Name: Condizioni che influiscono spazio sociale in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Scopri come quantificare la distanza sociale preferita in Drosophila melanogaster utilizzando una camera di spazio sociale. Questo metodo consente di analizzare i fattori genetici e ambientali che influenzano il comportamento sociale.

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Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Tadmiri Venkatesh per il suo incoraggiamento a preparare questo manoscritto, Dova Brenman e Selwyn Chui per i loro commenti costruttivi, Elyssa Burg e Wayne Rasband per aver progettato la macro in ImageJ per tutte le distanze di interfly e per le distanze più vicine. Gli autori desiderano inoltre ringraziare i revisori per i loro commenti costruttivi.
A.A.A, M.C.C. e A.F.S erano responsabili della progettazione della ricerca; S.N.J., A.A.A., M.N., Z.R. e A.J.M. hanno eseguito gli esperimenti. A.A.A, M.N., A.J.M. e M.C.C e A.F.S. hanno analizzato i dati; A.R.M. e A.F.S. hanno scritto il manoscritto.
Questo lavoro è stato sostenuto da premi di ricerca PSC-CUNY, finanziati congiuntamente dal Professional Staff Congress e dalla City University di New York ad A.F.S.; da finanziamenti interni dalla Western University ad A.F.S.; da una borsa di studio per laureati in Matematica, Biologia, Chimica e Geologia per insegnanti in formazione e da una borsa di studio Louis Stokes Alliance for Minority Participation ad A.A.A.

