Name: Motore e ippocampale Dependent apprendimento spaziale e valutazione della memoria di riferimento in un transgenici ratto modello di malattia di Alzheimer con ictus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Scopri come valutare la funzione motoria e l'apprendimento spaziale in un modello di ratto comorbido per Alzheimer e ictus. Questo metodo permette di analizzare l'interazione tra le patologie e testare composti preventivi.

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Questo lavoro è stato reso possibile grazie al finanziamento del Canadian Institutes of Health Research (CIHR) e gli autori desiderano ringraziare il CIHR per il loro sostegno finanziario.

Il comitato istituzionale adeguato etica animale dovrebbe approvare tutte le procedure comportamentali prima di iniziare la sperimentazione. Tutti i lavori animale qui descritto è stato approvato dal Western University Animal Usa sottocommissione e segue il Consiglio canadese sulle linee guida per la cura degli animali. Questi esperimenti sugli animali sono stati eseguiti durante la fase leggera. 1. Cilindro Task per la valutazione degli arti anteriori del motore lordo <ol><li> Impostazione attrezzature <ol><li> Acquisire un cilindro di plexiglas con un coperchio perforato che ospiterà la dimensione del ratto utilizzata per l&#39;esperimento. La dimensione del cilindro non deve permettere il ratto per raggiungere la cima quando allevamento e dovrebbe consentire per 2 cm tra la parete e il naso del ratto e la base della coda del topo. La dimensione standard di un cilindro è di 23 cm di diametro e 40 cm di altezza per un 6 mesi (400-600 g) di ratto. </li><li> Collocare uno specchio con un angolo di 45 ° sotto dell&#39;apparato cilindro con il cilindro seduto su un Plexiglas basamento o qualche altra forma di supporto di circa 30 cm sopra tavolo. </li><li> Impostare una videocamera su un treppiede ad una distanza appropriata di visualizzare l&#39;intero diametro del cilindro nello specchio della videocamera. </li><li> Girare l&#39;illuminazione di un ambiente dimmer e giocare rumore bianco nella stanza (cioè basso volume, la musica sottili) per ridurre l&#39;effetto di improvvisi rumori forti. Ciò dovrebbe contribuire ad incoraggiare il movimento e prevenire il congelamento a causa di rumori forti. </li></ol></li><li> Procedura sperimentale <ol><li> Spostare i topi nella stanza sperimentale 30 minuti prima dell&#39;inizio della prima prova per acclimatarsi ratti alla stanza con la riproduzione di musica e luci dimmer. </li><li> Scrivere le corrispondenti informazioni animale e di prova (cioè il numero degli animali, il giorno in timeline e il numero di prova) su un piccolo bordo bianco. Inserire questa scheda di fronte allo specchio. </li><li> Premere RECORD sulla videocamera con la scheda bianca di fronte allo specchio, prendere il topo nei pressi della base of la coda, posizionare il topo nel cilindro e fissare il coperchio. Basamento a lato del cilindro per evitare interferenze con registrazione video. </li><li> Rimuovere la scheda bianca da davanti allo specchio e lasciare che il record videocamera il topo nel cilindro per 5 minuti (utilizzare un timer per registrare 5 minuti da quando la scheda bianca è stato rimosso). Questa è una prova. </li><li> Pulire il cilindro con tovagliolo di carta e acqua dopo un processo. </li><li> Ripetere i punti 1.2.2-1.2.5 altre due volte a raggiungere un totale di tre prove. Ci dovrebbe essere un 20-30 min Tempo di inter-trial per diminuire il rischio di assuefazione al cilindro. Durante questo tempo, eseguire prove cilindri per gli altri ratti. </li></ol></li><li> Analisi Video <ol><li> Importare file video camera in programma di montaggio video (ad esempio iMovie) </li><li> Compilare i video in clip per ogni prova. Disattivare il volume del video e diminuire la velocità del video al 25% dell&#39;originale. </li><li> Contare il numero di contatti forelimbcon la parete del cilindro per la zampa anteriore sinistra e destra. Per contatti simultanei a sinistra ea destra, contare questi contatti arti anteriori come &quot;entrambi&quot;. Tenere presente che il video viene registrato attraverso uno specchio, quello che sembra essere dell&#39;arto anteriore sinistro nel video corrisponde alla zampa anteriore destra dell&#39;animale nella realtà. </li><li> Calcolare l&#39;uso per cento dell&#39;arto anteriore interessata (controlaterale alla corsa) con la seguente equazione: [{/ totale contatti numero (contatti + ½ contatti bilaterali influenzato)} x 100]. Le prestazioni di entrambi i gruppi wild type e il gruppo transgenico senza corsa sono considerati gruppi di confronto per valutare la presentazione di problemi di malattia indotta. </li></ol></li></ol> 2. Fascio-passeggiata Task per la valutazione Gross Motor <ol><li> Impostazione attrezzature <ol><li> Acquisire una trave di legno liscio sigillati che si trova a 2 cm di larghezza e lunga circa 120 cm (larghezza ottimale per un 200-600 g ratto). </li><li> Inserire due tabelle o scaffalature uni suoi 100 cm. Le superfici di ogni unità dovrebbe essere di circa 40 cm da terra. </li><li> Fissare entrambe le estremità del fascio al tavolo o superficie di scaffalatura con nastro. Circa 1 m di lunghezza della trave non supportata dovrebbero ora essere elevati a 40 cm da terra. </li><li> Impostare una videocamera su un supporto, catturando l&#39;intera lunghezza della trave. Per aumentare il contrasto del video, prendere in considerazione l&#39;introduzione di un fondo nero dietro il fascio quando si utilizzano topi bianchi. </li></ol></li><li> Procedura sperimentale <ol><li> Spostare i topi nella stanza sperimentale 30 minuti prima dell&#39;inizio della prima prova per acclimatarsi ratti alla stanza con la riproduzione di musica e luci dimmer. </li><li> Posizionare tubi gabbia casa o arricchimento ambientale del ratto ad una estremità della trave e posizionare il ratto all&#39;altra estremità della trave. </li><li> Condurre un