Name: Un Sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel SOD1-G93A modello murino della SLA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Impara a valutare la funzione neuromuscolare nel modello murino SOD1-G93A della SLA usando un sistema di punteggio neurologico fenotipico. Questo metodo rapido e affidabile aiuta a monitorare la progressione della malattia.

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Ringraziamo Beth Levine per la revisione critica del manoscritto, Valerie Tassinari per lo sviluppo del protocollo di genotipizzazione e Matt Ferola e Carlos Maya per la loro eccezionale cura degli animali.

Tutti gli esperimenti sono condotti in conformità con i protocolli descritti dai National Institutes of Health Guide per la cura e l&#39;uso di animali e sono stati approvati dalla cura degli animali e l&#39;uso istituzionale comitato di SLA TDI (IACUC). 1. Gli animali, della casa, e lo studio di design Nota: Il mouse colonia SOD1-G93A è stato derivato dalla alta copia B6SJLTgN (SOD1G93A) ceppo 1Gur originariamente prodotto da Gurney ed altri 7.. La colonia è attualmente mantenuto attraversando transgenici maschi C57BL / 6-SJL con wild-type femmine C57BL / 6-SJL F1. Gli animali F1 sono generate dall&#39;incrocio maschi SJL con le femmine B6. I topi sono spediti a ALS TDI settimanale a 35-45 giorni di età. <ol><li> Lasciare topi almeno una settimana per acclimatarsi al stabulario (luce 12 ore / buio ciclo, ad una temperatura di 18-23 ° C e 40-60% di umidità) prima di assegnare ad uno studio. </li><li> Casa SOD1-G93A maschio mice un mouse per gabbia, in quanto gruppo ospitato i maschi tendono a combattere. Casa topi femmina SOD1-G93A fino a due per gabbia. Fornire arricchimento ambientale, sotto forma di capanne di plastica. Fornire cibo e acqua ad libitum, a meno che i topi fanno parte di uno studio che richiede la somministrazione del farmaco in acqua potabile / cibo. In questi casi, razione alimentare e registrare e acqua. </li><li> Iniziare uno studio farmaco-efficacia in giro giorno di 50 anni e comprendono 64 lettiera corrispondenza di genere equilibrata topi (32 per coorte). Infine, assicurarsi che i ricercatori che conducono studi sono accecati alle condizioni sperimentali. Nota: Si raccomanda che un tipico studio farmaco-efficacia inizia a giorno 50 anni tuttavia, in base al tipo di intervento terapeutico potrebbe essere preferibile iniziare lo studio precedente o successiva. Nota: Uno studio con 32 topi per coorte è alimentato per rilevare droga effetti specifici di genere. Se non sono necessarie confronti specifici di genere, 24 topi per coorte dovrebbe essere sufficiente per rilevare droga effetti complessivi.</li></ol> 2. Peso corporeo <ol><li> Pesi corporei record per tutti i topi in studi giornaliero con una precisione di un decimo di grammo. Nota: Il peso corporeo è un indicatore sensibile della progressione della malattia e di qualsiasi malessere che potrebbero derivare da un trattamento farmacologico cronico. </li><li> Peso corporeo mouse variano considerevolmente nel corso di una giornata, essendo più alta al mattino, quindi li registrano intorno alla stessa ora ogni giorno. </li></ol> 3. Neurologico Scoring System (NeuroScore) <ol><li> Valutare punteggi neurologici (NS) per ciascun topo quotidianamente osservando il mouse sotto le seguenti tre condizioni eseguite in sequenza: a) il mouse è sospeso dalla sua coda, b) il mouse viene permesso di camminare, e dopo l&#39;inizio della paresi c) mouse viene posizionato su un lato. <ol><li> Per il test di sospensione posteriore, tenere il mouse circa 1,5 &quot;dalla base della coda sopra la parte superiore del filo della loro gabbia casa per 1-2 sec, lontano dal bacino cibo, mentre obsErving arti posteriori. Ripetere il test di sospensione 3 volte e registrare il risultato più consistente. </li><li> Per il test del cammino, posizionare il mouse su una superficie pulita che fornisce una certa trazione e una distanza di 25 cm (per es., Un tovagliolo di carta registrata giù per evitare scivolamenti). Lasciare che il mouse per camminare un totale di 75 cm (lunghezza 3X del tovagliolo di carta), mentre si osserva la sua andatura. </li><li> Per il test &quot;riflesso di raddrizzamento&quot;, posizionare il mouse sul lato sinistro o destro e utilizzando un cronometro misurare il tempo necessario per raddrizzarsi fino senza assistenza da entrambi i lati. Nota: solo una prova di questo test è richiesto. </li></ol></li><li> Determinare la NS di ogni arti posteriori (sinistra o destra) in modo indipendente su una scala da 0 a 4. Nota: Per esempio un punteggio di 0, 1 indica che il arti posteriori di sinistra NS è 0, mentre la destra arti posteriori NS è 1. </li><li> Assegnare punteggi neurologici (0-4) corrispondente alla seguente serie di osservazioni (sintesi di cui alla tabella 1):<ol><li> Assegnare NS 0 (pre-sintomatica) se il seguente si osserva: Quando il mouse è sospeso per la coda, la arti posteriori presenta una strombatura normale cioè, punto di massima estensione di distanza dalla linea mediana laterale e rimane in questa posizione per 2 sec più a lungo. Quando è consentito il mouse per camminare, andatura normale si osserva. </li><li> Assegna NS 1 (primi sintomi) se si osserva quanto segue: Quando il mouse è sospeso per la coda, la arti posteriori presenta una strombatura