Name: Analisi di reclutamento delle cellule di tumore del polmone (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Scopri come quantificare l'accumulo di cellule tumorali nei polmoni in un modello animale di metastasi. Questa tecnica permette di studiare i meccanismi molecolari della metastasi in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tutte le procedure eseguite con i topi sono state approvate da Medical University animale ricerca comitato di Tokyo femminile.
1. iniezione della vena della coda del polmone di Lewis (LLC) delle cellule di Carcinoma
<ol><li>Mantenere le cellule LLC in DMEM completati con 10% FCS, in un umidificata 5% CO2 incubatore a 37 ° C. Le cellule devono contenere un sistema di espressione della proteina fluorescente (ad es., GFP).</li>
	<li>Rimuovere le cellule dalla piastra di coltura utilizzando un reagente di dissociazione non enzimatica delle cellule. Seguire il protocollo del produttore.</li>
	<li>Raccogliere le cellule in una provetta da 15 mL e centrifugare a 400 x g per 3 min. Risospendere le cellule in 5 mL di PBS pipettando e centrifugare la provetta (400 x g, 3 min). Quindi, rimuovere il surnatante.<ol>
<li>Ripetere questo passaggio di lavaggio ancora una volta.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dopo il secondo lavaggio, passare le cellule attraverso un colino di cella (dimensione dei pori di 40 µm) e risospendere in PBS per ottenere una densità di cella finale di 1 x 106 cellule/mL.</li>
	<li>Iniettare 0,1 mL di sospensione cellulare (1 x 105 celle, ago 29 G) in ogni mouse C57BL/6 (maschi di 8-10 settimane vecchio) tramite vena caudale.</li>
</ol>2. isolamento dei polmoni e contando le cellule sotto un microscopio stereoscopico di fluorescenza
<ol><li>Eutanasia i topi da inalazione di CO2 .</li>
	<li>Togliere la pelle sulla superficie ventrale del torace con le forbici. Quindi, tagliare le costole e il diaframma per esporre la cavità toracica. Filo PBS (100 cmH2O, totale 15 mL) attraverso il ventricolo destro con un ago di 25 G di infusione ad alette e tubi.</li>
	<li>Tagliare il cuore e il timo. Afferrare la trachea con il forcipe e tirare verso l'alto, il tessuto connettivo intorno trachea di dissezione con forbici. Sezionare i polmoni e lavarli in PBS.</li>
	<li>Staccare ogni lobo e osservarlo sotto un microscopio stereoscopico di fluorescenza.</li>
</ol>3. polmone digestione
<ol><li>Sciogliere 10 mg di collagenasi, 10 mg di dispase e 10 µ g di dnasi in 10 mL di DMEM privo di siero. Filtrare attraverso un filtro per siringa da 0,22 µm per preparare la soluzione di digestione enzimatica.</li>
	<li>Tagliare a dadini il lobo caudale isolato con le forbici. Mettere i pezzi di polmone in una siringa da 10 mL, seguita dallo stantuffo.</li>
	<li>Aspirare la soluzione di digestione (5 mL) nella siringa tirando indietro lo stantuffo. Azionare lo stantuffo su e giù fino a che il polmone scende nella soluzione. Quindi, inserire il buffer del polmone e la digestione in un tubo da 50 mL.</li>
	<li>Agitare il tubo per 15 min a 37 ° C in un agitatore reciproco (150 rpm). I polmoni possono diventare brandelli durante questa incubazione.</li>
	<li>Pipettare su e giù fino a quando le cellule del polmone sono completamente dispersi. Agitare il tubo per ulteriori 30 min a 37 ° C in un agitatore reciproco (150 rpm).</li>
	<li>Passare le cellule del polmone attraverso un colino di cella 40 µm. Rotazione verso il basso le cellule a 400 x g per 3 min.</li>
</ol>4. flusso Cytometry delle cellule del polmone
<ol><li>Sciogliere 100 mg di BSA in 10 mL di PBS e filtrare attraverso un filtro per siringa 0,22 µm per preparare PBS - 1% BSA.</li>
	<li>Rimuovere il surnatante del campione ottenuto a passo 3.6 utilizzando una pipetta e aggiungere 2 mL di soluzione di lisi delle cellule di anima rosse. Quindi, lo spin down le cellule a 400 x g per 3 min. eliminare il supernatante.</li>
	<li>Risospendere le cellule in 5 mL di PBS - 1% BSA pipettando e centrifugare la provetta (400 x g, 3 min). Scartare il surnatante.<ol>
<li>Ripetere questo passaggio di lavaggio ancora una volta.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sospendere le cellule in 1 mL di PBS - 1% BSA e passare attraverso un nuovo filtro cella 40 µm.</li>
	<li>Analizzare le cellule con un citometro a flusso per contare le cellule del tumore (utilizzando filtro installazione FL1 per GFP-LLC).</li>
</ol>