1. Attrezzature e reagenti creato in casa (vedi elenco dei materiali per gli Altri) <ol><li> Preparare un apparato di anestesia fredda Drosophila come descritto in precedenza 8. </li><li> Preparare un aspiratore mosca come descritto in precedenza 13. </li><li> Preparare camere spazio sociale e titolari. <ol><li> Ordinare o fare lastre di vetro e distanziali acrilico per creare le camere di spazio sociale. Ogni camera di spazio sociale è costituito da due lastre di vetro quadrati (17,6 cm per 17,6 cm, con uno spessore di 0,3 cm), due giusti distanziali triangolo acrilico (con un&#39;altezza di 16,5 cm, una base di 8,9 cm, con uno spessore di 0,3 cm ), e due spazi rettangolari (9 cm per 1,5 cm con uno spessore di 0,3 cm) (Figura 1A). </li><li> Montare il vetro e acrilico camera spazio sociale tale che è identica alla camera in Figura 1B. Per fare ciò, iniziare inserendo un distanziale triangolare piatta sulla parte superiore di un pannello quadrato di vetro in modo che l&#39;angolo rettodel distanziale triangolare è allineato con uno degli angoli del riquadro quadrato. Successivamente, posizionare il secondo distanziale piatto triangolare sulla parte superiore del pannello piazza, rispecchiando il primo distanziale triangolare. NOTA: Assicurarsi di indossare i guanti per non contaminare i pezzi con oli e profumi dalle vostre mani. </li><li> Inserire due piccoli distanziatori rettangolari piane sopra il riquadro piazza, lungo il lato del pannello che non è coperto. I distanziatori acrilico sulla parte superiore del piano piazza ora dovrebbero formare un&#39;arena triangolare. </li><li> Posizionare un secondo pannello quadrato di vetro sulla parte superiore dei distanziali acrilici tale che sia allineato sopra il riquadro originale di vetro inferiore. </li><li> Utilizzare quattro clip legante per fissare i vetri e distanziali insieme per formare la camera di spazio sociale. Inserire una clip vicino all&#39;angolo, sul lato lungo ciascuno dei distanziatori triangolari, fissandoli all&#39;interno delle lastre di vetro. Su questi stessi lati, inserire una clip in un angolo adiacente, su ciascuno dei distanziatori rettangolari, fissandoli inlato i vetri. </li><li> Assemblare un cavalletto di sostegno ed un morsetto matraccio tale che il morsetto manterrà la camera spazio sociale in posizione verticale, come la camera di spazio sociale poggia sul suo bordo sulla parte superiore della superficie di lavoro. </li><li> Per ogni ripetizione nell&#39;esperimento, assemblare una camera di spazio sociale e sostenere stare. </li></ol></li><li> Preparare un apparato di risposta test arrampicata per verificare la capacità di salita delle mosche testati. <ol><li> Utilizzare un apparato in controcorrente, come precedentemente descritto 14,15. </li></ol></li><li> Garantire un&#39;illuminazione omogenee eseguendo l&#39;esperimento su una superficie di lavoro coperto con un coperchio panchina bianca e di fronte a uno sfondo bianco. </li></ol> 2. Preparazione delle mosche prima dell&#39;esperimento <ol><li> Mantenere mosche in flaconi contenenti standard di Drosophila volare cibo. Tenerli in una camera di incubazione a 25 ° C su una luce 12 hr / buio ciclo. </li><li> Uno o due giorni prima della postaXperiment, raccogliere e sesso vola in anestesia freddo, come descritto in precedenza 8. <ol><li> Raffreddare l&#39;apparecchio di anestesia freddo a -4 ° C. Luogo vola in 50 ml provette di plastica. Immergere completamente le provette di plastica contenenti mosche in ghiaccio in un secchio di ghiaccio isolato, attendere almeno 5 minuti per le mosche di diventare immobile. </li><li> Posizionare linea sul foglio di polietilene dell&#39;apparato anestesia fredda. A RT, utilizzare uno stereomicroscopio per separare i maschi dalle femmine. Mantenere le mosche, in gruppo, in flaconi contenenti norma Drosophila volare cibo, non supera i 40 mosche per flaconcino. </li></ol></li><li> Due ore prima dell&#39;inizio dell&#39;esperimento, assicurarsi che la temperatura della stanza in cui verrà eseguita l&#39;esperimento è compresa tra 24-25 ° C e l&#39;umidità è circa il 50%. </li><li> Trasferire le mosche in nuove fiale contenenti cibo, e metterli per 2 ore sul piano di lavoro in cui verrà eseguita l&#39;esperimento. NOTA: Per questi speriments, i ceppi mosca utilizzati sono stati Drosophila ceppi melanogaster: Cantone-speciali o Canton-S (CS), w 1118 Cs 10 (o W - w 1118 outcrossed 10 volte di Canton-S), Oregon e Samarcanda mosche erano tutti dal nostro laboratorio 16 titoli; Mosche Elwood sono stati raccolti in autunno 2011 nel quartiere