Name: Photopatterning proteine e cellule in acquosa ambiente utilizzando TiO 2 Fotocatalisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: Scopri la fotopatterning di proteine e cellule in ambiente acquoso mediante fotocatalisi al biossido di titanio. Questo metodo consente di creare microdomini selettivi per l'adesione cellulare su scaffold.

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Gli autori ringraziano il Sig. Kotaro Okubo per la gentile assistenza con l'imaging SEM. Questo lavoro è stato sostenuto dalla Japan Society for the Promotion of Science Grant-in-Aid for Basic Research (B) (20310069), dal Grant-in-Aid for Research Activity Start-up (25880021) e da sovvenzioni per la ricerca della Kurata Memorial Hitachi Science and Technology Foundation e della Nippon Sheet Glass Foundation for Materials Science and Engineering.

1. Preparazione di TiO2 Rivestiti vetro Coverslip <ol><li> Numero i coprioggetti usando una punta per tracciare diamante. Questo non solo aiuta a tenere traccia di ogni coprioggetto ma anche per garantire che il lato corretto del campione è rivolta verso l&#39;alto. Pulire i coprioggetti, prima sotto un getto DDH 2 O, poi immergendole in una soluzione piranha (H 2 SO 4: H 2 O 2 = 4: 1). Dopo 10 minuti, risciacquare accuratamente i coprioggetti, 8 volte in DDH 2 O. Asciugare il coprioggetto sotto N 2 flusso. </li><li> Impostare TiO 2 destinazione nel sistema sputtering a radiofrequenza (RF). Fissare i coprioggetti su un supporto campione del materiale sputtering utilizzando un nastro poliimmide. Collocare il supporto del campione nella camera di sputtering. Evacuare la camera fino a quando la pressione raggiunge 2.0 × 10 -4 Pa. </li><li> Introdurre gas Ar nella camera e impostare la pressione di deposizione a 4,0 mTorr. Pur mantenendo l&#39;otturatore chiuso, aumentare gradualmentela potenza RF a 70 W. </li><li> Aprire l&#39;otturatore e sputter per 15 minuti per ottenere una pellicola con uno spessore di 120-150 nm (Figura 1: Fase A). Tasso di crescita del film deve essere derivato per ciascuna macchina. </li></ol> 2. Surface Coating con cellulare repellente Film <ol><li> Hydrophilize superficie TiO 2 trattando il campione con O 2 al plasma, seguendo le istruzioni fornite dal produttore del reattore al plasma. Trattiamo il campione per 5 minuti a 200 W con O 2 flusso di 100 sccm. Immergere il campione in DDH 2 O e confermare che la superficie è superidrofilia. Asciugare accuratamente la superficie sotto N 2 flusso. </li><li> Preparare la soluzione 1 octadecyltrichlorosilane mm (OTS) con l&#39;aggiunta di 39,6 OTS microlitri per 100 ml di toluene. Immergere il campione nella soluzione per 1 ora a RT. Condurre questo passaggio all&#39;interno di un sacchetto 2 guanto -filled N (Figura 1: Fase B). </li><li> Per rimuovere molecole physisorbed, sonicate il campione in toluene, acetone, etanolo, e DDH 2 O per 5 minuti ciascuno, in questo ordine. Sciacquare il campione quattro volte in acqua dolce DDH 2 O e asciugare la superficie sotto N 2 flusso. La superficie deve essere idrofobica con un angolo di contatto di 100-110 °. </li></ol> 3. Ex-Situ Patterning Surface <ol><li> Lavorare in una cappa a flusso laminare, disegnare diversi segni di graffi con una punta per tracciare diamante sulla superficie. I segni aiutano a tenere traccia delle regioni elaborati e anche portare i microscopi a fuoco. Sterilizzare il TiO OTS rivestite 2 immergendo il campione in etanolo al 70% per 5 min. Risciacquare il campione due volte nel sterile DDH 2 O. </li><li> Trasferire il campione in un piatto da 35 mm, e aggiungere 2 ml di terreno di coltura PC12 (vedi punto 4.2). Incubare per oltre 3 ore in un incubatore CO 2 (37 ° C). Questa procedura è destinata a far albumine sieriche assorbono sulla superficie. Albumine adsorbite inibiscono conseguente assorbimento di altri proteins e cellule (Figura 1: fase c). </li><li> Durante l&#39;attesa, impostare il microscopio a fluorescenza invertito. <ol><li> Accendere la lampada ad arco, inserire il cubo di filtro UV, e impostare la lente dell&#39;obiettivo a 20X. </li><li> Misurare l&#39;intensità della luce I (W cm -2) usando un misuratore UV intensità, e calcolare il tempo di irradiazione t (in secondi) per una dose di d (in cm -2 J) come: t = d / I. Ad esempio, per irradiare alla dose di 200 J cm -2 utilizzando una sorgente luminosa di 600 mW cm -2, è richiesta 333 sec di irradiazione. </li><li> Utilizzare un micrometro e chiudere il diaframma di campo per impostare la dimensione della regione da irradiare, ad esempio, 200 micron. </li></ol></li><li> Dopo l&#39;incubazione 3 ore, integrare la media con 200 ml di 3,0 mg ml -1 di collagene di tipo-IV (Col-IV; finali concentrazione di 300 ug ml -1). </li><li> Trasferire il piatto 35 mm al palco microscopio. Trova il graffio marca