anormale, cioè, è compressa o parzialmente crollato verso linea mediana laterale O trema durante la sospensione della coda o è rientrato / abbracciato. Quando è consentito il mouse per camminare, andatura normale o leggermente lento si osserva. </li><li> Assegnare NS 2 (insorgenza di paresi) se la seguente si osserva: Quando il mouse è sospeso per la coda, la arti posteriori è parzialmente o completamente crollato, che non si estende molto. (Ci potrebbe essere ancora il movimento articolare). Quando è consentito il mouse per camminare, il arti posteriori viene utilizzata per mot avantiion però arricciare le dita dei piedi verso il basso almeno due volte nel corso di un 90 centimetri passeggiata o qualsiasi parte del piede sta trascinando sulla parte inferiore della gabbia / tavolo. Quando il mouse è posizionato sul lato sinistro e destro, è in grado di raddrizzarsi entro 10 secondi da entrambi i lati. </li><li> Assegnare NS 3 (paralisi) se il seguente si osserva: Quando il mouse è sospeso per la coda, c&#39;è la paralisi rigida in arti posteriori OR minimo movimento articolare. Quando è consentito il mouse per camminare non c&#39;è movimento in avanti però il arti posteriori non viene utilizzato per il movimento in avanti. Quando il mouse è posizionato sul lato sinistro e destro, è in grado di raddrizzarsi entro 10 secondi da entrambi i lati. Nota: Raramente, dopo l&#39;inizio della paralisi, urina umidità potrebbe apparire sugli arti posteriori. Sinistra umidità urina non trattata può portare a urina &quot;bruciare&quot; e lesioni cutanee. Trattare urina umidità clipping i capelli, applicare acqua calda assorbe per rimuovere l&#39;urina, e asciugare delicatamente asciutto. Se lesioni cutanee sono presenti applicano antibiopomata tic. </li><li> Assegnare NS 4 (Humane end-point), se la si osserva seguente: Quando il mouse è sospeso per la coda, c&#39;è la paralisi rigida nelle arti posteriori. Quando è consentito il mouse per camminare, non vi è alcun movimento in avanti. Quando il mouse è posizionato sul lato sinistro e destro non è in grado di raddrizzarsi entro 10 secondi da una parte QUALSIASI. Cioè, l&#39;assenza del riflesso di raddrizzamento. </li></ol></li></ol> 4. Data Entry e analisi <ol><li> Nel corso di uno studio di efficacia droga, inserire i dati raccolti per ogni mouse in una Laboratory Information Management System (LIMS) o in un software di foglio elettronico disponibile in commercio. Nota: il software LIMS ALS TDI-sviluppato è un repository centrale per tutti i dati raccolti da studi interni, rendendo questi dati facilmente accessibile nel tempo per gli investigatori SLA TDI. LIMS tracce qualsiasi individuo del mouse, con il suo ID univoco, al suo lignaggio, il peso corporeo o punteggio neurologico tutti i giorni di studio,e comprende tutte le altre osservazioni rilevate durante la sua vita. LIMS genera infine un foglio che viene utilizzato per le analisi successive. </li><li> Dopo il completamento di uno studio di droga efficacia, cioè, quando tutti i topi raggiungono il punto finale umana, software uso foglio (vedi TABELLA MATERIALI) per calcolare il combinato NS per ogni mouse, per ogni giorno facendo la media del hindlimb sinistra e destra NS . Avanti, calcola l&#39;età media di ciascun NS per ogni mouse e il numero di giorni ogni mouse passa ad una particolare NS. </li><li> Analizzare movimenti complessivi NS nel tempo importando i dati dal foglio di calcolo al software statistico (vedi Tabella dei Materiali). Montare questi dati utilizzando un modello di regressione logistica ordinale che stima l&#39;atteso NS, con età media alla NS e droga trattamento come effetti nella regressione. Utilizzando il test del chi quadro log-rank stimare la probabilità effetto verosimiglianza e determinare se l&#39;effetto della droga trattamento su NS progressione è statisticaly significativo (vedi file di codice supplementare per passo-passo le istruzioni). Nota: Un valore di p &lt;0.05 è considerato statisticamente significativo. Nota: Questo metodo di analisi statistica rispetta la natura ordinale dei dati NS e la natura variabile delle traiettorie NS per singoli topi. Si è preferito perché percorsi individuali NS possono essere notevolmente diverse con conseguente NS tempo associata medie di gruppo che non sono sufficientemente riflettente di risposte NS. Inoltre, in alcuni casi NS possono oscillare, in particolare quando nella gamma da zero a uno. </li><li> Infine, il software uso graficamente (vedi tabella dei Materiali) per generare &quot;ordinale Expected NS vs mediana Età al NS&quot; grafici per gli animali trattati con farmaci e di controllo (Figura 2; cfr Codice supplementare File per passo-passo le istruzioni). Utilizzare questi grafici per valutare comodamente spostamenti tra i gruppi trattati con farmaci e controllo interpolando dalla y l&#39;età media di insorgenza della malattia (i.e., NS 2) sul asse x. Nota: La differenza di età media tra i due gruppi rappresenta un cambiamento farmaco-indotta ed è trattata come una misura pratica della grandezza dell&#39;effetto. Nota: si sposta verso destra della curva della NS età mediana attesi indicano rallentato la progressione della malattia sintomatica. Al contrario, si sposta leftward nel NS curva della età media attesi indicano accelerato la progressione della malattia sintomatica. </li></ol>