Elwood di Huntington, a Long Island, New York, Stati Uniti d&#39;America 8. A parte quando diversamente specificato, i risultati presentati sono stati ottenuti con Canton-S mosche (nei toni del rosso). </li></ol> 3. Esecuzione dell&#39;esperimento <ol><li> Eseguire l&#39;esperimento 12:00-03:00 (ora Zeitgeber - il tempo in ore dopo l&#39;insorgenza di luce - di ZT 4-7). </li><li> Preparare la camera di spazio sociale per il trasferimento di mosche. <ol><li> Posizionare una TV camera di spazio sociale su un piano di lavoro, con il lato contenente distanziatori rettangolari più vicini al vostro corpo. </li><li> Rimuovere one fermaglio più vicino il vostro corpo e far scorrere un distanziale rettangolare verso l&#39;esterno, creando un gap di circa 1 cm tra i distanziatori rettangolari. </li><li> Con del nastro e un pennarello, etichettare la camera di spazio sociale in un angolo superiore con il sesso, lo sforzo, e il numero di ripetizione. Fare attenzione al fine di garantire il nastro non copre parte dell&#39;arena triangolare interno. </li></ol></li><li> Trasferire le mosche nella camera di spazio sociale. <ol><li> Trasferimento vola da loro flacone contenente cibo in un nuovo, fiala vuota. Aspirare aria dal fiala vuota e trasferirli nella camera di spazio sociale. <ol><li> Inspirate per disegnare le mosche nella punta dell&#39;aspiratore. Posizionare la punta nella fessura 1 cm tra i distanziatori rettangolari della camera di spazio sociale ed espirare a un ritmo costante per forzare linea nell&#39;arena triangolare interno. </li><li> Immediatamente far scorrere il distanziatore rettangolare al suo posto, chiudendo la base dell&#39;arena triangolari interiore, e posizionare la clip legante indietro. </li></ol></li&gt; </ol></li><li> Su un pad martellamento, che si trova sul banco diverso da quello in cui il lavoro sperimentale avviene, tenere la camera spazio sociale montante tale che i distanziatori rettangolari sono sul lato inferiore. Pound tre volte per garantire tutte le mosche sono caduti sul fondo dell&#39;arena. NOTA: A causa del distanziale in acrilico che esce la più piccola dimensione della camera (Figura 1D), battere i gomiti sul piano di lavoro, pur mantenendo una presa sicura su apparati per garantire le mosche sono caduti sul fondo. </li><li> Avviare un timer. </li><li> Posizionare la camera spazio sociale sul piano di lavoro e utilizzando il cavalletto pallone di supporto e morsetto per tenerlo in posizione verticale. Posizionare un righello o un adesivo di lunghezza nota piatto contro la camera di spazio sociale, ma non a copertura di qualsiasi parte dell&#39;arena triangolare interno. <ol><li> Per gli esperimenti in posizione orizzontale, non posizionare la camera di spazio sociale nel cavalletto di sostegno; invece porre l&#39;appartamento camera di spazio sociale sul piano di lavoro. </li></ol&gt; </li><li> Quando le mosche si sono stabiliti, di solito dopo circa 30 minuti, scattare una foto della camera di spazio sociale. Assicurarsi che il telaio contiene l&#39;intera arena interna triangolare, il sovrano, e l&#39;etichetta. </li><li> Ripetere l&#39;esperimento per ogni genotipo e condizione (idealmente 3 repliche interne e 3 ripetizioni indipendenti). </li></ol> 4. Analizzare lo spazio dati sociale <ol><li> Importare i seguenti macro in ImageJ 17 <ol><li> ImageJ è disponibile qui: http://rsbweb.nih.gov/ij/. </li><li> È possibile creare un comando &#39;misurare le distanze &quot;nel menu Plugin salvando le macro di seguito in un file chiamato&#39; Measure_Distances.txt &#39;nella cartella di ImageJ / plugins, nella sottocartella macro, e con il comando Aiuto&gt; comando Update Menu&#39;. </li><li> Copia in un file .txt le macro che sono forniti in dati supplementari e sono stati originariamente pubblicati in 3. </li></ol></li><li> Caricare le foto su un computer, e aprire uno picture utilizzando ImageJ. <ol><li> Creare una scala tracciando una linea da 0 cm a 1 cm segni sul righello nella foto, e sotto la scheda Analizza, scegli la funzione Imposta Scala per impostare una scala di 1 cm per quella distanza (stesso approccio per la vignetta di lunghezza nota). Scegliere l&#39;opzione globale prima di applicare la scala per l&#39;immagine. </li><li> Ritagliare l&#39;immagine utilizzando la funzione Ritaglia nella scheda Immagine tale che include tutte le mosche, mentre la rimozione come gran parte del resto del quadro il più possibile. </li><li> Rendere l&#39;immagine in bianco e nero, scegliendo a 8 bit dall&#39;opzione Tipo nella scheda Immagine. </li><li> Rimuovere tutti