paio di basi non-registrato due giorni prima di prove sperimentali. Sia il ratto esplorare la zona e guida il topo verso la trave tenendo la base del ratto&#39;S coda. </li><li> Una volta che il ratto ha attraversato il fascio, spostare la gabbia o tubo per l&#39;altra estremità della trave e ripetere. Quando il ratto attraversa il fascio liberamente in entrambe le direzioni, l&#39;allenamento è finita. Mantenere il numero di formazione corre coerente tra tutti gli animali. </li><li> Scrivere le corrispondenti informazioni animale e di prova (cioè il numero degli animali, il giorno in timeline e il numero di prova) su un piccolo bordo bianco. Nastro questo bordo bianco per il muro dietro la trave. </li><li> Posizionare gabbia ambiente domestico o tubi arricchimento del ratto ad una estremità della trave. </li><li> Premere registrare la videocamera e raccogliere il ratto dalla base della coda e posto alla fine della trave opposta alla gabbia casa o tubazione. </li><li> Registrare la totalità del processo, che termina quando il ratto è completato correttamente attraversa l&#39;intera lunghezza della trave elevata. Se le pause ratto midway attraverso il fascio, delicatamente scruff ratto dalla base della coda o toccare la coda del topo delicatamenteper promuovere il movimento attraverso il fascio. Non spingere il ratto in avanti in qualsiasi modo. </li><li> Re-do processi in cui il topo gira di lato, mentre sulla trave, più volte si ferma a piedi o passeggiate in modo incoerente. Se un ratto cade e continua ad aggrapparsi alla trave, delicatamente raccogliere ratto e rimetterlo sulla trave nella posizione della caduta e continuare il processo. </li><li> Spostare la gabbia casa o tubi per l&#39;altra estremità della trave, modificare il processo # sul bordo bianco e registrare il successivo processo. </li><li> Ripetere questa procedura fino a un totale di 6 prove sono state completate, con 3 prove in fase di registrazione per ogni direzione. Tutte le 6 prove per un topo possono essere registrate prima di iniziare le prove per la prossima topo. </li></ol></li><li> Analisi Video <ol><li> Importare i file video della telecamera nel programma di montaggio video (ad esempio iMovie). </li><li> Compilare i video in clip per ogni prova e disattivare il volume del video. Analizzare ogni fotogramma video clip per fotogramma. </li><li> Contare il numerodi passi totale ratto prende a camminare per tutta la lunghezza della trave e il numero totale di arti posteriori sinistra e destra e scivola arti anteriori e il numero totale di cadute. Le prestazioni di entrambi i gruppi di tipo selvatico e il gruppo transgenici senza corsa sono considerati in confronto al gruppo di co-morbidità per valutare comparsa di deficit unici per la condizione di co-morbidità. </li></ol></li></ol> 3. Morris water maze per ippocampo-dipendente spaziale di apprendimento e di memoria di riferimento <ol><li> Impostazione attrezzature <ol><li> Fissare una videocamera posizionata sopra il centro di una vasca circolare (148 cm di diametro e 58 cm di profondità). Allineare i quattro quadranti designati correttamente con il contorno della piscina nel programma software di monitoraggio. </li><li> Riempire la piscina circolare con acqua di circa 36 cm di profondità. L&#39;acqua deve essere portata a temperatura ambiente per riempire la piscina alcuni giorni prima di iniziare il protocollo sperimentale. </li><li> Aggiungere nero vernice acrilica un non tossicotil l&#39;acqua è opaca quando si utilizzano topi bianchi. Utilizzare un colore chiaro, come il bianco, per i ratti di colore più scuro. </li><li> Circondano la piscina con le superfici muro bianco, tra cui divisori, se necessario. Quando in piscina, il ratto non dovrebbe essere in grado di vedere gli sperimentatori. </li><li> Tagliare 4 grandi spunti spaziali di forma diversa da diversi colori di cartoncino e allegare una forma sulla parete nord per designata, est, sud-est e sud-ovest posizioni piscina. Questi segnali devono essere leggermente superiore al bordo della piscina. </li><li> Accendere una radio a basso volume nel quadrante nord-ovest per evitare che il ratto da essere distratti da forti rumori inaspettati durante il test. </li><li> Posizionare una piattaforma circolare (diametro 11,5 centimetri, superficiale 2-3 cm sotto il livello dell&#39;acqua) al centro del quadrante di destinazione. </li><li> Spegnere principali luci della stanza e accendere una lampada da pavimento sul lato opposto del divisorio alla piscina per illuminare la zona. </li></ol></li><li> Configurazione computer <ol&gt; <li> Utilizzare un programma di monitoraggio che è stato progettato per compiti di comportamento Morris water maze e impostare il protocollo prima di iniziare gli esperimenti. Un esempio di un possibile programma è fornito in Figura 4. </li><li> Set 4 giorni consecutivi con 4 prove di 90 secondi ciascuna per l&#39;esperimento di apprendimento spaziale. </li><li> Set 2 esperimenti sonda separata di 30 secondi ciascuno a 24 ore dopo l&#39;ultima prova di apprendimento spaziale e 1 settimana dopo il primo esperimento della sonda. </li><li> Set cued prove di apprendimento a 4 prove al giorno per 2 giorni consecutivi a partire 24 ore dopo il secondo esperimento sonda. Ogni prova deve essere totale 60 sec. </li><li> Per ogni fase, impostare l&#39;ordine di test in modo che vi sia un 20 min inter-trial intervallo tra ciascuna prova per ogni animale. Altri animali possono essere eseguiti durante questo intervallo inter-trial, finché ogni animale mantiene a 20 min inter-trial. </li><li> Assicurarsi che la posizione della piattaforma deve essere definita dallo sperimentatore e che tutte le altre zone sono demultato dalla posizione della piattaforma designata. </li><li> Impostare il programma per iniziare e terminare ogni prova manualmente. </li></ol></li><li> Spatial Esperimento Learning <ol><li> Posizionare la piattaforma circolare nel quadrante sud-ovest. Dovrebbe essere allineato con