fuoco il microscopio sulla superficie del campione, e irradiare luce UV con una dose di 200 J cm -2 (Figura 1: Fase D). La zona di irradiazione UV può essere modificata sia regolando l&#39;apertura del diaframma di campo o sostituendo il diaframma di campo con una maschera metallica della geometria arbitrale. </li><li> Sostituire la media con un mezzo di coltura fresco (senza Col-IV), e posizionare il campione torna in incubatrice. </li></ol> Cultura 4. cellulare <ol><li> Routine coltura di cellule PC12 è effettuata su un piatto di plastica rivestita di collagene. <ol><li> Per rivestire un piatto di tessuto-cultura di 60 mm, con Col-IV, prima bagnare la superficie con DDH 2 O e aspirare tutto DDH 2 O. </li><li> Preparare 300 mg ml -1 Col-IV diluendo la soluzione originale (3 mg ml -1) 10x con DDH 2 O. </li><li> Aggiungere 200 ml di 300 mcg ml -1 Col-IV per 60-mm piatto. Lasciate che la soluzione di diffondersi attraverso la superficie. </li><li> Dry tha piatto in una cappa a flusso laminare per circa 1 ora. </li><li> Lavare la superficie due volte con 4 ml di tampone fosfato salino di Dulbecco (D-PBS). Quando non si usa subito il piatto rivestito, lavare il piatto una volta con 4 ml di DDH 2 O. Dopo aspirazione DDH 2 O, riporre il piatto in incubatrice. Cercate di non conserverà per più di due settimane. </li></ol></li><li> Cellule PC12 sono coltivate in un terreno di coltura costituito da: medio (glucosio basso) modificato Eagle Dulbecco + 10% siero fetale bovino + 5% soluzione cavallo penicillina streptomicina siero + 1%. Incubare le cellule in un incubatore CO 2 (37 ° C, 5% CO 2), e sostituire la metà del mezzo ogni altro giorno. Passage cellule prima che raggiungano confluenza. <ol><li> Aspirare il terreno di coltura, e aggiungere 2 ml di PBS + (D-PBS + 10 mg ml -1 albumina di siero bovino (BSA) + EDTA 10 mM) preriscaldata a 37 ° C. Incubare per 5 min a 37 ° C. Battere delicatamente il piatto di staccare tutti cells. </li><li> Raccogliere le cellule in un tubo da 15 ml. Sciacquare il piatto con 3 ml di fresco D-PBS, preriscaldata a 37 ° C. </li><li> Centrifugare la provetta a 150 g per 4 min. </li><li> Aspirare il surnatante e aggiungere 1 ml di mezzo di crescita. </li><li> Per la cultura di routine, dividere le celle 1: 3 a 1: 5. </li></ol></li><li> Per piastra cellule sul campione modificato UV OTS / TiO 2, contare densità cellulare e aggiungere 3,0 x 10 5 cellule in un piatto da 35 mm (Figura 1: Stadio E). Incubare il piatto in incubatrice umidificata (37 ° C, 5% CO 2) per 1-2 giorni. Entrambi fattore di crescita ingenuo e nervoso (NGF), le cellule PC12 -differentiated possono essere utilizzati per gli esperimenti patterning. Per NGF differenziazione, 100 ng ml -1 di 7S-NGF viene aggiunto alla crescita media diversi giorni prima placcatura le cellule sul campione. NGF-differenziazione sembra aumentare la adhesibility delle cellule PC12 e facilita la manipolazione, specialmente nella in-situ e patterningxperiments. </li></ol> 5. In-Situ Patterning Surface <ol><li> Dopo 1-2 giorni di coltura sulla superficie ex situ modificato, confermano che le cellule sono Collegamento e cresce solo sulla regione UV irradiata. Impostare il microscopio, come descritto al punto 3.4. </li><li> Trasferire il campione in un piatto di coltura di tessuti da 35 mm contenente il mezzo di crescita, 100 ng ml -1 NGF (nel caso di utilizzo di cellule NGF dissociati), e 100 mg ml -1 Col-IV. </li><li> Porre la capsula sul palco microscopio. Trovare la posizione appropriata, e irradiare luce UV con una dose di 200 J cm -2 (Figura 1: Fase F, G). La regione permissiva appena creato viene indicato con un asterisco nella figura 1: Punto G. </li><li> Prova a completare l&#39;elaborazione di un singolo campione entro 30 minuti. Dopo l&#39;irraggiamento, trasferire il campione di nuovo nel mezzo senza Col-IV. </li><li> Fare molta attenzione quando si trasporta il piatto con cucellule ltured e trasferimento del campione dal piatto per piatto per evitare il distacco delle cellule fantasia. </li></ol><img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53045/53045fig1highres.jpg" width="700" /> Figura 1. Schema di processo globale. Vedere il testo per i dettagli. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53045/53045fig1large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Nel nostro attuale protocollo, TiO 2 film è stato formato da RF-magnetron sputtering. Favoriamo questo metodo di deposito in quanto ci permette di preparare in modo riproducibile un fotocatalitico TiO 2 film con una rugosità sub-nm. Anche se i processi di deposizione sputtering sono familiari a scienziati dei materiali e ingegneri elettronici, potrebbe non essere abbastanza accessibile per i biologi. In tal caso, TiO 2 film di spin-rivestite sarebbe una scelta alternativa 23. ...

