Name: Caratterizzazione di metabolica Stato a non umani Primati con il endovenosa glucosio test di tolleranza (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Impara a eseguire il test di tolleranza al glucosio endovenoso nei macachi per caratterizzare lo stato metabolico e valutare la progressione delle malattie metaboliche. Questo metodo standardizzato supporta la ricerca sul diabete e sull'insulino-resistenza.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori vorrebbero riconoscere il forte sostegno del personale cura degli animali DHMRI CLAS, Facility Manager Daniel Peralta e veterinario curante, il dottor Ignacio Glicerio, DVM MRCVS.

Tutte le procedure di animali sono stati approvati dal David H. Murdock Research Institute IACUC trova nel campus North Carolina Research (NCRC), in base al protocollo 14-017, Caratterizzazione di un modello di primate non umano di diabete e prediabete / insulino-resistenza e l&#39;efficacia di terapie per migliorare la sensibilità all&#39;insulina e la funzione metabolica. 1. Selezione degli animali e Studio Preparazione <ol><li> Selezionare la dieta e il peso degli animali stabili sulla base delle registrazioni mensili assunzione di cibo e il peso corporeo. NOTA: Gli animali che hanno presentato una recente diminuzione dell&#39;appetito non dovrebbero essere caratterizzati fino alla loro assunzione di cibo si è stabilizzata. <ol><li> Per gli animali maturi (&gt; 5 - 6 anni), non selezionare animali il cui peso tra mesi consecutivi corpo differire di oltre il 10% senza prima esaminare la scimmia e escludere altre cause che cambiare lo stato metabolico per il drammatico cambiamento di peso. </li></ol></li><li> Per glucosio, insulina e C-Peptide analiti, preparano provette per il prelievo del campione 2 EDTA K con inibitore della proteasi (Aprotinina e DPP4I). NOTA: Il cocktail DPP4I + Aprotinin fornisce un ampio spettro di inibizione della proteasi questo dovrebbe essere richiesto per analiti aggiuntivi (glucagone, GLP-1). Nel caso in cui analiti aggiuntivi non sono raccolti, i tubi del sangue dovrebbero essere preparati nello stesso modo per mantenere la coerenza nella raccolta dei campioni. I campioni per le analisi non convalidati per questo metodo devono essere raccolti separatamente, secondo le raccomandazioni del costruttore. <ol><li> Preparare il cocktail inibitore della proteasi mescolando 100 mg liofilizzato Aprotinin con 10 ml di DPP4I. Aggiungere 10 ml di miscela di aprotinina + DPP4I a ciascun tubo di sangue per ogni millilitro di sangue raccolto. </li><li> Aggiungere un ulteriore 10 ml di cocktail di inibitori delle proteasi in ogni provetta per un possibile eccedenza di raccolta. Conservare le provette-sangue trattata a -20 ° C fino al momento dell&#39;uso. Mantenere i tubi in ghiaccio durante la Operazinuovamente e girare a 4 ° C. </li><li> Utilizzare un tubo di separazione del siero per raccogliere un campione di sangue al basale per l&#39;analisi di serie ematochimiche. Per il completo conta dei leucociti (CBC), utilizzare uno standard K 2 EDTA, senza inibitori della proteasi. Utilizzare cryovials a plasma aliquota e siero dopo che i campioni di sangue sono stati filata verso il basso. </li><li> Etichettare i tubi di sangue e le cryovials adeguatamente con l&#39;identificazione degli animali, la data, procedura, timepoint, e il volume del campione. Etichettare i cryovials con l&#39;analita (s) nel plasma per il dosaggio appropriato. </li></ol></li><li> Preparare la soluzione fisiologica eparinizzata iniettando 0,15 ml di 1.000 unità USP per eparina ml in una sacca da 250 ml di soluzione fisiologica. Ottenere una soluzione di 0,06 mg di eparina / ml. Disegnare 40 - 60 ml di questa soluzione in una serratura salina per il lavaggio tra i campioni. Disegnare un ulteriore 1 ml e 5 ml in siringhe separate per lavaggio la porta di infusione di destrosio prima e dopo l&#39;infusione, rispettivamente. </li></ol> 2.La sedazione degli animali e preparazione <ol><li> Rimuovere cibo dalla gabbia dell&#39;animale non meno di 14 ore prima della procedura, e non più di 18 ore. NOTA: È importante che gli animali lasciati a digiuno per la procedura per evitare ogni variazione post-prandiale in valori glicemici. E &#39;anche una precauzione per evitare rigurgito e aspirazione del contenuto dello stomaco mentre anestetizzato. </li><li> animali sedare per la durata della procedura di IVGTT con ketamina somministrato per via intramuscolare come un anestetico generale, a 10 mg / kg. Somministrare ulteriori ketamina (5 - 10 mg / kg) ad intervalli di 20 - 30 minuti, o quando necessario, durante la procedura. <ol><li> Pesare l&#39;animale sedato. Posto l&#39;animale in una posizione lateralmente reclinata su un tavolo procedimento riscaldata. </li><li> Monitorare parametri clinici ogni 15 a 20 minuti per garantire l&#39;animale è in un piano stabile di anestesia. Misurare la frequenza cardiaca (100 - 200 bpm) e SPO 2 (&gt; 92%), con un pulsossimetro. Misurare la frequenza respiratoria (20 - 50 respiri / min) w<html> esimo un cronometro, contando respirazioni visivamente oppure a mano più di quindici secondi e moltiplicando per quattro. misurare la temperatura (&gt; 97 ° C) per via rettale. Monitorare il colore della mucosa intorno la gomma e labbri (umide, rosa). </li></ol></li><li> Preparare due siti cannula. Utilizzare tosatrici per tagliare i capelli