Name: Determinazione Preferenze ultrasuoni vocalizzazione nei topi utilizzando un test di riproduzione a due scelta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Scopri come determinare le preferenze per le vocalizzazioni ultrasoniche nei topi utilizzando un test di riproduzione a due scelte. Questo metodo consente di studiare la comunicazione e il comportamento sociale murino.

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Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa-in-Aid per JSPS Fellows a AA; da sovvenzioni-in-Aid per la Ricerca Scientifica sulle zone innovative per JSP Fellows (n 4501 e n 25.132.712) di TK; e da una borsa di progetto di ricerca assegnato dalla Azabu University. figura 2 è ristampato da Kihara, T., Harada, T., e Koshida, N. Wafer-compatibile fabbricazione e le caratteristiche del silicio nanocristallino emettitori di ultrasuoni indotte termicamente. In: Sensori e Attuatori A: fisiche, volume 125, Elsevier, pag. 426, (2006), con il permesso di Elsevier.

<html> Tutte le procedure sono state approvate dal Comitato Etico di Azabu University. Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in una camera insonorizzata. 1. Preparazione degli animali <ol><li> Maschi per la registrazione <ol><li> Ottenere topi maschi sessualmente maturi esperienza in accoppiamento. </li></ol></li><li> Soggetti di sesso femminile <ol><li> Ottenere vergine topi femmina che hanno ospitato da 2 a 5 fratellini per gabbia (di solito 8 - 12 settimane). </li><li> Ottenere striscio vaginale giornaliero per determinare la fase del ciclo estrale prima della prova, secondo McLean 21. Si deve prestare attenzione a ridurre al minimo la stimolazione vaginale per evitare pseudogravidanza. </li><li> Stain gli strisci con Giemsa, e determinare fase del ciclo estrale in base alla presenza o assenza di leucociti, cellule epiteliali cornified e cellule epiteliali nucleate, secondo Nelson 22. </li></ol></li></ol> 2. Dispositivi (Figura 1) _content &quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53074/53074fig1.jpg" /> Figura 1. Schema del due scelta Box Test e dispositivi. I topi possono accedere sale A e B attraverso i piccoli cancelli situati tra loro e la zona neutra. La scatola due scelta e due emettitori ultrasuoni sono posti sul pavimento di una camera insonorizzata. Il microfono è sospeso all&#39;interno della camera insonorizzata. Abbreviazione:. PC, personal computer <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53074/53074fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <ol><li> Per la registrazione <ol><li> Collegare un microfono a condensatore ad ultrasuoni a un PC utilizzando un convertitore USB A / D. </li><li> Impostare il livello di guadagno del convertitore A / D a &quot;7&quot;. </li><li> Dati acustici record in file di formato a 16 bit con una frequenza di campionamento di 400 kHz utilizzando il software di acquisizione audio. </li></ol></li><li> Per la riproduzione <ol><li> Collegare un convertitore D / A al PC utilizzandoun&#39;interfaccia USB. </li><li> Collegare due amplificatori per il convertitore D / A attraverso un attenuatore. (Quest&#39;ultimo dispositivo serve per evitare sovraccarichi.) </li><li> Collegare un emettitore ad ultrasuoni per ogni amplificatore. </li></ol></li></ol> 3. USV registrazione <ol><li> Inserire un topo maschio in piccole (17 x 10 x 11 cm) o medie (21 x 14 x 13 cm) gabbia con un foro di 6 cm di diametro nella parete laterale e il foro coperto con una rete metallica 0,5 cm. Quando si usa una gabbia di medie dimensioni, realizzare una partizione attraverso il centro della gabbia per ridurre l&#39;area. </li><li> Non utilizzare biancheria da letto nella gabbia per evitare fruscii che possono contaminare le registrazioni. </li><li> Collocare un microfono accanto alla mesh. </li><li> Iniziare il monitoraggio ultrasuoni vocalizzazione con l&#39;impostazione di registrazione mostrata al punto 2.1. </li><li> Posizionare un sessualmente maturo topo femmina sia metestrus o diestrus nella gabbia con il topo maschio. </li><li> USV record per 3-5 min. </li></ol> 4. Test Box <ol><li> Costruire la casella prova utilizzando bordo acrilico (Figura 1). Nota: La casella di prova (alta 35 x 20, e x 20 cm) è diviso in tre scomparti: una zona neutra (15 x 20 cm), e sale A e B (20 x 10 cm, ciascuno). Camere A e B hanno ciascuno un foro di 4 centimetri di diametro che è coperto con una rete metallica 0,5 centimetri. I fori e tele si trovano a ciascuna estremità del sale A e B. Fai cancelli (5 x 5 