Name: Preparazione di altamente poroso Coordinamento rivestimenti polimerici su macroporosi Polymer Monoliti di avanzata Arricchimento fosfopeptidi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Impara a preparare monoliti polimerici porosi rivestiti con polimeri di coordinazione per l'estrazione selettiva di fosfopeptidi. Questo metodo combina proprietà di trasporto di massa con elevata capacità di legame per applicazioni proteomiche.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato eseguito presso la Fonderia Molecolare, Lawrence Berkeley National Laboratory e supportato dall'Office of Science, Office of Basic Energy Sciences, Scientific User Facilities Division del Dipartimento dell'Energia degli Stati Uniti, sotto contratto n. DE-AC02–05CH11231. Si ringrazia il sostegno finanziario di F.M. da parte di una borsa di studio ME-Fulbright e di A.S. da parte della Commissione per l'Istruzione Superiore del Pakistan.

NOTA: Prima di iniziare, controllare tutti i fogli competenti, dati materiali (MSDS). Molti dei prodotti chimici utilizzati nelle procedure di sintesi e di applicazione sono tossici. Si prega di seguire tutte le pratiche di sicurezza appropriate e utilizzare attrezzature adeguate di protezione (camice, pantaloni full-length, scarpe chiuse, occhiali di sicurezza, guanti). Si prega di utilizzare tutte le criogeniche dispositivi di protezione individuale durante la manipolazione di azoto liquido per le misure di adsorbimento di azoto (guanti isolanti, visiera). 1. poroso Polymer Monolith preparazione in massa e capillare Formatta colonna <ol><li> Bulk Polymer Monolith per la caratterizzazione <ol><li> Purificare stirene, divinilbenzene e acido metacrilico attraverso una colonna di allumina basica, al fine di rimuovere gli inibitori di polimerizzazione. Introdurre 10 g di allumina basica in una siringa di plastica monouso ml 25 con un tappo in fibra di lana di vetro confezionato nella punta della siringa. Percolare circa 10 ml del monomero attraverso la colonna. </li><li> Caricare i monomeri (50 mg stirene, 100 mg divinilbenzene e 50 mg di acido metacrilico) e gli agenti che formano pori (300 mg toluene e 300 mg) in isoottano un flaconcino di vetro da 1 ml. Aggiungere l&#39;iniziatore della polimerizzazione, 4 mg di 2,2&#39;-azobisisobutirronitrile (AIBN, 1% rispetto ai monomeri). </li><li> Omogeneizzare mediante sonicazione per 10 min. Rimuovere l&#39;ossigeno dissolto con gorgogliamento di azoto attraverso il liquido per 10 min. Sigillare il cappuccio della fiala con parafilm e metterlo in un bagno di acqua a 60 ° C per 6 ore per polimerizzare la miscela. </li><li> Raffreddare a temperatura ambiente e rompere la fiala con attenzione. Trasferire il monolite di polimero in un ditale di estrazione della cellulosa. Porre il ditale di estrazione in una camera di estrazione Soxhlet e assemblare in un pallone a fondo tondo che contiene un volume di metanolo, che è almeno tre volte il volume della camera di estrazione. Assemblare un condensatore per la parte superiore della camera di estrazione. Eseguire l&#39;estrazione Soxhlet facendo bollire il metanoloper 16 ore, assicurando la completa rimozione dei monomeri non reagiti e poro agenti formatura. </li><li> Durante la notte a secco in un forno a vuoto a 60 ° C. Confermare la presenza di gruppi funzionali carbossilici per fissare la PCP Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Misurare la superficie da adsorbimento di azoto porosimetria. </li></ol></li><li> Funzionalizzazione di silice capillari per la preparazione di colonne monolitiche <ol><li> Tagliare 2 m di 100 micron id capillare di silice fusa poliimmide rivestita. Collegare ad una siringa di vetro 0,25-0,50 ml e lavare il capillare con acetone. Rimuovere l&#39;acetone risciacquando capillare con acqua. </li><li> Per attivare il rivestimento di silice interna del capillare, utilizzare una pompa a siringa a fluire una soluzione di NaOH 0,2 M acquosa a 0,25 ml / min per 30 min. Risciacquare con acqua fino a quando l&#39;effluente è neutro. </li><li> Utilizzare strisce di carta pH per verificare dell&#39;effluente pH. Per protonare i gruppi silanolo del capillare, pompare un aqueo 0.2 Msoluzione ci HCl attraverso il capillare a 0.25 ml / min per 30 min. Risciacquare con acqua fino a quando l&#39;effluente è neutro. Sciacquare con etanolo. </li><li> Pompa a 20% (w / w) soluzione etanolica di 3- (trimetossisilil) propil metacrilato (pH 5 regolato con acido acetico) in 0,25 ml / min per 1 ora. In questa fase, il capillare di silice è funzionalizzato con gruppi vinilici per collegare il monolite polimero alla superficie interna capillare. </li><li> Risciacquare con acetone, secco in corrente di azoto e lasciare a temperatura ambiente per una notte prima dell&#39;uso. Tagliare il capillare in brevi pezzi di lunghezza 20 cm. </li></ol></li><li> Preparazione di colonne monolitiche capillari <ol><li> Preparare una miscela di polimerizzazione identico per il polimero monolite bulk (punto 1.1) in una fiala di vetro da 1 ml con un setto di gomma. Aggiungere iniziatore 1% AIBN rispetto ai monomeri. Omogeneizzare mediante sonicazione per 10 min. </li><li> Eliminare la miscela di polimerizzazione con azoto accoppiando un capillare di silice non-funzionalizzatoa un flusso di azoto. <ol><li> Inserire la corrente di azoto capillare attraverso il setto di gomma del flacone ed immergerlo nella miscela di polimerizzazione in modo che l&#39;azoto bolle nel liquido. Lasciare il tappo flacone leggermente allentato per evitare sovrapressione. Purge per 10 min. </li><li> Sollevare il capillare corrente di azoto dalla miscela di polimerizzazione allo spazio di testa della fiala, e chiudere ermeticamente il tappo. Inserire un capillare funzionalizzato attraverso il setto nella miscela di polimerizzazione. L&#39;eccesso di pressione generata nel capillare attraverso l&#39;azoto iniettato spazio di testa pompe miscela di polimerizzazione attraverso il capillare funzionalizzato. </li><li> Raccogliere alcune gocce di miscela di polimerizzazione dall&#39;effluente del capillare per assicurarsi che sia completamente riempito e chiuderlo con un setto di gomma. Prendere il capillare dal flaconcino con molta attenzione e chiudere l&#39;ingresso del capillare con un setto di gomma. </li></ol></li><li> Polimerizzare il mixture contenuta nel capillare in un bagno di acqua a 60 ° C per 6 ore. Raffreddare a temperatura ambiente e tagliare qualche millimetro di entrambe le estremità del capillare. Rimuovere monomeri non reagiti e agenti che formano pori svuotando la colonna con acetonitrile usando una pompa HPLC a 3 ml / min per 30 min. Controllare contropressione della colonna capillare. </li></ol></li></ol> 2. Crescita del ferro benzenetrycarboxylate (FeBTC) PCP <ol><li> La crescita della FeBTC MOPH su una massa Polymer Monolith per la caratterizzazione <ol><li> Macinare il monolite precedentemente essiccato con un mortaio e pestello. </li><li> Immergere 100 mg della polvere monolite in 5 ml di 2 mM FeCl 3 · 6H 2 O in etanolo per 15 min. Filtro a vuoto usando un filtro di nylon (0,22 micron) e lavare la polvere con etanolo. Immergere la polvere monolite in 5 ml di 2 mM di acido 1,3,5-benzenetricarboxylic (BTC) in etanolo per 15 min. Filtro a vuoto usando un filtro di nylon (0,22 micron) e lavare la polvere con etanolo.