la circolare zona designata &quot;piattaforma&quot; nel quadrante sul programma per computer. </li><li> Inizia posizioni intorno alla piscina devono essere assegnati in modo casuale per ogni ratto. Rappresentano tutte le posizioni di partenza in ciascun gruppo di trattamento. N ratto inizia dalla posizione est per le prove di apprendimento spaziale nel paradigma presentati per consentire una posizione di partenza romanzo durante il test sonda. </li><li> Tenere il ratto alla base della coda e delicatamente metterlo nell&#39;acqua lungo la parete della piscina in posizione di partenza designato, e muoversi rapidamente fuori dalla vista del ratto. </li><li> Avere l&#39;altro sperimentatore avviare il software di monitoraggio non appena il ratto è in acqua. Un timer dovrebbe iniziare il conteggio da 0 sul programma di monitoraggio. </li&gt; <li> Se il ratto individua la piattaforma, avere l&#39;altro sperimentatore arrestare il processo nel computer e lasciare il ratto sulla piattaforma per almeno 30 secondi prima di recuperare esso. Se il ratto salta dalla piattaforma prima del processo si arresta sul computer, il processo continua. </li><li> Se il ratto non trova la piattaforma nel tempo di prova assegnato, guida il topo alla piattaforma con la mano (o fare il topo seguire la mano o guidare il ratto dalla base della coda). Tenere il ratto sulla piattaforma per 30 sec. </li><li> Rimuovere il ratto dalla piscina dalla base della coda al braccio dello sperimentatore che è coperto con un asciugamano o lasciare il ratto salire su una superficie portatile. </li><li> Ripetere i passaggi 3.3.3-3.3.7 per un totale di 4 prove per Rat. Ci dovrebbe essere un intervallo inter-trial di 20 minuti per ogni ratto. </li><li> Restituire i ratti a loro gabbia casa sotto una lampada di calore per almeno 10 minuti dopo prova apprendimento spaziale finale del ratto. </li><li> Continuare la exact stesso protocollo di apprendimento spaziale per giorno da 2 a 4 giorni di apprendimento spaziale. </li><li> Il giorno 2-4, non tenere il topo sulla piattaforma più a lungo. Lasciare che il topo di sedersi sulla piattaforma senza assistenza per 30 sec con gli sperimentatori fuori dalla vista. Questo può essere fatto durante le prove successive il giorno 1 in occasione. </li></ol></li><li> Probe Experiment <ol><li> Rimuovere la piattaforma dalla piscina. Assicurarsi che la posizione della piattaforma precedente rimane definito sul computer (cerchio nel quadrante sud-ovest). </li><li> Posizionare il ratto nell&#39;acqua lungo la parete della piscina in posizione nord-est e muoversi rapidamente fuori dalla vista del ratto. L&#39;uso del romanzo est posizione di partenza assicura che il topo ricorda la posizione della piattaforma indipendente dalla posizione iniziale precedentemente formati. </li><li> Avere l&#39;altro sperimentatore avviare il software di monitoraggio non appena il ratto è in acqua. Un timer dovrebbe iniziare il conteggio da 0 sul software di monitoraggio. </li><li> Recuperare il ratto dalsud-ovest quadrante della piscina dalla base della coda e tenere su un braccio telo coperto o lasciare che il ratto salire su una superficie portatile. </li><li> Restituire i ratti a loro gabbia casa sotto una lampada di calore per almeno 10 minuti dopo prova sonda di ogni ratto. </li><li> Ripetere questo esperimento (gradini 3.4.1-3.4.5) dopo 1 settimana. </li></ol></li><li> Cued Esperimento Learning <ol><li> Utilizzare nastro adesivo per fissare a 4 cm di diametro spunto sferica bianca su un supporto che è alto 8,5 cm sulla piattaforma (altezza totale di spunto è di 12,5 cm). La parte superiore della stecca sferica sarà di almeno 8,5 cm sopra il livello dell&#39;acqua. </li><li> Rimuovere le indicazioni spaziali dalle pareti che circondano la piscina. </li><li> Randomize posizioni della piattaforma e iniziare a posizioni per ogni ratto in ciascun gruppo. Tutte le posizioni di piattaforma e di partenza devono essere rappresentati per ciascun gruppo di trattamento. </li><li> Posizionare la piattaforma nella zona della piattaforma designata e definire nel software di monitoraggio. </li><li> Posizionare il ratto nell&#39;acqua lungo la parete della piscina al tha designato posizione di inizio e rapidamente spostare fuori dalla vista del ratto. </li><li> Avere l&#39;altro sperimentatore avviare il software di monitoraggio non appena il ratto è in acqua. Un timer dovrebbe iniziare il conteggio da 0 sul software di monitoraggio. </li><li> Una volta che il ratto raggiunge la piattaforma, avere l&#39;altro sperimentatore arrestare il processo nel computer. Se il ratto salta dalla piattaforma, il processo continua. Prima di recuperare il topo, il ratto permettono di sedersi sulla piattaforma per 15 sec. </li><li> Recuperare il ratto dalla piscina dalla base della coda e tenere su un braccio telo coperto o lasciare che il ratto salire su una superficie portatile. </li><li> Controllare la posizione della piattaforma per la prossima ratto e spostare la piattaforma in area corrispondente definita nel software di monitoraggio. </li><li> Ripetere i passaggi 3.5.4-3.5.9 per i seguenti 3 prove. Ci dovrebbe essere un intervallo inter-prova di 15 min. </li><li> Restituire i ratti a loro gabbia casa sotto una lampada di calore per almeno 10 minuti dopo fina di ogni rattol cued processo di apprendimento. </li><li> Continuare lo stesso protocollo per il giorno 2 di apprendimento cued. </li></ol></li><li> Analisi dei dati Nota: Il tempo trascorso in zone, la distanza percorsa in zone, velocità media, il numero di voci in zone e il tempo di prima dell&#39;ingresso nella zona sono spesso utilizzati. <ol><li> Analizzare il tempo e la distanza per raggiungere la zona della piattaforma e la velocità media al giorno di spaziale e cued learning separatamente. Per gli esperimenti sonda, analizzare la latenza al primo ingresso nella zona target come un tempo crudo o una variazione percentuale dal sonda 1 per sondare 2. </li></ol></li></ol>

