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DOI: 10.3791/53262-v
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La coltura di goccioline verticali ex vivo è un'alternativa alle attuali tecniche sperimentali in vitro e in vivo. Questo protocollo è facile da eseguire e richiede piccole quantità di reagente, consentendo al contempo la capacità di manipolare e studiare la vascolarizzazione, la morfogenesi e l'organogenesi fetale.
L'obiettivo generale di questa procedura è esaminare gli effetti degli inibitori di piccole molecole sullo sviluppo degli organi fetali utilizzando una tecnica di coltura di goccioline ex vivo. Ciò si ottiene aprendo prima il peritoneo di una topolina gravida e rimuovendo l'embrione contenente l'utero. Successivamente, gli embrioni vengono rimossi dall'utero e liberati dal tuorlo e dalle sacche amniotiche.
Quindi il complesso goad me neph viene sezionato e isolato dall'embrione. Infine, il complesso di Meris viene coltivato in una gocciolina con o senza un inibitore di piccole molecole. In definitiva, la microscopia a immunofluorescenza viene utilizzata per mostrare i cambiamenti nell'architettura degli organi utilizzando anticorpi specifici per tipo di cellula.
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