rimozione di cellule di fibre, induce una risposta lesioni nell&#39;epitelio lente adiacente, che risponde riepitelizzazione dell&#39;area posteriore della capsula del cristallino che era stato occupato dalle cellule della fibra. Nella chirurgia della cataratta, come nella maggior parte delle risposte di riparazione della ferita, si verifica talvolta un esito fibrotico aberrante risposta guarigione della ferita, associata alla comparsa di miofibroblasti, che nella lente è noto come posteriore capsule opacizzazione 20-22. Per generare il modello guarigione delle ferite chirurgia della cataratta, una procedura di chirurgia della cataratta è imitato in lenti rimosso dall&#39;occhio pulcino embrione per produrre una lesione fisiologica. Rimozione microchirurgica delle fibre lente risultati cellule in una ferita circolare molto consistente circondata dalle cellule epiteliali lente. Questa popolazione di cellule rimane fermamente attaccata alla membrana capsula del cristallino seminterrato ed è ferito dalla procedura chirurgica. Le cellule epiteliali migrano sulla zona dissodata della membrana basale endogena per guarire la ferita, guidata da una popolazione di cellule mesenchimali ricche di vimentina noti nel processo di riparazione come cellule capo 1. Con questo modello la risposta di un epitelio di lesione può essere facilmente visualizzata e seguita con il tempo nel contesto del microambiente delle cellule. Le cellule sono facilmente accessibili per le modifiche dell&#39;espressione o l&#39;attivazione di molecole che dovrebbero svolgere un ruolo nella riparazione delle ferite. Una potente funzione di thè il modello è la capacità di isolare e studiare i cambiamenti specifici di migrazione nel quadro di guarigione della ferita. La capacità di preparare un gran numero di ex vivo cicatrizzanti culture abbinati invecchiato per studi è un altro vantaggio di questo modello. Così, questo modello di sistema offre l&#39;opportunità unica di prendere in giro a parte i meccanismi di riparazione delle ferite e terapie di prova per il loro effetto sul processo di guarigione delle ferite. Il finto modello ex vivo chirurgia della cataratta dovrebbe avere ampia applicabilità, fornendo una risorsa fondamentale per lo studio dei meccanismi di riparazione del pregiudizio.

<table><tbody><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td>Utilizzo a 140 mM in tampone TD</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio (KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td>Utilizzo a 5 mM in tampone TD</td></tr><tr><td>Fosfato di sodio (Na2HPO4)</td><td>Sigma</td><td>S0876</td><td>Utilizzo a 0,7 mM in tampone TD</td></tr><tr><td>D-glucosio (destrosio)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-500</td><td>Utilizzo a 0,5 mM in tampone TD</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td>Utilizzo a 8,25 mM in tampone TD</td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-500</td><td>Utilizzo per pH TD tampone a 7,4</td></tr><tr><td>Terreno 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>L-glutammina</td><td>Corning/CellGro</td><td>25-005-CI</td><td>Utilizzo all'1% in Terreno 199</td></tr><tr><td>Penicillina/streptomicina</td><td>Corning/ CellGro</td><td>30-002-CI</td><td>Uso all'1% in Media199</td></tr><tr><td>Piastre di Petri da 100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875711Z</td><td></td></tr><tr><td>Stericup Filter Unit</td><td>Millipore</td><td>SCGPU01RE</td><td>Uso per filtrare sterilizzare Media</td></tr><tr><td>Dumont #5 pinze (ne servono 2)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per colture cellulari da 35 mm</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1 ml SlipTip con ago di scorrimento di precisione</td><td>BD</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>Forbici fini</td><td>Strumenti di scienza fine</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinze standard</td><td>Strumenti di scienza fine</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Altri elementi necessari: Strumenti di dissezione generale,&nbsp; uova di gallina livornese bianche fertili, incubatrice per uova di controllo (umidificata, 37,7&deg; C), cappa a flusso laminare, microscopio</td><td></td><td></td><td></td> binoculare da dissezione con stereovisione</tr></tbody></table>

istituzione di un clinicamente rilevanti<em&gt; ex vivo</em&gt; mock chirurgia della cataratta modello per indagare epiteliale wound repair in un microambiente native