cm ciascuno) tra la zona neutra e camere A e B. </li><li> Per evitare perdite suono isolare ciascun emettitore ultrasuoni, ad eccezione del lato rivolto verso la rete, utilizzando lastre in gomma, loro tenuta alla scatola intorno al perimetro di ciascuna maglia. </li><li> Sigilli di piombo posto su entrambi i lati del muro tra le stanze A e B per l&#39;isolamento acustico. </li></ol> 5. La preparazione per la riproduzione del suono <ol><li> Creazione di riproduzione Suoni <ol><li> Catturare un segmento di 20 secondi di USV dal file registrato utilizzando software di editing audio digitale. </li><li> Selezionare e catturare sfondo noise (0.35 sec) dal file segmento 20 sec USV. Creare un file di rumore di fondo 20 sec ripetendo il segmento rumore. </li><li> Per riprodurre i due file audio contemporaneamente, esportarli come un unico file audio stereo, con un file per il &quot;orecchio sinistro&quot; e l&#39;altro file per il &quot;orecchio destro.&quot; </li><li> Filtrare i file audio utilizzando come filtro passa-alto con un taglio di 40 kHz. </li><li> Ridurre il rumore utilizzando lo strumento di riduzione del rumore in software di post-elaborazione. Selezionare e catturare un segmento del file che contiene USV come il profilo di riduzione del rumore, ed eseguire la riduzione del rumore con il livello 40. </li></ol></li><li> Taratura di riproduzione Suoni <ol><li> Assicurarsi che lo spazio tra gli emettitori di ultrasuoni e il microfono è di 10 cm. </li><li> Per calibrare i livelli di pressione sonora dagli emettitori di ultrasuoni, effettuare il monitoraggio ad ultrasuoni utilizzando la configurazione descritta al punto 2.1. Misurare il livello di pressione sonora dal microfono in decibel (dB). </li><li> Using l&#39;attenuatore e amplificatori, regolare il volume dei USV generati dai emettitori ultrasuoni allo stesso livello di pressione sonora come USV maschi registrate nel passaggio 3. </li><li> Quando si utilizzano i due emettitori di ultrasuoni e un file audio composto da USV e rumore di fondo, verificare che i due emettitori di ultrasuoni presentano lo stesso livello di pressione sonora con un suono di calibrazione (per esempio, un tono puro 75-kHz) prima di eseguire il test comportamentale. </li><li> Quando si riproduce un file audio composto da due flussi di USV, regolare i due livelli di pressione sonora generati allo stesso livello, prima del test. </li></ol></li></ol> 6. Prova a due scelta <ol><li> Posizionare gli emettitori di ultrasuoni dietro le maglie della scatola della prova. </li><li> Chiudere le porte di stanze A e B con un bordo acrilico, e abituare il soggetto femminile alla zona neutra per 30 min. Coprire la scatola con bordo acrilico per evitare che il mouse può sfuggire. </li><li> Avviare la registrazione video utilizzando un CCFotocamera D montata sopra la casella. La telecamera (non mostrato in figura 1) comprende una superficie di tutte tre scomparti. </li><li> Rimuovere il cancello e la copertura di bordo e lasciare la femmina di esplorare liberamente la casella di prova, comprese le zone sane. </li><li> Una volta che la femmina ha indagato due maglie, ed è tornato alla zona neutra, avviare la riproduzione di un file audio di 20 secondi più volte per 5 o 10 minuti. </li><li> Condurre il monitoraggio comportamentale per 5 o 10 minuti. </li><li> Per ridurre stimoli olfattivi indesiderati depositati dal soggetto precedente, pulire le gabbie di prova tra le prove con il 70% di etanolo. </li><li> Accendere il luogo di emettitori di ultrasuoni A e B in modo casuale al fine di evitare pregiudizi inerenti effetto lato verso le camere A o B. </li></ol> 7. Analisi statistica <ol><li> Utilizzando il software comportamentale evento-gol, l&#39;analisi dei seguenti parametri: numero totale delle voci in ogni stanza; durata totale di permanenza in ogni zona mediana; durata totale di permanenza in ogni zona del suono; edurata totale di ricerca di ciascuna maglia davanti ultrasuoni emettitore. Figura 1 illustra ciò che si intende per &quot;zona intermedia&quot; e &quot;zona suono.&quot; Nota: Nei casi in cui il mouse rimane sulla linea di separazione tra le due zone (figura 1, linea tratteggiata) decidere la posizione della direzione della testa. Quando la testa rivolta verso il lato della maglia, è segnato come permanenza nella zona di suono. </li><li> Per ogni parametro comportamentale, confrontare le risposte per camere A e B con un Wilcoxon prova firmato-rank, o t -test in coppia con un livello di significatività di 0.05. </li></ol>

