Name: In vitro misurare phosphatidylethanolamine metiltransferasi attività (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-05T13:00:01.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Impara a misurare l'attività della fosfatidiletanolamina metiltransferasi (PEMT) negli estratti cellulari di Leishmania. Questo metodo radioattivo quantifica la sintesi di fosfatidilcolina senza richiedere la purificazione enzimatica.

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Questo lavoro è stato supportato dalle sovvenzioni NIH ARRA RO3 AI078145 e 1SC3GM113743 a RZ.

1. cella estratto Preparazione <ol><li> Crescere le cellule Leishmania in una bottiglia di plastica sterile, sigillato con tappo a tenuta d&#39;aria a 26 ° C in un mezzo fatto di 1x M199 supplementato con 20 mM HEPES pH7.4, 100 U / ml di penicillina, 100 mg / ml di streptomicina, 5 mg / ml eme , 0,35 g / L Naco 2 H, adenina mM 0.1, e 2 mg / ml biopterina senza agitare. Raccogliere le cellule per centrifugazione a 1.500 g per 5 minuti a 4 ° C quando raggiungono una densità cellulare di 1-2 x 10 7 / ml. </li><li> Eliminare il surnatante con una pipetta e lavare le cellule risospendendo il pellet cellulare con una pipetta sierologica a metà del volume del cultura del fosfato salino freddo tamponata (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, Na 10 mm 2 HPO 4, 1.8 KH mM 2 PO 4, pH7.4). Smaltire surnatanti cellulari secondo le linee guida di sicurezza BL2. </li><li> Centrifugare le cellule di nuovo a 1.500 g per 5 minuti a 4 ° C. Eliminare il surnatante con una pipetta. Procedere to il prossimo passo elastico, congelare il pellet di cellule in azoto liquido per la conservazione a lungo termine a -80 ° C (fino a tre mesi). </li><li> Preparare 2x tampone di lisi (0,5 M di saccarosio, 0,1 M TrisHCl, pH7.5, 2 mM EDTA, e inibitore della proteasi 2x cocktail) e tenerlo a 4 ° C su ghiaccio. </li><li> Risospendere il pellet cellulare (fresco o congelato) in volume uguale di tampone di lisi 2x. Aggiungere il volume 1x di perline di vetro. Vortex vigorosamente a 4 ° C per 10 min. </li><li> Aggiungere 2 volumi di tampone di lisi 1x e mescolare. Estratti cellulari centrifugare a 1500 xg a 4 ° C per 10 minuti a pellet cellule intatte e nuclei. </li><li> Trasferire il surnatante con una pipetta in una provetta da centrifuga fresca aperta e mantenerlo estratti cellulari in ghiaccio fino al completamento dell&#39;esperimento. </li></ol> 2. Determinare la concentrazione della proteina del estratto cellulare utilizzando proteine ​​Stima Kit Come bicinconinico Acid Assay <ol><li> Preparare la soluzione di acido bicinconinico (BCA) (1 ml / tubo) mescolando il BCA e rame (II) sulfate in un rapporto di 49: 1 (v / v). </li><li> Preparare gli standard proteici di 0, 10, 20, 30, 40, 50, e 60 ug / ml diluendo un / ml albumina di siero bovino (BSA) soluzione madre 10 mg in 1 ml aliquote della soluzione BCA. </li><li> Aggiungere 2 ml di cellule estratti in 1 ml di soluzione di BCA in duplicato. Incubare standard e campioni di proteine ​​per 10 minuti in un bagno d&#39;acqua a 60 ° C pre-riscaldato. </li><li> Campioni di trasferimento di ghiaccio per 3 min. Misurare l&#39;assorbanza degli standard e dei campioni di proteine ​​con uno spettrofotometro ad una lunghezza d&#39;onda di 562 nm. </li><li> Calcolare la concentrazione proteica degli estratti cellulari utilizzando lo standard BSA come riferimento, come descritto nel protocollo del produttore. Diluire estratti cellulari ad una concentrazione proteica di 10 mg / ml con tampone di lisi 1x. </li></ol> 3. enzimatica Assay in 200 pl per Tubo NOTA: Eseguire le seguenti operazioni in una cappa