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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

La combinazione di ictus e di malattia di Alzheimer risultati nelle patologie comportamentali ben distinte che possono influenzare sia il motore e la funzione cognitiva in base alla gravità di ogni condizione. Pertanto, è necessario fare uso di una varietà di compiti comportamentali per determinare i singoli contributi di queste condizioni, così come dare qualche informazione sugli effetti combinati e potenzialmente interattivi nella condizione co-morbidità. I dati presentati dimostrano tre economicamente efficiente, le...

La malattia di Alzheimer (AD) è la forma più diffusa di demenza nella popolazione anziana e una malattia neurodegenerativa debilitante. Istopatologico, AD si presenta come placche amiloidi, grovigli neurofibrillari e la perdita neuronale. Placche amiloidi sono costituiti principalmente da peptide beta-amiloide (Ap) che è stato prodotto mediante un clivaggio proteolitico alterata della proteina precursore dell&#39;amiloide (APP) di β-secretasi e enzimi gamma-secretasi 1,2,3. Il prodotto di scissione, Ap, i depositi nel cervello creando placche amiloidi patologiche ed ha effetti tossici sul cervello che può portare a dei disturbi di apprendimento caratteristici e perdita di memoria. Tutti questi passaggi insieme sono indicati come la &quot;cascata amiloide ipotesi&quot; 3,4. Anche se questa ipotesi è importante nell&#39;ambito delle indagini dC, altri cambiamenti cellulari sono stati trovati a precedere queste formazioni placca che si allontana dal sentiero cascata amiloide originale. questi altricambiamenti cellulari sono pensati per contribuire alla perdita di memoria all&#39;inizio, menomazioni e altre disfunzioni cognitive coinvolte nella DC prima di formazione della placca 3,5,6 apprendimento. Con dC diventando sempre più diffuso, i fattori di rischio per lo sviluppo di AD stanno diventando una messa a fuoco estremamente importante della ricerca. Anche se l&#39;età è il principale fattore di rischio per le forme sporadiche di AD, sono stati identificati altri fattori di rischio, tra cui ictus 7,8. Ictus non è solo un fattore di rischio, ma può anche esacerbare demenze già presenti. Ad esempio, clinicamente, la progressione della AD ha dimostrato di essere peggiore in pazienti che avevano precedentemente sperimentato ictus 9. Inoltre, un aumento dell&#39;espressione di APP e l&#39;accumulo di A? È stato trovato in modelli animali sperimentali di tossicità Ap combinato con ictus indotto 10,11. Poiché non vi è questo importante interazione tra ictus e AD, è essenziale che questi due patologie essere ulteriormente studiateinsieme a modelli di co-morbidità per capire meglio fisiopatologia e comportamenti implicati in entrambe le condizioni. Per indagare le condizioni di co-morbidità, un modello adeguato doveva essere sviluppato in cui un ictus potrebbe interagire con Ap per la produzione di patologia AD-like. Per la prima volta, un topo transgenico APP21 che ha un gene umano APP mutato incorporato nel suo DNA è stato usato per realizzare un modello appropriato di AD. Le mutazioni sono il doppio missense svedese e Indiana mutazioni missense singolo, che sono stati entrambi implicati in forme familiari di AD 4,8,12. In assenza di un insulto in più, questo modello di ratto età senza sviluppare le caratteristiche placche Ap o neurofibrillari grovigli 12. Pertanto, nel tentativo di indurre patologia del comportamento AD-like, un piccolo tratto viene introdotto nello striato diritto di imitare i piccoli colpi sottocorticali spesso presenti in pazienti affetti da demenza 9. La corsa del ra transgenici APP21t incarna la condizione di co-morbidità e permette di indagine dei vari tipi di cambiamenti comportamentali coinvolti in entrambe le condizioni di malattia. In particolare, questo induzione di deficit AD-come patologia e cognitivi nel ratto adulto ci permette di indagare i primi cambiamenti molecolari e cognitivi precedenti dC. Dal momento che l&#39;obiettivo è quello di determinare i primi segni di cambiamenti comportamentali e poiché sia ​​ictus e AD hanno patologie comportamentali molto diverse, quando si studia il modello di co-morbidità, i compiti di comportamento devono valutare una varietà di fenotipi comportamentali. Ci sono una serie di test relativamente sensibili che possono essere fatte per analizzare il motore e il comportamento cognitivo in modelli di roditori che implicano una serie di paradigmi e delle attrezzature. Per analizzare specificatamente la funzione zampa anteriore e motore degli arti posteriori, il compito compito cilindro e fascio-passeggiata sono state realizzate per individuare deficit motori e monitorare locomozione in questo modello. Altri compiti sensibili a valutare specificamente bene FOabilità relimb motore (cioè il compito scalinata e unico pellet compito di raggiungere) richiedono privazione di cibo 11,13,14. Al fine di evitare qualsiasi degli effetti noti di privazione di cibo sulle patologie malattia 15,16,17, questi test sono stati ritenuti non idonei per questo studio. Il compito del cilindro valuta l&#39;uso spontaneo di arti anteriori del ratto durante l&#39;allevamento in un ambiente nuovo e in grado di rilevare asimmetria tra arti anteriori nei ratti con ictus unilaterale 10,18. Un importante vantaggio di questo compito è che l&#39;apparecchiatura può essere utilizzata per altre attività comportamentali, come la Porsolt forzata compito swim 19. Contrariamente al compito cilindro, il compito fascio piedi permette anche l&#39;analisi di hindlimb e controllo motorio degli arti anteriori, oltre a locmotion 10,14. Bilanciere include un componente locomotore, un componente di equilibrio e il posizionamento del piede qualificato. Entrambi questi test sono economicamente efficiente, semplice, e in tempi rapidi e chiarire gli effetti di ictus e AD su d<html> ifferences in arto funzionamento. Oltre a cambiamenti nella funzione motoria, AD comporta deficit di memoria che possono presentare nelle prime fasi della progressione della malattia. Al momento di affrontare patologie AD-come in un modello di roditore, è fondamentale che l&#39;apprendimento ippocampo dipendenti e la memoria è determinati, in quanto l&#39;ippocampo è una importante struttura del cervello in gran parte influenzato in AD 2. L&#39;ippocampo è una regione del cervello essenziale per l&#39;apprendimento spaziale e la memoria e la sua funzione può essere testato con vari paradigmi labirinto nei roditori. Uno dei compiti labirinto per lo più ampiamente utilizzati per i modelli di roditori di diverse malattie è il labirinto d&#39;acqua di Morris 20. La Morris water maze utilizza indizi spaziali per aiutare il topo nel localizzare una piattaforma nascosta fermo e test di memoria di riferimento spaziale quando la piattaforma viene rimosso. Un notevole vantaggio della configurazione water maze è che è altamente adattabile a seconda del proposto domanda di ricerca 20. tenda &quot;&gt; Per la prima volta, le tecniche descritte sono stati utilizzati per valutare il motore e la funzione cognitiva in un modello di ratto di co-morbidità romanzo di ictus e AD. coinvolgendo piccoli colpi in un modello di topo transgenico APP21. Co-morbidità è stato raggiunto da indurre vasocostrizione dei vasi sanguigni nel corpo striato di produrre un piccolo ictus in APP21 topi transgenici. questo modello colpo è stato ben definito come una condizione di co-morbidità in un modello di ratto alternativo di aD 11. avanzamento in questo romanzo APP21 modello di ratto transgenico è stato destinato per la produzione di un modello più translationally prezioso. Mentre i compiti comportamentali sono descritti utilizzando un modello di ictus e aD rat co-morbidità, queste attività possono essere ulteriormente applicate ad altri modelli di ictus o modelli di altre malattie neurologiche (per esempio il morbo di Parkinson). Il generale metodologia descritta sarà ampiamente applicabile a questi altri stati di malattia, ma le scadenze di comportamento e paradigmi può richiedere modifiche in base alle proposte resdomanda earch e modello. Oltre ad essere adattabile, i compiti sono efficaci nel dimostrare deficit minori, pur essendo di costo e in tempi rapidi.