</li><li> Ripetere il passo numero 2 come desiderato. La crescita del rivestimento metallo-organico finale sarà definito dal numero di cicli richiesti. Tipicamente, vengono eseguiti tra 10 e 30 cicli. Confermare la presenza di nuovi pori mediante adsorbimento di azoto porosimetria. Misurare la quantità di siti di metallo supplementari di analisi termogravimetrica (TGA). </li></ol></li><li> La crescita della FeBTC MOPH su una colonna monolitica capillare per l&#39;arricchimento di fosfopeptidi <ol><li> Utilizzando una pompa a siringa. Lavare il monolite capillare con 2 mM FeCl 3 · 6H 2 O in etanolo per 15 minuti a 2 microlitri / min. Lavare con etanolo per 15 minuti a 2 microlitri / min. Lavare il monolito capillare con un BTC 2 mM in etanolo per 15 minuti a 2 microlitri / min. Lavare con etanolo per 15 minuti a 2 microlitri / min. </li><li> Ripetere il passaggio 1 come desiderato. La crescita del rivestimento metallo-organico finale sarà definito dal numero di cicli eseguiti. </li></ol></li></ol> 3. digestione delle proteine ​​ed Enrichment di fosfopeptidi <ol><li> Digestione delle proteine <ol><li> Sciogliere 0,5 ml di latte scremato in 1 ml di acqua e dividerlo in 200 microlitri frazioni. </li><li> Per la digestione delle proteine ​​aggiungere 160 microlitri 1 M di bicarbonato di ammonio e ditiotreitolo 50 microlitri 45 mM per ogni frazione, per aderire i legami disolfuro. Incubare a 50 ° C in un thermomixer per 15 min. </li><li> Aggiungere gradualmente 50 ml di una soluzione acquosa di iodoacetamide 100 mM, mentre la soluzione raffreddata a temperatura ambiente. Iodoacetamide impedirà la formazione di nuovi legami disolfuro. </li><li> Incubare al buio per 15 min a temperatura ambiente. Aggiungere 1 ml di acqua deionizzata. Aggiungere 2 ug tripsina e digerire le proteine ​​in un thermomixer a 37 ° C per 14 ore. </li><li> Terminare la digestione per acidificazione con 10 ml di 1% di acido trifluoroacetico, e ponendolo nella thermomixer per 5 min a temperatura ambiente. Conservare le proteine ​​digerite a -20 ° C. </li></ol></li><li> Arricchimento di fosfopeptidi utilizzando una colonna capillare MOPH. <ol><li> Lavare la colonna con 100 ml di una miscela 4: 1 di acetonitrile contenente un acido trifluoroacetico 0,1% per 10 minuti a una velocità di flusso di 1 ml / min. Pompa la digestione delle proteine ​​attraverso la colonna, 2 microlitri / min per 30 min. </li><li> Lavare i peptidi non-fosforilati nuovo con una miscela 4: 1 di acetonitrile contenente un acido trifluoroacetico 0,1% per 10 minuti a una velocità di flusso di 1 ml / min. Lavare con acqua per 10 minuti ad una velocità di flusso di 1 ml / min. </li><li> Fosfopeptidi eluire con una soluzione tampone a pH 7 fosfato 250 mM pompato a 1 ml / min per 15 min. Raccogliere il eluente in una fiala e desalt la soluzione con un protocollo standard 19. Preparare un acido / ml 2,5-diidrossibenzoico 2 mg di utilizzarlo come matrice per la spettrometria di matrice laser assistita desorbimento / ionizzazione a tempo di volo di massa (MALDI-TOF-MS). Disegnato 2 ml di acido 2,5-diidrossibenzoico nella punta per eluire il phosphopeptides e individuare direttamente sulla piastra MALDI. </li><li> Analizzare i punti di MALDI-TOF-MS e rigenerare la colonna di lavaggio con acqua e poi il metanolo. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, H., Eddaoudi, M., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+synthesis+of+an+exceptionally+stable+and+highly+porous+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Design and synthesis of an exceptionally stable and highly porous metal-organic framework.</a> Nature. 402, 276-279 (1999).</li>
<li>Kitagawa, S., Kitaura, R., Noro, S. i <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+porous+coordination+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Functional porous coordination polymers.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2334-2375 (2004).</li>
<li>Furukawa, H., Cordova, K. E., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+and+applications+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The chemistry and applications of metal-organic frameworks.</a> Science. 341, 974(2013).</li>
<li>Ma, S., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+storage+in+porous+metal-organic+frameworks+for+clean+energy+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Gas storage in porous metal-organic frameworks for clean energy applications.</a> Chem. Commun. 46, 44-53 (2010).</li>
<li>Li, J. R., Sculley, J., Zhou, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+separations%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for separations.</a> Chem. Rev. 112, 869-932 (2012).</li>
<li>Lee, J., Farha, O. K., Roberts, J., Scheidt, K. A., Nguyen, S. T., Hupp, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+materials+as+catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework materials as catalysts.</a> Chem. Soc. Rev. 38, 1450-1459 (2009).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yang, C. X., Chang, N., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+frameworks+for+analytical+chemistry%3A+From+sample+collection+to+chromatographic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Metal-organic frameworks for analytical chemistry: From sample collection to chromatographic separation.</a> Acc. Chem. Res. 45, 734-745 (2012).</li>
<li>Ahmad, R., Wong-Foy, A. G., Matzger, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+coordination+polymers+as+selective+sorbents+for+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Microporous coordination polymers as selective sorbents for liquid chromatography.</a> Langmuir. 25, 11977-11979 (2009).</li>
<li>Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101%28Cr%29+for+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+substituted+aromatics%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101(Cr) for high-performance liquid chromatographic separation of substituted aromatics.</a> Anal. Chem. 83, 7144-7150 (2011).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+the+coordination+status+of+the+open+metal+sites+in+metal-organic+frameworks+for+high+performance+separation+of+polar+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Control of the coordination status of the open metal sites in metal-organic frameworks for high performance separation of polar compounds.</a> Langmuir. 28, 6802-6810 (2012).</li>
<li>Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-organic+framework+MIL-101+for+high-resolution+gas-chromatographic+separation+of+xylene+isomers+and+ethylbenzene%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Metal-organic framework MIL-101 for high-resolution gas-chromatographic separation of xylene isomers and ethylbenzene.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 49, 1477-1480 (2010).</li>