<ol><li>Panksepp, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affiliative+behavior%2C+ultrasonic+communication+and+social+reward+are+influenced+by+genetic+variation+in+adolescent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice.</a> PLoS One. 2 (4), e351(2007).</li>
<li>Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+adult+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice+during+three+types+of+social+encounters%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T+tf/J mice during three types of social encounters.</a> Genes Brain Behav. 10 (1), 44-56 (2010).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+usage+of+female+and+male+mouse+ultrasonic+vocalizations+reveal+only+minor+differences%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The structure and usage of female and male mouse ultrasonic vocalizations reveal only minor differences.</a> PLoS One. 7 (7), e41133(2012).</li>
<li>Merten, S., Hoier, S., Pfeifle, C., Tautz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ultrasonic+vocalisation+in+social+communication+and+divergence+of+natural+populations+of+the+house+mouse+%28Mus+musculus+domesticus%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A role for ultrasonic vocalisation in social communication and divergence of natural populations of the house mouse (Mus musculus domesticus).</a> PLoS One. 9 (5), e97244(2014).</li>
<li>Amato, F. R., Moles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+as+an+index+of+social+memory+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations as an index of social memory in female mice.</a> Behav. Neurosci. 115 (4), 834-840 (2001).</li>
<li>Chabout, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+male+mice+emit+context-specific+ultrasonic+vocalizations+that+are+modulated+by+prior+isolation+or+group+rearing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adult male mice emit context-specific ultrasonic vocalizations that are modulated by prior isolation or group rearing environment.</a> PLoS One. 7 (1), e29401(2012).</li>
<li>Ehret, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+rodent+ultrasounds%E2%80%93a+gate+to+the+understanding+of+sound+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">Infant rodent ultrasounds–a gate to the understanding of sound communication.</a> Behav. Genet. 35 (1), 19-29 (2005).</li>
<li>Holy, T. E., Guo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+songs+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic songs of male mice.</a> PLoS Biol. 3 (1), e386(2005).</li>
<li>Portfors, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+and+functions+of+ultrasonic+vocalizations+in+laboratory+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46 (1), 28-34 (2007).</li>
<li>Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+partial+from+whole+ultrasonic+vocalizations+using+a+go%2Fno-go+task+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice.</a> J. Acoust. Soc. Am. 136 (6), 3401(2014).</li>
<li>Neilans, E. G., Holfoth, D. P., Radziwon, K. E., Portfors, C. V., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+ultrasonic+vocalizations+by+CBA%2FCaJ+mice+%28Mus+musculus%29+is+related+to+spectrotemporal+dissimilarity+of+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Discrimination of ultrasonic vocalizations by CBA/CaJ mice (Mus musculus) is related to spectrotemporal dissimilarity of vocalizations.</a> PLoS One. 9 (1), e85405(2014).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+respond+to+male+ultrasonic+%E2%80%98songs%E2%80%99+with+approach+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Female mice respond to male ultrasonic ‘songs’ with approach behaviour.</a> Biol. Lett. 5 (5), 589-592 (2009).</li>
<li>Musolf, K., Hoffmann, F., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+courtship+vocalizations+in+wild+house+mice%2C+Mus+musculus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic courtship vocalizations in wild house mice, Mus musculus musculus.</a> Anim. Behav. 79 (3), 757-764 (2010).</li>
<li>Asaba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+social+environment+imprints+female+preference+for+male+song+in+iice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Developmental social environment imprints female preference for male song in iice.</a> PloS one. 9 (2), e87186(2014).</li>
<li>Uematsu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+approaches+to+pup+ultrasonic+vocalizations+produced+by+a+nanocrystalline+silicon+thermo-acoustic+emitter%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal approaches to pup ultrasonic vocalizations produced by a nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitter.</a> Brain Res. 1163, 91-99 (2007).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+social+experience+and+gonadal+hormones+on+retrieving+behavior+of+mice+and+their+responses+to+pup+ultrasonic+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog.+Sci%22%5BJournal%5D)">The effects of social experience and gonadal hormones on retrieving behavior of mice and their responses to pup ultrasonic vocalizations.</a> Zoolog. Sci. 27 (10), 790-795 (2010).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pup+odor+and+ultrasonic+vocalizations+synergistically+stimulate+maternal+attention+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pup odor and ultrasonic vocalizations synergistically stimulate maternal attention in mice.</a> Behav. Neurosci. 127 (3), 432-438 (2013).</li>