i rumori di fondo dal quadro andando alla funzione Soglia sotto l&#39;opzione Regola della scheda Immagine. Trascinare i cursori per aumentare o rimuovere il contrasto in modo che il corpo di ciascun volo può essere visto chiaramente senza altre marcature nell&#39;immagine. Se ci sono segni che non sono le mosche, li cattura con lo strumento rettangolare ed eliminarli. </li><li> Impostare ille misurazioni utilizzando lo strumento Misure Imposta nella scheda Analisi. Selezionare Area, Centro della Messa, Centroid, e Etichetta visualizzata. Quindi, scegliere il Particelle Analizza presentano nella scheda Analizza per creare un elenco numerato di tutte le macchie nere che rappresentano mosche. <ol><li> Quando si utilizza Analizzare le particelle; Dimensioni set 0,01-0,1 (non scegliere unità pixel); circolarità 0,00-1,00; mostrare contorni; visualizzare i risultati, e aggiungere al responsabile. </li><li> Assicurarsi che ogni macchia nera (ogni particella) è una rappresentazione accurata delle mosche che sono nell&#39;immagine originale, confrontando l&#39;elenco numerato per l&#39;immagine originale. NOTA: Se alcune mosche che sono molto vicine tra loro contati come una particella, disegnare manualmente una linea bianca per separare le due mosche sull&#39;immagine binaria. </li></ol></li><li> Mentre è selezionato nell&#39;elenco, utilizzare il vicino più vicino - Lista distanze macro sotto la seconda opzione Macro nella scheda Plugin per creare un nuovo elenco contenente le distanze, in cm, da EAch volare a loro vicino più prossimo. </li></ol></li><li> Copiare i più vicini distanze vicine da ImageJ e incollarlo in una colonna di un foglio di calcolo. <ol><li> Compilare tutti i dati di ogni ripetizione sullo stesso foglio di calcolo e di organizzare per il genotipo e condizione. </li></ol></li><li> Eseguire l&#39;analisi dei dati utilizzando il software statistico. In questo esperimento, Grafico Pad Prism (versione 6 per MacOSX, GraphPad Software, San Diego California, www.graphpad.com) è stato utilizzato per condurre un ANOVA e test Kruskal-Wallis, Tukey e post-hoc test di Dunnet. </li><li> La distribuzione delle distanze segue una distribuzione non parametrica 1, ei dati sono rappresentati come scatola e baffi di Tukey (per eliminare outliers). </li></ol> 5. Arrampicata Assay (comportamento di controllo) <ol><li> Utilizzare un test di arrampicata come un controllo di mosche di prova di salita 14,15,18. <ol><li> Utilizzare l&#39;apparato controcorrente tale che tre prove cun essere eseguito in parallelo. </li></ol></li><li> Trasferire 50 a 100 mosche ingenui (mosche, che non sono stati testati in precedenza) in tre fiale di test differenti, e li scattare in 1 °, 3 ° e l&#39;ultimo slot nella parte inferiore di apparecchi controcorrente, con le fiale freschi vuoti nelle posizioni opposte. </li><li> Luogo fresco, i flaconi vuoti negli slot vuoti nella parte inferiore dell&#39;apparecchiatura. </li><li> Premere giù dell&#39;apparecchiatura tre volte, in modo che tutte le mosche sono in fondo di ogni tubo, per iniziare l&#39;esperimento. </li><li> Avviare il timer per 15 secondi (tempo sufficiente per ~ 100% di 3-7 giorni di età Canton-S per raggiungere la fiala superiore - vedi figura 3F). </li><li> Far scorrere la parte superiore dell&#39;apparecchiatura controcorrente, per spostare i primi flaconi di uno slot. </li><li> Raccogliere mosche toccando l&#39;apparecchio verso il basso, per portare tutte le mosche nei flaconcini di fondo. <ol><li> 1 ° e 2 tubi nd (o 3 ° e 4 °, 5 ° </sup&gt; e 6 °) corrispondono rispettivamente alle mosche che non hanno raggiunto verso l&#39;alto e le mosche che hanno raggiunto la fiala superiore. </li></ol></li><li> Calcolare il Performance Index (PI). <ol><li> Contare il numero di mosche in ogni fiala. </li><li> Il PI è la percentuale di mosche in grado di salire sul tubo superiore. </li><li> I mezzi di PI seguono una distribuzione normale 1, ei dati sono rappresentati come grafici delle colonne di media più o meno l&#39;errore standard a media (SEM). NOTA: In alternativa, il PI può essere calcolata come la percentuale di mosche in grado di raggiungere la parte superiore della fiala inferiore (per le mosche anziani, 5 sec è il tempo sufficiente per quantificare una differenza in salita tra infette e non infette 12 giorni Canton-S quantificati da un fermo immagine: vedere i risultati). Altri hanno usato diverse misure di performance geotassi negativi improvvisi indotto, che sono anche opportuno quantificare salita 19-22. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