<li>Chang, N., Gu, Z. Y., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zeolitic+imidazolate+framework-8+nanocrystal+coated+capillary+for+molecular+sieving+of+branched+alkanes+from+linear+alkanes+along+with+high-resolution+chromatographic+separation+of+linear+alkanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Zeolitic imidazolate framework-8 nanocrystal coated capillary for molecular sieving of branched alkanes from linear alkanes along with high-resolution chromatographic separation of linear alkanes.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 13645-13647 (2010).</li>
<li>Yu, L. Q., Xiong, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room+temperature+fabrication+of+post-modified+zeolitic+imidazolate-90+as+stationary+phase+for+open-tubular+capillary+electrochromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Room temperature fabrication of post-modified zeolitic imidazolate-90 as stationary phase for open-tubular capillary electrochromatography.</a> J. Chromatogr. A. 1343, 188-194 (2014).</li>
<li>Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+metal-organic+framework+UiO-66+into+porous+polymer+monoliths+to+enhance+the+liquid+chromatographic+separation+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Incorporation of metal-organic framework UiO-66 into porous polymer monoliths to enhance the liquid chromatographic separation of small molecules.</a> Chem. Commun. 49, 7162-7164 (2013).</li>
<li>Lin, C. L., Lirio, S., Chen, Y. T., Lin, C. H., Huang, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hybrid+metal-organic+framework-polymeric+monolith+for+solid-phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eur.+J%22%5BJournal%5D)">A novel hybrid metal-organic framework-polymeric monolith for solid-phase extraction.</a> Chem. Eur. J. 20, 3317-3321 (2014).</li>
<li>Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+polymer+monoliths%3A+Amazingly+wide+variety+of+techniques+enabling+their+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Porous polymer monoliths: Amazingly wide variety of techniques enabling their preparation.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 902-924 (2010).</li>
<li>Monolithic HPLC Columns. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phenomenex.com/onyx">http://www.phenomenex.com/onyx</a> (2015).</li>
<li>Bia Separations. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.biaseparations.com/">http://www.biaseparations.com/</a> (2015).</li>
<li>Shekhah, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+route+for+the+synthesis+of+metal-organic+frameworks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Step-by-step route for the synthesis of metal-organic frameworks.</a> J. Am. Chem. Soc. 129, 15118-15119 (2007).</li>
<li>Shekhah, O., Fu, L., Belmabkhout, Y., Cairns, A. J., Giannelis, E. P., Eddaoudi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+implementation+of+the+stepwise+layer-by-layer+growth+of+MOF+thin+films+on+confined+surfaces%3A+mesoporous+silica+foam+as+a+first+case+study%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Successful implementation of the stepwise layer-by-layer growth of MOF thin films on confined surfaces: mesoporous silica foam as a first case study.</a> Chem. Commun. 48, 11434-11436 (2012).</li>
<li>Saeed, A., Maya, F., Xiao, D. J., Naham-ul-Haq, M., Svec, F., Britt, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+a+highly+porous+coordination+polymer+on+a+macroporous+polymer+monolith+support+for+enhanced+immobilized+metal+ion+affinity+chromatographic+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Funct.+Mater%22%5BJournal%5D)">Growth of a highly porous coordination polymer on a macroporous polymer monolith support for enhanced immobilized metal ion affinity chromatographic enrichment of phosphopeptides.</a> Adv. Funct. Mater. 24, 5797-5710 (2014).</li>
<li>Krenkova, J., Lacher, N. A., Svec, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+selectivity+via+nanochemistry%3A+Monolithic+capillary+column+containing+hydroxyapatite+nanoparticles+for+separation+of+proteins+and+enrichment+of+phosphopeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Control of selectivity via nanochemistry: Monolithic capillary column containing hydroxyapatite nanoparticles for separation of proteins and enrichment of phosphopeptides.</a> Anal. Chem. 82, 8335-8341 (2010).</li>
<li>Jabeen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silica-lanthanum+oxide%3A+Pioneer+composite+of+rare-earth+metal+oxide+in+selective+phosphopeptides+enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Silica-lanthanum oxide: Pioneer composite of rare-earth metal oxide in selective phosphopeptides enrichment.</a> Anal. Chem. 84, 10180-10185 (2012).</li>
<li>Hussain, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+diamond+nanopowder+for+phosphopeptides+enrichment+from+complex+biological+fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Functionalized diamond nanopowder for phosphopeptides enrichment from complex biological fluids.</a> Anal. Chim. Acta. 775, 75-84 (2013).</li>
<li>Aprilita, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28glycidyl+methacrylate%2Fdivinylbenzene%29-IDA-FeIII+in+phosphoproteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-FeIII in phosphoproteomics.</a> J. Proteom. Res. 4, 2312-2319 (2005).</li>
<li>Lo, C. Y., Chen, W. Y., Chen, C. T., Chen, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+phosphopeptides+from+tryptic+digests+of+proteins+using+iron+oxide+nanocomposites+of+magnetic+particles+coated+with+zirconia+as+the+concentrating+probes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteom.+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of phosphopeptides from tryptic digests of proteins using iron oxide nanocomposites of magnetic particles coated with zirconia as the concentrating probes.</a> J. Proteom. Res. 6, 887-893 (2007).</li>
<li>Aryal, U. K., Ross, A. R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+and+analysis+of+phosphopeptides+under+different+experimental+conditions+using+titanium+dioxide+affinity+chromatography+and+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass.+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry.</a> Rapid Commun. Mass. Spectrom. 24, 219-231 (2010).</li>
<li>Select Iron Affinity Gel Technical Bulletin. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf">https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il polimero monolite originale contiene gruppi funzionali carbossilici in grado di legarsi ai metalli. Coordinare i siti metallici iniziali sul materiale originale, siamo in grado di crescere un rivestimento PCP (Figura 1A), che incorpora una serie di siti di metallo supplementari plasmare una rete microporosa. Questo rende i materiali MOPH presentati attraenti per procedure di estrazione o di purificazione in cui sono coinvolti specie metalliche, come la tecnica cromatografia di affinità con ioni metal...