<li>Shinoda, H., Nakajima, T., Ueno, K., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermally+induced+ultrasonic+emission+from+porous+silicon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Thermally induced ultrasonic emission from porous silicon.</a> Nature. 400 (6747), 853-855 (1999).</li>
<li>Kihara, T., Harada, T., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wafer-compatible+fabrication+and+characteristics+of+nanocrystalline+silicon+thermally+induced+ultrasound+emitters%5BTitle%5D)+AND+%22Sensor.+Actuat.+A-Phys%22%5BJournal%5D)">Wafer-compatible fabrication and characteristics of nanocrystalline silicon thermally induced ultrasound emitters.</a> Sensor. Actuat. A-Phys. 125 (2), 422-428 (2006).</li>
<li>Kikusui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+fostering+experiments+suggest+that+mice+songs+are+innate%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Cross fostering experiments suggest that mice songs are innate.</a> PloS One. 6 (3), e17721(2011).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Vaginal+Lavage%2C+Crystal+Violet+Staining%2C+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> J. Vis. Exp. (67), e4389(2012).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Tomihara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ER-beta+gene+disruption+on+estrogenic+regulation+of+anxiety+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effect of ER-beta gene disruption on estrogenic regulation of anxiety in female mice.</a> Physiol. Behav. 96 (2), 300-306 (2009).</li>
<li>Zheng, Q. Y., Johnson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss+associated+with+the+modifier+of+deaf+waddler+%28mdfw%29+locus+corresponds+with+age-related+hearing+loss+in+12+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Hearing loss associated with the modifier of deaf waddler (mdfw) locus corresponds with age-related hearing loss in 12 inbred strains of mice.</a> Hear. Res. 154 (1-2), 45-53 (2001).</li>
<li>Haga, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+male+mouse+pheromone+ESP1+enhances+female+sexual+receptive+behaviour+through+a+specific+vomeronasal+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The male mouse pheromone ESP1 enhances female sexual receptive behaviour through a specific vomeronasal receptor.</a> Nature. 466 (7302), 118-122 (2010).</li>
<li>Grimsley, J. M., Monaghan, J. J., Wenstrup, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+social+vocalizations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of social vocalizations in mice.</a> PLoS One. 6 (3), e17460(2011).</li>
<li>Sugimoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+strain+differences+in+waveforms+of+ultrasonic+vocalizations+during+male-female+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A role for strain differences in waveforms of ultrasonic vocalizations during male-female interaction.</a> PLoS ONE. 6 (7), (2011).</li>
<li>Hanson, J. L., Hurley, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+presence+and+estrous+state+influence+mouse+ultrasonic+courtship+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Female presence and estrous state influence mouse ultrasonic courtship vocalizations.</a> PLoS One. 7 (7), e40782(2012).</li>
<li>Wang, H., Liang, S., Burgdorf, J., Wess, J., Yeomans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+induced+by+sex+and+amphetamine+in+M2%2C+M4%2C+M5+muscarinic+and+D2+dopamine+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations induced by sex and amphetamine in M2, M4, M5 muscarinic and D2 dopamine receptor knockout mice.</a> PLoS One. 3 (4), (2008).</li>
<li>Moles, A., Kieffer, B. L., D'Amato, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficit+in+attachment+behavior+in+mice+lacking+the+mu-opioid+receptor+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Deficit in attachment behavior in mice lacking the mu-opioid receptor gene.</a> Science. 304 (5679), 1983-1986 (2004).</li>
<li>Hiramoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tbx1%3A+identification+of+a+22q11.2+gene+as+a+risk+factor+for+autism+spectrum+disorder+in+a+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Tbx1: identification of a 22q11.2 gene as a risk factor for autism spectrum disorder in a mouse.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (24), 4775-4785 (2011).</li>
<li>Ey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+deficits+in+social+behaviors+and+ultrasonic+vocalizations+in+later+generations+of+mice+lacking+neuroligin4%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Absence of deficits in social behaviors and ultrasonic vocalizations in later generations of mice lacking neuroligin4.</a> Genes Brain Behav. , (2012).</li>
<li>Roy, S., Watkins, N., Heck, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+ultrasonic+vocalizations+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome+reveals+limited%2C+call+type+specific+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of ultrasonic vocalizations in a mouse model of fragile X syndrome reveals limited, call type specific deficits.</a> PLoS One. 7 (9), e44816(2012).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.