<ol><li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
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<li>C, M., Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+low+expressor+line+of+transgenic+mice+carrying+a+mutant+human+Cu%2CZn+superoxide+dismutase+%28SOD1%29+gene+develops+pathological+changes+that+most+closely+resemble+those+in+human+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).</li>
<li>Wegorzewska, I., Baloh, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDP-43-based+animal+models+of+neurodegeneration%3A+new+insights+into+ALS+pathology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegener.+Dis%22%5BJournal%5D)">TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology.</a> Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).</li>
<li>Hatzipetros, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6J+congenic+Prp-TDP43A315T+mice+develop+progressive+neurodegeneration+in+the+myenteric+plexus+of+the+colon+without+exhibiting+key+features+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS.</a> Brain Res. 1584, 59-72 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

In questo rapporto, si descrive un protocollo video semplice e veloce che, se applicata correttamente, è in grado di valutare in modo affidabile la progressione della malattia nei topi SOD1-G93A e identificare cambiamenti indotte da farmaci. Mentre diversi gruppi hanno sviluppato sistemi di scoring fenotipiche per i topi SOD1-G93A 8-10, spesso non forniscono dettagli sufficienti sulla procedura e sono inadeguati per la replica. Come risultato, sistemi di scoring sono raramente utilizzati all&#39;esterno del g...