dalla zona di interesse in cui verrà inserito il catetere, e sterilizzare l&#39;intera regione, con alternanza di macchie di clorexidina e il 70% di alcol. <ol><li> Mettere una catetere nella regione delle vene sinistro o destro o cefalica safena e allegarlo a un filo eparina salina (0,06 mg di eparina / ml) con una valvola a tre vie. Questo è il sito prelievo di sangue campionamento. </li><li> Posizionare il secondo catetere in un&#39;altra gamba o un braccio nella regione delle vene cefaliche o safena e allegare una porta. Usare questo sito per l&#39;infusione di destrosio. Utilizzare un piccolo, 1 ml di soluzione fisiologica eparinizzata a filo per mantenere il brevetto cannula prima dell&#39;infusione destrosio. </li></ol></li></ol>e_title &quot;&gt; 3. Procedura IVGTT NOTA: La procedura IVGTT è composto da 8 campionamento prelievo di sangue time-punti (Tabella 1). <ol><li> Prendere il campione di riferimento e utilizzare un glucometro tenuto in mano per misurare il livello di glicemia a digiuno. Ottenere un campione di siero per l&#39;analisi chimica standard così come un campione di sangue intero per un CBC per valutare la salute generale dell&#39;animale. Raccogliere campioni di plasma per saggiare i livelli di glucosio e di insulina dal campione di riferimento utilizzando un kit convalidato per l&#39;uso con macachi come da istruzioni del produttore 8, 9. NOTA: È importante avere un pre-draw di 0,5 ml prelevati dalla cannula prima di prendere qualsiasi campione per la raccolta di sangue per rimuovere il sangue residuo o eparina nello spazio morto della cannula. </li><li> Dopo aver ottenuto il campione di riferimento, infondere la dose di destrosio al 50% (250 mg / kg) più di 30 secondi nella porta di infusione di destrosio. NOTA: modelli dose più alta (500 mg / kg) possono essere utilizzati,anche se la dose deve essere fissato attraverso procedure al fine di fare confronti longitudinali. <ol><li> Lavare la porta per infusione con 5 ml di soluzione fisiologica eparinizzata per assicurarsi che non vi sia destrosio sinistra in porto. Il termine dell&#39;infusione è il T0. Avere il tecnico sostituire i guanti, come il destrosio residua dalla infusione può contaminare i successivi campioni di sangue. </li></ol></li><li> Il primo punto tempo di campionamento post-infusione è a T3 min, dalla fine dell&#39;infusione destrosio, seguita da T5 min, T7 min, T10 min, T15 min, T20 min, e l&#39;ultimo punto tempo di campionamento è a T30 min. Raccogliere il plasma da ogni timepoint a livelli di glucosio test e di insulina con il campione di riferimento (vedi punto 3.1). <ol><li> Al T3 min punto di tempo, utilizzare il glucometro tenuto in mano per controllare ancora una volta il livello di glucosio nel sangue. NOTA: Le letture glucometro al basale e T3 sono solo per confermare l&#39;infusione del glucosio. al T3 min punto di tempo il livello di glucosio nel sangue dovrebbe essere ~ 100 mg / dl più alto compared al digiuno di base di glucosio nel plasma livello. </li></ol></li></ol> 4. il recupero degli animali e Sample Processing <ol><li> Rimuovere le cannule e applicare pressione ai siti cateterizzati per emostasi dopo il T30 min time-point. Monitorare l&#39;animale fino a che non ha ripreso conoscenza ed è seduto. alimentazione offerta una volta che l&#39;animale è completamente recuperato. </li><li> Porre immediatamente ogni campione di sangue intero in K 2 tubi EDTA su ghiaccio. Centrifugare a 3.000 rpm ad una temperatura di 4 ° C entro 10 minuti di raccolta. campioni Aliquota di plasma in cryovials, congelare e conservare a -80 ° C fino al momento dell&#39;analisi. <ol><li> Lasciare il sangue nel tubo siero per analisi standard di chimica siero riposare a temperatura ambiente per non meno di 20 minuti e non più di 30 minuti prima della centrifugazione a 3000 rpm a temperatura ambiente. Congelare i campioni di siero fino analizzati entro 48 ore di raccolta. NOTA: refrigerare il campioni di sangue intero raccolti per analisi CBC fino comesayed entro 24 ore di raccolta. </li></ol></li></ol> 5. Il trattamento dei dati <ol><li> Dopo aver stabilito le curve plasmatici di insulina e glucosio, determinare il tasso di clearance del glucosio K dalla pendenza del logaritmo naturale di valori di glucosio di cui sopra della linea di base 16, 17. NOTA: Un NHP sana può essere dovrebbe avere un tasso di clearance del glucosio K ben al di sopra 1, spesso superiore a 2 o più, come un animale sano spesso tornare ai valori di glucosio basali entro 30 min. Poiché la produzione di insulina cade, il tasso di clearance del glucosio K scenderà più drammaticamente, al di sotto 1. </li><li> Calcolare la AUC nel suo complesso, come somma dei totali della zona dei trapezi rappresentano l&#39;area sotto la curva di ogni segmento di linea tra punti temporali, attraverso T30 16, 17. NOTA: Tradizionalmente, l&#39;AUC dei primi dieci minuti della procedura è considerato il acute risposta insulinica al glucosio (AIR), mentre l&#39;AUC dall&#39;ultimo 20 min della procedura è considerata la risposta tardiva insulina (LIR). Come l&#39;animale diventa più dismetabolica, l&#39;AUC insulina aumenta, riflettendo la compensazione per l&#39;aumento di insulina insensibilità. Poiché le transizioni animali al diabete conclamato, tuttavia, l&#39;AUC diminuirà, spesso inizialmente nella fase acuta di insulina, catturato dalla AIR. </li></ol>