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Il principale ostacolo alla comprensione di come un tessuto epiteliale esegue la riparazione della ferita è la limitata disponibilità di modelli in cui è possibile seguire e manipolare la risposta della ferita ex vivo in un ambiente che imita da vicino quello della lesione del tessuto epiteliale in vivo. Questo problema è stato affrontato creando un modello epiteliale ex vivo di riparazione delle lesioni clinicamente rilevante basato sulla chirurgia della cataratta. In questo modello di coltura, la risposta dell'epitelio del cristallino alla ferita può essere seguita dal vivo nel microambiente nativo delle cellule e i mediatori molecolari della riparazione della ferita possono essere facilmente manipolati durante il processo di riparazione. Per preparare le colture, le lenti vengono rimosse dall'occhio e viene praticata una piccola incisione nella parte anteriore della lente da cui viene rimossa la massa interna delle cellule delle fibre del cristallino. Questa procedura crea una ferita circolare sulla capsula posteriore del cristallino, la spessa membrana basale che circonda il cristallino. Questa area della ferita in cui sono state attaccate le cellule delle fibre si trova appena adiacente a un monostrato continuo di cellule epiteliali del cristallino che rimane collegato alla capsula del cristallino durante la procedura chirurgica. L'epitelio ferito, il tipo di cellula da cui derivano le cellule fibrose durante lo sviluppo, risponde alla lesione della rimozione delle cellule fibrose muovendosi collettivamente attraverso l'area della ferita, guidato da una popolazione di cellule di riparazione ricche di vimentina i cui progenitori mesenchimali sono endogeni al cristallino1. Queste proprietà sono tipiche di una normale risposta epiteliale di guarigione delle ferite. In questo modello, come in vivo, la riparazione della ferita dipende dai segnali forniti dall'ambiente endogeno che viene mantenuto in modo univoco in questo sistema di coltura ex vivo, fornendo un'opportunità ideale per la scoperta dei meccanismi che regolano la riparazione di un epitelio dopo la ferita.

Ex Vivo Modello creato per studiare il processo di guarigione delle ferite nei microambiente nativo le cellule &#39; Per studiare i meccanismi coinvolti nella regolazione guarigione delle ferite di un epitelio all&#39;interno microambiente nativo delle cellule, un clinicamente rilevante ex vivo finto modello chirurgia della cataratta è stato creato. Questo modello è stato creato da tessuto lente che offre molti vantaggi per le sue proprietà intrinseche: 1) l&#39;obiettivo è...

Qui viene descritta la creazione di un modello di chirurgia della cataratta simulata ex vivo clinicamente rilevante che può essere utilizzato per studiare i meccanismi della risposta al danno dei tessuti epiteliali all'interno del loro microambiente nativo.

Istituzione di un clinicamente rilevanti<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock chirurgia della cataratta modello per indagare epiteliale Wound Repair in un microambiente Native