In questo protocollo, una procedura dettagliata per la quantificazione dello spazio sociale è stato descritto. Alcuni passi cruciali per garantire l&#39;esperimento è successo sono: 1) usare sempre i guanti durante la pulizia e messa in opera dell&#39;apparecchiatura, per mantenere i propri oli e profumi fuori dalla camera interna dell&#39;apparato, 2) garantire le mosche sono raccolti almeno un giorno prima l&#39;esperimento per ridurre gli effetti potenziali di anestesia freddo, 3) 2 ore prima dell&#39;esperimento for...

Le interazioni sociali sono fondamentali per il corretto sviluppo e la salute degli individui all&#39;interno di un gruppo nel suo insieme, e possono essere osservati tra le numerose specie, dagli esseri umani (Homo sapiens) a organismi più semplici come i moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) 5,6. Un individuo moscerino della frutta o di condivisione umana mezzi comuni per elaborare le informazioni sensoriali durante queste interazioni, che si tratti di: uditiva, visiva, olfattiva, tattile o gustation. Noi e gli altri ipotizzare che ci sia un neurocircuitry potenzialmente condivisa sottostante risposte comportamentali alle interazioni sociali, e che le cellule neuronali e geni coinvolti potrebbe essere evolutivo conservati 7. Una volta che si è verificato l&#39;interazione iniziale, lo spazio sociale tra gli individui interagenti sarà o aumento (evitamento sociale 8) o diminuire (formazione di gruppi / aggregazione 5). Interazioni più complesse, come l&#39;aggressività o di corteggiamento, possono quindi prendere posto. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Né strumenti e metodi sofisticati, né grandi investimenti in tempo e la formazione sono necessari per quantificare questo semplice forma di comportamento sociale, rendendolo un potente strumento analitico. Qui, spieghiamo un protocollo semplice che quantifica la distanza inter-fly, o spazio sociale, per valutare l&#39;interazione sociale in gruppi stabili di Drosophila melanogaster, usati nei seguenti studi 1-4,9. Spazio sociale si riferisce ad una misura della distanza tra una mosca e il suo vicino più vicino 10. Spazio sociale è coerente per una data popolazione di D. melanogaster quando le condizioni sperimentali sono conservati (in media circa in 1-2 lunghezze corpo), e varia rispetto alla esperienza sociale di linea, aumentando se l&#39;individuo è stato tenuto in isolamento 1. La corretta visione è necessario per mantenere normale la distanza sociale, ma non odoranti classiche o percezione CVA 1. Misura dello spazio sociale può quindi essereutilizzato come strumento diagnostico per analizzare le interazioni sociali e quantificare il comportamento sociale in D. melanogaster 1. Descriviamo qui in dettaglio come eseguire questa quantificazione, e in che misura variabili sperimentali comuni influenzano questo comportamento. Si dimostra che l&#39;orientamento della camera in cui viene eseguito il test, così come il numero di mosche - in misura - fare colpisce spazio sociale. E &#39;stato precedentemente dimostrato che la geometria della camera colpisce spontaneo movimento esplorativo di mosche 11,12, e questo fenomeno potrebbe in ultima analisi, avere un impatto in cui decidono di stabilirsi. Tuttavia, finché la densità mosca (fly / cm 2) e l&#39;orientamento della camera è mantenuta la stessa, lo spazio sociale della linea rimane costante. La robustezza di questo test è illustrata dal fatto che laboratori indipendenti utilizzando diverse dimensioni della camera, la forma e l&#39;orientamento in grado di replicare il risultato visualizzato dal mutanti del whgene ite (che colpisce pigmentazione dell&#39;occhio), che è uno spazio sociale incremento (triangolo verticale o cerchio orizzontale in 1, piazza orizzontale con flusso d&#39;aria in 3). I nostri risultati indicano anche che mantenere il momento in cui viene eseguito l&#39;esperimento spazio sociale è fondamentale per la coerenza dei risultati, come abbiamo dimostrato che i maschi, ma non le femmine, sono più distanti la sera. Tuttavia, le differenze tra le viste diurne e serali ore non sono dovute a differenze di attività di linea, e discutiamo argomenti che indicano che i livelli di attività non sono correlati con lo spazio sociale. Infine, ci sono basi genetiche alla determinazione dello spazio sociale, come indicato dal mutante bianco già descritto 1,3, e le differenze tra i vari ceppi inbred e catturati in natura di mosche che vi presentiamo qui. Pertanto, questo test rappresenta un eccellente strumento fo studiare gli effetti della genetica e fattori ambientali.