Polimeri di coordinazione porosi (PCP) sono composti di coordinazione basato su centri metallici collegati da leganti organici di ripetere le entità di coordinamento che si estendono a 1, 2 o 3 dimensioni che possono essere amorfa o cristallina 1-3. Negli ultimi anni, questa classe di materiali porosi ha attirato l&#39;attenzione diffusa a causa della loro elevata porosità, ampia modulabilità chimica, e la loro stabilità. PCP sono stati esplorati per una vasta gamma di applicazioni, tra cui lo stoccaggio del gas, separazione di gas, e catalisi 3-6, e poco tempo fa, le prime applicazioni analitiche di PCP sono stati descritti 7. A causa delle loro avanzate funzionalità chimica ed alta porosità PCP sono stati presi di mira per il loro enorme potenziale per il miglioramento dei processi di depurazione e separazioni cromatografiche, e un certo numero di segnalazioni relative a questo argomento sono stati pubblicati 7-13. Tuttavia, le prestazioni di PCPs non è attualmente in una equivalelivello nt con materiali cromatografici esistenti probabilmente a causa rapida diffusione attraverso le grandi vuoti interparticellari in letti riempiti di questi solidi a causa della loro morfologia in genere di forma irregolare delle loro particelle o cristalli. Questo imballaggio distribuiti irregolarmente porta ad una minore prestazione del previsto, nonché contropressioni alta colonna e indesiderabili morfologie forma del picco 14,15. Al fine di risolvere il problema della diffusione veloce attraverso i vuoti fra le particelle e contemporaneamente migliorare le prestazioni di PCPs per applicazioni analitiche, lo sviluppo di un materiale ibrida basata su un polimero macroporoso monolite 16 che contiene il PCP sulla superficie dei macropori sarebbe auspicabile. Monoliti di polimeri sono self-contained, materiali pezzo unico in grado di sostenere il flusso convettivo attraverso i pori, che li rende una delle alternative più efficienti da bordare imballaggi e sono stati commercializzati con successo da diversi c<html> ompanies 17,18. Monoliti polimeri porosi sono generalmente basati sulla polimerizzazione di un monomero e un reticolante in presenza di porogens, tipicamente miscele binarie di solventi organici. I materiali monolitici ottenuti hanno una struttura microglobular e un&#39;elevata porosità e permeabilità flusso. Un approccio semplice per unificare questi materiali per preparare un monolito polimero contenente un PCP si basa sulla aggiunta diretta di PCPs as-sintetizzati nella miscela di polimerizzazione del monolito. Questo approccio provocato PCPs principalmente sepolto entro un scaffold polimerico, e non essere attivi per l&#39;ulteriore applicazione del materiale finale 14,15. Un diverso approccio sintetico è chiaramente necessaria per, per esempio, sviluppare film uniformi di PCP, o strutture metallo-organici cristallini (MOF) dove la maggior parte dei pori contenute all&#39;interno del cristallo sono accessibili dal macropori del monolite polimero. t &quot;&gt; Qui riportiamo un semplice protocollo per la preparazione di un materiale polimerico ibrido metallo-organici (MOPH) basato su un supporto polimerico macroporoso con gruppi funzionali adatti per il fissaggio di PCPs, che possono essere facilmente implementati come un self-contained singola -piece monolite polimero in un formato colonna con proprietà ottimali per applicazioni a flusso continuo. La procedura di sintesi del polimero è seguita da una soluzione semplice basata temperatura ambiente &#160; metodo per coltivare un rivestimento PCP sulla superficie interna dei pori del monolite 19-20. Come primo esempio, si descrive la preparazione di un ferro da stiro (III) benzenetricarboxylate (FeBTC) film polimerico coordinamento all&#39;interno di un poli macroporoso (acido stirene-divinilbenzene-metacrilico) monolite. Questo metodo è efficace per la preparazione di polveri all&#39;ingrosso così come colonne capillari e il protocollo descritto è facilmente implementabile ad altri PCP. Come esempio delle potenzialità di MOPHs come materiali funzionali per flow-throuapplicazioni gh, abbiamo applicato il sviluppato FeBTC MOPH che contiene un denso strato di Fe (III) centri per arricchire phosphopeptides da miscele proteiche digeriti sfruttando l&#39;affinità di legame di fosfopeptidi a Fe (III). Il protocollo sviluppato 21 comprende tre parti principali: Preparazione del supporto macroporoso monolite polimero organico; la crescita del rivestimento PCP sulla superficie dei pori del monolite; applicazione per l&#39;arricchimento di fosfopeptidi.