Qui, i risultati di un test rappresentativo hanno mostrato che i topi femmina possono discriminare tra USV maschi artificiali e rumore di fondo (Figura 3). La conclusione che si può trarre da questi risultati è che il segnale di discriminazione si riflette nella durata della permanenza nella stanza e nella zona sonora, e nella durata della ricerca della rete nei primi 5 minuti di test, ma non nei secondi 5 minuti (Figura 3C, E e F). Questi dati indicano che i topi si abituano ai suoni di...

Molti animali usano vocalizzazioni per la comunicazione intraspecifica. Nel topo Mus musculus, uno importante tipo di segnale di comunicazione è vocalizzazioni ultrasoniche (USV), che hanno frequenze superiori a 20 kHz. USV emessi dai topi sono considerati una componente di riconoscimento sociale in maschio-femmina 1-4, femmina-femmina 1, 5, e maschio-maschio 1, 6 interazioni. USV vengono emessi anche da cuccioli quando sono isolate dalla loro madre, che aumenta il suo comportamento-pup recupero, e di conseguenza la sopravvivenza Pup 7. Anche se molti studi hanno analizzato e classificato USV del mouse 8, 9, le risposte comportamentali e meccanismi neurali dell&#39;animale ricevente sono stati meno documentati 10, 11. Quest&#39;ultimo è necessario per chiarire il significato biologico delle diverse caratteristiche di USV. Per rivelare questi meccanismi, l&#39;esperimento di riproduzione è un metodo efficiente. Studi di riproduzione recenti hanno rivelato che femminilei topi sono attratti da USV 12, e che preferiscono USV da maschi che sono diversi dai loro genitori 13, 14. Questo articolo spiega il test di riproduzione utilizzato per valutare USV preferenza nei topi. Una scatola test a due scelta è stata sviluppata in cui due USV differenti possono essere riprodotte contemporaneamente in due compartimenti di un contenitore di prova, come illustrato in Figura 1. Questo tipo di scatola di prova impedisce la contaminazione suono dividendo l&#39;area di prova in tre sottocamere , con muri di piombo. Gli emettitori di ultrasuoni si trovano al di fuori di ogni stanza. Nel muro tra le camere e emettitori di ultrasuoni sono buchi coperti di rete metallica. Topi può muoversi liberamente nelle tre sale, e mostra una &quot;ricerca della rete&quot; comportamento, come se per rispondere a USV riprodotte dagli emettitori di ultrasuoni. In questo test, i topi soggiornare per periodi di durata diversa vicino a un emettitore sonoro o l&#39;altro. Questi parametri possono essere registrati per ottenere un sensibile misu<html> re di preferenza suono. Per riprodurre i USV indietro, silicio nanocristallino emettitori termo-acustico (cioè, &quot;emettitore nc-Si&quot;), sono stati utilizzati come in studi precedenti 15-17. Questi dispositivi sono composti da un elettrodo a film sottile riscaldatore, uno strato di silicio poroso nano, e un wafer di silicio monocristallino. Il file audio digitale viene convertito in un segnale analogico e poi fatto passare attraverso l&#39;elettrodo riscaldatore. Il dispositivo converte i segnali termici derivanti voltaggio-dipendenti in significativo di pressione sonora con bassa distorsione. Questo dispositivo è unico in quanto, a differenza di generatori di suoni comuni che dipendono da vibrazioni meccaniche, può riprodurre il suono senza la necessità di un diaframma. L&#39;emettitore presenta un livello di pressione sonora piatta a frequenze da 20 a 160 kHz (figura 2), e può riprodurre USV murini digitalmente registrate molto accuratamente in termini di durata, frequenza e livello sonoro di pressione 15, 18, ​​19. ve_content &quot;&gt; In un esperimento rappresentativo mostrato in Figura 3, C57BL / 6 (B6) femmine hanno permesso di scegliere tra BALB / c (BALB) USV maschi e rumore di fondo. Inoltre, la Figura 4 mostra la scelta delle femmine B6 e BALB tra riproduzioni USV simultanee da un topo BALB e un maschio B6, come riportato in un precedente studio 14. Le caratteristiche di USV maschili differiscono B6 e BALB ceppi 20. Come mostrato da questi risultati, l&#39;attrattiva di USV può essere valutata con il presente protocollo, in cui i suoni sono registrati da un individuo dal vivo, acusticamente analizzati e riprodotti ad altri individui.