<table><tbody><tr><td>Microscopio zoom stereoscopico&nbsp;</td><td>Nikon&nbsp; &nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>Qualsiasi altro cannocchiale standard per la manipolazione delle mosche funzionerebbe</td></tr><tr><td>Piccoli pennelli&nbsp;</td><td></td><td></td><td>per spingere le mosche</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>qualsiasi altro cibo standard per drosophila funzionerebbe</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-Alarm Timer/Cronometro</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Penne</td><td></td><td></td><td></td>Sharpie</tr><tr><td>Nastro</td><td></td><td></td><td></td>adesivo</tr><tr><td>Clip per raccoglitori di medie dimensioni</td><td>Punti metallici</td><td></td><td>per tenere insieme le camere: clip medie da 1-1/4" (32 mm) con capacità di 5/8"</td></tr><tr><td>piccoli SupportStands</td><td>Carolina&nbsp;</td><td>707161</td><td>per tenere le camere in orientamento verticale</td></tr><tr><td>Morsetti Buret</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera digitale</td><td>Nikon</td><td>&nbsp; Coolpix S8000&nbsp;</td><td>per scattare le foto fisse</td></tr><tr><td>Piccolo righello</td><td></td><td></td><td>per poter ridimensionare il</td></tr><tr><td>pannello a tre ante e la copertura</td><td></td><td></td> del banco bianca <td>per fornire uno sfondo bianco e una luce omogenea.</td></tr><tr>Tappetino <td></td><td></td><td>martellante</td><td>Qualsiasi tappetino per mouse funziona.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prisma 6</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>Prism 6 per Mac OS X</td><td>Qualsiasi software di analisi statistica con t-test, unidirezionale e due ANOVA funzionerebbe</td></tr></tbody></table>