<table><tbody><tr><td>Capillari rivestiti in poliimmide</td><td>Polymicro Technologies</td><td>TSP100375</td><td>100 &mu; m i.d.</td></tr><tr><td>3-(trimetossisilil)metacrilato di propile, 98%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>440159</td><td></td></tr><tr><td>stirene, 99%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>W323306</td><td>Grado tecnico</td></tr><tr><td>Divinilbenzene, 80%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>414565</td><td></td></tr><tr><td>Acido metacrilico, 98%</td> <td>Mallinckrodt</td><td>MK150659</td><td></td></tr><tr><td>Toluene, &ge; 99,5%</td> <td>di sostanze chimiche EMD</td><td>MTX0735-6</td><td></td></tr><tr><td>isoottano, &ge; 99,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>650439</td><td></td></tr><tr><td>2,2'-azobisisobutirronitrile, 98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441090</td><td></td></tr><tr><td>Ossido di alluminio (allumina basica)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>199443</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di ferro (III) esaidrato, 97%</td><td>Acido carbossilico Sigma-Aldrich</td><td>236489</td><td></td></tr><tr><td>1,3,5-benzentrico, 95%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>482749</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile, &ge; 99,5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>360457</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di ammonio, &ge; 99,5%</td> Acido trifluoroacetico <td>Sigma-Aldrich</td><td>9830</td><td></td></tr><tr><td>, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich 302031</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanolo, &ge; 99,8%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2854</td><td></td></tr><tr><td>Iodoacetammide, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1149</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43819</td><td></td></tr><tr><td>Sodio fosfato monobasico diidrato, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico diidrato, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71643</td><td></td></tr><tr><td>Acido fosforico, &ge; 85%</td><td></td> Acido 2,5-diidrossibenzoico <td>Sigma-Aldrich</td> 438081<td></td></tr><tr><td>, &ge; 99%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85707</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8003</td><td>Pancreas bovino</td></tr><tr><td>&beta;-caseina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6905</td><td>Latte bovino</td></tr><tr><td>ZipTip puntali per pipette</td><td>Merck Millipore</td><td>ZTC18S096</td><td>resina C18</td></tr></tbody></table>