Da quando il suo sviluppo negli metà del 1990 il modello di topo transgenico SOD1-G93A è stato il modello animale più diffuso della sclerosi laterale amiotrofica (SLA) 1. Questo modello di topo transgenico è stato geneticamente modificato per iperespressione di una forma mutante del gene umano Cu / Zn superossido dismutasi 1 (SOD1) ospitare la glicina ALS-associata a mutazioni alanina a aminoacidi 93 (G93A). La mutazione G93A è una delle tante mutazioni nel gene SOD1 che collettivamente il make-up di circa un quinto dei casi di SLA familiare 2. Il modello SOD1-G93A è diventato un cavallo di battaglia della ricerca lo sviluppo di farmaci SLA perché oltre alla sua evidente legame genetico per la SLA, si ricapitola molte delle caratteristiche patologiche della SLA nell&#39;uomo come la perdita dei motoneuroni, progressiva debolezza muscolare e atrofia, con eventuale paralisi e la morte 3. Anche se, come spesso accade con modelli animali transgenici, c&#39;è un bi intrinsecavariabilità ological associati con i topi SOD1-G93A. Scott et al. hanno determinato che le coorti di almeno 24 topi di genere equilibrata lettiera abbinati sono necessari disegni di studio farmaco-efficacia al fine di superare il rumore creato dalla variabilità biologica 4. Il gran numero di animali necessari in questi studi, in combinazione con la progressione della malattia aggressiva e la necessità di monitoraggio giornaliero vieta l&#39;uso di tecniche in termini di tempo e potenzialmente stressanti elaborati per misurare forza e la funzione neuromuscolare (ad esempio, elettromiografia, forza di presa, Rotorod , ecc). Invece, evidenzia la necessità di un vivo strumento di screening in che valuta in modo affidabile la funzione neuromuscolare di topi SOD1-G93A in modo rapido. A ALS TDI un protocollo è stato sviluppato che consente la valutazione affidabile della funzione neuromuscolare di topi SOD1-G93A in meno di 30 secondi per topo in media. Questo encompa protocolloSSES valutazione giornaliera della funzione degli arti posteriori utilizzando un semplice sistema di punteggio neurologico (NeuroScore) che è descritta in questa relazione in corso di stampa e in video. NeuroScore si concentra sulla funzione degli arti posteriori, perché i deficit arti posteriori sono il primo riferito segno neurologico della malattia nei topi SOD1-G93A 5,6. Inoltre, il protocollo sviluppato da SLA TDI fornisce una valutazione imparziale di insorgenza della paralisi (lieve o parziale paralisi), la progressione e la gravità di paralisi ed è abbastanza sensibile per identificare i cambiamenti indotti da farmaci a progressione della malattia.

<table><tbody><tr><td>Ceppo B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur</td><td>The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td><td>002726</td><td>Ceppo di topi utilizzato in questo studio</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Scala di mantenimento della colonia</td></tr><tr><td>Navigatore</td><td>OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>Modello N14120</td><td>Utilizzato per pesare i topi</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td></td>#S4798 <td>Cibo umido fornito ai topi malati</td></tr><tr><td>Irradiato Lab Animal Diet</td><td>Harlan, Indianapolis, IN</td><td>2918-111914M</td><td>Chow diet</td></tr><tr><td>Lab-grade Sani-chips</td><td>Harlan Teklad, Indianapolis, IN</td><td>7090</td><td>Biancheria da letto</td></tr><tr><td>JMPH&nbsp;</td><td>SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC</td><td>&nbsp; v10.0.2</td><td>Software statistico</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>Software per fogli di calcolo</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad software Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>Software grafico</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>Per l'arricchimento ambientale</td></tr></tbody></table>

un sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel sod1-g93a modello murino della sla

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

Il topo transgenico SOD1-G93A è il modello animale più utilizzato di sclerosi laterale amiotrofica (SLA). Alla ALS TDI abbiamo sviluppato un protocollo di screening fenotipico, dimostrato nel video qui, che valuta in modo affidabile la funzione neuromuscolare dei topi SOD1-G93A in modo rapido. Questo protocollo comprende un semplice sistema di punteggio neurologico (NeuroScore) progettato per valutare la funzione degli arti posteriori. NeuroScore si concentra sulla funzione degli arti posteriori perché i deficit degli arti posteriori sono i primi segni neurologici riportati di malattia nei topi SOD1-G93A. Il protocollo sviluppato da ALS TDI fornisce una valutazione imparziale dell'insorgenza della paresi (paralisi lieve o parziale), della progressione e della gravità della paralisi ed è sufficientemente sensibile da identificare i cambiamenti indotti dal farmaco nella progressione della malattia. In questo rapporto, la combinazione di un manoscritto dettagliato con un video riduce al minimo le ambiguità di punteggio e la variabilità tra gli sperimentatori, consentendo così l'adozione del protocollo da parte di altri laboratori e consentendo confronti tra studi che si svolgono in contesti diversi. Riteniamo che questo protocollo video possa fungere da eccellente strumento di formazione per i ricercatori presenti e futuri sulla SLA.