<ol><li>Bergman, R., Phillips, L., Cobelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+evaluation+of+factors+controlling+glucose+tolerance+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Physiologic evaluation of factors controlling glucose tolerance in man.</a> J. Clin. Invest. 68, 1456-1457 (1981).</li>
<li>Bergman, R., Prager, R., Volund, A., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equivalence+of+the+insulin+sensitivity+index+in+man+derived+by+the+minimal+model+and+the+euglycemic+glucose+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Equivalence of the insulin sensitivity index in man derived by the minimal model and the euglycemic glucose clamp.</a> J. Clin. Invest. 79, 790-800 (1987).</li>
<li>Hovorka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partitioning+glucose+distribution%2Ftransport%2C+disposal%2C+and+endogenous+production+during+IVGTT%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Partitioning glucose distribution/transport, disposal, and endogenous production during IVGTT.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 282, E992-E1007 (2002).</li>
<li>Salinari, S., Guidone, C., Bertuzzi, A., Manco, M., Asnaghi, S., Mingrone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-phase+insulin+secretion+restoration+and+differential+response+to+glucose+load+depending+on+the+route+of+administration+in+type+2+diabetic+subjects+after+beriatric+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">First-phase insulin secretion restoration and differential response to glucose load depending on the route of administration in type 2 diabetic subjects after beriatric surgery.</a> Diabetes Care. 32 (3), 375-380 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Clinical+Diabetes+Research%3A+Methods+and+Techniques%22">Clinical Diabetes Research: Methods and Techniques</a>. Roden, M. , John Wiley & Sons. (2007).</li>
<li>Cobelli, C., Pacini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+secretion+and+hepatic+extraction+in+humans+by+minimal+modeling+of+c-peptide+and+insulin+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin secretion and hepatic extraction in humans by minimal modeling of c-peptide and insulin kinetics.</a> Diabetes. 37, 223-231 (1988).</li>
<li>Lorenzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disposition+index%2C+glucose+effectiveness%2C+and+conversion+to+type+2+diabetes%3A+the+insulin+resistance+atherosclerosis+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Disposition index, glucose effectiveness, and conversion to type 2 diabetes: the insulin resistance atherosclerosis study.</a> Diabetes Care. 33, 2098-2103 (2010).</li>
<li>Hansen, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+and+treatment+of+type+2+diabetes+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigation and treatment of type 2 diabetes in nonhuman primates.</a> Methods Mol Biol. 933, 177-185 (2012).</li>
<li>Hansen, B. C., Bodkin, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+IVGTT.+Importance+of+method+used+to+calculate+glucose+disappearance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Standardization of IVGTT. Importance of method used to calculate glucose disappearance.</a> Diabetes Care. 16 (5), 847(1993).</li>
<li>Hardwood, J. H., Listrani, P., Wagner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhuman+primates+and+other+animal+models+in+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Sci+Tech%22%5BJournal%5D)">Nonhuman primates and other animal models in diabetes research.</a> J Diabetes Sci Tech. 3, 503-514 (2012).</li>
<li>De Koning, E. J., Bodkin, N. L., Hansen, B. C., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+in+Macaca+mulatta+monkeys+is+characterized+by+islet+amyloidosis+and+reduction+in+beta-cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus in Macaca mulatta monkeys is characterized by islet amyloidosis and reduction in beta-cell population.</a> Diabetologia. 36, 378-384 (1993).</li>
<li>Letiexhe, M. R., Scheen, A. J., Gerard, P. L., Desaive, C., Lefebvre, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+secretion%2C+clearance+and+action+before+and+after+gastroplasty+in+severely+obese+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Insulin secretion, clearance and action before and after gastroplasty in severely obese subjects.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 18, 295-300 (1994).</li>
<li>Letiexhe, M. R., Scheen, A. J., Gerard, P. L., Desaive, C., Lefebvre, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postgastroplasty+recovery+of+ideal+body+weight+normalizes+glucose+and+insulin+metabolism+in+obese+women%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Postgastroplasty recovery of ideal body weight normalizes glucose and insulin metabolism in obese women.</a> J Clin Endocrinol Metab. 80, 364-369 (1995).</li>
