Semplice e assistita da computer Olfattivo Test per Mice

L'obiettivo generale del seguente esperimento è testare la discriminazione olfattiva innata, la preferenza olfattiva o l'evitamento e la sensibilità olfattiva nei topi. Ciò si ottiene esponendo il topo a un nuovo attrattivo o ricorrente e a un odore neutro, che è l'acqua. Nel frattempo, una videocamera registra la sessione comportamentale.

Successivamente, il video viene analizzato nell'immagine J utilizzando le macro fornite per ottenere il tempo trascorso nei parametri dell'odore e dell'acqua. I risultati mostrano la preferenza o il comportamento di evitamento degli odori rispetto all'acqua tra i diversi genotipi sulla base dell'analisi assistita da computer post hoc. Il vantaggio principale del test olfattivo rispetto all'uso di un'arena e di un'arena dedicata è che utilizza un'arena familiare ed è quindi di completamento rapido e configurazione semplice.

Inoltre, utilizza hardware poco costoso che dimostra che la procedura sarà Emmanuel Abry, secondo lo studente nel mio laboratorio. Per questo esperimento, utilizzare topi maschi da tre a cinque mesi, C 57 neri, sei wild type e transgenici. Questa dimostrazione utilizza due linee di sfondamento e controlli del compagno di cucciolata.

Per le arene sperimentali, utilizzare gabbie per topi pulite e sterilizzate con tre centimetri di lettiera. Quindi, prepara la configurazione della fotocamera. Posizionalo a 58 centimetri dal pavimento della gabbia su un supporto per treppiede personalizzato.

Fai dei segni sul bancone per indicare dove dovrebbe essere la posizione della gabbia. Per un'immagine centrale, impostare la fotocamera in modo che registri un video di 320 x 240 pixel a circa 15 fotogrammi al secondo. Per preparare l'esecutore del test, conserva i concentrati di ogni profumo nel solvente quando possibile.

Per il test delle preferenze, preparare una soluzione al 10% in peso in volume di burro di arachidi in olio di arachidi. Per il test di evitamento, avere una soluzione al 98% di acido metilbutirrico. Per il test di sensibilità, raccogliere l'urina femminile da un topo dello stesso ceppo uno o due giorni prima del test.

Trattieni una femmina con la pancia sopra la griglia della gabbia e raccogli le gocce della sua urina in un piatto di plastica. Raccogli campioni da diverse femmine per normalizzare. Per una variabilità individuale, estrarre tutti i campioni in una provetta da 1,5 millilitri e conservarla a meno 20 gradi Celsius.

Per iniziare, abituare gli animali, metterne uno in una gabbia pulita e lasciarlo esplorare. Per cinque minuti l'ambiente della gabbia di prova dovrebbe essere simile a quello della gabbia di casa. Ripetere la fase di assuefazione una volta ogni giorno di test, quando il periodo di assuefazione è terminato, avviare la registrazione e pipettare 60 microlitri di un gradevole profumo.

In questo caso, burro di arachidi su una parete sulla parete opposta, pipettare la stessa quantità di acqua. Un profumo neutro, applicare le gocce a circa 10 centimetri su ogni parete. Ora lascia che l'animale esplori per due minuti, quindi interrompi la registrazione e riporta il topo nella sua gabbia di casa.

Ripetere il processo con ogni mouse da testare. Utilizzo sempre di nuove gabbie di prova. Da tre a cinque giorni Dopo aver eseguito tutti i test di preferenza, eseguire il test di evitamento utilizzando una nuova gabbia di prova.

Per ogni mouse, eseguire il test di evitamento. Come il test di attrazione, sostituisci solo il profumo gradevole con il profumo di evitamento, che è l'acido butirrico a due metili. Per il test di sensibilità, una gabbia può essere riutilizzata tra le prove per lo stesso topo.

Quindi segna il lato dell'acqua della gabbia e preparati a pulire le pareti corte con carta imbevuta di etanolo al 70% tra una prova e l'altra. Il giorno dell'esperimento, fare quattro concentrazioni di urina con la serie di diluizione decupla. Utilizzando acqua distillata doppia, come nel test di evitamento, abituare ogni animale alla sua gabbia di prova per cinque minuti.

Quindi esporre ogni topo all'urina alla diluizione più alta all'inizio, che è da uno a 10.000. Durante la registrazione, applicare la diluizione delle urine sulla gabbia del test e applicare acqua sulla parete opposta. Come fatto per altri test, lascia che l'animale esplori.

Per due minuti. Successivamente, trasferisci l'animale in una gabbia per topi pulita. Dopo che tutti gli animali hanno sperimentato la concentrazione più bassa, pulire tutte le pareti della gabbia di prova e ripetere il test su ciascun topo utilizzando l'urina successiva più concentrata.

Continua questo processo fino a quando l'urina pura non viene testata. Dopo aver raccolto tutti i dati per un esperimento, aprire i video nell'immagine J per la regolazione e l'elaborazione, i cui dettagli sono forniti nel protocollo di testo utilizzando i protocolli descritti. Due diverse linee di knockout.

I gruppi B e C sono stati confrontati con i controlli del gruppo A.A del gruppo T non direzionale dello studente con varianza uguale o disuguale confronta il tempo trascorso tra l'odore e l'acqua all'interno dei genotipi. Confrontare il comportamento tra i genotipi utilizzando un inova unidirezionale. Entrambi i gruppi sperimentali, B e C, non hanno mostrato alcuna preferenza per l'odore attrattivo Nel test di evitamento, la risposta verso l'odore repulsivo di acido metilbutirrico è stata quella prevista per i gruppi A e B, ma il gruppo C non ha mostrato alcun comportamento di evitamento a questo odore.

Nel test di sensibilità, la soglia di attrazione è stata ottenuta sottraendo il tempo trascorso con l'urina dal tempo trascorso con l'acqua, l'urina preferita all'acqua con una diluizione di uno a 1000. Mentre entrambi i gruppi sperimentali, B e c, avevano bisogno di una concentrazione 100 volte maggiore per mostrare una preferenza. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in un paio d'ore se eseguita correttamente, quindi seguendo questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi come l'apprendimento olfattivo e l'estinzione per indagare la plasticità olfattiva e l'apprendimento.