chimica. <ol><li> Testare ciascun campione in duplicato in 15 mltubo conico. Preparare 20 ml 1 M TrisHCl pH 7,5 per tubo e tenerlo in ghiaccio. Preparare 2 ml di cloroformio / metanolo (1: 1 (v / v); soluzione di stop) a temperatura ambiente per ogni provetta. </li><li> Pipettare 20 ml di 1 M pH 7,5 TrisHCl in ciascun tubo da 15 ml su ghiaccio. </li><li> Seguire le linee guida di sicurezza di radiazioni da qui in poi. Aggiungere l&#39;equivalente di 0,06 mM (0,2 pCi) S - [Methyl- 3 H] adenosil-L-metionina e 50 mM freddo SAM per provetta per un totale di 50,06 mM di SAM. Aggiungi x ml di acqua fredda dove x = 200- (20 (per il buffer) + 20 (per estratti cellulari) + volume di freddo e radioattivi SAM) per provetta. </li><li> Trasferire ogni tubo conico a 30 ° C bagno di acqua preriscaldata. Aggiungere a ciascuna provetta 20 l di estratti cellulari (pari a 200 mg di proteine) per attivare la reazione. Incubare per il tempo desiderato (da 0 a 45 min). </li><li> Arrestare la reazione aggiungendo 2 ml di cloroformio / metanolo (1: 1; v / v; soluzione di arresto) ad ogni provetta. Trasferire il tubo conico di RT (20-256; C). </li></ol> 4. lipidi Estrazione NOTA: Eseguire le seguenti operazioni in una cappa chimica. <ol><li> Aggiungere 700 ml di acqua a ciascuna provetta contenente il campione reazione enzimatica. Vortex energicamente per 30 sec. Centrifugare a 1500 xg per 5 minuti a RT per separare il organica dalla fase acquosa. </li><li> Trasferire la fase organica inferiore in un nuovo tubo da 15 ml con una pipetta. Aggiungere 1 ml di acqua per ogni &quot;fase inferiore&quot; contenente provetta e agitare vigorosamente per 30 secondi. Centrifugare nuovamente a 1.500 xg per 5 min per separare il organica dalla fase acquosa. </li><li> Trasferire la fase organica inferiore in un tubo scintillazione con una pipetta. Campioni secco sotto flusso di N 2. Smaltire le fasi d&#39;acqua contenenti la SAM radioattivo non incorporato e tubi coniche radioattive come da linee guida di radiazione. </li><li> Aggiungere 2 ml / tubo di scintillazione liquida. Misurare la radioattività incorporata con un paio di scintillazionenter secondo il protocollo dei costruttori e l&#39;uso dello strumento. </li><li> Calcolare l&#39;attività enzimatica in nmol / mg proteina usando la seguente equazione generale: valore cpm x 10 x 3 [totale (radioattivi e freddo) concentrazione di SAM (mM)] x 5 attività specifica di SAM radioattivi (Ci / mmol) x [concentrazione di SAM radioattivi (mM)] NOTA: il protocollo di cui sopra può essere modificato per una concentrazione SAM dipendente o una proteina dipendente test PEMT. Per concentrazione SAM saggio enzimatico dipendente, il tempo viene mantenuta costante (15 min, che è nel range lineare) e varie quantità di freddo SAM vengono aggiunti al dosaggio mentre per proteina dipendente dosaggio PEMT, concentrazione SAM (abbiamo scelto 0,05 mM) e tempo sono mantenuto costante (15 min). Anche il pH del tampone può essere cambiata come necessario se alcuni enzimi PEMT hanno un diverso valore ottimale del pH. </li></ol>

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Nessun conflitto di interessi dichiarati

Questa semplice, rapido test PEMT consente la quantificazione di forme metilate di PE che deriva dal trasferimento di gruppi metilici radioattive da SAM su PE utilizzando estratto cellulare tutto come fonte proteica. È veloce, sensibile, riproducibile e adatto anche per enzimi purificati 17. Monomethyl- o dimetil-PE possono essere aggiunti al test se il metiltransferasi di interesse specifico per questi substrati anziché PE 12,13,18,19. Se viene utilizzato purificato enzima PEMT, PE può essere aggi...