<li>Kim, S. H., Abbasi, F., Chu, J. W., McLaughlin, T. L., Lamendola, C., Polonsky, K. S., Reaven, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rosiglitazone+reduces+glucose-stimulated+insulin+secretion+rate+and+increases+insulin+clearance+in+nondiabetic%2C+insulin-resistant+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Rosiglitazone reduces glucose-stimulated insulin secretion rate and increases insulin clearance in nondiabetic, insulin-resistant individuals.</a> Diabetes. 54, 2447-2452 (2005).</li>
<li>Toffolo, G., Breda, E., Cavaghan, M. K., Ehrmann, D. A., Polonsky, K. S., Cobelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+indexes+of+beta-cell+function+during+graded+up+and+down+glucose+infusion+from+C-peptide+minimal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Quantitative indexes of beta-cell function during graded up and down glucose infusion from C-peptide minimal models.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 280, E2-E10 (2001).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+beta-cell+insulin+secretory+function+using+a+graded+glucose-infusion+with+C-peptide+deconvolution+in+dysmetabolic%2C+and+diabetic+cynomolgus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetology+and+Metabolic+Syn%22%5BJournal%5D)">Quantification of beta-cell insulin secretory function using a graded glucose-infusion with C-peptide deconvolution in dysmetabolic, and diabetic cynomolgus monkeys.</a> Diabetology and Metabolic Syn. 5, 40(2013).</li>
<li>Xiao, Y. F., Wang, B., Wang, X., Du, F., Benzinou, M., Wang, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xylazine-induced+reduction+of+tissue+sensitivity+to+insulin+leads+to+acute+hyperglycemia+in+diabetic+and+normoglycemic+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Xylazine-induced reduction of tissue sensitivity to insulin leads to acute hyperglycemia in diabetic and normoglycemic monkeys.</a> Anesthesiology. 13 (33), (2013).</li>
<li>Porte, D., Kahn, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-cell+dysfunction+and+failure+in+type+2+diabetes+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">β-cell dysfunction and failure in type 2 diabetes potential mechanisms.</a> Diabetes. 50, Suppl 1. S160-S163 (2001).</li>
<li>DeFronzo, R. A., Tobin, J. D., Andres, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+clamp+technique%3A+a+method+for+quantifying+insulin+secretion+and+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glucose clamp technique: a method for quantifying insulin secretion and resistance.</a> American Journal of Physiology. 237 (3), G214-G223 (1979).</li>
<li>Ferrannini, E., Gastaldelli, A., Miyazaki, Y., Matsuda, M., Mari, A., DeFronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes%3A+a+new+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">β-cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J Clin Endocrinol Metab. 90 (1), 493-500 (2005).</li>
<li>Vaughan, K. L., Szarowicz, M. D., Herbert, R. L., Mattison, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+anesthesia+protocols+for+intravenous+glucose+tolerance+testing+in+rhesus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Comparison of anesthesia protocols for intravenous glucose tolerance testing in rhesus monkeys.</a> J Med Primatol. 43, 162-168 (2014).</li>
<li>Kemnitz, J. W., Kraemer, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+glucoregulation+in+rhesus+monkeys+sedated+with+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">Assessment of glucoregulation in rhesus monkeys sedated with ketamine.</a> American Journal of Primatology. 3, 201-210 (1982).</li>
<li>Dutton, C. J., Parvin, C. A., Gronowski, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+glycated+hemoglobin+percentages+for+use+in+the+diagnosis+and+monitoring+of+diabetes+mellitus+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Measurement of glycated hemoglobin percentages for use in the diagnosis and monitoring of diabetes mellitus in nonhuman primates.</a> Am J Vet Res. 64, 562-568 (2003).</li>
<li>Rai, V., Iyer, U., Mani, I., Mani, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+biochemical+changes+in+insulin+dependent+and+non-insulin+dependent+diabetes+mellitus+and+their+role+in+the+development+of+secondary+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Diab+Dev+Countries%22%5BJournal%5D)">Serum biochemical changes in insulin dependent and non-insulin dependent diabetes mellitus and their role in the development of secondary complications.</a> Int J Diab Dev Countries. 17, 33-37 (1997).</li>
<li>Shirasaki, Y., Yoshioka, N., Kanazawa, K., Maekawa, T., Horikawa, T., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+physical+restraint+on+glucose+tolerance+in+cynomolgus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Effect of physical restraint on glucose tolerance in cynomolgus monkeys.</a> J Med Primatol. 42, 165-168 (2013).</li>
</ol>

