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DOI: 10.3791/52982-v
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De novo lipogenesi e acido ossidazione β-grassi costituiscono importanti vie metaboliche in epatociti, percorsi che sono perturbate in diversi disordini metabolici, tra cui malattia del fegato grasso. Qui mostriamo isolamento di epatociti primari di topo e descriviamo la quantificazione di ossidazione degli acidi β-grassi e lipogenesi.
L'obiettivo generale di questa procedura è valutare il metabolismo degli acidi grassi negli epatociti primari di topo. Ciò si ottiene prima perfondendo un fegato di topo con digestione, mezzo, rimuovendolo e quindi isolando gli epatociti. Il secondo passo consiste nel coltivare gli epatociti su piastre rivestite di collagene.
Successivamente, gli epatociti vengono trattati con gli interventi sperimentali da testare. Il passaggio finale consiste nell'incubare le cellule in presenza di un substrato radiomarcato. In definitiva, l'analisi a scintillazione liquida viene utilizzata per mostrare gli effetti di vari interventi farmacologici o genetici sull'ossidazione degli acidi grassi o sulla lipogenesi negli epatociti primari.
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