condizioni che influiscono spazio sociale in<em&gt; drosophila melanogaster</em

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Il test spazio sociale qui descritto può essere utilizzato per quantificare le interazioni sociali di Drosophila melanogaste r - o di altri piccoli insetti - in modo semplice. Come abbiamo precedentemente dimostrato 1, in una camera a due dimensioni, abbiamo prima forza linea per formare un gruppo compatto, successivamente consentendo loro di loro distanza preferito l&#39;uno dall&#39;altro. Dopo che le mosche si sono stabiliti, si misura la distanza dal vicino più prossimo (o spazio sociale), l&#39;elaborazione di un quadro statico con il software online gratuito (ImageJ). L&#39;analisi della distanza del vicino più prossimo permette ai ricercatori di determinare gli effetti di fattori genetici e ambientali sulla interazione sociale, mentre il controllo di potenziali fattori di confondimento. Diversi fattori quali la capacità di arrampicata, l&#39;ora del giorno, il sesso, e il numero di mosche, possono modificare la spaziatura sociale di mosche. Ci proponiamo quindi una serie di controlli sperimentali per mitigare questi effetti confondenti. Questo test puòessere utilizzato per almeno due scopi. In primo luogo, i ricercatori possono determinare in che modo il loro turno ambientale preferito (come l&#39;isolamento, la temperatura, lo stress o tossine) avrà un impatto sociale, spaziatura 1,2. In secondo luogo, i ricercatori possono sezionare le basi genetiche e neurali di questa forma di base del comportamento sociale 1,3. In particolare, abbiamo usato come uno strumento diagnostico per studiare il ruolo dei geni ortologhi si ritiene siano coinvolti nel comportamento sociale in altri organismi, come i geni candidati per l&#39;autismo negli esseri umani 4.

La camera di spazio sociale può essere utilizzato come strumento per quantificare il comportamento sociale di Drosophila melanogaster. Distanziatori acrilico e vetri sono ritagliati insieme per formare un&#39;arena triangolare interno che fornisce una superficie a due dimensioni in cui vola può formare gruppi stabili senza la presenza di molti spunti potenzialmente confondenti. Quando le mosche sono trasferiti per l&#39;arena verticale, vengono sorpresi da essere sfruttato in giù, e rispondono con un comportame...