<table><tbody><tr><td>Cilindro</td> in plexiglas <td>della Western University</td><td>Cilindro Diametro del cilindro: 23 cm Altezza del cilindro: 40 cm Altezza della piattaforma: 30 cm Lunghezza dello specchio: 35 cm Larghezza dello specchio: 26,5 cm</td><td>Questo è stato realizzato appositamente da Western University Machine Services per il nostro laboratorio. Si prega di contattare il produttore scelto per progettare questo prodotto.</td></tr><tr><td>Videocamera portatile</td><td>JVC</td><td>GZ-E200</td><td></td></tr><tr><td>Videocamera Treppiede</td><td>Slik</td><td>F163</td><td></td></tr><tr><td>AM / FM Orologio Radio</td><td>Sylvania</td><td>SCR1388</td><td></td></tr><tr><td>Lavagna bianca</td><td>Walmart</td><td>Larghezza: 71,12 cm Altezza: 55,88 cm</td><td>Questi possono essere acquistati in qualsiasi negozio (ad es. Walmart, librerie universitarie)</td></tr><tr><td>Marcatore cancellabile a secco</td><td>Expo</td><td>Expo Cancellabile a secco originale Pennarello</td><td>Questi possono essere acquistati in qualsiasi negozio (ad es. Walmart, librerie universitarie)</td></tr><tr><td>Trave in legno</td><td>Rona</td><td>Compensato Larghezza: 2 cm Lunghezza: 100 cm</td><td></td></tr><tr><td>VWR Nastro da laboratorio per uso generico VWR</td><td>Intl.</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>iMovie '11</td><td>Apple Inc.</td><td>Versione 9.0.9 (1795)</td><td>Questa è la versione utilizzata in questo manoscritto, ma potrebbe essere utilizzata qualsiasi altra versione di iMovie o software di editing video.</td></tr><tr><td>Piscina del labirinto d'acqua di Morris con piattaforma</td><td>Stoelting Co.</td><td>60136/60035</td><td>Questi non sono i prodotti esatti utilizzati nel video, ma sono sostanzialmente identici.</td></tr><tr><td>Stecca a piattaforma</td><td>:</td><td></td> <td>la stecca a piattaforma utilizzata è stata creata utilizzando un piccolo supporto in metallo e una palla di schiuma sferica bianca. Questi possono probabilmente essere acquistati in qualsiasi negozio con materiali per la casa (ad esempio Walmart, Rona ecc.)</td></tr><tr><td>Pilastri 71 "Lampada da terra</td><td>Walmart</td><td>HW-F0377SLV</td><td></td></tr><tr><td>ANY-Maze Software di tracciamento comportamentale</td><td>Stoelting Co.</td><td>60000</td><td>Ci sono pacchetti ANY-maze&reg; che includono la fotocamera con o senza computer e accessori.</td></tr><tr><td>Videocamera compatta</td><td>Logitech</td><td>V-U0023</td><td></td></tr><tr><td>Computer portatile</td><td>Hewlett-Packard</td><td>HP Pavilion dv6 Notebook PC</td><td>portatile Specifiche: APU AMD A6-3420M con Radeon HD Graphics 1,50 GHz, 6,00 GB di RAM, sistema operativo a 64 bit.</td></tr><tr><td>Americana Vernice Acrilica Atossica</td><td>DecoArt</td><td>DAO67-9</td><td>Può essere ordinata sul sito DecoArt o acquistata in negozio presso i rivenditori DecoArt.</td></tr><tr><td>Tabellone per poster</td><td>Walmart</td><td>PA-1961</td><td></td></tr></tbody></table>

motore e ippocampale dependent apprendimento spaziale e valutazione della memoria di riferimento in un transgenici ratto modello di malattia di alzheimer con ictus