<ol><li>Valastyan, S., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+molecular+insights+and+evolving+paradigms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms.</a> Cell. 147 (2), 275-292 (2011).</li>
<li>Kaplan, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR1-positive+haematopoietic+bone+marrow+progenitors+initiate+the+pre-metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche.</a> Nature. 438 (7069), 820-827 (2005).</li>
<li>Hiratsuka, S., Watanabe, A., Aburatani, H., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-mediated+upregulation+of+chemoattractants+and+recruitment+of+myeloid+cells+predetermines+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tumour-mediated upregulation of chemoattractants and recruitment of myeloid cells predetermines lung metastasis.</a> Nature Cell Biology. 8 (12), 1369-1375 (2006).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+S100A8-serum+amyloid+A3-TLR4+paracrine+cascade+establishes+a+pre-metastatic+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The S100A8-serum amyloid A3-TLR4 paracrine cascade establishes a pre-metastatic phase.</a> Nature Cell Biology. 10 (11), 1349-1355 (2008).</li>
<li>Tomita, T., Sakurai, Y., Ishibashi, S., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imbalance+of+Clara+cell-mediated+homeostatic+inflammation+is+involved+in+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Imbalance of Clara cell-mediated homeostatic inflammation is involved in lung metastasis.</a> Oncogene. 30 (31), 3429-3439 (2011).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+amyloid+A3+binds+MD-2+to+activate+p38+and+NF-%CE%BAB+pathways+in+a+MyD88-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Serum amyloid A3 binds MD-2 to activate p38 and NF-κB pathways in a MyD88-dependent manner.</a> Journal of Immunology. 191 (4), 1856-1864 (2013).</li>
<li>Erler, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-induced+lysyl+oxidase+is+a+critical+mediator+of+bone+marrow+cell+recruitment+to+form+the+premetastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-induced lysyl oxidase is a critical mediator of bone marrow cell recruitment to form the premetastatic niche.</a> Cancer Cell. 15, 35-44 (2009).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+destabilization+in+the+premetastatic+phase+facilitates+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular destabilization in the premetastatic phase facilitates lung metastasis.</a> Cancer Research. 69 (19), 7292-7237 (2009).</li>
<li>Sceneay, J., Smyth, M. J., Möller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-metastatic+niche%3A+finding+common+ground%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">The pre-metastatic niche: finding common ground.</a> Cancer Metastasis Reviews. 32 (3-4), 449-464 (2013).</li>
<li>Castle, J., Shaker, H., Morris, K., Tugwood, J. D., Kirwan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+circulating+tumor+cells+in+breast+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">The significance of circulating tumor cells in breast cancer: A review.</a> The Breast. 23, 552-560 (2014).</li>
<li>Wolf, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+CCR2+signaling+induced+by+colon+carcinoma+cells+enables+extravasation+via+the+JAK2-Stat5+and+p38MAPK+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Endothelial CCR2 signaling induced by colon carcinoma cells enables extravasation via the JAK2-Stat5 and p38MAPK pathway.</a> Cancer Cell. 22 (1), 91-105 (2012).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+tumours+modulate+innate+immune+signalling+to+create+pre-metastatic+vascular+hyperpermeability+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Primary tumours modulate innate immune signalling to create pre-metastatic vascular hyperpermeability foci.</a> Nature Communications. 4, 1853(2013).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eritoran+inhibits+S100A8-mediated+TLR4%2FMD-2+activation+and+tumor+growth+by+changing+the+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Eritoran inhibits S100A8-mediated TLR4/MD-2 activation and tumor growth by changing the immune microenvironment.</a> Oncogene. 35 (19), 1445-1456 (2016).</li>
<li>Ieguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAM12-cleaved+ephrin-A1+contributes+to+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">ADAM12-cleaved ephrin-A1 contributes to lung metastasis.</a> Oncogene. 33 (17), 2179-2190 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Pre-trattamento dei topi con anticorpi, farmaci, una dieta ricca di grassi o medio del tumore-condizionato prima dell'iniezione delle cellule del tumore è possibile. Il passo più difficile in questo dosaggio è l'iniezione della vena della coda. Iniezione incompleta provoca dati inconcludenti. La vena della coda in C57BL/6 è particolarmente difficile da identificare, con conseguente iniezioni non riuscite. Ponendo i mouse su un rilievo di riscaldamento (° C 37) aiuta a dilata la vena di coda affinché iniezione diventa più...