Fosfatidiletanolamina metiltransferasi (PEMT) enzimi catalizzano l&#39;attacco covalente di uno o più gruppi metilici utilizzando S -adenosylmethionine (SAM) come il gruppo metilico donatore sul PE, PE o monometil-dimetil-PE dare monometil-PE, dimetil-PE e / o fosfatidilcolina (PC). Questi enzimi sono quasi onnipresenti nelle cellule animali e funghi. Possono anche essere trovati in alcune piante 1 e circa il 10% dei batteri, in particolare quelli che interagiscono con eucarioti 2. PEMTs sono rilevanti alla biologia della cellula non solo contribuendo alla produzione di PC, che è la classe principale lipidi nelle cellule animali, ma anche compiendo altre importanti funzioni cellulari. Nei mammiferi, PEMTs sono espressi principalmente nel fegato dove sono richiesti per il normale secrezione di lipoproteine ​​a bassissima densità e contribuiscono anche all&#39;obesità indotta dalla dieta 3, aterosclerosi 4, e l&#39;insulina resistonoANCE 5. Inoltre, PEMT mammiferi sono espressi anche negli adipociti, anche se a livelli più bassi, e partecipare a deposizione di grasso 6, 7. Ruolo PEMT nello sviluppo del cancro 8, 9 apoptosi, e la crescita delle cellule 10 sono stati anche dimostrato. Nei batteri, enzimi PEMT hanno dimostrato di essere importante per la normale crescita delle cellule 2, la virulenza 2, e simbiosi con la pianta ospite 11. L&#39;obiettivo e le motivazioni del presente protocollo è quello di misurare l&#39;attività PEMT da estratti cellulari interi, senza la necessità di purificare l&#39;enzima. Due protocolli distinti sono stati sviluppati per misurare l&#39;attività PEMT. Il primo e più comune misura il trasferimento del gruppo metilico triziata da SAM radioattivo su PE, che è l&#39;argomento di questo articolo. Questo protocollo è stato originariamente sviluppato per misurare l&#39;attività PEMT dal lievito 12 e cellule di mammifero (fegato) 13 per ottenere un understANDing di biosintesi PC in queste cellule, nonché per determinare la specificità di questi enzimi. Successivamente, questa tecnica è stata applicata ad altri tipi di cellule, come i batteri 2 (utilizzando un valore pH basico per il test se 15) e protozoi parassiti 14. Questa tecnica può essere utilizzata con estratti cellulari interi nonché enzima purificato, e può potenzialmente essere applicato a qualsiasi sistema di estratto cellulare. Un test non radioattivo è stato progettato che si basa sulla quantificazione enzimatica di S -adenosylhomocysteine, il prodotto di transmetilazione SAM 16. Quest&#39;ultimo test può essere più conveniente in quanto non comporta radioattività ma è adatto solo per gli enzimi purificati.