preparazione di altamente poroso coordinamento rivestimenti polimerici su macroporosi polymer monoliti di avanzata arricchimento fosfopeptidi

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

Descriviamo un protocollo per la preparazione di materiali ibridi basati su rivestimenti polimerici di coordinazione altamente porosi sulla superficie interna di monoliti polimerici macroporosi. L'approccio sviluppato si basa sulla preparazione di un polimero macroporoso contenente gruppi funzionali dell'acido carbossilico e sulla successiva crescita controllata in soluzione passo-passo di uno strato di un polimero poroso di coordinazione sulla superficie dei pori del monolite polimerico. L'ibrido di polimero metallo-organico preparato ha un'elevata superficie specifica dei micropori. La quantità di siti di ferro (III) è aumentata attraverso la coordinazione metallo-organica sulla superficie dei pori del supporto polimerico funzionale. L'aumento dei siti metallici è correlato al numero di iterazioni del processo di rivestimento.
Lo schema di preparazione sviluppato è facilmente adattabile a un formato di colonna capillare. Il polimero poroso funzionale viene preparato come un monolite poroso monoblocco autonomo all'interno del capillare, producendo un dispositivo di separazione a flusso continuo con un'eccellente permeabilità al flusso e una modesta contropressione. La colonna ibrida metallo-polimero organico ha mostrato prestazioni eccellenti per l'arricchimento di fosfopeptidi da proteine digerite e la loro successiva rilevazione mediante spettrometria di massa a tempo di volo di desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice. Il protocollo sperimentale presentato è altamente versatile e può essere facilmente implementato su diversi supporti e rivestimenti di polimeri organici con una pletora di polimeri porosi di coordinazione e strutture metallo-organiche per molteplici applicazioni di purificazione e/o separazione.

Una illustrazione schematica della crescita PCP sulla superficie dei pori del monolito polimero organico è mostrato in Figura 1. In questa figura, illustriamo iniziale Fe (III) atomi trattenuti sulla superficie dei pori del polimero monolite originale coordinato ai gruppi funzionali carbossilici . Utilizzando il protocollo qui descritto aggiuntivo legante organico e Fe (III) ioni vengono aggiunti alla superficie, modellare una rete di coordinamento porosa all&#39;interno del monolite polimero. L...

Viene presentata una procedura per la preparazione di mezzi di separazione ibridi porosi composti da un monolite polimerico macroporoso rivestito internamente da un polimero di coordinazione microporoso ad alta area superficiale.

Preparazione di altamente poroso Coordinamento rivestimenti polimerici su macroporosi Polymer Monoliti di avanzata Arricchimento fosfopeptidi

