Name: Umano vasto laterale Biopsia muscolare scheletrico Utilizzando la Weil-Blakesley Conchotome (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Impara la biopsia muscolare del vasto laterale con il conchotome Weil-Blakesley. Questa tecnica percutanea ottiene tessuto sufficiente per istochimica e analisi molecolare con minimo disagio, risultando sicura e ben tollerata in ambito clinico e di ricerca.

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Desideriamo ringraziare i partecipanti allo studio per aver reso possibile questo lavoro e il personale del NIHR Southampton Biomedical Research Centre e del Wellcome Trust Clinical Research Facility, University Hospital Southampton per l'assistenza con le misurazioni dello studio.
Questo lavoro è stato supportato dal NIHR Southampton Biomedical Research Centre, Nutrition, dall'MRC Lifecourse Epidemiology Unit e dall'Università di Southampton. Questo rapporto è una ricerca indipendente del NIHR BRC Funding Scheme. Le opinioni espresse in questa pubblicazione sono quelle degli autori e non necessariamente quelle del NHS, del NIHR o del Dipartimento della Salute. L'AMB è supportata da una borsa di studio per la ricerca clinica NIHR, l'HPP è supportata dal NIHR Southampton Biomedical Research Centre.

Etica dichiarazione: Una descrizione della procedura di biopsia muscolare seguiamo all&#39;interno della nostra istituzione segue ora. La procedura di biopsia muscolare viene utilizzata nel Hertfordshire Sarcopenia studio che è stato approvato dal Comitato di ricerca numero di Hertfordshire 07 / Q0204 / 68. Tutti i partecipanti hanno dato consenso informato scritto 20. NOTA: un singolo operatore può eseguire la procedura, aiutato da un assistente che può coinvolgere il partecipante in una conversazione al fine di ridurre l&#39;ansia e garantire che essi sono confortevoli in ogni momento. La camera procedura deve essere dotato di un lavandino, un&#39;altezza divano registrabile, superfici pulite e un carrello procedimento. 1. Preparare il partecipante (Figura 2) <ol><li> Chiedere al partecipante di porre comodamente, in posizione supina su un divano. Esporre la coscia preferito dalla piega inguinale. Stendere un foglio assorbente usa e getta sotto la coscia esposto. Assicurarsi che la gamba rimane dritta e rilassata durante tutta la procedura, mala coscia è teso a delineare momentaneamente vasto laterale. </li><li> Segna il sito procedura di circa due terzi verso il basso una linea immaginaria dalla spina iliaca anteriore superiore alla rotula. </li></ol> 2. Preparare la pelle (Figura 2) <ol><li> Radere la pelle per circa 4 cm di diametro che circonda il sito biopsia proposto con una lama da barba sterile e pulire la pelle con un tampone imbevuto di alcool. NOTA: Questo per evitare ogni successiva intrappolamento dei capelli nella ferita durante il processo di guarigione. Questo passaggio è opzionale in base alle preferenze dell&#39;operatore. </li><li> Infiltrati nella pelle e la fascia sovrastante con anestesia locale. Utilizzare un ago da 25 G a sollevare una bozza sottocutanea di 2% lidocaina poi infiltrarsi più in profondità nel tessuto sottocutaneo con un ago 23 G. Obiettivo a penetrare almeno alla metà di un pollice a seconda del tenore di tessuto sottocutaneo nel sito bioptico. Questa profondità dovrebbe essere sufficiente a garantire le fas sovrastanticia è anestetizzato. Lasciare 2-5 minuti per l&#39;anestetico ad azione. Confermare l&#39;anestesia sondando delicatamente la pelle con l&#39;ago o bisturi