Processi litografia di semiconduttori e suoi derivati ​​- come fotolitografia 1,2, litografia a fascio elettronico 3-6, 7-10 e stampare microcontact - sono diventati uno strumento stabilito in biologia cellulare crescere cellule viventi in una posizione e geometria definita. Il metodo patterning si basa sull&#39;utilizzo di substrati microfabbricati, costituito da micro-isola di cellule permissive rivestimento in uno sfondo non permissive. Tale substrato serve come modello per modello cellule. Queste tecnologie ci hanno fornito i nuovi metodi per progettare cellule e la loro funzione a livello singolo e multi-cellulari, per estrarre le proprietà intrinseche delle cellule, e per aumentare la produttività di base cellulare di screening farmaco 11. Il grado di libertà in patterning cellula sarebbe aumentare notevolmente se la geometria motivo template potrebbe essere modificato in situ, cioè, mentre le cellule sono coltivate sulle surface. I metodi convenzionali per la formazione di pattern non possono essere applicati direttamente qui, dato che elaborano campioni in atmosfera o in vuoto. Sono stati proposti quindi varie nuove tecniche di modificazione superficiale, che si basano, per esempio, su composti fotoreattivi 12,13 o ablazione laser 5,14, solo per citarne alcuni. I metodi proposti sono stati ben recensito da Robertus et al. 15, e più recentemente da Choi et al. 16 e 17 Nakanishi. Qui, in questo articolo, si descrive un nuovo protocollo di in-situ modifica della superficie, che si avvale di decomposizione fotocatalitica di molecole organiche su un biossido di titanio (TiO2) Superficie 18,19. In questo metodo, un film TiO 2 è inserito tra il substrato di vetro e la pellicola organica che interfaccia le cellule, e la pellicola organica viene decomposta in situ irradiando localmente ultravioletta (UV)luce per una regione di interesse (λ &lt;388 nm). Abbiamo dimostrato che il nuovo protocollo può essere utilizzato per creare microdisegni di proteine ​​della matrice extracellulare e le cellule viventi sia ex situ e in situ. TiO 2 è biocompatibile, chimicamente stabile, e otticamente trasparente, cui caratteristiche rende adatto ad introdurre in esperimenti di coltura cellulare. Questo protocollo fornisce una scienza dei materiali a base alternativa per modificare ponteggi coltura cellulare in ambiente coltura cellulare.