I dati neurologici punteggio di 90 maschi e 94 donne non trattate topi SOD1-G93A studiato presso ALS TDI nel corso del 2014 sono stati valutati. I risultati mostrano che i topi maschi di solito hanno una progressione della malattia più aggressiva rispetto ai topi di sesso femminile, come evidenziato da una percentuale maggiore della loro vita a NS 1 rispetto alle femmine. NS 2 e 3 NS si verificano con frequenza pressoché uguale in tutta generi. NS 0 è stato escluso dall&#39;analisi perché è considerato un fenotipo &quot...

Questo protocollo video descrive un metodo sensibile, affidabile e rapido per valutare i deficit neuromuscolari in un modello murino transgenico di sclerosi laterale amiotrofica.

Un Sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel SOD1-G93A modello murino della SLA

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare in modo rapido e affidabile la funzione neuromuscolare dei topi SOD1 G93A mediante una valutazione giornaliera della funzione degli arti posteriori, utilizzando un semplice sistema di punteggio neurologico fenotipico. Questo viene effettuato osservando innanzitutto gli arti posteriori dei topi mentre vengono sospesi per la coda. Il secondo passaggio consiste nell'osservare l'andatura dei topi mentre camminano.Successivamente, i topi vengono posizionati su un fianco per verificare la presenza o l'assenza del riflesso di scrittura. L'ultimo passaggio consiste nell'effettuare l'analisi dei dati adattando i punteggi neurologici dei gruppi di topi a un modello di regressione logistica ordinale. In definitiva, il nostro sistema fenotipico di punteggio neurologico viene utilizzato per valutare la progressione della malattia nel modello murino SOD1 G93A di SLA, al fine di determinare l'efficacia di interventi terapeutici.Il principale vantaggio di questo metodo rispetto a tutte le altre tecniche esistenti è che è rapido, semplice, affidabile e provoca un minimo stress per i topi. Le implicazioni di questo metodo si estendono alla terapia della sclerosi laterale neotropica o di una SL, poiché permettono una rapida valutazione degli interventi terapeutici nel modello murino più comune della malattia. La dimostrazione visiva è fondamentale, in quanto il metodo di valutazione neurologica è difficile da apprendere perché le differenze neurologiche possono essere sottili.Alloggiare inizialmente i topi maschi SOD1 G93A in modo che ci sia un topo per gabbia, e le femmine SOD1 G93A fino a due per gabbia. Fornire arricchimento ambientale per i topi sotto forma di casette di plastica. Fornire ai topi cibo e acqua ad libitum.Pesi corporei di tutti i topi e studi nello stesso momento. Il peso corporeo giornaliero è un indicatore sensibile della progressione della malattia e di qualsiasi malessere che potrebbe derivare da un trattamento cronico con farmaci. Durante lo studio, valutare ogni giorno il punteggio neurologico di ciascun topo mediante un regime costituito da tre test eseguiti in sequenza.Osservare attentamente, poiché la valutazione dei punteggi nei punti di transizione fenotipica è molto difficile nel primo test. Nel test di sospensione per la coda, tenere il topo a circa 1,5 pollici dalla base della coda sopra la griglia metallica della gabbia di casa. Osservare la funzione degli arti posteriori per un periodo di uno o due secondi e ripetere il test tre volte.Per il test della deambulazione. Posizionare il topo su una superficie pulita che offra una certa aderenza e presenti una distanza di cammino di almeno 25 centimetri. Consentire al topo di camminare fino a 75 centimetri osservandone l'andatura.Per il test del riflesso di raddrizzamento, posizionare il topo sul fianco e utilizzare un cronometro per misurare il tempo necessario per raddrizzarsi autonomamente da entrambi i lati. È richiesta una sola prova di questo test. Assegnare un punteggio a ciascun arto posteriore, sinistro o destro, in modo indipendente su una scala da zero a quattro in base al risultato complessivo dei tre test di osservazione fenotipica.Un punteggio sinusale pari a zero indica che