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è preparare un nuovo materiale di supporto con prestazioni migliorate nell'estrazione selettiva di peptidi fosforilati. Questo risultato si ottiene mediante un'adeguata preparazione di un monolite poroso in polimero capillare dotato di gruppi funzionali appropriati. In primo luogo, una specie metallica viene immobilizzata sui gruppi funzionali di un monolite polimerico, rendendo il supporto selettivo per l'estrazione di peptidi fosforilati.Successivamente viene effettuata una crescita progressiva di più strati del framework metallo-organico al fine di aumentare il numero di siti metallici, incrementando così la selettività nei confronti dei peptidi fosforilati. I risultati mostrano una maggiore selettività nell'estrazione di peptidi fosforilati da digesti proteici, analizzati mediante spettrometria di massa con desorbimento/ionizzazione laser assistita da matrice e tempo di volo. L'arricchimento di peptidi O-fosforilati è generalmente eseguito mediante cromatografia di affinità per ioni metallici, che viene condotta su particelle di silice convenzionali o su particelle polimeriche, impaccate in una colonna cromatografica.Il nostro materiale combina i vantaggi di un monolite polimerico macroporoso, che presenta buone proprietà di trasporto di massa, con l'elevata capacità di legame di un framework organometallico. Raggiungiamo questo risultato facendo crescere in modo sequenziale il framework organometallico a partire dalla superficie del monolite, in modo da ottenere alla fine diversi strati di linee metalliche disponibili per interagire con l'analita. La dimostrazione visiva della preparazione del monolite polimerico e della crescita del framework organometallico è importante perché entrambi i processi sono molto difficili da apprendere. Esistono diversi passaggi fondamentali ai quali è necessario prestare attenzione per ottenere un monolite con buone proprietà superficiali e porosità.Per iniziare, tagliare due metri di capillare in silice fusa rivestito con poliammide e con un diametro interno di 100 micron, collegato a una siringa di vetro da 25 millilitri, e lavare il capillare con acetone. Successivamente, rimuovere l'acetone risciacquando il capillare con acqua. Poi posizionare una siringa di vetro da 250 microlitri riempita con idrossido di sodio acquoso 0,2 molare sulla pompa per siringa ed eluire la soluzione a 0,25 microlitri al minuto attraverso il capillare per 30 minuti al fine di attivare il rivestimento interno in silice.Dopo 30 minuti, risciacquare il capillare con acqua fino a quando l'effluente non risulti neutro. Utilizzare strisce di carta pH per verificare che il flusso abbia pH neutro. Successivamente, caricare nella siringa una soluzione acquosa di acido cloridrico 0,2 molare ed eluire la soluzione attraverso il capillare a una portata di 25 microlitri al minuto per protonare i gruppi ciol; dopo 30 minuti di flusso, risciacquare nuovamente il capillare con acqua fino a quando il flusso non risulti neutro.Una volta che il pH è neutro, risciacquare i capillari con una siringa da 250 microlitri riempita con etanolo al 100%. Successivamente, pompare una soluzione al 20% di tre trimetil propil metacrilato in etanolo a 25 microlitri al minuto per un'ora per funzionalizzare la superficie con gruppi vinilici. In seguito, risciacquare i capillari con acetone e quindi asciugarli con un flusso di azoto.Lasciare riposare i campioni a temperatura ambiente durante la notte, quindi tagliarli in sezioni lunghe 20 centimetri. Preparare la miscela di polimerizzazione in un vial di vetro da un millilitro con settimo di gomma come descritto nel protocollo testuale allegato. Aggiungere 1% di IBN rispetto ai monomeri come iniziatore e sottoporre la miscela a sonificazione per 10 minuti.Successivamente, collegare un capillare in silice non funzionalizzato a una corrente di azoto ed inserirlo attraverso il settimo in gomma nella miscela di polimerizzazione. Allentare leggermente il tappo del vial e far gorgogliare lentamente l'azoto nella miscela per 10 minuti. Trascorsi 10 minuti, sollevare il capillare della corrente di azoto dalla miscela di polimerizzazione allo spazio di testa del vial e chiudere saldamente il tappo.Inserire una delle capillari funzionalizzate attraverso il setto nella miscela di polimerizzazione. Utilizzare l'eccesso di pressione generato dall'azoto per spingere la miscela di polimerizzazione all'interno della capillare funzionalizzata. Far defluire alcune gocce della miscela di polimerizzazione dall'effluente della capillare per assicurarsi che sia completamente riempita, quindi chiuderla con un setto di gomma.Estrarre con molta attenzione la capillare dal flaconcino e chiudere l'ingresso con un setto di gomma; posizionare la miscela contenuta nella capillare in un bagno termico ad acqua a 60 gradi Celsius per sei ore per favorire la polimerizzazione. Al termine, raffreddare la capillare a temperatura ambiente, quindi tagliare alcuni millimetri da entrambe le estremità. Successivamente, utilizzare una pompa HPLC per sciacquare la colonna con acetonitrile a quattro microlitri al minuto per 30 minuti.Questo rimuoverà eventuali monomeri inattivi e agenti formanti scadenti. Verificare la pressione di retrostanta della colonna capillare. Successivamente, sciacquare il monolite capillare in cicli con i reagenti mostrati qui per far crescere il rivestimento metallico organico finale.Lo spessore del rivestimento è determinato dal numero di cicli eseguiti. Lavare i capillari con il rivestimento organometallico preparato utilizzando 100 microlitri di una miscela quattro a uno di trial acetone e acido triacetico acquoso 0,1%. Quindi pompare un digest di proteine attraverso la colonna a due microlitri al minuto.Per 30 minuti, lavare nuovamente i peptidi non fosforilati con una miscela in rapporto 4:1 di acetonitrile acetilato e acido trifluoroacetico acquoso 0,1% per 10 minuti a un flusso di un microlitro al minuto. Lavare con acqua per 10 minuti a un flusso di un microlitro al minuto. Eluire i peptidi fosforilati utilizzando una soluzione tampone fosfato 250 micromolare a pH 7 pompandola attraverso la capillare a un flusso di un microlitro al minuto per 15 minuti, raccogliere l’eluato in un vial e desalare la soluzione seguendo un protocollo standard.Successivamente, preparare una soluzione di due milligrammi per millilitro di acido due cinque diidrossibenzoico in metanolo e mescolare due microlitri di questa soluzione con due microlitri della soluzione di fosfopeptide precedentemente ottenuta. All'interno di una punta da pipetta, applicare direttamente questa miscela sulla piastra di desorbimento laser assistito da matrice per la spettrometria di massa, e lasciare asciugare completamente il campione. Analizzare i punti mediante spettrometria di massa con desorbimento laser assistito da matrice e analisi del tempo di volo; infine, rigenerare la colonna lavandola accuratamente con acqua, seguito da metanolo, in capillari modificati con strati multipli di ferro disponibile.Tre gruppi sono ideali per l'uso nella cromatografia di affinità con ioni metallici immobilizzati; qui vengono mostrati gli spettri ottenuti da proteine digerite prima e dopo l'arricchimento, che evidenziano una notevole selettività per 12 diversi peptidi fosforilati. Esperimenti rappresentativi di caratterizzazione forniscono informazioni preziose sull'emergere di nuovi pori. Di seguito è riportata un'immagine di un monolite in polvere in massa dopo 30 cicli di polimeri coordinati porosi, noti come cicli PCP, ottenuta mediante microscopio elettronico a scansione.Dopo 30 cicli PCP, le dimensioni delle larghezze dei pori nel materiale si sono rivelate inferiori a tre nanometri di diametro rispetto al polimero in massa. L'ibrido presenta una grande quantità di area incrementale con pori di piccole dimensioni. Ciò porta a un aumento dell'assorbimento di azoto in un intervallo di pressioni utilizzando la spettroscopia infrarossa a trasformata di Fourier.L'introduzione iniziale dei gruppi funzionali carbossilici è risultata visibile, così come la crescita del rivestimento dopo 10, 20 e 30 cicli di PCP. Infine, è stata utilizzata l'analisi termogravimetrica per misurare la quantità di siti metallici aggiuntivi accumulati ad ogni ciclo. Qui viene mostrata l'analisi gravimetrica effettuata in un intervallo di temperature, che conferma la presenza di un numero maggiore di siti metallici all'aumentare del numero di cicli.Seguendo questo protocollo, è possibile sviluppare una procedura analoga per diversi centri metallici in ligandi organici al fine di ottenere separazioni efficienti di analiti differenti in base alla loro affinità per un determinato reticolo. Ritengo che materiali compositi come il nostro, che combinano polimeri macroporosi con strutture organometalliche, offrano grandi prospettive nel campo della scienza delle separazioni, poiché possono migliorare notevolmente la selettività, la capacità di legame e l'efficienza complessiva delle separazioni, sia su scala analitica che preparativa.

preparation-highly-porous-coordination-polymer-coatings-on

Research

Ricerca

JoVE Journal

Chemistry

Chimica

Abbiamo usato maggiore plasma deposizione di vapore chimico per depositare pellicole sottili che variano da pochi nm a 100 nm su diverse particelle nanodimensionate di vari materiali. Abbiamo successivamente etch del materiale del nucleo per produrre nanoshells cave cui permeabilità è controllata dallo spessore del guscio. Abbiamo caratterizzano la permeabilità di questi rivestimenti piccoli soluti e dimostrano che queste barriere possono fornire un rilascio prolungato del materiale del nucleo...