<table><tbody><tr><td>Camera insonorizzata</td><td>Muromachi Kikai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gabbia piccola</td><td>CLEA Japan</td><td>CL-0113-1</td><td></td></tr><tr><td>Gabbia centrale</td><td>CLEA Japan</td><td>CL-0103-1</td><td></td></tr><tr><td>Microfoni a condensatore ad ultrasuoni</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>CM16/CMPA</td><td></td></tr><tr><td>Convertitore A/D</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>UltraSoundGate116H</td><td></td></tr><tr><td>Audio software</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>RECORDER USGH</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Audition 3.0 / Software di editing audio</td><td>Adobe</td><td>Systems Adobe Audition 3.0</td><td></td></tr><tr><td>Emettitore Nc-Si</td><td>Originale</td><td></td><td>non disponibile in commercio ma si prevede di esserlo nel prossimo futuro</td></tr><tr><td>Convertitore D/A</td><td>National Instruments</td><td>NI USB-6251 BNC</td><td></td></tr><tr><td>Attenuator</td><td>Original</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplificatore</td><td>Yamatake</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Windows 7 professionale</td><td></td><td>Intel&reg; core i7-2600K CPU @ 3.4GHz, 8GB RAM, sistema operativo a 64 bit</td></tr><tr><td>Registratore di eventi Excel-macro / Software di punteggio</td><td>di eventi originale</td><td></td><td>Programmato da Naoto Akagawa & Takeru Yamamoto</td></tr><tr><td>CCD Camera</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastre di gomma (realizzate in resina elastomerica)</td><td>Tokyo bouon</td><td>TI-75BK B4</td><td>Tagliarle alla misura corretta http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3</td></tr><tr><td>Giemsa's azur eosin metilene blue solution</td><td>Merck Millipore</td><td>1.09204.0500</td><td></td></tr></tbody></table>

determinazione preferenze ultrasuoni vocalizzazione nei topi utilizzando un test di riproduzione a due scelta

Determining Ultrasonic Vocalization Preferences in Mice using a Two-choice Playback Test

I topi emettono vocalizzazioni ultrasoniche (USV) durante una varietà di condizioni, come l'isolamento dei cuccioli e le interazioni sociali degli adulti. Questi USV differiscono per età, sesso, condizione e background genetico dell'animale emittente. Sebbene molti studi abbiano caratterizzato queste differenze, resta da chiarire se i topi riceventi siano in grado di discriminare tra USV oggettivamente diversi e mostrare preferenze per particolari tratti sonori. Per determinare se i topi possono discriminare tra le diverse caratteristiche degli USV, è stato recentemente sviluppato un esperimento di riproduzione, in cui le risposte di preferenza dei topi a due diversi USV potrebbero essere valutate sotto forma di preferenza di luogo.
Innanzitutto, sono stati registrati gli USV dei topi. Quindi, gli USV registrati sono stati modificati, tagliati di conseguenza ed esportati come file audio stereofonici. Successivamente, le ampiezze USV generate dai due emettitori di ultrasuoni utilizzati nell'esperimento sono state regolate allo stesso livello di pressione sonora. Gli emettitori termoacustici in silicio nanocristallino sono stati utilizzati per riprodurre gli USV. Infine, per studiare la preferenza dei topi soggetti rispetto agli USV selezionati, coppie di due diversi segnali USV sono state riprodotte simultaneamente in una scatola di test a due scelte. Entrando ripetutamente in una zona definita vicino a un emettitore di ultrasuoni e cercando la rete metallica davanti all'emettitore, il mouse rivela la sua preferenza per un suono rispetto a un altro. Questo modello consente di confrontare l'attrattiva delle varie caratteristiche degli USV di topo, in vari contesti.

I USV registrate da un topo BALB-maschio (161 sillabe per 20 sec), così come rumore di fondo sono stati utilizzati come riprodurre suoni nell&#39;esperimento rappresentante illustrato nella figura 3. In questo esperimento, 7 topi B6 femminili sono stati usati a 9 settimane di età . Per determinare la migliore durata della prova della risposta femminile di riproduzione suoni, i parametri comportamentali sono state analizzate separatamente per i primi e gli ultimi cinque minuti del tempo di collaudo total...