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare un modello clinicamente rilevante in cui il processo di riparazione della ferita possa essere seguito nel suo microambiente naturale. Questo viene raggiunto innanzitutto rimuovendo il cristallino dall'occhio di un embrione di pollo. Il secondo passaggio consiste nell'effettuare un piccolo taglio nell'area anteriore del cristallino.Quindi eluire idraulicamente la massa cellulare delle fibre del cristallino. Successivamente, appiattire la capsula del cristallino con l'epitelio associato effettuando ulteriori incisioni nella capsula anteriore. L'ultimo passaggio consiste nel fissare la coltura ferita alla piastra per colture cellulari al fine di seguire il processo di guarigione della ferita man mano che si verifica.In definitiva, la microscopia a tempo-lapse, la microscopia confocale e l'analisi biochimica vengono utilizzate per mostrare i meccanismi di riparazione della ferita in un modello che riproduce in modo fedele l'ambiente in vivo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande fondamentali nel campo della guarigione delle ferite, come ad esempio come le cellule si muovono in modo coordinato per chiudere la ferita. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul processo di riparazione della ferita.È possibile applicarlo anche a studi di guarigione delle ferite ABER, in particolare alla fibrosi e alla formazione di cicatrici. Iniziare posizionando tre piastre di Petri da 100 millimetri in una cappa a flusso laminare sterile. Riempire due delle piastre di Petri per metà con tampone tris dextrosio a temperatura ambiente, lasciando la terza vuota.Quindi rimuovere un uovo fecondato di pollo White Leghorn al giorno embrionale 15 da un incubatrice a 37,7 gradi Celsius e pulire l'esterno del guscio con etanolo al 70% per sterilizzarlo. Successivamente, rompere con attenzione l'uovo e versarne il contenuto in una capsula di Petri da 100 millimetri vuota. Utilizzando pinze standard e forbici fini, decapitare l'embrione e collocare la testa in una delle capsule contenente il buffer TST con destrosio.Entro 15 minuti, spostare la testa dell'embrione di pollo su un coperchio di una piastra di Petri. Utilizzare pinzette di alta precisione per pizzicare la parte posteriore dell'occhio, creando un piccolo foro nella parte posteriore dell'occhio. Successivamente, afferrare l'umor vitreo con le pinzette ed esercitare un leggero strappo sull'umor vitreo con un movimento rotatorio.Il vitreo con il cristallino attaccato si staccherà dall'occhio. Posizionare il cristallino e il vitreo nella piastra Petri rimanente contenente il Tex extras Buffer. Lasciare i cristallini nel buffer per non più di 30 minuti prima di proseguire con la dissezione.Successivamente, spostare la lente su un nuovo coperchio di piastra di Petri sotto un microscopio stereoscopico utilizzando pinzette di precisione, rimuovendo con cura qualsiasi cellula del corpo ciliare che si sia staccata insieme alla lente, servendosi del bordo delle pinzette. Quindi separare la lente dall'umor vitreo staccando il corpo vitreo dall'inserzione con la capsula posteriore del cristallino. Dopo la separazione, trasferire la lente in una goccia di 200 microlitri di tampone tris-dextrosio posta in una piastra per colture cellulari da 35 millimetri, orientandola in modo che l'aspetto anteriore della lente sia rivolto verso l'alto.La parte anteriore del cristallino è facilmente identificabile dalla presenza di un anello denso nel tessuto, che indica il confine tra la regione interna e quella equatoriale dell'epitelio del cristallino. Utilizzando due pinzette di alta precisione, praticare una piccola incisione di circa 850 micron di lunghezza al centro della capsula anteriore del cristallino afferrando il tessuto con una pinzetta in ciascuna mano e tirando delicatamente in direzioni opposte. Successivamente, prendere una siringa da un millilitro con ago da 27,5 gauge e riempirla con 300 microlitri di tampone TST al dextrosio.Inserire la punta dell'ago nell'incisione praticata nella capsula lentica anteriore e fino a circa metà della lente. Quindi premere delicatamente sulla siringa, iniettando il tampone di destrosio TST all'interno della lente. Massa delle cellule fibrillari.Iniettare tra 50 e 200 microlitri di tampone per staccare la massa cellulare delle fibre dall'epitelio circostante e dalla capsula del cristallino. Non iniettare mai più di 300 microlitri. Utilizzando pinze di alta precisione, rimuovere la massa cellulare delle fibre allentata dal cristallino attraverso il sito di incisione anteriore.La rimozione della massa delle cellule del cristallino dal suo punto di attacco sulla capsula posteriore crea un'area di ferita altamente riproducibile sulla membrana basale, circondata dall'epitelio lesionato. Partendo dalla borsa capsulare, effettuare cinque incisioni nella porzione anteriore del cristallino fino all'equatore. Appiattire le cinque lembi risultanti della capsula del cristallino, con l'epitelio adeso, nel piatto colturale con la capsula rivolta verso il basso e le cellule verso l'alto.Premere delicatamente con la pinzetta in ciascun punto della stella per fissare la capsula alla piastra. Questo creerà una piccola indentazione nelle cinque punte più esterne dell'x explan, garantendo un'adesione sostenuta alla piastra. Successivamente, rimuovere il tampone tris dextrosio dalla piastra da 35 millimetri e sostituirlo con 1,5 millilitri di M199 preriscaldato.Mezzo integrato con 1% di L-glutammina e penicillina. Coprire la piastra con il suo coperchio e collocarla nell'incubatore. Posizionare la piastra colturale sotto il microscopio stereoscopico ed osservare la delimitazione tra la zona centrale di migrazione e la zona originale di adesione delle cellule epiteliali.Quindi utilizzare due pinzette di alta precisione per afferrare il bordo su entrambi i lati della linea di demarcazione tra le due zone. Tirare delicatamente la zona di attacco originale lungo la linea per separare facilmente le due zone. Continuare a separare le due zone lungo l'intera coltura finché le due regioni non sono completamente distinte.Studiare le due frazioni utilizzando tecniche analitiche molecolari o biochimiche standard. Immediatamente dopo la rimozione della massa cellulare fibrosa, una sottopopolazione di cellule mesenchimali di riparazione viene attivata e migra verso il margine della ferita nell'epitelio. Queste cellule si spostano rapidamente nella regione priva di cellule della capsula della membrana basale endogena, la zona centrale di migrazione, per iniziare il processo di guarigione.La ferita, la tecnica qui descritta prepara perfettamente questo sistema modello per l'osservazione di questo processo al microscopio o con una videocamera; la guarigione della ferita procede rapidamente, coprendo un'area significativa della ferita entro il primo giorno di coltura. Entro il terzo giorno, il processo di guarigione della ferita è generalmente completato in seguito alla separazione tra la zona centrale di migrazione e la zona originaria di attacco. Le differenze molecolari tra queste zone distinte sono state analizzate in questo studio.I livelli di chinasi della adesione focale sono stati misurati nelle due zone ed è stato riscontrato un aumento della quantità di chinasi della adesione focale fosforilata nella zona centrale specifica per la migrazione. Una volta padroneggiata, questa tecnica di simulazione di intervento chirurgico per cataratta può essere completata in tre minuti se eseguita correttamente. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come creare un modello di simulazione di intervento chirurgico per cataratta che riproduca da vicino la riparazione della ferita in un microambiente naturale.

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