<table><tbody><tr><td>Vetrino coprioggetti</td><td>Warner Instruments</td><td>CS-15R15</td> diametro <td>15 mm, spessore #1,5</td></tr><tr><td>Graffiatore diamantato</td><td>Ogura Jewel Industry</td><td>D-Point Pen</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di sputtering RF</td><td>ANELVA</td><td>SPC350</td><td></td></tr><tr><td>TiO2 sputtering target</td><td>Kojundo Chemical Lab</td><td>Ossido di titanio (IV), purezza target</td>, reattore al plasma al <td>99,9%</td></tr><tr><td></td><td>Yamato</td><td>PR301</td><td></td></tr><tr><td>n-ottadeciltriclorosilano (OTS)</td><td>Aldrich</td><td>104817</td><td></td></tr><tr><td>Toluene</td><td>Wako</td><td>204-01866</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per coltura tissutale (35&#160; mm)</td><td>Greiner</td><td>627160</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per coltura tissutale (60&#160; mm)</td><td>BD Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Collagene di tipo IV</td><td>Nitta Gelatina</td><td>Cellmatrix Tipo IV</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di Eagle modificato di Dulbecco (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td>Inattivare a caldo e passare attraverso un 0,22&#160; &#956; m filtrare prima dell'uso</td></tr><tr><td>Siero di cavallo</td><td>Gibco</td><td>26050-088</td><td>Passare attraverso un 0,22&#160; &#956; m filtro prima dell'uso</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina (100x)</td><td>Nacalai tesque</td><td>26253-84</td><td></td></tr><tr><td>7S nerve growth factor (NGF)</td><td>Alomone Labs</td><td>N-130</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Dojindo</td><td>N001</td><td>Soluzione madre in nanoparticella 0,5 M</td></tr><tr><td>TiO2</td><td>Tayca</td><td>TKD-701</td><td></td></tr></tbody></table>

photopatterning proteine ​​e cellule in acquosa ambiente utilizzando tio<sub&gt; 2</sub&gt; fotocatalisi

Photopatterning Proteins and Cells in Aqueous Environment Using TiO2 Photocatalysis

Contaminanti organici adsorbiti sulla superficie del biossido di titanio (TiO 2) possono essere decomposti da fotocatalisi sotto ultravioletta (UV). Qui si descrive l&#39;impiego di TiO 2 fotocatalisi alterare localmente affinità cellule della superficie del substrato un nuovo protocollo. Per questo esperimento, un sottile TiO 2 film era sputtering rivestite su un vetrino di vetro, e la superficie TiO 2 è stato successivamente modificato con un monostrato silano organico derivato da octadecyltrichlorosilane (OTS), che inibisce l&#39;adesione cellulare. Il campione è stato immerso in un mezzo di coltura cellulare, e concentrato luce UV è stata irradiata ad una regione ottagonale. Quando un neuronali PC12 linea cellulare sono state piastrate sul campione, cellule rispettati solo sulla zona UV-irradiati. Mostriamo inoltre che tale modificazione superficiale può essere eseguita anche in situ, cioè, anche quando le cellule crescono sul substrato. Modifica corretta della superficie necessaria una matrice extracellulare protein collagene di essere presente nel mezzo al momento della irradiazione UV. La tecnica qui presentata può potenzialmente essere impiegato in tipi di cellule patterning più per la costruzione di sistemi di co-coltura o di manipolare arbitrariamente cellule in coltura.

Figura 2A mostra un&#39;immagine in sezione microscopia elettronica a scansione (SEM) della TiO 2 film di sputtering depositato. Dall&#39;osservazione, spessore del film è stata stimata essere di circa 150 nm. Notevole ecco la planarità del depositato TiO 2 film. Ulteriori analisi mediante microscopia a forza atomica (AFM) ha rivelato che la radice quadrata media (RMS) rugosità della superficie era di 0,2 nm (Figura 2B). Quando la super...

Descriviamo un protocollo per modificare l'affinità cellulare di una superficie di scaffold in ambiente acquoso. Il metodo sfrutta la fotocatalisi del biossido di titanio per decomporre il film organico nella regione foto-irradiata. Mostriamo che può essere utilizzato per creare microdomini di proteine di impalcatura, sia ex situ che in situ.