L'effetto dei geni e dell'ambiente sullo spazio sociale di Drosophila melanogaster può essere quantificato attraverso un potente ma diretto paradigma analitico. Mostriamo qui diversi fattori che possono influenzare questo spazio sociale, e quindi devono essere presi in considerazione quando si progettano esperimenti in questo paradigma.

Condizioni che influiscono spazio sociale in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quantificare un aspetto del comportamento sociale delle mosche, ovvero la loro distanza sociale preferita. Questo viene ottenuto innanzitutto assemblando la camera dello spazio sociale. Nel frattempo, un gruppo di mosche viene abituato alla stanza dell'assay controllata ambientalmente trasferendolo in un nuovo vial all'interno della stanza.Dopo due ore, il gruppo di moscerini viene trasferito nella camera dello spazio sociale. Vengono leggermente battuti per farli scendere e quindi posizionati verticalmente con un supporto a morsetto. Una volta che i moscerini si sono assestati, le loro posizioni vengono registrate e le distanze tra i moscerini vengono calcolate a partire da questa immagine mediante software.In definitiva, il saggio dello spazio sociale quantifica una forma di comportamento sociale, che può essere utilizzata per studiare i fattori ambientali influenti e la neurogenetica di questo comportamento. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il tracciamento video assistito da computer, nel quantificare il comportamento sociale è che non richiede strumenti o metodi sofisticati né ingenti investimenti di tempo e formazione. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo del comportamento sociale.Abbiamo utilizzato questo metodo come strumento diagnostico per studiare il ruolo di geni autologhi ritenuti coinvolti nel comportamento sociale e di altri organismi, come ad esempio i geni candidati per il disturbo dello spettro autistico negli esseri umani. Ebbi per la prima volta l'idea di questo metodo quando notai all'UCLA che, nel nostro magazzino, i moscerini nelle loro provette non avevano una distribuzione casuale, ma formavano aggregati con intervalli netti tra di loro. Questa procedura descrive il montaggio delle camere dello spazio sociale, da iniziare indossando i guanti.Posizionare un distanziatore triangolare su un pannello quadrato, allineandone gli angoli in un punto, quindi posizionare un secondo distanziatore triangolare in modo speculare rispetto al primo. Successivamente, apporre i due distanziatori rettangolari più piccoli sul pannello quadrato lungo i due bordi non coperti, in modo che i quattro distanziatori formino un'arena triangolare. Quindi inserire i distanziatori tra due pannelli quadrati e utilizzare quattro clip per fissare l'insieme.Posizionare delle clip ai quattro angoli, iniziando dagli angoli con gli spessori triangolari, per garantire un corretto assemblaggio. Orientare la camera verticalmente con il bordo inferiore appoggiato sul banco. La temperatura ambiente deve corrispondere a quella di allevamento delle mosche e l'umidità deve essere simile. Le mosche utilizzate per questo esperimento devono essere allevate in bottiglie in condizioni standard per uno o due giorni prima dell'esperimento, quindi raccolte e separate per sesso mediante anestesia fredda.Popolazioni sperimentali di 40 moscerini trasferite in nuovi vial per moscerini. Successivamente, due ore prima dell'esperimento, trasferire i moscerini in nuovi vial e posizionarli sul banco dove le arene verranno caricate due ore dopo. Iniziare l'esperimento.Rimuovere la clip più vicina e scivolare via lo spaziatore rettangolare per creare un'apertura di un centimetro tra gli spaziatori. L'angolo in alto a sinistra della camera può essere utilizzato per identificare il gruppo di moscerini sottoposto a test mediante un'etichetta. Basta non coprire alcuna parte dell'area di prova.Ora trasferire il gruppo in un nuovo flacone vuoto ed aspirare le mosche dal flacone. Successivamente, inserire la punta dell'aspiratore nella fessura ed espirare delicatamente con una pressione costante. Le mosche dovrebbero essere tutte espulse nell'arena.Reinserire immediatamente il distanziatore rettangolare nella posizione corretta e rimettere a posto la clip. Battere tre volte per far cadere tutti i moscerini sul fondo dell'arena. Avviare il cronometro e portare l'arena nella camera controllata.Attaccare l'arena verticalmente al pallone. Fissare con una pinza nella camera controllata lungo il bordo della camera, ma non sopra l'arena. Attaccare un righello o un adesivo di lunghezza nota dietro le mosche.Attendere circa 30 minuti. Scattare una foto, documentando l'intera arena con il righello in vista. Questo conclude la prova.Per ogni condizione devono essere eseguite tre ripliche. Per svuotare l'arena, posizionare l'arena nel congelatore per cinque-dieci minuti e versare le mosche congelate in un contenitore per mosche morte. In ImageJ, aprire tutte le foto necessarie per l'analisi.Utilizzando il righello, creare una scala a partire dai segni dei centimetri sotto la scheda analizza. Selezionare imposta, scala e seguire le istruzioni. Tuttavia, prima di applicare la scala, assicurarsi di selezionare l'opzione globale.Utilizzando la funzione di ritaglio, regolare le immagini in modo da includere solo lo spazio dell'arena. Successivamente, selezionare l'opzione tipo e scegliere otto bit per rendere le immagini in bianco e nero. Poi, rimuovere il rumore di fondo utilizzando la funzione soglia presente nell'opzione regola della scheda immagine.Spostare i cursori finché il corpo di ciascuna mosca è chiaramente visibile, senza creare segni sullo sfondo. Per rimuovere segni non appartenenti alla mosca, selezionarli con lo strumento rettangolo ed eliminarli. A questo punto, configurare lo strumento di misurazione nella scheda analizza.Selezionare l'area del centro di massa Centro e visualizzare l'etichetta tra le opzioni disponibili. Quindi scegliere la funzione analizza particelle nella scheda analizza. Questo crea un elenco numerato di tutte le mosche presenti.Assicurarsi che questo strumento funzioni correttamente confrontando l'elenco numerato con la foto originale. Selezionare ora l'elenco. Quindi andare nella scheda plugin e selezionare l'opzione macro.Quindi selezionare la macro denominata distanze della lista dei vicini più prossimi. Analizzare questi valori in un foglio di calcolo o in un pacchetto statistico utilizzando il protocollo descritto. La linea di tipo selvatico recentemente stabilita, Elwood, è stata confrontata con i ceppi di laboratorio inbred Canton S e organ, e lo spaziamento sociale variava tra i ceppi di moscerini, suggerendo una componente genetica nel comportamento.Mentre stavo eseguendo questa procedura, è importante ricordare di mantenere condizioni ambientali controllate prima e durante l'esperimento. Tuttavia, una volta raggiunta l'orientazione, le dimensioni e la forma dell'arena non hanno rilevanza e non influenzeranno il comportamento, purché vengano mantenute costanti dopo il loro sviluppo. Questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della neuroscienze comportamentali per esplorare l'effetto dei fattori ambientali sullo spazio sociale.In Joseph La Melanogaster, dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire il saggio dello spazio sociale, a partire dalla preparazione delle mosche fino al montaggio e all'utilizzo dell'arena per lo spazio sociale, nonché all'analisi delle immagini.

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Drosophila melanogaster è un sistema genetico e comportamentale del modello trattabile che è stato utilizzato per comprendere le basi molecolari e cellulari di molti importanti processi biologici per oltre un secolo 1. Drosophila è stata ben sfruttata per acquisire conoscenze in base genetica del comportamento mosca.

Metodi per test Drosophila Comportamento

Drosophila melanogaster sono utili per studiare le manipolazioni genetiche o ambientali che influenzano i comportamenti come l'attività locomotoria spontanea. Qui si descrive un protocollo che utilizza il monitor con raggi infrarossi e software di analisi dei dati per quantificare l'attività locomotoria spontanea.

Determinazione del locomotore attività spontanea in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare l'evitamento degli individui stressati. Questo paradigma è potente ma facile da usare e può essere utilizzato per valutare l'influenza dei geni e dell'ambiente su un tipo di interazione sociale in Drosophila melanogaster.

Assay Semplice per la quantificazione della Social Prevenzione in Drosophila melanogaster

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Un nuovo approccio che elimina la gestione per lo studio Aggressione e l&#39;effetto &quot;Loser&quot; in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

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Allevamento la mosca della frutta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

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Un metodo per testare l &#39;effetto dei segnali ambientali sul comportamento di accoppiamento in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

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