Motor and Hippocampal Dependent Spatial Learning and Reference Memory Assessment in a Transgenic Rat Model of Alzheimer's Disease with Stroke

La malattia di Alzheimer (AD) è una malattia neurodegenerativa invalidante che si traduce in perdita di neurodegenerazione e la memoria. Mentre l&#39;età è un importante fattore di rischio per l&#39;AD, il colpo è stato anche implicato come fattore di rischio e un fattore esacerbando. Il co-morbidità dei risultati ictus e AD in peggioramento di controllo del motore ictus-correlata e deficit cognitivi legati AD se confrontato con ogni condizione da solo. Per modellare la condizione combinato di ictus e AD, un romanzo transgenico modello di ratto di AD, con una forma mutata della proteina precursore dell&#39;amiloide (una proteina chiave coinvolti nello sviluppo di AD) incorporato nel suo DNA, viene dato un piccolo ictus striato unilaterale. Per un modello con la combinazione di entrambi ictus e AD, test comportamentali che valutano il controllo motore ictus-correlata, locomozione e la funzione cognitiva AD-correlati devono essere attuate. Il compito del cilindro coinvolge un apparato multifunzione conveniente che valuta l&#39;uso del motore zampa anteriore spontanea. In questo compito, un ratto viene posto in un apparecchio cilindrica, dove il ratto spontaneamente posteriore e contattare la parete del cilindro con le sue zampe anteriori. Questi contatti sono considerati uso del motore degli arti anteriori e quantificati in sede di analisi video dopo il test. Un altro compito motorio economicamente efficiente implementato è il compito fascio-passeggiata, che valuta il controllo degli arti anteriori, il controllo degli arti posteriori e locomozione. Questo compito implica un topo a piedi attraverso una trave di legno che consenta la valutazione del controllo motorio degli arti attraverso l&#39;analisi delle scivola zampa anteriore, scivola e cade arti posteriori. La valutazione dell&#39;apprendimento e della memoria si completa con Morris water maze per questo paradigma comportamentale. Il protocollo inizia con l&#39;apprendimento spaziale, per cui il ratto individua una piattaforma nascosta stazionaria. Dopo l&#39;apprendimento spaziale, la piattaforma viene rimosso e sia a breve termine e la memoria di riferimento spaziale a lungo termine è valutata. Tutti e tre questi compiti sono sensibili alle differenze comportamentali e completato entro 28 giorni per questo modello, rendendo questo paratempo-efficiente paradigma ed economicamente efficiente.

I compiti comportamentali descritti sono stati usati per dimostrare gli effetti di ictus in un modello di topo transgenico APP21 della malattia di Alzheimer. La combinazione di ictus e del transgene APP21 si dovrebbe comportare una maggiore deficit motorio negli arti colpiti, così come un aumento dei deficit di memoria. Il compito del cilindro ha valutato la funzione motoria degli arti anteriori lordo ed è rappresentato come l...

Per studiare la malattia di co-morbidità di Alzheimer (AD) e la condizione ictus in un nuovo modello, tre compiti di comportamento sono descritte che valutare sia il controllo del motore e comportamenti cognitivi. Queste attività includono il compito fascio-passeggiata, compito cilindro e labirinto d&#39;acqua di Morris.

Motore e ippocampale Dependent apprendimento spaziale e valutazione della memoria di riferimento in un transgenici ratto modello di malattia di Alzheimer con ictus

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk ...