punta della lama. </li></ol> 3. Preparare un campo sterile (Figura 2) <ol><li> Lavare le mani con sapone e mantenere le mani pulite fino a quando un camice sterile viene indossato. Coprire le mani con guanti sterili prima di creare un campo sterile sulla procedura di carrello. </li><li> Sterilizzare il sito biopsia con una soluzione di alcool clorexidina / isopropilico 2% o un disinfettante pelle di iodio base. Applicare una garza sterile con un&#39;apertura adesivo per esporre il sito biopsia, ma anche per mantenere un campo sterile. </li></ol> 4. Eseguire la procedura (Figura 2) <ol><li> Con una dimensione 11 bisturi, fare un 5 - mm incisione 10 sulla pelle e giù e attraverso la fascia sovrastante. Inserire la punta mordere chiusa del conchotome attraverso l&#39;incisione ad angolo retto rispetto all&#39;asse longitudinale del femore, per mezzo di profondità media di un pollice. Se l&#39;uso necessariola mano libera per tenere e supportare la coscia circonda il sito biopsia mentre la punta del conchotome viene aperta e chiusa all&#39;interno del muscolo. </li><li> Ruotare il conchotome di 90 - 180 ° per tagliare il muscolo. Ritirare il conchotome e aprire la punta su garza sterile inumidita con soluzione fisiologica sterile. Ripetere la procedura all&#39;interno del sito singola ferita, se necessario, per ottenere il tessuto muscolare sufficiente. Trasferire la garza in un contenitore collocato su ghiaccio. Trasferire il contenitore ad un laboratorio di preparazione per elaborare il muscolo secondo il protocollo istituzionale locale. </li></ol> 5. Procedura Post (Figura 2) <ol><li> Applicare una pressione diretta sulla ferita per un massimo di 5 min. Chiudere la ferita con steri-strips mettendoli parallele alla ferita anziché perpendicolare per evitare di rimuovere potenzialmente tessuto cicatriziale e riaprendo la ferita se i steri-strips vengono rimossi inavvertitamente. Posizionare una medicazione assorbente sterile sulle Steri-strip e cravatta a due stratibendaggio per la compressione e fissare con nastro adesivo. </li><li> Spiegare il metodo medicazione al partecipante come si dovranno eseguire un cambio di medicazione 3 - 4 giorni dopo la procedura. Assicurarsi che il partecipante rimuove il bendaggio compressivo prima di andare a letto più tardi quella sera. </li></ol> 6. Messaggio biopsia Consigli <ol><li> Informare il partecipante che è comune a sperimentare un po &#39;di rigidità coscia che può essere sostituito da ginnastica dolce (ad es., A piedi). Utilizzare semplici analgesici come il paracetamolo. Avvisa il partecipante su intorpidimento transitoria intorno al sito biopsia che può persistere fino a due settimane così come il potenziale complicazione di infezione della ferita. </li></ol> 7. Istruzioni per la procedura di invio Titolo <ol><li> Chiedi ai partecipanti di evitare l&#39;attività vigorosa per 72 ore (come l&#39;arrampicata, corsa, sollevamento di carichi pesanti). Chiedere al partecipante al fine di evitare l&#39;immersione in acqua per 48-72 ore. Tuttavia, istruire il participant per avvolgere pellicola trasparente o simile intorno al sito biopsia quando avere una doccia per mantenere la medicazione secca. </li><li> Chiedere al partecipante di cambiare la medicazione dopo 3 - 4 giorni e rimuovere le Steri-strip dopo una settimana. NOTA: Il partecipante deve essere dato istruzioni scritte per la cura biopsia inviati, medicazioni di ricambio e recapiti di emergenza del team responsabile per l&#39;esecuzione della procedura. </li></ol>