Gli autori sono affiliati a una organizzazione di ricerca a contratto (Corona Bioscience) attiva nel campo delle malattie metaboliche.

Il IVGTT valuta la capacità di rilascio di insulina glucosio-stimolata da una singola infusione di destrosio base al peso corporeo 5, 12, 13. Dal test, il livello di glucosio nel sangue a digiuno e il livello di insulina è raggiunta, e permette una valutazione della capacità degli animali alla rilascio di insulina e restituire il livello di glucosio elevata nei confronti della linea di base. Questo fornisce all&#39;utente informazioni per caratterizzare l&#39;animale come un livello normale e controllo sano l...

Il IVGTT è un saggio funzionale conveniente che viene normalmente utilizzato per determinare la funzione β-cellule nell&#39;uomo a diversi stati metaboliche 5, 7. In modelli animali di DT2, è ben riconosciuto come uno strumento per caratterizzare animali che mostrano progressione della malattia metabolica una sana ad un dismetabolica stato hyperglycemic 8, 9. Il modello animale più vicino di T2D è dimostrata nei primati non umani (NHPs), di cui rhesus e cynomolgus macachi sono esempi notevoli. Questi animali naturalmente sviluppano T2D con gli stessi fattori di rischio di età e obesità contribuendo alla sua incidenza come negli esseri umani 10. Inoltre, vi è una progressione della malattia simile e patologia del pancreas che mostra depositi di amiloide come la malattia progredisce dismetabolici 11. Qui riportiamo sul nostro metodo standard di esecuzione di un IVGTT in primati non umani come parte della nostra colonia caratterizzazione dello stato metabolico in questi animali. Questo metodo èfacile da eseguire rispetto ad altri, più lunga e costose tecniche 2. Il IVGTT è utile per caratterizzare una grande colonia di animali rapidamente e frequentemente. Quando prese in considerazione il livello di emoglobina glicata (HbA1C), storia dieta e l&#39;assunzione di cibo dell&#39;animale, nonché la loro magra massa grassa e corporeo per cento, il IVGTT è normalmente sufficiente per caratterizzare stato metabolico di un animale e la progressione verso il diabete conclamato 6 , 8. HbA1C rappresenta il livello medio glicemico durante la vita di un globulo rosso, fornendo una misura affidabile dei livelli di glucosio nel corso degli ultimi sei settimane a tre mesi. Misurato dal campione di sangue al basale a digiuno del IVGTT, questo valore fornisce una finestra nel controllo glicemico durante i mesi tra procedure. Se l&#39;animale è passata da dismetabolica per diabetici dalla loro ultima IVGTT, un valore di HbA1C molto superiore al loro valore precedente indicherebbeche la transizione è iniziata subito dopo il loro ultimo IVGTT, mentre, un valore di HbA1c più vicino al loro valore precedente indicherebbe che hanno solo di recente la transizione. In generale, nei macachi rhesus, HbA1C valori superiori al 6% sono considerati anomali, e indicare scarso controllo glicemico 10, 23. glicemia devono essere interpretate nel contesto del comportamento e della salute generale dell&#39;animale nel suo complesso. macachi diabetici - come gli esseri umani - mostra iperfagia, polidipsia, poliuria e. alloggiamento gruppo di animali fornisce sfide significative per la misurazione di questi indicatori e la cura individuale necessari per dismetaboliche e scimmie diabetiche. Si consiglia singolarmente accogliere gli animali in modo che la cura più personalizzata può essere fornito, e gli indicatori comportamentali della salute della scimmia più facilmente essere monitorato 8. Inoltre, macachi diabetici esporrà perdita di peso, nonché un profilo lipidico elevata (maggiorecolesterolo, ipertrigliceridemia) e del metabolismo minerale disturbato nella chimica del siero. E &#39;importante misurare i marcatori di funzionalità epatica e renale in chimica del siero, i danni a questi organi sono spesso complicazioni di avanzare metabolica disturbo / diabete, e può essere co-determinanti della glicemia, lipidi e gli squilibri minerali 9, 11, 18, 24 . Con questo metodo, i valori storici generati da più, caratterizzazioni frequenti durante la vita di una scimmia sono di particolare pregio. Se altre procedure, come un morsetto di glucosio o assortite infusione di glucosio (GGI), sono necessari per valutare pienamente la salute di un animale, è comunemente dopo caratterizzazione iniziale quando la loro storia non è più disponibile. Tuttavia, una volta che una linea di base è stato stabilito, ripetuti IVGTTs di una frequenza di ogni tre mesi sono normalmente sufficienti per monitorare i progressi di un animale. Ciò è particolarmente importante quando gli animali sono arruolati in più studi tutta unaanno solare in base alla loro stato metabolico. Mentre la loro salute può rimanere relativamente stabile per anni alla volta, quando lo stato metabolico di un animale peggiora, un drammatico aumento nella resistenza all&#39;insulina e intolleranza al glucosio può verificarsi molto rapidamente. I valori di HbA1C consentono per alcuni interpolazione del declino o il miglioramento dello stato di salute dell&#39;animale, fra le procedure previste tre mesi. Per questa ragione, questo metodo è ideale per la caratterizzazione animali utilizzati in diversi studi longitudinali nel corso della loro vita naturale.