Le vocalizzazioni ultrasoniche (USV) nei topi differiscono a seconda dell'età, del sesso, della condizione e del background genetico. Utilizzando due emettitori di ultrasuoni che trasmettono simultaneamente in luoghi diversi, questo test a due scelte può valutare il riconoscimento murino e le risposte delle preferenze a diverse caratteristiche degli USV.

Determinazione Preferenze ultrasuoni vocalizzazione nei topi utilizzando un test di riproduzione a due scelta

Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, ...

L'obiettivo generale di questa procedura è determinare le preferenze relative alle vocalizzazioni ultrasonore o USV nei topi mediante un test di riproduzione a scelta multipla. Questo viene realizzato innanzitutto registrando le USV da un soggetto vivo. Il secondo passaggio consiste nell'editing e nel ritaglio delle USV registrate in modo appropriato e nella generazione di file audio stereofonici.Successivamente, gli emettitori ad ultrasuoni vengono calibrati e il volume degli ultrasuoni vocalizzati (USV) viene regolato. Utilizzando l'attenuatore e gli amplificatori, l'ultimo passaggio consiste nell'introdurre il topo sottoposto al test nella scatola e avviare la riproduzione simultanea dei due file audio. In definitiva, il monitoraggio del comportamento può rivelare se il topo mostra una preferenza per un suono rispetto all'altro.Gli emettitori di ultrasuoni che abbiamo sviluppato possono aiutarci a rispondere a domande fondamentali riguardo le comunicazioni vocali dei miei soggetti, come ad esempio i partecipanti e il significato biologico di diversi tipi di ultrasuoni. Il principale vantaggio del nostro emettitore rispetto ai dispositivi esistenti, come i trasduttori piezoelettrici, è che la risposta in frequenza non presenta picchi risonanti. L'emissione broadband nell'ultrasuono, priva di distorsioni armoniche, rende possibile utilizzare l'emettitore per riprodurre complessi segnali acustici di comunicazione.Questo metodo può fornire informazioni sulla risposta delle femmine nei confronti di maschi o di altri individui di sesso maschile. Può essere applicato anche ad altri tipi di interazione sociale, come tra madre e piccoli, tra maschi adulti e tra femmine adulte. Per iniziare, procurarsi topi maschi sessualmente esperti e topi femmine vergini, monitorando il ciclo estrale mediante prelievo giornaliero di tamponi vaginali.Colorare i preparati con Giza e determinare la fase del ciclo esra secondo le procedure standard. Per registrare le vocalizzazioni ultrasoniche o US v., collegare un microfono a condensatore ultrasonico a un PC utilizzando un convertitore analogico-digitale USB.Impostare il livello di guadagno sul convertitore analogico-digitale a sette per registrare i dati acustici in 16 bit. Formattare i file con una frequenza di campionamento di 400 kilohertz utilizzando un software di acquisizione audio per la riproduzione del suono, collegare un convertitore digitale-analogico al PC e quindi collegare due amplificatori al convertitore digitale-analogico attraverso un attenuatore. Riparare una piccola gabbia con un foro nella parete laterale del diametro di sei centimetri. Coprire il foro con una rete metallica da 0,5 centimetri.Evitare l'uso di lettiera o qualsiasi altro materiale che possa produrre rumori di fruscio e contaminare la registrazione. Posizionare il microfono a ultrasuoni accanto al foro coperto da rete. Quando si è pronti.Posizionare un topo maschio e una femmina sessualmente matura in fase di estro o diestro nel recinto. Registrare gli ultrasuoni per tre-cinque minuti.La scatola di prova è divisa in tre compartimenti: una zona neutra e le stanze A e B, ciascuna con un cancello. Separare la zona neutra dalle altre stanze. Le stanze A e B presentano ciascuna un foro di quattro centimetri coperto con una rete metallica all'estremità.Posizionare l'emettitore ad ultrasuoni contro la griglia e circondarlo con piastre di gomma per prevenire perdite acustiche. Posizionare sigilli di piombo su entrambi i lati della parete tra le stanze A e B per l'isolamento acustico al fine di creare i suoni di riproduzione. Acquisire un segmento numero 22 di USB dal file registrato in precedenza.Utilizzando un software di editing audio digitale, selezionare e acquisire il rumore di fondo da questo segmento e creare un file di rumore di fondo di 22 secondi ripetendo il segmento di rumore per riprodurre contemporaneamente i due file audio. Esportarli contemporaneamente come un unico file audio stereo, con un file destinato all'orecchio sinistro e l'altro