Metastasi del tumore rappresenta alta mortalità nelle malattie legate al cancro. Dal punto di vista delle indagini a livello molecolare, metastasi può essere diviso in più fasi: l'inizio del tumore al luogo primario del tumore, la crescita del tumore primario e invasione nei circostanti tessuti, intravasation, circolazione attraverso i vasi sanguigni , lo stravaso in organi distanti e la ricrescita del tumore. Ogni fase prevede diversi insiemi di molecole/segnali1.
Gli studi fin qui sono stati interessati con eventi che si verificano in organi distanti, prima le cellule tumorali circolanti nel sangue, che è anche conosciuto come la fase pre-metastatico2,3,4,5, 6. I nostri studi di modello del mouse ha rivelato che la fase di pre-metastatica facilita la metastasi del polmone con la creazione di lunga durata e basso livello le risposte infiammatorie nei polmoni. La fase di pre-metastatica è caratterizzata da hyperpermeability di themicrovasculature, reclutamento di cellule di derivazione midollare (BMDC) e il upregulation di citochine/chemochine-come molecole tra cui S100A8 e SAA33,4 . È stato segnalato che lisil ossidasi consente di modificare la matrice extracellulare nei polmoni per reclutare BMDCs7. Un altro rapporto ha rivelato l'importanza della Angpt2, MMP3 e MMP10 nella fase pre-metastatico8. In altre parole, le intricate interazioni tra tumori primari, midollo osseo e organi remoti devono essere capito e correttamente modulata (ad esempio, utilizzando farmaci mirati proteine coinvolte in queste interazioni) per prevenire futura metastasi9 . Per regolare la fase di pre-metastatica, in primo luogo dovrebbe essere visualizzato e valutato per interventi diagnostici o terapeutici. Qui, segnaliamo un'analisi di reclutamento polmonare del tumore delle cellule che consente lo studio della fase pre-metastatico nei polmoni.
Le cellule del tumore iniettate direttamente nel vaso sanguigno del mouse sono simili a fare circolare le cellule del tumore in malati di cancro, anche se ci possono essere differenze tra cellule coltivate e cellule tumorali circolanti. Cellule tumorali circolanti stessi subire alcuni cambiamenti caratteristici quando entrano in circolazione dal tumore primario. Tuttavia, le cellule coltivate possono formare tumori in topi immunodeficienti quando vengono iniettati nella vena caudale. Inoltre, nel sistema modello del mouse, può essere utilizzato fluorescenza etichettato le cellule del tumore che consentono il rilevamento di queste cellule nel corpo. Il comportamento di cellule tumorali circolanti è critico che determinano le estreme conseguenze in cancro pazienti10. Sangue non è un buon posto per la sopravvivenza del tumore le cellule2. Hanno bisogno di fuggire da attacco da sistema immunitario dell'ospite e hanno bisogno di segnali anti-apoptotici per prevenire l'apoptosi dovuto una mancanza di supporto fisico. Le cellule del tumore con maggiore abilità dell'inizio del tumore ai siti metastatici generano più noduli del tumore. Se le cellule tumorali mostrano tropismo organo specifico, metastasi dovrebbe essere osservata in quegli organi particolari. In questa analisi, non sono inclusi i passaggi iniziali della cascata metastatica (crescita primaria del tumore e l'invasione), e così il focus è sull'interazione fra le cellule del tumore e le cellule stromali (cellule endoteliali, cellule epiteliali e le cellule del sangue) di circolazione. Nelle analisi di iniezione delle cellule del tumore convenzionali, i ricercatori devono attendere fino a quando i noduli del tumore crescono a una dimensione tangibile per rilevare la metastasi. In questo caso, il numero esatto delle cellule del tumore nel vaso sanguigno non può essere quantificato. Inoltre, questo processo include una fase di ricrescita del tumore, che indica che altri fattori nelle cellule del tumore possono influenzare il risultato.
Conteggio etichettato le cellule del tumore sotto un microscopio stereoscopico di fluorescenza è un processo semplice. Lo stereomicroscopio fornisce un ampio campo di vista in modo che l'intero polmone può essere scansionato. Citometria a flusso è anche un utile strumento che dà immediatamente un numero preciso di cellule del tumore nel tessuto. Contando le cellule fluorescenti nel tessuto sotto un microscopio confocale è anche possibile e visualizza le immagini più precise delle cellule del tumore metastatico, ma esso richiede tempo e può dare risultati parziale se solo un'area selezionata viene conteggiata. L'obiettivo finale di questo test è quello di osservare come facilmente le cellule del tumore si accumulano nei polmoni. Come riferito precedentemente3,4, se i polmoni sono in fase pre-metastatico a causa della segnalazione infiammatoria dal tumore primario, le cellule tumorali iniettate sono inclini ad accumularsi nei polmoni, così che implica una maggiore probabilità di metastasi del polmone. Altre condizioni (artrite reumatoide, asma, ecc.) e il loro trattamento con agenti anti-infiammatori (ad esempio anti-TNFα) può attenuare la metastasi del polmone. Quindi, possiamo concludere che questo test è un potente strumento per valutare la possibilità della metastasi del polmone.