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Nessuno è stato dichiarato.

Per garantire la sicurezza dei partecipanti e di eseguire la biopsia muscolare in modo efficiente, è fondamentale prestare attenzione alle fasi critiche all&#39;interno del protocollo. I partecipanti devono essere selezionati dopo aver esaminato attentamente i criteri di esclusione per evitare complicanze come sanguinamento e la guarigione delle ferite. asepsi rigorosa durante tutta la procedura è essenziale. Applicazione della tecnica corretta garantirà confort partecipante, minimizzare il ...

Ottenere muscolo scheletrico per la diagnosi di una miopatia e altre malattie degenerative neuromuscolari basa su metodi sicuri ed efficaci che sono accettabili e non invalidante ai pazienti 1. Storicamente, metodi per ottenere tessuto muscolare per l&#39;analisi inclusi biopsie aperte eseguite in anestesia generale o dal post mortem. Queste tecniche ha permesso la visualizzazione diretta del muscolo e consentito un pezzo più grande di muscoli per essere sottoposte a biopsia. Date le potenziali svantaggi queste tecniche hanno al paziente in termini di degenza e di recupero, percutanee &#39;semi-aperti &quot;metodi di biopsia muscolare sono stati introdotti come alternative. Questa tecnica è stata prima eseguita da Duchenne (1806-1875), che ha usato un ago di auto-costruito con un trequarti ed è stato in grado di ottenere un campione di muscolo da un soggetto vivente senza anestesia generale 2. Da allora, varie forme di aghi bioptici sono stati utilizzati 3,4,5. Tuttavia, la biopsia nEedle sviluppato da Bergstrom nel 1962 è stato il più comunemente usato nella pratica clinica; sia nei bambini e negli adulti, così come nella ricerca 6,7,8,9,10. Possiede una trocar tagliente, una cannula di taglio ed un&#39;asta di spinta per espellere il palo tessuto bioptico. Rendimenti muscolari da questa procedura sono stati segnalati per variare da 25 -293 mg dopo il campionamento 11,9 ripetuto. Henriksson introdotto il conchotome Weil-Blakesley nel 1979 come metodo biopsia muscolare semiaperto alternativa (figura 1) 12. Lo strumento è una struttura unica differenza del costrutto Bergstrom ed è stata progettata come una pinza con una punta affilata pungente. La dimensione punta può variare da 4 mm a 6 mm di larghezza. Quando i due bordi della punta mordere oppongono, una cavità è formata che assicura la cattura del muscolo. Il conchotome viene inserito attraverso un 5 - mm incisione 10 cutanea ed evita la necessità di un trequarti per penetrare il muscolo e la fascia sovrastante come Scalpel può essere usato per fare una traccia fino al muscolo. Questo metodo permette controllato penetrazione del tessuto con un elevato grado di manovrabilità 13,14. È particolarmente utile per i siti dove indebita pressione potrebbe potenzialmente danneggiare strutture ossee neurovascolari o sottostanti ad es., Nel sito del tibiale anteriore 15,14. rendimenti muscolo tramite il conchotome possono essere variabili e nella nostra pratica 20 - sono stati ottenuti 200 mg di muscoli dopo il campionamento ripetuto. Un vantaggio potenziale del conchotome sull&#39;ago Bergstrom, oltre alla grande manovrabilità che offre, è che la punta mordere non necessita di essere affilati o sostituito spesso trequarti della Bergstrom costrutto 16. L&#39;obiettivo generale di biopsia muscolare utilizzando la conchotome Weil Blakesley è quello di ottenere una quantità sufficiente di tessuto muscolare per permettere istochimica e analisi molecolare sia per la diagnosi e researstudio ch. Si tratta di una procedura semplice e sicura che può essere appresa facilmente. Con questa tecnica, il muscolo adatto per la biopsia comprende bicipiti, tricipiti, deltoidi, gastrocnemio, tibiale anteriore, soleo e le sacrospinals 17,15,7,18,14. La parte più esterna del vasto laterale è il sito più comune utilizzato per la biopsia in quanto evita le principali strutture neurovascolari all&#39;interno della coscia. Si è identificato circa due terzi verso il basso una linea immaginaria che unisce la spina iliaca anteriore superiore e la rotula. Dati morfologia muscolare, ad esempio zona myofibre, proporzioni myofibre, densità capillare derivato dal vasto laterale di campionamento sono ampiamente disponibili in letteratura che permette il confronto tra gli studi 11,19.

<table><tbody><tr><td>Weil-Blakesley conchotome</td><td>Gebr&uuml; der Zepf Medizintechnik, D&uuml; rbheim, Germania</td><td>Nessuno</td> Punta <td>da morso da 6 mm</td></tr><tr><td>5 ml 2% di lidocaina</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td>Una fiala da 5 ml dovrebbe essere sufficiente per un'anestesia adeguata</td></tr><tr><td>Tampone imbevuto di alcol</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 5 ml</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Aghi sterili da 25 G e 23 G</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi sterile misura 11</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Quadrati di garza sterili</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio 0,9% 10 ml</td><td>Fannin</td><td>1122/002/001</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Drape&trade; Piccolo telo con apertura adesiva</td><td>3M</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>ChloraPrep 2% w/v /70% v/v soluzione cutanea&nbsp;</td><td>CareFusion</td><td>270400</td><td>Due</td></tr><tr><td>Steri-Strip&trade; 1/4 di pollice x 3 pollici chiusure cutanee adesive rinforzate</td><td>3M</td><td>R1541</td><td></td></tr><tr><td>PRIMAPORE medicazione sterile 15 cm x 8 cm</td><td>Smith & &nbsp; Nephew</td><td>66000318</td><td></td></tr><tr><td>Bendaggio in crepe di cotone Hospicrepe 233 7,5 cm x 4,5 m</td><td>Hartmann</td><td>915562</td><td></td></tr><tr><td>Bendaggio coesivo flessibile Co-Plus LF</td><td>BSN</td><td>medical 2904565</td><td></td></tr><tr><td>Foglio assorbente monouso</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Nastro per micropori o traspore</td><td>Uso</td><td>generico Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Camice sterile con carta sterile asciugamani</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr><tr><td>Guanti sterili</td><td>Uso generico</td><td>Nessuno</td><td></td></tr></tbody></table>