Photopatterning proteine ​​e cellule in acquosa ambiente utilizzando TiO<sub&gt; 2</sub&gt; Fotocatalisi

Organic contaminants adsorbed on the surface of titanium dioxide (TiO2) can be decomposed by photocatalysis under ultraviolet (UV) light. Here we describe ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è eseguire una modifica superficiale di un impalcatura per coltura cellulare sfruttando l'attività fotocatalitica del biossido di titanio. Questo viene ottenuto depositando uno strato sottile di biossido di titanio su un coprioggetto di vetro, per poi rivestirlo con un ottadecilsilano al fine di rendere l'intera superficie idrofobica. Come secondo passaggio, il substrato viene bloccato immergendolo in un mezzo di coltura cellulare contenente albumina sierica.L'albumina assorbe sulla superficie e la rende non permissiva all'adesione cellulare. Successivamente, il campione viene trasferito in una soluzione acquosa contenente collagene e viene utilizzata una luce UV focalizzata per irradiare la superficie. Questo consente alle molecole di collagene di assorbirsi selettivamente sulla regione irradiata fotochimicamente, rendendo tale area permissiva all'adesione cellulare.Questo processo può essere ripetuto al fine di ottenere un pattern di molteplici proteine o tipi cellulari. In questo video mostriamo come la regione adesiva delle cellule PC 12 possa essere modificata selettivamente mediante irradiazione UV. Abbiamo avuto per la prima volta l'idea di questo metodo quando abbiamo realizzato che la fotocatalisi del biossido di titanio viene applicata commercialmente per produrre vetri autolavanti, in grado di rimuovere contaminanti organici dalla superficie grazie all'irraggiamento luminoso, dimostrando che la procedura sarà di interesse per un laureando del mio laboratorio.Iniziare numerando i vetrini con un punterello al diamante in modo da garantire che il lato corretto del campione sia rivolto verso l'alto. Successivamente, pulire i vetrini prima sotto acqua bidistillata in corso, quindi immergendoli in soluzione piranha per 10 minuti. Trascorsi 10 minuti, risciacquare i vetrini otto volte in acqua bidistillata ed essiccarli sotto flusso di azoto.Successivamente, posizionare un bersaglio di ossido di titanio in un sistema di sputtering a radiofrequenza, quindi fissare i vetrini puliti sul portacampioni utilizzando un nastro di poliammide, inserire il portacampioni nella camera di sputtering ed evacuare la camera fino a quando la pressione raggiunge 2,0 × 10⁻⁴ pascals. Successivamente, introdurre gas argon nella camera e impostare la pressione di deposizione a 4,0 mPa mantenendo chiuso lo shuter. Aumentare gradualmente la potenza RF a 70 watt.Quindi aprire l'otturatore e sputterizzare per 15 minuti per ottenere un film con uno spessore compreso tra 120 e 150 nanometri. Iniziare asciugando un becher di vetro e le pinzette in un forno a 120 gradi Celsius per 30 minuti. Successivamente, inserire i coverslip in un reattore al plasma e trattare la superficie di biossido di titanio con plasma di ossigeno per cinque minuti a 200 watt con un flusso di ossigeno di 100 centimetri cubi standard al minuto per creare una superficie più idrofila.Quindi rimuovere i campioni e immergerli in acqua doppio distillata per verificare che la superficie sia superidrofila, quindi asciugare completamente la superficie sotto flusso di azoto. Successivamente, trasferire i campioni, il becher asciutto e le pinzette all'interno di un guanto a tenuta stagna riempito di azoto e preparare una soluzione di octodesiltricloroetilene ad una concentrazione di un millimolare, disciolta in toluene. Immergere il campione nella soluzione per un'ora a temperatura ambiente per formare un monolayer autoassemblato sulla superficie dell'ossido di titanio.Quindi rimuovere eventuali molecole di phasor trattando il campione con toluene, acetone ed etanolo. Infine, con acqua bidistillata per cinque minuti ciascuno. Successivamente, risciacquare il campione quattro volte con acqua bidistillata fresca e asciugare la superficie sotto flusso di azoto.Sterilizzare le lamelle rivestite immergendo i campioni in etanolo al 70% per cinque minuti. Successivamente, risciacquare i campioni due volte in acqua distillata