<table><tbody><tr><td>Collagenasi</td><td>Sigma</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>Dispasi</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>senza calcio, senza magnesio</td></tr><tr><td>Desossiribonucleasi I</td><td>Sigma</td><td>DN-25</td><td>tracce</td></tr><tr><td>tampone di lisi RBC</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Filtro cellulare</td><td>BD</td><td>352340</td><td>maglia 40 micrometri</td></tr><tr><td>Kit di marcatura a fluorescenza</td><td>Sigma</td><td>MIN26-KIT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m filtro per siringa</td><td>sartorius</td><td>17597K</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. composto</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeide fosfato soluzione tampone</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr></tbody></table>

analisi di reclutamento delle cellule di tumore del polmone

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Per studiare i meccanismi molecolari che regolano la metastasi del tumore, sono stati proposti vari saggi usando il mouse come un animale di modello. Qui, dimostriamo un semplice test per valutare lo stravaso delle cellule di tumore o micrometastasi. In questa analisi, le cellule del tumore sono state iniettate attraverso la vena caudale, e dopo un breve periodo, i polmoni erano dissecati e digeriti per contare le cellule del tumore con etichetta accumulato. Questo test salta il passaggio iniziale dell'invasione del tumore primario nel vaso sanguigno e facilita lo studio di eventi in organi distanti dove si verifica la metastasi del tumore. Il numero di cellule iniettate nel vaso sanguigno può essere ottimizzato per osservare un numero limitato di metastasi. È stato segnalato che le cellule stromal in organi distanti contribuiscano alla metastasi. Così, questo test potrebbe essere uno strumento utile per esplorare il potenziale terapeutici farmaci o dispositivi per la prevenzione della metastasi del tumore.

I polmoni presentano molte cellule GFP-LLC 2 h dopo l'iniezione (Figura 1A). Dovrebbe essere notato che le macchie fluorescenti anche rilevate nel filtro rosso devono essere escluso dal conteggio del numero di cellulare. La maggior parte delle cellule LLC scomparsa dai polmoni 24 h dopo l'iniezione (Figura 1).
Per confermare il numero della GFP-LLC nei polmoni, uno dei ...

Questo manoscritto descrive un metodo per quantificare l'accumulo di cellule del tumore nei polmoni in un modello animale della metastasi del tumore.

