Preparazione e caratterizzazione di individuale e Multi-droga Loaded Fisicamente intrappolate polimerici Micelle

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di delineare un processo passo dopo passo di preparazione e caratterizzazione delle cellule caricate con farmaco prima di valutarle negli stati patologici di interesse. Ciò si ottiene preparando le cellule My mediante il metodo di colata con solvente per generare cellule my riproducibili per lo studio. In una seconda fase, vengono valutate la stabilità e le dimensioni del carico cellulare, che determina la capacità delle cellule my di caricare e mantenere concentrazioni clinicamente rilevanti.

Successivamente, viene determinato il tasso di rilascio del farmaco dalle cellule My al fine di garantire che le mie cellule abbiano caratteristiche di rilascio in vitro appropriate prima di valutare la stabilità in vivo. I risultati mostrano che le cellule my stabili generate in modo riproducibile possono fornire una piattaforma per perseguire la somministrazione di farmaci in vari stati patologici sulla base delle tecniche di valutazione qui presentate. Il vantaggio principale di questa tecnica o di metodi esistenti come il caricamento all'equilibrio o i metodi di dialisi, è che le miosine possono essere preparate molto più velocemente con un carico e dimensioni del farmaco riproducibili.

Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia o la diagnosi di vari stati patologici perché i farmaci su scala nanometrica offrono opportunità oltre le forme convenzionali, Generalmente gli individui che stanno appena iniziando potrebbero avere difficoltà con queste tecniche anche se sono semplici perché ancora si arriva a fare gli studi di rilascio, non è possibile valutare l'effetto burst. A dimostrare queste procedure saranno Shaman Duke, il mio studente laureato, e Deepa, la mia collaboratrice. Prima pesare un milligrammo di DTX, un milligrammo di EVR e 15 milligrammi di Peg 4, 000 blocco PLA 2200 per il doppio farmaco my cells o DDM. Dopo la pesatura, sciogliere i farmaci e il polimero in 0,5 millilitri di nitrile di aceto, quindi trasferire la soluzione in un pallone a fondo rotondo da cinque millilitri per formare un sottile film polimerico distribuito dal farmaco facendo evaporare la soluzione di aceto polimero a pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante.

Successivamente, reidratare il film di polimero del farmaco con 0,5 millilitri di acqua deionizzata preriscaldata a 50 gradi Celsius e agitare delicatamente il pallone in un bagno d'acqua a 50 gradi Celsius per formare le cellule del topo. Aggiungere la soluzione in una provetta da centrifuga e centrifugare a 7, 200 volte G per tre minuti. Aspirare la soluzione con un ago e filtrare la soluzione di Micella risultante in una nuova provetta da centrifuga da 1,5 millilitri utilizzando un filtro in nylon da 0,2 micron per rimuovere eventuali farmaci o contaminanti non risolti A questo punto, eseguire l'analisi HPLC in fase inversa con una colonna C otto bilanciata a 40 gradi Celsius in modalità socratica con una fase mobile di prova dell'acetil I e diluire in acqua le mycell appena preparate in prova ace eye a un rapporto di uno a 100 prima dell'analisi mediante HPLC in fase inversa per determinare il carico iniziale del farmaco.

Dopo aver conservato le mie cellule non diluite a temperatura ambiente per 48 ore, preparare campioni freschi diluiti per rivalutare mediante HPLC in fase inversa e determinare la stabilità del farmaco nelle mie cellule nell'arco di 48 ore. Monitora i picchi DTX e DVR a 227 e 279 nanometri con tempi di ritenzione rispettivamente di 1,7 e 5,7 minuti. Presentare i dati come media più o meno la deviazione standard del carico del farmaco.

Successivamente, diluire le mie cellule appena preparate e l'acqua deionizzata in un rapporto da uno a 20 per una concentrazione finale di polimero di 1,5 milligrammi per millilitro. Trasferire la soluzione a un veterinario per la misurazione dinamica della diffusione della luce. Misurare l'intensità del laser al neon ad elio a 173 gradi per determinare la dispersione.

Presenta i dati come la dimensione media Z più o meno la deviazione standard insieme all'indice di polidispersione o PDI della distribuzione. Dopo aver preparato il DDM come descritto in precedenza, caricare 2,5 millilitri di cellule my in una cassetta per dialisi da tre millilitri con un limite di peso molecolare di 7.000 grammi per mole. Posizionare la cassetta in 2,5 litri di tampone fosfato a pH 7,4 da 10 millimolari durante i seguenti intervalli.

Prelevare 150 microlitri di soluzione e sostituirli con 150 microlitri di tampone fresco. Modificare il buffer ogni tre ore per garantire le condizioni di sincronizzazione. Analizzare i campioni utilizzando l'HPLC in fase inversa per determinare la curva di concentrazione del farmaco.

Adattando i dati di rilascio del farmaco basati su un semplice modello di diffusione con un'associazione esponenziale monofase utilizzando il software statistico D-T-X-E-V-R il DDM ha mostrato una stabilità simile nel blocco PEG 2000 PLA 1800 o nel blocco PEG 2000 PLA 2200 nell'arco di 48 ore. Tutte le mie cellule hanno mantenuto il 97% o più del carico iniziale a 48 ore a temperatura ambiente. Sulla base dei risultati della diffusione dinamica della luce, tutte le mie celle hanno mostrato una distribuzione unimodale con valori PDI inferiori a 0,2.

Sulla base dei dati, il rilascio di DTX dalle singole mycells e DDM è stato di circa il 60% in 48 ore. Il rilascio di EVR dalle singole cellule my e DDM è stato rispettivamente del 60% e del 50%. Qui vengono presentati il tempo necessario per il rilascio del 50% del farmaco dalle singole cellule my e DDM e la bontà dei dati di adattamento.

La bontà dell'adattamento della curva per tutte le mie cellule, tranne EVR individuale, le mie cellule è superiore a 0,950, il che significa che l'ipotesi del rilascio del primo ordine è una buona approssimazione per spiegare il rilascio di farmaci dalle singole cellule my e DDM Una volta padroneggiate, queste tecniche possono essere eseguite di routine su una libreria di farmaci e polimeri come le mie cellule nel giro di poche ore o settimane. Durante questa procedura, è importante ricordarsi di caratterizzare completamente le cellule my prima di accedere alla coltura cellulare o ai modelli animali seguendo queste procedure. Altri sistemi di rilascio come il sistema di rilascio liposomiale possono anche essere valutati o caratterizzati al fine di rispondere alla domanda sul ruolo del sistema di rilascio del farmaco nell'efficacia del trattamento.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare e caratterizzare il carico di farmaci sulle mie cellule prima di valutarle nella malattia. Stato di interesse.