il topo è presintomatico. Quando, durante il test di sospensione, gli arti posteriori sono completamente estesi rispetto alla linea mediana laterale e mantengono questa posizione per due secondi o più. Inoltre, durante il test di camminata, viene osservata una andatura normale.Assegnare un punteggio pari a uno che indichi la comparsa dei primi sintomi. Se durante il test di sospensione, l'arto posteriore è collassato verso la linea mediana laterale, parzialmente collassato verso la linea mediana laterale con tremore o anormalmente divaricato in qualche altro modo. Oltre ai sintomi del test di sospensione appena descritti, l'andatura di un topo che deve ricevere un punteggio pari a uno dovrebbe comunque apparire normale o leggermente ridotta.Assegnare un punteggio di due che indichi l'insorgenza dei Parsis. Se durante il test di sospensione, l'arto posteriore è parzialmente o completamente cedevole, e inoltre durante il test di camminata, gli arti posteriori vengono utilizzati per il movimento in avanti. Tuttavia, le dita dei piedi si piegano verso il basso almeno due volte durante una camminata di 75 centimetri oppure qualsiasi parte del piede striscia per ottenere un punteggio di due.Il topo deve inoltre essere ancora in grado di rialzarsi dopo essere stato posizionato su entrambi i lati entro 10 secondi. Un punteggio sinusale pari a tre indica paralisi. Se durante il test di sospensione il topo mostra una paralisi rigida degli arti posteriori o un movimento articolare minimo, potrebbe comunque mostrare un movimento in avanti durante il test della deambulazione, tuttavia senza utilizzare gli arti posteriori.Oltre a un punteggio sinusale pari a tre, il topo deve ancora essere in grado di rialzarsi dopo essere stato posizionato su ciascuno dei due lati entro 10 secondi. Infine, un punteggio pari a quattro definisce il punto finale umano ogni volta che il topo mostra una paralisi rigida durante la sospensione. Il test mostra l'assenza di movimento in avanti durante la prova di camminata utilizzando gli arti posteriori ed è inoltre impossibilitato a rialzarsi entro 10 secondi dopo essere stato posizionato su uno qualsiasi dei due lati.I topi maschi presentano generalmente un decorso della malattia più aggressivo rispetto alle femmine, come dimostrato da una percentuale maggiore della loro durata della vita in cui manifestano sintomi classificabili con un punteggio neurologico pari a uno, rispetto alle femmine. All'aumentare dei sintomi, che raggiungono il livello di un punteggio neurologico pari a due o tre, il numero di giorni trascorsi a ciascun punteggio è uguale in frequenza tra i sessi. Qui vengono mostrati grafici di analisi statistica basati su modelli logistici ordinali, generati utilizzando il protocollo neuroco appena descritto.Questi dati provengono da uno studio di farmacologia sull'efficacia di un farmaco in cui un gruppo di topi SOD1 G93A trattati con il composto in esame TDI-173 viene confrontato con un gruppo di topi trattati con il veicolo. Nessuna differenza statisticamente significativa è stata osservata quando i sessi sono stati analizzati separatamente, ma è stato raggiunto un valore di significatività statistica quando i dati dei due sessi sono stati combinati. Sebbene mostrassero tendenze simili, l'analisi di Kaplan-Meier sulla sopravvivenza non si è rivelata sufficientemente sensibile da evidenziare differenze significative, nemmeno quando i sessi sono stati uniti.Una volta padroneggiato, il sistema di valutazione può essere applicato in meno di un minuto per topo se eseguito correttamente. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come valutare l'evoluzione della malattia nel modello murino SOD1 G93A di SLA mediante l'utilizzo del sistema Neuroco.

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Un Sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel SOD1-G93A modello murino della SLA (Video) | JoVE Journal

Un Sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel SOD1-G93A modello murino della SLA

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