<table><tbody><tr><td>Allegra X-15R Centrifuga</td><td></td><td></td><td>al plasma: 4 &#176; C a 3.000 giri/min per 10 min</td></tr><tr><td>Siero per centrifuga</td><td></td><td></td> Sorvall ST16R<td>: 22 &#176; C a 3.000 giri/min per 10 min</td></tr><tr><td>Thermo Scientific -86 &#176; C Congelatore, serie Forma 88000</td><td>Modello: 88500A</td><td></td>Destrosio 50% (D50)Webster 07-8008986 Infuso di glucosio per via endovenosa 3 ml Siringa Luer Lock Midwest Veterinary Suppy prelievi di sangue seriali 5 ml Siringa Luer Lock Midwest Veterinary Suppy soluzione salina eparinizzata 10 ml Siringa Luer Lock Midwest Veterinary Suppy <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> consegna di spugne di garza <td>I.V. D50</td></tr><tr><td>2 x 2</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>366.23000.4</td><td>Usato a secco, con 70% di alcol e 2% di soluzione di clororex</td></tr><tr><td>4 ml di provette per separatore di siero&nbsp;</td><td>Provetta per la raccolta del sangue</td> <td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.45000.4</td> per pannello superchimico</tr><tr><td>K2EDTA, 2 ml</td><td>VWR</td><td>95057-239</td><td>provette per la raccolta del sangue</td></tr><tr><td>Aprotinina, 100 mg</td><td>Sigma</td><td>A1153-100MG</td> provetta <td>per la raccolta del sangue additivo per proteasi</td></tr><tr><td>22 G x 1" Cateteri</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.75250.2</td><td>Catetere per via endovenosa&nbsp;</td></tr><tr><td>Tappo di iniezione con tappo</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.11500.2</td><td>%50 porta per infusione di destrosio</td></tr><tr><td>Nastro poroso, 1/2" x 10 yd</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.85000.2</td><td>mantiene l'aderenza dei cateteri e dell'epatite. Serrature</td></tr><tr><td>Soluzione di clorexidina 2%</td> <td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.08855.3</td><td>sito del catetere di preparazione</td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>VWR</td><td>71001-654</td><td>sito del catetere di preparazione</td></tr><tr><td>laccio emostatico</td><td>Webster</td><td>07-8003432</td><td></td></tr><tr><td>rubinetto a 3 vie</td><td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.28510.4</td><td></td></tr><tr><td>set di prolunga da 37"</td><td>Webster</td><td>07-8454200</td><td>Exel</td></tr><tr><td>50-60cc LL Siringhe</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.12250.2</td><td>Soluzione salina eparinizzata Flush</td></tr><tr><td>250 ml Sacca 0,9% soluzione salina</td><td>Webster</td><td>07-8365593</td><td>Flush</td></tr><tr><td>1.000 U Eparina, 10 ml</td><td>Webster</td><td>07-883-4916</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina (Ketaset) 100&nbsp; mg / ml</td><td>Fort Dodge</td> <td>(AV ordinato)</td><td></td></tr> <tr><td>Strisce reattive per glucosio Precision Xtra 50 / bx</td><td>Abbott (American Diabetes Wholesale)</td> <td>9381599728K7</td><td>test baseline / livelli di glucosio nel sangue T3</td></tr><tr><td>Masimo Rad 57</td><td>DRE</td><td>6052057V</td><td>pulsossimetro</td></tr><tr><td>Pavia termometro rettale</td><td>Patterson</td><td>07-8391335</td><td></td></tr><tr><td>Glucometro Precision Xtra</td><td>Abbott</td><td>9381599728K7</td><td>Glucometro portatile</td></tr></tbody></table>

caratterizzazione di metabolica stato a non umani primati con il endovenosa glucosio test di tolleranza

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

Il test di tolleranza al glucosio per via endovenosa (IVGTT) svolge un ruolo chiave nella caratterizzazione di omeostasi del glucosio. Quando prese insieme con i profili sierici biochimici, comprensivo dei livelli di glucosio nel sangue sia la Fed e digiunato stato, HbA1c, i livelli di insulina, la storia clinica di dieta, la composizione corporea, e lo stato di peso corporeo, una valutazione del controllo glicemico normale e anormale può essere fatto . Interpretazione di un IVGTT avviene attraverso la misurazione delle variazioni dei livelli di glucosio e insulina nel tempo in relazione alla sfida destrosio. I componenti critici da considerare sono: i livelli di picco di glucosio e di insulina raggiunti in relazione a T0 (termine dell&#39;infusione di glucosio), il tasso di clearance del glucosio K derivato dal versante della clearance del glucosio rapida nei primi 20 minuti (T1 a T20), il tempo per tornare al basale del glucosio, e l&#39;area sotto la curva (AUC). Queste misure IVGTT mostrerà cambiamenti caratteristici come mosse omeostasi del glucosio da un t sanoOA malata stato metabolico 5. Qui descriveremo la caratterizzazione dei primati non umani (Rhesus e Cynomolgus macachi), che sono il modello più rilevante degli animali di diabete di tipo II (T2D) negli esseri umani e la IVGTT e profili clinici di questi animali da un magro sano, a dismetabolica obesi, e lo stato 8, 10, 11 T2D.

I risultati mostrati nella Figura 1 sono dimostrative di glucosio e di insulina curve tipiche maturi, sani e diabetici macachi Cynomolgus nel corso di un 30 min IVGTT. I dati provenienti da scimmie diabetiche sane e avanzate sono mostrati al fine di contrastare le ovvie differenze tra gli animali da entrambe le estremità estreme della gamma di caratterizzazione metabolica. Questo protocollo IVGTT è stato usato con successo da in macachi Rhesus con risultati simili gli au...

L&#39;obiettivo di questo protocollo è quello di presentare un metodo standard per eseguire test orale di tolleranza al glucosio per via endovenosa (IVGTTs) per valutare il controllo glicemico nei primati non umani e valutare il loro stato metabolico da sano a dismetabolica.