L'obiettivo generale di questi test comportamentali è valutare la funzione motoria, nonché le prestazioni nell'apprendimento spaziale e nella memoria in un nuovo modello ratto comorbido di malattia di Alzheimer e ictus. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della demenza, come ad esempio in che modo la patologia dell'ictus e della malattia di Alzheimer interagisca, producendo un fenotipo caratterizzato da un deficit motorio potenzialmente maggiore e da un declino cognitivo accelerato. Il principale vantaggio di queste tecniche consiste nel fatto che permettono di testare un'ampia gamma di funzioni cerebrali, risultando al contempo facili da eseguire, economiche ed adatte a test ripetuti in momenti successivi.Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla prevenzione della demenza dopo un ictus, poiché nuovi composti preventivi possono essere testati per la loro capacità di migliorare il fenotipo comportamentale comorbido. Per iniziare, posizionare uno specchio a un angolo di 45 gradi al di sotto di un apparato cilindrico precedentemente montato. Successivamente, fissare una videocamera su un treppiede e posizionarla a una distanza di circa 50 centimetri dall'apparato.Verificare che l'intero diametro del cilindro presente nello specchio sia visibile sulla telecamera. Successivamente, scegliere un ratto acclimatato e su un foglio bianco annotare il numero dell'animale e ulteriori informazioni relative alla prova. Posizionare questo foglio davanti allo specchio e quindi premere il tasto di registrazione sulla videocamera.Continuare afferrando il ratto alla base della coda e posizionandolo nel cilindro. Quindi fissare il coperchio dell'apparecchiatura e rimuovere la lavagna bianca in modo che non ostruisca più lo specchio. Una volta rimossa la lavagna bianca, procedere a filmare l'animale per cinque minuti, un periodo che costituisce una singola prova.Al termine di questo periodo, interrompere la registrazione, riportare il ratto nella sua gabbia di mantenimento e pulire il cilindro con tovaglioli di carta e acqua. Quindi ripetere i passaggi precedentemente descritti altre due volte, per ottenere un totale di tre prove per ogni ratto. Una volta raccolti i dati per tutti i ratti, importare i file della videocamera in un programma di editing video e procedere a quantificare il numero di contatti con tutti e quattro gli arti come descritto nel protocollo testuale.Posizionare innanzitutto due scaffalature a circa 100 centimetri di distanza l'una dall'altra davanti a una parete nera. Successivamente, utilizzare del nastro adesivo per fissare le estremità di una trave di legno precedentemente ottenuta agli scaffali, in modo che vi sia circa un metro di legno senza supporto tra di essi. Quindi, posizionare una videocamera su un treppiede e sistemarla in modo che la telecamera inquadri l'intera lunghezza della trave.Procedere scegliendo un ratto che ha completato una sessione di addestramento sulla passerella e registrarne il numero e ulteriori informazioni relative alla prova su una lavagna bianca. Al termine, fissare con del nastro la lavagna bianca al muro dietro la passerella. Continuare posizionando la gabbia di casa dell'animale e un tubo per arricchimento ambientale, che funge da coda motivazionale in cui il ratto può entrare immediatamente dopo aver attraversato la tavola, a un'estremità della passerella.Quindi premere il tasto di registrazione sulla videocamera. Immediatamente dopo, prendere il ratto alla base della coda e posizionarlo all'estremità opposta della trave, senza gabbia e tubo. Registrare l'animale fino a quando non avrà percorso con successo l'intera lunghezza della trave rialzata, momento che segna la fine della prova.Se il ratto si ferma a metà del percorso sulla trave, toccare delicatamente la sua coda per incoraggiare il movimento. Una volta che l'animale ha completato il compito, spostare la sua gabbia di casa all'altra estremità della trave. Quindi modificare il numero della prova sulla lavagna bianca e ripetere la procedura come descritto in precedenza.Dopo aver registrato tutte le prove sugli animali, importare i file della videocamera in un programma di editing video e analizzare il passo rilevante, le scivolate degli arti e i dati relativi alle cadute come descritto nel protocollo testuale. Iniziare posizionando una videocamera sopra il centro di una piscina circolare vuota. Quindi, delimitare i quattro quadranti della vasca posizionando del nastro lungo il bordo della piscina e allinearli correttamente con il contorno della vasca nel programma software di tracciamento.Successivamente, riempire il serbatoio con acqua fino a una profondità di 36 centimetri, quindi aggiungere della vernice nera non tossica fino a quando il liquido diventa opaco, in modo da garantire che la piattaforma non sia visibile al di sotto della superficie dell'acqua e per visualizzare meglio i ratti bianchi. Una volta preparata la vasca, circondarla con superfici di parete bianche. Quindi preparare dei riferimenti spaziali ritagliando quattro forme di colori diversi da cartoncini rigidi.Successivamente, fissare una forma a ciascuna delle pareti associate alle posizioni nord, sud, est e ovest della vasca. Per eseguire un esperimento di apprendimento spaziale, procedere posizionando una piattaforma circolare nel quadrante sud-ovest della vasca. Nel programma informatico associato, verificare che questa struttura sia allineata con un'area designata per la piattaforma all'interno del quadrante.Procedere afferrando un ratto alla base della coda e posizionandolo delicatamente in un punto di partenza prestabilito nell'acqua, lungo la parete della vasca. Una volta che l'animale è nella vasca, spostarsi rapidamente fuori dal suo campo visivo e segnalare a un altro sperimentatore di avviare il software di tracciamento. Consentire al ratto di nuotare fino a quando non individua e sale sulla piattaforma.A questo punto, l'altro ricercatore deve interrompere la prova sul computer. Lasciare l'animale sulla piattaforma per 30 secondi. Se il ratto non riesce a trovare la piattaforma entro il tempo assegnato alla prova, in questo caso 90 secondi, guidare l'animale verso la struttura e lasciarlo rimanere lì per 30 secondi.Successivamente, sollevare il ratto alla base della coda e rimuoverlo dal labirinto, appoggiandolo su un asciugamano disposto su un braccio. Ripetere questa procedura altre tre volte per ogni animale con un intervallo inter-trial di 20 minuti, in modo che ciascun ratto completi un totale di quattro prove.Una volta completato l'esperimento di apprendimento spaziale, rimuovere la piattaforma dalla vasca per iniziare le prove di sonda. Nel software, verificare che la posizione precedente della piattaforma, nel quadrante sud-ovest, rimanga definita. Quindi introdurre un ratto nella vasca.Posizionarlo nell'acqua lungo la parete della vasca. Come in precedenza, allontanarsi immediatamente dalla vista dell'animale e istruire un altro sperimentatore ad avviare il software di tracciamento. Al termine della prova di 30 secondi, afferrare l'animale alla base della coda, rimuoverlo dalla vasca e quindi appoggiarlo su un braccio coperto con un asciugamano.Ripetere questa procedura una settimana dopo. Una volta completati i test di apprendimento spaziale e le prove di sonda per tutti gli animali, analizzare i dati come descritto nel protocollo testuale. I dati sull'uso delle quattro zampe ottenuti dall'apparato del cilindro sono stati raccolti da ratti transgenici APP21 tre giorni prima e sette e venti giorni dopo l'induzione dell'ictus.Quando standardizzati e confrontati con il valore che rappresenta un uso equilibrato dei quattro arti, la linea rossa in questo grafico, questi risultati indicano che i ratti con patologie concomitanti non mostrano statisticamente un deficit nell'uso dei quattro arti. Risultati simili sono stati ottenuti per animali di tipo selvatico con o senza ictus e per ratti transgenici APP21 singolarmente. Tuttavia, gli animali comorbidi hanno mostrato differenze nella funzione motoria associata alla locomozione.I dati della prova sul trave raccolti per questi ratti sette giorni prima e 21 giorni dopo l'induzione dell'ictus mostrano un aumento significativo del numero di passi necessari per attraversare la trave, fenomeno non osservato negli altri gruppi. I risultati del labirinto acquatico di Morris rivelano inoltre deficit di memoria negli animali con comorbilità, come dimostrato da questo grafico che mostra la variazione percentuale della latenza, ovvero il tempo impiegato dagli animali per raggiungere il quadrante della vasca in cui precedentemente si trovava la piattaforma, confrontando la prima e la seconda prova di ricerca. In questo caso, i ratti APP21 con ictus impiegano significativamente più tempo nella seconda prova per entrare nel quadrante bersaglio.Una differenza che non è stata evidenziata né dai ratti transgenici né dagli animali di tipo selvatico con ictus. Questo indica che gli animali con patologie concomitanti presentano un deficit della memoria a lungo termine. Durante il tentativo di questa procedura, è importante mantenere tutte le variabili il più possibile costanti durante e tra le sessioni di prova e creare un ambiente privo di stress per gli animali.Dopo aver guardato questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare le prestazioni motorie e cognitive nei modelli di ratto della demenza post-ictus.