Analisi di reclutamento delle cellule di tumore del polmone

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia tumorale sui meccanismi molecolari della metastasi. Il principale vantaggio di questa tecnica è che il reclutamento di cellule tumorali all'interno di un organo remoto può essere quantificato. Inizia usando un reagente di dissociazione cellulare non enzimatica per rimuovere il carcinoma polmonare lewis che esprime proteine fluorescenti, o LLC, dalle loro cellule di coltura secondo protocolli standard.Trasferire la soluzione cellulare risultante in un tubo conico da 15 millilitri prima della centrifugazione e centrifugare lavare il pellet due volte in cinque millilitri di PBS per lavaggio. Dopo il secondo lavaggio, filtrare le cellule attraverso un filtro cellulare a poro di 40 micrometri e diluire la sospensione a una volta per 10 alle sei cellule per concentrazione di millilitro. Quindi caricare le cellule in una siringa da un millilitro dotata di un ago calibro 29 e iniettare 100 microlitri di cellule nella vena di coda di ogni topo maschio di otto-10 settimane, C57-Black-6.All'endpoint sperimentale appropriato, utilizzare le forbici per rimuovere la pelle dalla superficie ventrale di ogni topo e tagliare le costole e il diaframma per esporre la cavità toracica. Utilizzare un ago per infusione alato calibro 25 e tubi per lavare 15 millilitri di PBS attraverso il ventricolo destro e rimuovere il cuore e il timo. Afferrando la trachea con le forcelle, tirare su, sezionando i tessuti connettivi intorno alla trachea, per raccogliere i polmoni.Quindi lavare i polmoni in PBS e staccare un lobo per la visualizzazione delle cellule fluorescenti in situ al microscopio a fluorescenza. Per digerire il tessuto polmonare, prima dadi il lobo caudale con le forbici e posiziona i pezzi polmonari in una siringa da 10 millilitri. Chiudere la siringa con lo stantuffo e aspirare cinque millilitri di soluzione di digestione nella siringa, spostando lo stantuffo in entrata e in uscita dall'albero della siringa fino a quando il tessuto polmonare non viene diffuso in tutta la soluzione.Erogare il liquame polmonare in un tubo da 50 millilitri e digerire il tessuto su uno shaker reciproco per 15 minuti a 37 gradi Celsius e 150 giri/min. Alla fine dell'incubazione, triturare il tessuto rimanente fino a quando le cellule polmonari non sono completamente disperse e restituire il tubo allo shaker per altri 30 minuti. Quindi filtrare le cellule attraverso un colino poro di 40 micrometri e raccogliere le cellule mediante centrifugazione.Per analizzare le cellule polmonari isolate per citometria a flusso, rimescolare il pellet in due millilitri di tampone di lisi dei globuli rossi per un minuto a temperatura ambiente e raccogliere le cellule per centrifugazione. Quindi centrifugare il pellet due volte in cinque millilitri di PBS fresco integrato con l'1% di albumina di siero bovino per lavaggio. Dopo la seconda centrifugazione, rimescolare il pellet in un millilitro di PBS fresco più BSA e filtrare le cellule attraverso un nuovo colino poro di 40 micrometri per la quantificazione delle cellule tumorali per citometria a flusso.I polmoni presentano molte cellule GFP-LLC due ore dopo l'iniezione, con la stragrande maggioranza delle cellule che scompaiono dai polmoni entro 24 ore. Si noti che tutte le macchie fluorescenti rilevate all'interno del filtro rosso devono essere escluse dal conteggio delle celle. Per confermare il numero di GFP-LLC nei polmoni, uno dei lobi può essere utilizzato per l'analisi citometrica del flusso come dimostrato.Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che una procedura di sezione congelata è un metodo più accurato per osservare la posizione esatta delle cellule tumorali.

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Descriviamo un protocollo per monitorare la mobilità radiale delle cellule immunitarie non aderenti in vitro utilizzando un collettore/apparato di vetrini per sedimentazione cellulare. La migrazione cellulare viene tracciata su monostrati di cellule tumorali o su proteine della matrice extracellulare. L'esame al microscopio ottico e a fluorescenza consente di osservare la mobilità cellulare e la funzionalità citotossica.

Radial Mobilità e citotossico Funzione retrovirale Replica vettoriale trasdotte, non aderente Alloresponsive Linfociti T

I neutrofili svolgono un ruolo importante non solo nella difesa dell'ospite contro i microrganismi invasori, ma sono anche coinvolti nella sorveglianza immunitaria delle cellule tumorali. Qui, descriviamo le tecniche relative all'isolamento di neutrofili con proprietà antitumorali e i metodi per monitorare la funzione dei neutrofili antitumorali in vitro e in vivo.

Isolamento e caratterizzazione di neutrofili con proprietà antitumorali

Questo metodo valuta l'invasione delle cellule tumorali dagli sferoidi in una matrice 3D circostante.  Gli sferoidi vengono generati con il metodo della coltura a goccia sospesa e quindi incorporati in una matrice composta da materiali a membrana basale e collagene di tipo I.  L'invasione degli sferoidi viene successivamente monitorata.

