Un trombotica Stroke modello basato sulla transitoria cerebrale ipossia-ischemia

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un modello semplice di ictus trombotico con un'infarto cerebrale stabile e valutare gli effetti protettivi della terapia con attivatore del plasminogeno tissutale, o TPA. In primo luogo, l'induzione di ipossia-ischemia cerebrale transitoria o THI viene dimostrata mediante la doppia legatura dell'arteria carotide comune destra o RCCA e l'esposizione dell'animale legato a condizioni ipossiche per indurre la trombosi. Dopo 30 minuti di condizione ipossica, i due nodi sull'arteria carotide vengono sciolti.

Nell'ultimo passaggio, vengono mostrate la somministrazione e la valutazione degli effetti della terapia con TPA. In alternativa, è possibile analizzare la registrazione in tempo reale del flusso sanguigno cerebrale, la formazione del trombo e il grado di ostruzione dei vasi. Questo modello permette di indurre un ictus trombotico in topi adulti e di studiare il fenomeno sfruttando il loro sistema di coagulazione endogeno.

Vogliamo utilizzare questo modello per studiare come il cervello regola il proprio flusso sanguigno in condizioni di ipotesi di ischemia. Inoltre, lo utilizzeremo per studiare come possiamo migliorare la terapia trombotica. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché può essere difficile mantenere la temperatura corporea corretta e una respirazione regolare durante l'infezione cerebrale.

Passaggi di induzione Almeno 15 minuti prima di iniziare la procedura. Posizionare il lettino chirurgico su un tappetino riscaldante, impostato a 37 gradi Celsius, e collocare un rullo per il collo realizzato dal corpo di una siringa da tre millilitri sul lettino. Impostare il sistema di ipossia per erogare il 2% di isoflurano nel 7,5% di ossigeno, bilanciato dal 92,5% di azoto, e regolare i controllori della temperatura.

Posizionare un topo maschio C57 black six di 10-13 settimane di età e del peso di 22-30 grammi sul lettino chirurgico. Dopo aver confermato l'anestesia mediante pizzicamento del dito del piede, applicare un unguento sugli occhi dell'animale. Estendere gli arti lungo il collo, arrotolarli e fissarli con nastro medico.

Quindi, utilizzando una crema depilatoria, rimuovere i peli dal collo dell'animale e pulire il sito chirurgico. Posizionare ora il letto chirurgico sotto un microscopio stereoscopico ed eseguire un'incisione cervicale destra di 0,5 centimetri nella cute lungo la linea mediana. Utilizzando una pinzetta fine, separare la trachea e il muscolo per esporre l'arteria carotide comune destra e posizionare due suture di seta numero 5 precedentemente tagliate al di sotto dell'arteria.

Separare con attenzione l'arteria carotide dalla nervo vago in vivo, non due suture di seta da cinque zero pre-tagliate e rilasciabili sulla RCCA. Quindi utilizzare suture monofilamento di nylon da quattro zero per chiudere la cute e trasferire rapidamente il topo al sistema di ipossia. Posizionare la maschera facciale sul naso e sulla bocca dell'animale e una sonda rettale in modo da mantenere una temperatura corporea di 37,5 gradi Celsius per tutta la durata della somministrazione di ipossia.

Regolare le lampade a infrarossi dopo 30 minuti. Riposizionare il topo sul lettino operatorio e rimuovere i due punti di sutura. Quindi chiudere la ferita con colla tissutale e riportare il topo nella gabbia, monitorando l'animale fino a quando non si sarà completamente ripreso.

In alternativa, l'imaging con contrasto di speckle laser può essere utilizzato per esaminare il flusso sanguigno cerebrale durante e dopo l'ipossia ischemica. Posizionare l'animale in posizione prona. Successivamente, aprire il cuoio capelluto con un'incisione mediana lunga un centimetro per esporre, senza aprire, il cranio.

Quindi trasferire immediatamente l'animale sul dispositivo di imaging del flusso sanguigno e iniziare la registrazione del flusso ematico cerebrale. Visualizzare le immagini del flusso ematico cerebrale seguendo le istruzioni del produttore, utilizzando il software FLPI per analizzare le regioni selezionate in tempo reale. Per valutare gli effetti della terapia con TPA, somministrare agli animali una iniezione endovenosa nella vena della coda al momento appropriato, dopo l'occlusione transitoria unilaterale della carotide e l'ipossia.

Quindi quantifichi il volume dell'infarto mediante TTC in vivo 24 ore dopo l'ischemia ipossica cerebrale transitoria. Il giorno successivo utilizzi un vibromicrotomo per ottenere sezioni spesse un millimetro. Infine, ottenga una serie di quattro immagini cerebrali sezionate mediante microscopia digitale e utilizzi un software di imaging appropriato per quantificare il volume dell'infarto come rapporto tra l'area bianca dell'infarto e l'area dell'emisfero controlaterale non danneggiato.

Al di là di questa procedura, altri metodi di trombolisi possono essere utilizzati per valutarne gli effetti e il potenziale clinico. Questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'ictus ischemico per esplorare la terapia trombolitica nel cervello.