umano<em&gt; vasto laterale</em&gt; biopsia muscolare scheletrico utilizzando la weil-blakesley conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Percutanea biopsia muscolare utilizzando il conchotome Weil-Blakesley è ben consolidata sia nella pratica clinica e nella ricerca. Si tratta di una tecnica sicura, efficace e ben tollerato. Il conchotome Weil-Blakesley ha una punta affilata mordere con un 4 - larghezza cavo 6 mm. Esso è inserito attraverso un 5 - un&#39;incisione 10 millimetri pelle e può essere manovrato per la penetrazione tissutale controllata. La punta viene aperto e chiuso all&#39;interno del tessuto e quindi ruotato di 90 ° -180 per tagliare il muscolo. La quantità di muscolo ottenute in seguito ripetuto campionamento può variare da 20 mg a 290 mg, che possono essere elaborati sia per l&#39;istologia e studi molecolari. La ferita deve essere mantenuto attività fisica asciutta e vigorosa ridotto al minimo per circa 72 ore, anche se i livelli normali di attività può ripartire immediatamente dopo la procedura. Questa procedura è sicura ed efficace quando molta attenzione è riservata alla selezione dei soggetti, completa asepsi e procedura di post cura. Sia a destra ea sinistra vlateralis Astus sono adatti per la biopsia dipende dalla preferenza dei partecipanti.

La procedura sopra descritta è sicuro e accettabile in entrambe le impostazioni cliniche e di ricerca. Quando la biopsia viene eseguita come parte del processo diagnostico, il muscolo deve essere scelto in base ai sintomi e segni di debolezza muscolare del paziente. Il sito biopsia dovrebbe essere esente da infortuni precedenti, contratture o strumentazione 21,1. Nella ricerca, condizioni standardizzate come il digiuno o l&#39;esclusione dei pazienti con diabete possono essere...

Questo video dimostra la tecnica della biopsia muscolare percutanea del vasto laterale umano utilizzando il concotomo di Weil-Blakesley.

Umano<em&gt; vasto laterale</em&gt; Biopsia muscolare scheletrico Utilizzando la Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di introdurre una tecnica sicura, efficace e ben tollerata di biopsia muscolare del vasto laterale, per ottenere tessuto sufficiente per l'istochimica e l'analisi molecolare sia negli studi diagnostici che in quelli di ricerca. Questo metodo può aiutare gli investigatori a ottenere una quantità sufficiente di tessuto muscolare con il minimo disagio e trauma per il partecipante. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è sicura e accettabile sia in ambito clinico che di ricerca.Le complicanze sono basse e il disagio è ridotto al minimo quando la procedura viene eseguita utilizzando una tecnica standard. Per iniziare, chiedi al partecipante di sdraiarsi comodamente su un divano in posizione supina. Esporre la coscia preferita dalla piega dell'inguine e stendere un foglio assorbente usa e getta sotto la coscia esposta.Assicurarsi che la gamba rimanga dritta e rilassata durante tutta la procedura, ma che la coscia sia momentaneamente tesa per delineare il vasto laterale. Segnare il sito della procedura a circa 2/3 lungo una linea immaginaria dalla spina iliaca antero-superiore alla rotula. Per preparare la pelle, utilizzare una lama

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Lo scopo di questo video è presentare la tecnica di biopsia del muscolo scheletrico di Bergström modificata su soggetti umani.

Scheletrici Procedure biopsia muscolare dell&#39;uomo con la tecnica Bergström Modificato

I principali tipi di cellule aderenti derivati dal muscolo umano sono le cellule miogeniche e i fibroblasti. Qui, le popolazioni cellulari vengono arricchite utilizzando lo smistamento cellulare attivato magneticamente basato sull'antigene CD56. La successiva immunomarcatura con anticorpi specifici e l'uso di tecniche di analisi delle immagini consentono la quantificazione delle caratteristiche citoplasmatiche e nucleari nelle singole cellule.