Un Cancer Cell Saggio sferoide valutare Invasion in un Ambiente 3D

Presentato ecco un metodo semplice per l'isolamento e il flusso citometria di cellule mononucleate del sangue periferico gliomi infiltranti che produce dati quantitativi dipendenti dal tempo sul numero e l'attivazione dello stato di cellule immunitarie che entrano presto microambiente tumorale al cervello.

Isolamento e analisi citofluorimetrica di-Glioma infiltrazione sangue periferico mononucleari Cellule

Un modello animale è necessario per decifrare il ruolo di fare circolare le cellule del tumore (CTCs) nel promuovere la colonizzazione del polmone durante la metastasi del cancro. Qui, abbiamo stabilito ed effettuato con successo un in vivo analisi specificamente prova il requisito dell'Assemblea polimerici fibronectina (polyFN) su CTCs per colonizzazione del polmone.

L'istituzione di un'analisi di colonizzazione del polmone per la visualizzazione di cellule del tumore nei tessuti polmonari di circolazione

Qui, presentiamo un protocollo per utilizzare iniezione ultrasuono-guida del neuroblastoma (NB) e cellule (ES) il sarcoma di Ewing (stabilito linee cellulari e cellule tumorali derivate dal paziente) biologicamente rilevanti siti per creare modelli preclinici affidabili per il cancro ricerca.

L'utilizzo degli ultrasuoni guidati l'impianto cellulare diretto del tessuto per l'istituzione degli xenotrapianti del tumore metastatico biologicamente rilevanti

Qui, descriviamo le tecniche di imaging di cellule vive per misurare quantitativamente la migrazione e l'invasione delle cellule staminali tumorali di glioblastoma del cervello nel corso del tempo e sotto condizioni multiple di trattamento.

Analisi Live Cell Imaging Studio Glioblastoma cerebrale tumore cellule staminali migrazione e invasione

Qui, descriviamo un metodo semplice ed economico che permette la quantificazione delle cellule tumorali adesive alle criosezioni dei linfonodi (LN). Le cellule tumorali aderenti a LN sono facilmente identificabili dalla microscopia leggera e confermate da un metodo basato sulla fluorescenza, dando un indice di adesione che rivela l'affinità di legame delle cellule tumorali al parenchyma LN.

Quantificazione dell'adesione delle cellule tumorali nelle Criosezioni del linfonodo

L'approccio descritto combina saggi sperimentali di metastasi della vena della coda con immagini animali vive in vivo per consentire il monitoraggio in tempo reale della formazione e della crescita della metastasi del cancro al seno, oltre alla quantificazione del numero e delle dimensioni delle metastasi nei polmoni.

Uso combinato dei saggi di metastasi della vena della coda e dell'imaging in vivo in tempo reale per quantificare la colonizzazione metastatica del cancro al seno e il carico nei polmoni

L'approccio presentato valuta simultaneamente l'invasione delle cellule tumorali nei saggi dello sferoideo 3D e nella citotossicità delle cellule T. Gli spheroidi sono generati in un cast multi-microwell senza scaffold. La co-coltura e l'incorporamento nella matrice di collagene di tipo I vengono eseguite all'interno dello stesso dispositivo che permette di monitorare l'invasione delle cellule tumorali e la citotossicità mediata a cellule T.

Monitoraggio dell'invasione delle cellule tumorali e della citotossicità delle cellule T nella cultura 3D

La coltura di CTC consente una caratterizzazione funzionale più profonda del cancro, attraverso l'analisi dell'espressione di marcatori specifici e la valutazione della resistenza ai farmaci e della capacità di colonizzare il fegato tra le altre possibilità. Nel complesso, la cultura CTC potrebbe essere uno strumento clinico promettente per la medicina personalizzata per migliorare l'esito del paziente.

Linee cellulari tumorali circolanti: uno strumento innovativo per la ricerca fondamentale e traslazionale

Scopri come quantificare l'accumulo di cellule tumorali nei polmoni in un modello animale di metastasi. Questa tecnica permette di studiare i meccanismi molecolari della metastasi in vivo.

Analisi di reclutamento delle cellule di tumore del polmone

Esplora altri video