Un Sistema di punteggio rapida fenotipica neurologica per la valutazione di progressione della malattia nel SOD1-G93A modello murino della SLA

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di valutare in modo rapido e affidabile la funzione neuromuscolare dei topi SOD one G 93 a mediante la valutazione giornaliera della loro funzione degli arti posteriori utilizzando un semplice sistema di punteggio neurologico fenotipico. Ciò si ottiene osservando prima gli arti posteriori dei topi mentre li sospendono per la coda. Il secondo passo è permettere ai topi di camminare osservando la loro andatura.

Successivamente, i topi vengono posizionati su un fianco per verificare la presenza o l'assenza del riflesso di scrittura. Il passaggio finale consiste nell'eseguire l'analisi dei dati inserendo i dati del punteggio neurologico delle coorti di topi in un modello di regressione logistica ordinale. In definitiva, il nostro sistema di punteggio neurologico fenotipico viene utilizzato per valutare la progressione della malattia nel SOD one G 93, un modello murino di LS allo scopo di discernere l'efficacia degli interventi terapeutici.

Il vantaggio principale di questo metodo rispetto a tutte le altre tecniche esistenti è che è veloce, semplice, affidabile e minimamente stressante per i topi. Le implicazioni di questo metodo si estendono a una terapia della sclerosi laterale neotropica o LS perché consente la valutazione rapida degli interventi terapeutici nel modello murino più comune della malattia. La dimostrazione visiva è fondamentale in quanto il metodo di punteggio neurologico è difficile da apprendere perché le differenze neurologiche possono essere sottili.

Inizia alloggiando un topo maschio SOD un G 93 A in modo che ci sia un topo per gabbia, femmina SOD un topo G 93 A fino a due per gabbia. Fornire un arricchimento ambientale per i topi sotto forma di capanne di plastica. Fornisci ai topi cibo e acqua al disco del Lido.

Pesi corporei per tutti i topi e studi allo stesso tempo. Il peso corporeo giornaliero è un indicatore sensibile della progressione della malattia e di qualsiasi malessere che potrebbe derivare da un trattamento farmacologico cronico. Durante lo studio, valutare quotidianamente il punteggio neurologico di ciascun topo attraverso un regime di tre test eseguiti in sequenza.

Fai attenzione perché delineare i punteggi nei punti di transizione fenotipici è molto difficile nel primo test. Il test di sospensione della coda, tenere il mouse a circa 1,5 pollici dalla base della coda sopra la parte superiore del filo della gabbia domestica. Osservare la funzione degli arti posteriori per un periodo di uno o due secondi e ripetere il test tre volte.

Per il test del cammino. Posiziona il mouse su una superficie pulita che fornisca una certa trazione e abbia una distanza a piedi di almeno 25 centimetri. Consenti al mouse di camminare fino a 75 centimetri osservando il suo ga.

Per il test del riflesso di scrittura, posiziona il mouse su un lato e usa un cronometro per misurare il tempo necessario per scrivere da solo senza assistenza da entrambi i lati. È richiesta una sola prova di questo test. Assegna un punteggio a ciascun arto posteriore sinistro o destro in modo indipendente su una scala da zero a quattro in base all'esito collettivo dei tre test di osservazione fenotipica.

Un punteggio sinusale pari a zero indica che il topo è presintomatico. Durante il test di sospensione, gli arti posteriori sono completamente estesi lontano dalla linea mediana laterale e rimangono in questa posizione per due secondi o più. Inoltre, durante il test del cammino, si osserva un'andatura normale.

Assegna un punteggio di uno che indica la comparsa dei primi sintomi. Se, durante la prova di sospensione, l'arto posteriore è collassato verso la linea mediana laterale, parzialmente collassato verso la linea mediana laterale tremante o divaricato in modo anomalo in qualche altro modo. Oltre ai sintomi del test di sospensione appena mostrati, l'andatura di un topo che dovrebbe ricevere un punteggio di uno dovrebbe comunque apparire normale o leggermente inferiore.

Assegna un punteggio di due che indica l'inizio della parsi. Se durante il test di sospensione, l'arto posteriore è parzialmente o completamente collassato e, inoltre, durante il test di deambulazione, gli arti posteriori vengono utilizzati per il movimento in avanti. Tuttavia, le dita dei piedi si arricciano verso il basso almeno due volte durante una camminata di 75 centimetri o qualsiasi parte del piede si trascina per ottenere un punteggio di due.

Il mouse deve anche essere ancora in grado di scrivere da solo dopo essere stato posizionato su entrambi i lati entro 10 secondi. Un punteggio del seno di tre che indica una paralisi. Se durante la prova di sospensione il topo mostra una paralisi rigida dell'arto posteriore o ha un movimento articolare minimo, il topo può ancora mostrare un movimento in avanti durante la prova di deambulazione, ma non utilizzando gli arti posteriori.

Oltre a un punteggio seno di tre, il mouse deve essere ancora in grado di scrivere da solo dopo essere stato posizionato su entrambi i lati entro 10 secondi. Infine, un punteggio di quattro, definendo il punto finale umano ogni volta che il topo mostra una paralisi rigida durante la sospensione. Il test non mostra alcun movimento in avanti durante il test del cammino utilizzando gli arti posteriori e non è nemmeno in grado di scrivere da solo entro 10 secondi dopo essere stato posizionato su entrambi i lati.

I topi maschi hanno in genere una progressione della malattia più aggressiva rispetto alle femmine, come evidenziato da una percentuale maggiore della loro durata di vita che mostra sintomi che possono essere classificati con un punteggio neurologico di uno rispetto alle femmine. Man mano che i sintomi aumentano nell'intervallo di un punteggio neurologico di due o tre, il numero di giorni trascorsi a ciascun punteggio è uguale in frequenza tra i sessi. Qui sono mostrati la logistica ordinale, grafici di analisi statistica generati utilizzando il protocollo neuroco appena descritto.

Questi dati provengono da uno studio di farmacologia sull'efficacia dei farmaci in cui una coorte di topi SOD uno G 93 a che ricevono il composto in esame TDI 1 73 viene confrontata con una coorte di topi che ricevono il veicolo. Non sono state osservate differenze statisticamente significative quando i generi sono stati analizzati separatamente, ma la significatività statistica è stata raggiunta quando i generi sono stati uniti. Sebbene mostrasse tendenze simili, l'analisi della sopravvivenza di Kaplan Meyer non era abbastanza sensibile da rivelare differenze significative anche quando i sessi sono stati uniti.

Una volta padroneggiato, il sistema di punteggio può essere applicato in meno di un minuto per mouse se viene eseguito correttamente. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare la progressione della malattia nel SOD one G 93, un modello murino di un LS utilizzando il sistema Neuroco.