Caratterizzazione di metabolica Stato a non umani Primati con il endovenosa glucosio test di tolleranza

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

L'obiettivo generale di questo test di tolleranza al glucosio endovenoso, o IVGTT, è caratterizzare l'evoluzione della malattia metabolica nei macachi, passando da uno stato sano a uno stato dismetabolico e iperglicemico. Questo metodo può essere utilizzato per costituire coorti di soggetti stratificati in base al loro stato metabolico, al fine di indagare attraverso studi dietetici o farmacologici l'efficacia terapeutica dei trattamenti per la resistenza all'insulina nel diabete. Il principale vantaggio di questa tecnica è che è semplice da eseguire rispetto ad altre tecniche più lunghe e costose.14-18 ore prima di iniziare la procedura, rimuovere il cibo dalla gabbia del macaco per evitare eventuali variazioni post-prandiali dei valori glicemici. La mattina seguente, pesare l'animale sedato. Successivamente, posizionare il primate in posizione laterale su un tavolo riscaldato per procedure.Ogni 15-20 minuti, utilizzare un pulsossimetro per misurare la frequenza cardiaca e la saturazione periferica di ossigeno nel capillare. Usare un cronometro per misurare la frequenza respiratoria e un termometro per misurare la temperatura per via rettale. Verificare anche a ogni controllo dei parametri clinici che la membrana mucosa intorno alle gengive e alle labbra sia umida e di colore rosa.Dopo aver confermato lo stato di salute di base dell'animale, utilizzare un tagliacapelli per rasare i peli nelle aree in cui verranno inseriti i cateteri, seguito dalla sterilizzazione di entrambe le regioni con alternati passaggi di clorhexidina e alcol al 70%. Quando i siti sono pronti, inserire il primo catetere e collegare l'esca a una soluzione salina eparinizzata mediante un rubinetto a tre vie. Questo è il sito per il prelievo di campionamento del sangue.Fissare il rubinetto a tre vie con del nastro adesivo per assicurarlo al supporto. La posizione del catetere è fondamentale per mantenerne la pervietà e per eseguire prelievi ematici seriali precisi. Pertanto, è importante considerare una regione mediale e più prossimale della vena safena per fissare e manovrare agevolmente il sistema di blocco con soluzione eparinizzata.Quindi, posizionare il secondo catetere e collegare un'apertura per l'infusione di destrosio, seguita dall'amministrazione di un risciacquo di un millilitro di soluzione salina eparinizzata per mantenere pervia la cannula fino all'infusione di destrosio. Fissare l'apertura al braccio con del nastro adesivo per garantirne la stabilità. Quando entrambi i cateteri sono in posizione, prelevare un campione basale e utilizzare un glucometro portatile per misurare il livello di glucosio nel sangue a digiuno.Prelevare un campione di siero per l'analisi chimica standard, nonché un campione di sangue intero per un conteggio completo delle cellule ematiche, al fine di valutare lo stato di salute generale dell'animale. Capovolgere il campione di sangue intero. Dopo ogni prelievo ematico, mescolare i campioni in provette contenenti EDTA con gli inibitori della proteasi.Dopo aver ottenuto i campioni di base, somministrare la dose di destrosio al 50% in 30 secondi attraverso il port di infusione del destrosio. Successivamente, eseguire un flush con cinque millilitri di soluzione salina eparinizzata, in modo da non lasciare residui di destrosio nel port. Al termine dell'infusione, cambiare i guanti, poiché il destrosio residuo potrebbe contaminare i campioni di sangue successivi.Il primo prelievo del campione dopo l'infusione avviene a tre minuti dalla fine dell'infusione di destrosio, seguito da prelievi a T cinque, sette, 10, 15 e 20 minuti, con l'ultimo campione raccolto a T 30 minuti. Centrifugare i campioni per l'analisi di glucosio e insulina entro 10 minuti dal prelievo, quindi aliquotare il plasma in crioprovette per il congelamento e lo stoccaggio a meno 80 gradi Celsius, fino all'analisi successiva dei campioni. Al prelievo del campione a T tre, utilizzare il glucometro portatile per verificare il livello di glucosio nel sangue e confermare l'infusione di destrosio.Dopo aver raccolto l'ultimo campione, rimuovere le cannule applicando pressione sui siti cateterizzati per ottenere l'emostasi, e monitorare l'animale fino al completo recupero. Qui vengono mostrate le tipiche curve di glucosio e insulina ottenute da macachi cynomolgus adulti sani e diabetici nel corso di un IVGTT della durata di 30 minuti. I valori basali di glucosio a digiuno nei macachi sani possono scendere fino a 50-60 milligrammi per decilitro, con un picco iniziale di glucosio plasmatico osservato al tempo T di tre minuti.Questo valore è notevolmente inferiore rispetto all'incremento tipico del glucosio plasmatico osservato negli animali diabetici. Nel corso della procedura, i livelli di glucosio negli animali sani tornano spesso ai valori basali, mentre negli animali dismetabolici e diabetici ciò non avviene. La curva insulinica associata a un animale sano mostra due picchi, corrispondenti a un iniziale rapido calo del glucosio ematico mediato in misura maggiore del normale dagli effetti periferici dell'insulina sul trasporto e sull'assorbimento del glucosio.L'entità di questi effetti periferici, anche durante la prima fase della risposta insulinica, non equivale al contributo del fegato alla riduzione del glucosio, che, durante il picco insulinico secondario più piccolo ma più prolungato, ha l'impatto maggiore sui livelli glicemici attraverso la soppressione della produzione endogena di glucosio. Una volta che un animale è diventato fortemente diabetico, la produzione di insulina in risposta al bolo di destrosio diminuisce drasticamente. I livelli glicemici rimarranno elevati per tutta la durata della procedura.Come per il glucosio, l'eliminazione avviene ora quasi interamente tramite meccanismi indipendenti dall'insulina. Dopo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come l'infusione graduata di glucosio o la clamp euglicemica iperinsulinemica, per rispondere ad ulteriori domande sulla sensibilità all'insulina. Non dimenticare che lavorare con aghi esposti al sangue di macaco può essere estremamente pericoloso, a causa del rischio di esposizione al virus dell'herpes B.Precauzioni, come indossare l'adeguata attrezzatura di protezione personale e prestare la massima attenzione durante la manipolazione di oggetti appuntiti, devono essere sempre osservate durante l'esecuzione di questa procedura.