Isolamento e quantitativa immunocitochimica caratterizzazione di cellule miogeniche primarie e fibroblasti da muscolo scheletrico umano

Sono descritti metodi per la biopsia di vasto laterale, la preparazione dei mitocondri purificati, e profilatura respirometrico. L'uso di piccolo volume muscolare rende questa tecnica adatta per applicazioni di ricerca clinica.

Preparazione e respirometrici valutazione dei mitocondri isolati dal tessuto muscolare scheletrico Ottenuto dalla biopsia percutanea

Qui presentiamo un protocollo per la dissezione delle ossa lunghe degli arti posteriori (femori e tibie) dal topo di laboratorio. Descriviamo inoltre una tecnica rapida per l'isolamento del midollo osseo da queste ossa che utilizza la centrifugazione per la rimozione del midollo osseo dallo spazio del midollo osseo.

Murino arto posteriore osso lungo dissezione e isolamento di midollo osseo

Ecografia 3D imaging (3DUS) permette rapida e conveniente morfometria dei tessuti muscolo-scheletrici. Vi presentiamo un protocollo per misurare la lunghezza di volume e fascicolo muscolare utilizzando 3DUS.

Ecografia 3D: veloce e conveniente morfometria del tessuto muscolo-scheletrico

La macchiatura di Immunohistochemical delle isoforme della catena pesante della miosina è emerso come il discriminatore di state-of-the-art di fibra del muscolo scheletrico-tipo (cioè, tipo I, tipo IIA, tipo IIX, tipo IIB). Qui, presentiamo un protocollo di colorazione insieme a un algoritmo romanzo semi-automatico che facilita la rapida valutazione della morfologia del tipo di fibra e fibra.

Analisi semi-automatica del Mouse del muscolo scheletrico morfologia e composizione di fibra-tipo

Vi presentiamo protocolli dettagliati per l'esecuzione di esperimenti di diffrazione a raggi X a piccolo angolo utilizzando muscoli scheletrici del topo intatti. Con l'ampia disponibilità di modelli murini transgenici per le malattie umane, questa piattaforma sperimentale può costituire un utile banco di prova per chiarire la base strutturale delle malattie genetiche...

Diffrazione a raggi X del muscolo scheletrico Murine intatto come strumento per studiare la base strutturale della malattia muscolare

Presentiamo tecniche per isolare, coltivare, caratterizzare e differenziare le cellule progenitrici muscolari primarie umane (hMMP) ottenute dal tessuto della biopsia muscolare scheletrica.  Gli hMPC ottenuti e caratterizzati attraverso questi metodi possono essere utilizzati per affrontare successivamente le domande di ricerca relative alla miogenesi umana e alla rigenerazione muscolare scheletrica.

Isolamento, cultura, caratterizzazione e differenziazione delle cellule del progenitore muscolare umano dalla procedura di biopsia muscolare scheletrica

Descritto qui è un protocollo per l'immunolabelling diretto delle minofibre necrotiche nelle criosezioni muscolari. Le cellule necrotiche sono permeabili alle proteine del siero, tra cui l'immunoglobulina G (IgG). Rivelare l'assorbimento di IgG da miofibre permette l'identificazione e la quantificazione delle miofibre che subiscono necrosi indipendentemente dalla condizione muscolare.

Immunolabelling Degenerazione di mitragliari nelle biopsie muscolari

Questa relazione tecnica descrive una variazione della tecnica bergstrom modificata per la biopsia del musculus tibialis anteriore che limita i danni alle fibre.

Collezione di biopsie muscolari scheletriche dal compartimento superiore del musolo umano Tibialis Anterior per la valutazione meccanica

Qui, descriviamo un metodo dettagliato per l'isolamento dei mitocondri dal muscolo scheletrico del topo e la successiva analisi della respirazione mediante Oxygen Consumption Rate (OCR) utilizzando saggi respirometrici basati su micropiastre. Questa pipeline può essere applicata per studiare gli effetti di molteplici interventi ambientali o genetici sul metabolismo mitocondriale.

Isolamento dei mitocondri dal muscolo scheletrico del topo per saggi respirometrici

Impara la biopsia muscolare del vasto laterale con il conchotome Weil-Blakesley. Questa tecnica percutanea ottiene tessuto sufficiente per istochimica e analisi molecolare con minimo disagio, risultando sicura e ben tollerata in ambito clinico e di ricerca.

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