sterile. Poi, posizionare il campione in una piastra da 35 millimetri e aggiungere due millilitri di mezzo di crescita per cellule PC12.Incubare i campioni per almeno tre ore in un incubatore tamponato con CO2 a 37 gradi Celsius, lasciando che l'albumina sierica nel mezzo aderi alla superficie dei coverslip durante l'attesa. Configurare il microscopio a fluorescenza invertito accendendo innanzitutto la lampada ad arco. Successivamente, inserire il cubo filtro UV e ruotare l'obiettivo su uno con un ingrandimento di 20 x.Misurare l'intensità della luce con un misuratore di intensità UV e calcolare il tempo di irradiazione per una dose di 200 joule per centimetro quadrato. Successivamente, utilizzare un micrometro dello stage e impostare il diametro della regione da irradiare a 200 micron regolando il diaframma del campo. Dopo l'incubazione di tre ore, integrare il mezzo che ricopre i coprioggetti con 200 microlitri di collagene di tipo quattro a 3,0 milligrammi per millilitro.Quindi trasferire la piastra da 35 millimetri sul palchetto del microscopio e mettere a fuoco il microscopio sulla superficie del campione utilizzando i segni di graffio. Irradiare un'area del vetrino con luce UV a una dose di 200 joule per centimetro quadrato. Poi sostituire il mezzo con due millilitri di mezzo di crescita fresco, contenente NGF e privo di collagene di tipo quattro, e riposizionare il campione nell'incubatrice.Raccogliere le cellule PC 12 differenziate con NGF coltivate in un tubo conico da 15 millilitri e centrifugare il tubo a 150 ×g per quattro minuti. Quindi aspirare il soprannatante e aggiungere un millilitro di mezzo di crescita. Ri-sospendere le cellule pipettando delicatamente su e giù con un emocitometro.Contare la densità cellulare e aggiungere 3,0 × 10⁵ cellule in una piastra da 35 millimetri contenente i coverslip modificati. Incubare la piastra per uno o due giorni in un incubatore con 5% di CO₂ a 37 gradi Celsius, dopo uno o due giorni di coltura sulla superficie modificata XC due. Utilizzare un microscopio per confermare che le cellule si stiano attaccando e crescendo esclusivamente sulla regione irradiata con raggi UV dei coverslip.Quindi aggiungere 67 microlitri di collagene di tipo IV alla piastra con le cellule coltivate in modo che la concentrazione finale di collagene sia di 100 microgrammi per millilitro con il microscopio impostato per la creazione di motivi superficiali. Posizionare la piastra sullo stage del microscopio e posizionare la regione di irradiazione adiacente alla posizione attuale delle cellule. Irradiare il vetrino con luce UV a una dose di 200 joule per centimetro quadrato.Dopo l'irradiazione, sostituire il mezzo con uno privo di collagene e riposizionare il campione nell'incubatore, cercando di completare l'elaborazione di un singolo campione entro 30 minuti. Questa è un'immagine al microscopio elettronico a scansione in sezione trasversale del film di biossido di titanio depositato mediante sputtering. Dall'osservazione, lo spessore del film è stato stimato essere di circa 150 nanometri.È inoltre evidente la planarità del film di biossido di titanio depositato. Un'analisi successiva mediante microscopia a forza atomica ha rivelato che la rugosità quadratica media della superficie era di soli 0,2 nanometri. Il collagene di tipo quattro e la soluzione si assorbono preferenzialmente nella regione irradiata con raggi UV, dove l'albumina viene spostata dal laser.Per dimostrare la versatilità di questo approccio, altre proteine come la fibrina sono state anch'esse impresse utilizzando la stessa tecnica. Qui le cellule stanno crescendo sulla regione della lamella trattata con il pattern XC due e immediatamente accanto ad esse, nell'area definita dalla linea tratteggiata. La lamella è stata recentemente irradiata con raggi UV in situ due e rivestita con collagene di tipo quattro.Nel corso dei successivi cinque giorni, le cellule proliferano e migrano per ricoprire la regione appena codificata. La procedura qui presentata può essere utilizzata per manipolare arbitrariamente cellule in coltura e potenzialmente per creare schemi con più tipi di cellule al fine di costruire elaborati sistemi di co-coltura.

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