characterization-metabolic-status-nonhuman-primates-with-intravenous

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Il iperinsulinemico-euglicemico morsetto, o pinza insulina, è il gold standard per valutare l'azione...

Iperinsulinemico-euglicemico Morsetti in Cosciente, Mouse sfrenato

Questo video introduce come eseguire un test di tolleranza al glucosio orale su un topo da laboratorio.

Test di tolleranza al glucosio orale (OGTT): misurazione del metabolismo del glucosio nei topi

L'articolo attuale descrive la generazione e la caratterizzazione metabolica di topi di dieta-federazione di grassi come modello di resistenza all'insulina indotta da dieta e obesità. È dotato di ulteriori protocolli dettagliati per eseguire il test di tolleranza al glucosio orale e la prova di tolleranza dell'insulina, monitoraggio corpo intero alterazioni del metabolismo del glucosio in vivo.

Studio In Vivo del metabolismo del glucosio nei topi di dieta-federazione di grassi utilizzando Test di tolleranza al glucosio orale (OGTT) e Test di tolleranza dell'insulina (ITT)

L'incidenza dell'obesità è in aumento e aumenta il rischio di malattie polmonari croniche. Per stabilire i meccanismi sottostanti e le strategie preventive, animale ben definiti modelli sono necessari. Qui, mettiamo a disposizione tre metodi (prova di tolleranza di glucosio, pletismografia corporea e fissazione del polmone) per studiare l'effetto dell'obesità sui risultati polmonari nei topi.

Prova di tolleranza di glucosio intraperitoneale, misura della funzione polmonare e la fissazione del polmone per studiare l'impatto dell'obesità e metabolismo alterato sugli esiti polmonare

Questo protocollo descrive l'uso di un analizzatore di composizione corporea e sistema di monitoraggio degli animali metabolica per caratterizzare la composizione corporea e parametri metabolici nei topi. Un modello di obesità indotta alimentando grassi viene utilizzato come esempio per l'applicazione di queste tecniche.

Analisi metabolica ingabbiamento in topi alta Fed grasso e della composizione corporea

L'articolo corrente descrive un protocollo dettagliato per il digiuno intermittente isocalorico 2:1 per proteggere e trattare contro l'obesità e il metabolismo alterato del glucosio nei topi selvatici e ob/ob.

Valutazione degli effetti metabolici del digiuno intermittente isocalorico 2:1 nei topi

Questo protocollo dimostra la misurazione accurata e riproducibile del consumo di ossigeno nelle isole pancreatiche dei primati non umani. Le tecniche di caricamento dell'isolotto e il rivestimento della micropiastra forniscono un quadro per la misurazione efficiente della respirazione in altri tipi di sferoidi coltivati.

Analisi del consumo di ossigeno dell'isola pancreatica del primate non umano

Questo studio descrive la misurazione diretta della produzione epatica di glucosio in un modello murino di sindrome dell'ovaio policistico utilizzando un tracciante di glucosio isotopico stabile attraverso la vena della coda sia a digiuno che in stati ricchi di glucosio in tandem.

Valutazione della produzione epatica di glucosio in un modello murino di sindrome dell'ovaio policistico

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare il significato fisiologico dell'impatto dell'attività del tessuto adiposo bruno (BAT) sul metabolismo umano. Ciò si ottiene combinando il carico di carboidrati e la calorimetria indiretta con misurazioni dei cambiamenti sopraclavicolari della temperatura. Questo nuovo approccio può aiutare a sviluppare un bersaglio farmacologico per la termogenesi BAT negli esseri umani.

Utilizzando una combinazione di calorimetria indiretta, termografia a infrarossi e livelli di glucosio nel sangue per misurare la termogenesi del tessuto adiposo bruno nell'uomo

Una batteria di test (IMAP) per l'esecuzione di un'approfondita valutazione di abilità uditive e cognitive contribuiscono alla capacità di ascolto è descritto. E 'veloce da amministrare, a misura di bambino e senza confonde linguistica. Generazione stimolo gestione del protocollo e sono controllati tramite una piattaforma software (RSI-STAR) per garantire procedure replicabili.

Making Sense di Ascolto: La batteria di test IMAP

Impara a eseguire il test di tolleranza al glucosio endovenoso nei macachi per caratterizzare lo stato metabolico e valutare la progressione delle malattie metaboliche. Questo metodo standardizzato supporta la ricerca sul diabete e sull'insulino-resistenza.

Caratterizzazione di metabolica Stato a non umani Primati con il endovenosa glucosio test di tolleranza

Esplora altri video