Caratteristiche di incapsulamento e di permeabilità di plasma particelle polimerizzate Hollow

Questo video dimostra l'arricchimento a base di biossido di titanio di fosfopeptidi estratti dal tessuto tumorale della prostata. Questi fosfopeptidi arricchiti possono essere utilizzati per applicazioni a valle, come la caratterizzazione delle proteine, per comprendere le vie di segnalazione cellulare coinvolte nella progressione del cancro alla prostata.

Arricchimento di fosfopeptidi a base di biossido di titanio: un metodo per l'isolamento selettivo di fosfopeptidi dalla libreria di peptidi

Questo video illustrerà un metodo rapido e efficiente per metacrilato poli (glicole etilenico), consentendo polimerizzazioni a catena e sintesi idrogel. Si dimostrerà come introdurre in modo simile funzionalità metacrilammide in peptidi, dettaglio metodi analitici comuni per valutare l'efficienza funzionalizzazione, fornire suggerimenti per la risoluzione dei problemi e le modifiche avanzate, e dimostrare le tecniche tipiche di caratterizzazione idrogel.

Forno a microonde assistita Funzionalizzazione di poli (etilene glicole) e On-resina Peptidi per l&#39;uso a polimerizzazione a catena ed idrogel Formazione

Riportiamo protocolli per "polimerizzare" vari tipi di nanoparticelle metalliche incapsulate in polimeri in lunghe catene di "omo-" e "co-polimeri".

Utilizzando Polystyrene-<em&gt; Blocco</em&gt; -poly (Acido acrilico) Rivestiti metallo Nanoparticelle come monomeri per loro omo- e co-polimerizzazione

In questo articolo descriviamo la sintesi interfacciale di polimeri microporosi coniugati (CMP) su substrati sacrificali e la dissoluzione del substrato per la preparazione di nanomembrane CMP indipendenti. Inoltre, descriveremo come le fragili nanomembrane possono essere trasferite ad altri substrati.

Sintesi layer-by-layer e di trasferimento delle Freestanding coniugati microporosi Polymer nanomembrane

L'adesività cellulare è la chiave di molti approcci nella ricerca sui biomateriali e nell'ingegneria tissutale. Viene presentata una tecnica passo-passo utilizzando la chimica umida per la modifica della superficie dell'importante polimero PTFE con peptidi.

Wet Chimica e Peptide immobilizzazione su politetrafluoroetilene per Miglioramento di adesione cellulare

La sintesi delle poliammine-basato del peptide anfifili (PPA) è una sfida significativa per la presenza di multiple azoti ammina, che richiede l'uso giudizioso di proteggere i gruppi per mascherare queste funzionalità reattive. In questo articolo, descriviamo un metodo facile per la preparazione di questi nuova classe di molecole autoassemblanti.

Facile protocollo per la sintesi di auto-assemblaggio basato su poliammina Peptide anfifili (PPA) e biomateriali correlate

Questo protocollo descrive una procedura per estrarre e arricchire fosfopeptidi da linee cellulari di carcinoma della prostata o tessuti per un'analisi della phosphoproteome via basati sulla spettrometria di massa proteomica.

Fosfopeptide arricchimento accoppiata alla spettrometria di massa privo di etichetta quantitativa per indagare il Phosphoproteome nel carcinoma della prostata

Un protocollo dettagliato è descritto per la separazione, identificazione e caratterizzazione di proteoforms nei campioni della proteina mediante capillare zonale elettroforesi-electrospray ionizzazione-spettrometria di massa (CZE-ESI-MS/MS). Il protocollo può essere utilizzato per la caratterizzazione ad alta risoluzione di proteoforms nei campioni della proteina semplice e l'identificazione su grande scala di proteoforms in campioni complessi proteoma.

Proteomica di Top-down su larga scala usando la spettrometria totale in Tandem elettroforesi capillare zona

Un protocollo per la preparazione di poli (acrilato pentafluorofenil) (perle di silice poly(PFPA)) innestato è presentato. La superficie funzionalizzata poly(PFPA) quindi è immobilizzata con anticorpi e utilizzata con successo per la separazione di proteine attraverso immunoprecipitazione.

Preparazione di Poly(pentafluorophenyl acrylate) funzionalizzati SiO2 perline per la purificazione della proteina

Viene presentato un protocollo per la sintesi di oligomeri peptoidi codificati in informazioni e per l'autoassemblaggio di questi peptoidi diretti in sequenza in scale molecolari utilizzando ammine e aldeidi come coppie dinamiche di reazione covalenti e Lewis acida rara terra triflates in metallo come reagenti multiruolo.

Sintesi dei Peptoidi a informazione e del loro autoassemblaggio covalente dinamico diretto in sequenza

Impara a preparare monoliti polimerici porosi rivestiti con polimeri di coordinazione per l'estrazione selettiva di fosfopeptidi. Questo metodo combina proprietà di trasporto di massa con elevata capacità di legame per applicazioni proteomiche.

Preparazione di altamente poroso Coordinamento rivestimenti polimerici su macroporosi Polymer Monoliti di avanzata Arricchimento fosfopeptidi (Video) | JoVE Journal

Preparazione di altamente poroso Coordinamento rivestimenti polimerici su macroporosi Polymer Monoliti di avanzata Arricchimento fosfopeptidi

Esplora altri video