all'orecchio destro. Filtrare i file audio utilizzando un filtro passa-alto con una frequenza di taglio di 40 kilohertz.Ridurre il rumore utilizzando lo strumento di riduzione del rumore. Nel software di post-elaborazione, selezionare e acquisire un segmento del file che non contenga ultrasuoni come profilo di riduzione del rumore ed eseguire la riduzione del rumore con livello 40 per calibrare i livelli sonori durante la riproduzione. Posizionare innanzitutto il microfono a 10 centimetri di distanza dagli emettitori di ultrasuoni.Avviare la riproduzione e misurare il livello di pressione sonora in decibel. Utilizzare l'attenuatore e gli amplificatori per regolare il volume degli ultrasuoni emessi dagli emettitori a ultrasuoni allo stesso livello di pressione sonora degli ultrasuoni maschili.Registrato in precedenza. Verificare che i due emettitori ad ultrasuoni presentino lo stesso livello di pressione sonora utilizzando un suono di calibrazione durante la riproduzione di un file audio composto da due flussi di ultrasuoni. Regolare i due livelli di pressione sonora generati in modo che siano uguali.Per iniziare il test a scelta multipla, chiudere le porte delle stanze A e B e abituare il soggetto femmina alla zona neutra. Per 30 minuti, coprire la scatola con una lastra di acrilico per impedire la fuga. Dopo 30 minuti, registrare l'intera procedura utilizzando una videocamera posizionata sopra la scatola.Rimuovere la barriera e permettere alla femmina di esplorare liberamente il resto della scatola di prova, inclusi le zone sonore. Una volta che la femmina ha esaminato entrambi i cerchi in rete ed è tornata alla zona neutra, iniziare a riprodurre il 22° file audio preparato in precedenza. Monitorare il comportamento dell'animale per cinque-dieci minuti riproducendo ripetutamente il file audio.Alterare casualmente la posizione degli emettitori ad ultrasuoni per evitare di creare un bias laterale tra le due stanze. I topi femmina non hanno mostrato preferenza tra le stanze A e B quando è stato loro consentito di esplorare le camere prima della riproduzione del suono. Il numero di ingressi nelle stanze è stato simile tra le camere contenenti rumore di fondo o ultrasuoni maschili rispetto a. Tuttavia, i soggetti hanno trascorso un tempo significativamente più lungo nella camera in cui us vs sono stati rigenerati, specialmente nei primi cinque minuti. L'esplorazione della zona centrale non è stata modificata dalla riproduzione del suono.Le femmine hanno trascorso significativamente più tempo nella zona sonora e a esplorare la rete metallica nella camera in cui venivano riprodotti i vocalizzi ultrasonori maschili rispetto a, in particolare, i primi cinque minuti, sia B sei che bub. Le femmine hanno trascorso più tempo a investigare il lato abbinato ai vocalizzi maschili rispetto a quelli di un ceppo diverso.Dopo aver guardato questo video, dovresti avere una buona comprensione di come determinare la preferenza per uno spray in topi utilizzando un test di sapore a scelta multipla. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della ricerca su marchi di studio per esplorare l'interazione uomo-animale. Le USV nei topi differiscono a seconda dell'età, del sesso, delle condizioni e dei background genetici.Seguendo questa procedura, è possibile misurare i profili USB della massa transgenica per determinare se le unità USB di invio e salvataggio sono alterate.

determining-ultrasonic-vocalization-preferences-mice-using-two-choice

Research

Ricerca

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Le vocalizzazioni ultrasoniche dei topi vengono utilizzate come proxy per modellare le basi genetiche dei deficit di comunicazione vocale nei modelli murini per i disturbi neuropsichiatrici. Il presente protocollo descrive tre contesti sperimentali che suscitano in modo affidabile vocalizzazioni ultrasoniche da cuccioli (durante lo sviluppo) e topi adulti (interazioni tra persone dello stesso sesso, interazioni maschio-estro).

Registrazione del mouse ultrasuoni Vocalizations per valutare Comunicazione Sociale

I topi producono un complesso repertorio multisilabico di vocalizzazioni ultrasoniche (USVs). Questi USV sono ampiamente usati come letture per i disturbi neuropsichiatrici. Questo protocollo descrive alcune delle pratiche apprese e sviluppate per indurre, raccogliere e analizzare costantemente le caratteristiche acustiche e la sintassi delle canzoni del mouse.

Eliciting e analisi di canzoni ad ultrasuoni (USV) di topo maschio

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