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Il Labirinto d'acqua Morris è un compito comportamentale per testare dell'ippocampo-dipendente apprendimento e la memoria. E 'stato ampiamente utilizzato nello studio della neurobiologia, neurofarmacologia e disturbi neurocognitivi in ​​modelli di roditori.

Morris Maze prova d&#39;acqua per deficit di apprendimento e memoria in topi modello della malattia di Alzheimer

L'obiettivo di questo protocollo è studiare la cognizione spaziale nei roditori. Il labirinto d'acqua a doppia H è un test innovativo, particolarmente utile per chiarire le diverse componenti dell'apprendimento, del consolidamento e della memoria, nonché l'interazione dei sistemi di memoria.

The Double-H labirinto: una prova comportamentale robusto per l&#39;apprendimento e la memoria nei roditori

Questo manoscritto descrive un protocollo di labirinto d'acqua Morris (MWM) su misura per l'uso con un modello murino di Alzheimer comunemente usato. L'MWM è ampiamente utilizzato nei modelli murini transgenici. L'implementazione di una procedura sensibile alla deformazione di fondo del modello murino è essenziale per rilevare le differenze di gruppo.

Morris water maze Test: Ottimizzazione per ceppo di topi e Ambiente di prova

Descriviamo un protocollo immunoistochimica per studiare il profilo di attivazione dei neuroni dell'ippocampo seguito dell'esposizione ad un compito di apprendimento spaziale in un modello murino caratterizzato da deficit cognitivi di origine dello sviluppo neurologico. Questo protocollo può essere applicato a entrambi i modelli murini genetici o farmacologici caratterizzati da deficit cognitivi.

Visualizzazione immunoistochimica di ippocampale Neuron attività dopo Spatial apprendimento in un modello murino di disturbi dello sviluppo neurologico

Qui descritto è un approccio scenico di screening comportamentale che può essere utilizzato per la ricerca di composti che presentano l'efficacia in vivo sui comportamenti motori cognitivi e funzionali nei modelli di topi transgenici di β-amiloidosi e tauopatia. Questi metodi sono ottimizzati per schermare composti per attività in attività di memoria a breve termine e di lavoro.

Valutazione di alternanza spontanea, riconoscimento novello di oggetti e attacco degli arti nei modelli di topo transgenico Modelli di neuropathologia di Amiloide-β e Tau

Qui presentiamo un protocollo per una prova specifica del topo di cognizione che non richiede nuoto. Questo test può essere utilizzato per distinguere con successo i topi traumatici e lesioni cerebrali indotte da impatto corticale controllato dai controlli di sangue.

Valutare l&#39;alterazione della memoria spaziale in un modello di topi di lesioni traumatiche del cervello usando un labirinto radiale

Si tratta di un protocollo per imitare la malattia di Alzheimer in ratti dalla valutazione di danno di memoria spaziale, cambiamenti patologici di un neurone, un neurone amiloide beta proteina (Aβ) onere, e l'aggregazione di grovigli neurofibrillari, indotta tramite l'iniezione di Aβ25-35 combinato con tricloruro di alluminio e ricombinanti umani trasformando il fattore di crescita-β1.

Istituzione di un Mimic prezioso del morbo di Alzheimer nel modello animale del ratto tramite iniezione di Intracerebroventricular di proteina Beta amiloide composte

Qui, viene descritto un protocollo per condurre i test del labirinto d'acqua Morris per valutare la capacità di apprendimento e la memoria dei topi modello di malattia di Alzheimer e per valutare l'effetto dell'agopuntura manuale per il trattamento di loro è descritto.

Analisi della capacità di apprendimento e memoria in un modello di mouse malattia di Alzheimer utilizzando il Morris Water Maze

Lo scopo di questo studio è quello di stabilire e convalidare un modello animale per la ricerca nelle fasi di recupero e sequela dell'ischemia cerebrale testando l'infarto cerebrale e la funzione motoria sensoriale dopo l'occlusione/reperfusione dell'arteria cerebrale media (MCAO/R) dopo 1-90 giorni in ratti.

Un modello preclinico per valutare il recupero del cervello dopo l'ictus acuto nei ratti

Il metodo dell'ago della stenosi bilaterale asimmetrica dell'arteria carotide comune è proposto per creare un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza. Si traduce in risultati a lungo termine rispetto ai modelli precedentemente stabiliti ed è compatibile con la risonanza magnetica dal vivo. La rappresentazione visiva che dimostra la procedura fornisce una guida per padroneggiare l'intervento chirurgico.

Un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza basato sulla stenosi dell'arteria carotide comune bilaterale asimmetrica guidata da ago

L'attuale studio descrive un test del comportamento motorio fine per esaminare i deficit motori nei modelli di roditori, incluso il ratto TgF344-AD, utilizzando l'apprendimento automatico.

Un compito motorio fine per studiare la cinematica articolare in un modello preclinico di malattia neurodegenerativa

Scopri come valutare la funzione motoria e l'apprendimento spaziale in un modello di ratto comorbido per Alzheimer e ictus. Questo metodo permette di analizzare l'interazione tra le patologie e testare composti preventivi.

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Motore e ippocampale Dependent apprendimento spaziale e valutazione della memoria di riferimento in un transgenici ratto modello di malattia di Alzheimer con ictus

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