<table><tbody><tr><td>S-[Metil-3H]adenosil-L-metionina (attività specifica di 5-15 Ci/mMole)</td><td>Perkin Elmer</td><td>NET155050UC</td><td>Aliquotare il reagente e congelare a -20 &deg; C; seguire le linee guida sulla sicurezza delle radiazioni durante l'utilizzo di questo reagente</td></tr><tr><td>Cocktail di inibitori della proteasi</td><td>Roche Life Sciences</td><td>11836170001</td><td>diluirlo fresco&nbsp;</td></tr><tr><td>Perle di vetro, lavate con acido, 425-600 mm</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8772</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di acido bicinconnico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B9643</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di rame (II)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2284</td><td></td></tr><tr><td>Contatore a scintillazione MicroBeta2 con 1-rivelatore</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>2450-0010</td><td></td></tr><tr><td>Spettrofotometro Biomate 3</td><td>Thermo Scientific</td><td>840208300</td><td></td></tr><tr><td>soluzione madre BSA (10 mg/ml)</td><td>New England Biolabs</td><td>B9001S</td><td></td></tr><tr><td>Liquido a scintillazione&nbsp;</td><td>Prodotto della ricerca International Corp</td><td>111198</td><td></td></tr><tr><td>cloruro di S-(5'-adenosil)-L-metionina (cloridrato)&nbsp;</td><td>Cayman Chemicals</td><td>13956</td><td>diluire il reagente in 20 mM di HCl e congelare le aliquote a -80 gradi; C&nbsp;</td></tr></tbody></table>

in vitro misurare phosphatidylethanolamine metiltransferasi attività

In Vitro Assay to Measure Phosphatidylethanolamine Methyltransferase Activity

Le fosfatidiletanolammina metiltransferasi sono enzimi biosintetici che catalizzano il trasferimento di uno o più gruppi metilici dalla S-adenosil-L-metionina alla fosfatidiletanolammina, monometil-fosfatidiletanolammina o dimetil-fosfatidiletanolammina per dare monometil-fosfatidiletanolammina, dimetil-fosfatidiletanolammina o fosfatidilcolina. Questi enzimi sono onnipresenti nelle cellule animali, nei funghi e si trovano anche in circa il 10% dei batteri. Svolgono varie funzioni importanti nella fisiologia cellulare oltre al loro ruolo diretto nel metabolismo dei lipidi, come nell'insulino-resistenza, nel diabete, nell'aterosclerosi, nella crescita cellulare o nella virulenza. Il presente manoscritto riporta un semplice saggio enzimatico cell-free che misura il trasferimento di gruppi metilici triziati da S-[Metil-3H]adenosil-L-metionina su fosfatidiletanolammina utilizzando estratti di cellule intere come fonte enzimatica. Le forme metilate risultanti di fosfatidiletanolammina sono idrofobiche e quindi possono essere separate dalla S-[metil-3H]adenosil-L-metionina solubile in acqua mediante estrazione organica. Questo test può essere potenzialmente applicato a qualsiasi altro tipo di cellula e utilizzato per testare inibitori/farmaci specifici per una fosfatidiletanolammina metiltransferasi di interesse senza la necessità di purificare l'enzima.

La figura 1 mostra un tempo dipendente PEMT dosaggio, che è stata effettuata con Leishmania estratto cellula intera come fonte dell&#39;enzima utilizzando PE endogena come substrato. La quantità di radioattività nella fase organica è stata quantificata mediante conteggio a scintillazione. I numeri ottenuti sono stati utilizzati per calcolare la quantità di gruppi metilici triziata trasferiti verso PE. L&#39;attività PEMT era lineare per circa 20 min. È quindi ra...

Il presente rapporto descrive un test enzimatico in vitro per misurare l'attività della fosfatidiletanolammina metiltransferasi utilizzando estratti cellulari di Leishmania. Questo test si basa sul trasferimento di un gruppo metilico radioattivo dalla S-[metil-3H]adenosil-L-metionina alla fosfatidiletanolammina endogena.

In vitro misurare phosphatidylethanolamine metiltransferasi attività

Phosphatidylethanolamine methyltransferases are biosynthetic enzymes that catalyze the transfer of one or more methyl group(s) from ...

L'obiettivo generale di questa metodologia è quantificare l'attività della fosfatidiletanolammina metiltransferasi o PEMT da estratti cellulari totali. Con questo metodo è possibile rispondere a domande fondamentali nel campo del metabolismo lipidico, come l'importanza delle fosfatidiletanolammina metiltransferasi nella biosintesi della fosfatidilcolina. Il principale vantaggio di questo protocollo è che può essere misurato direttamente da estratti cellulari totali e non richiede la purificazione dell'enzima.Pertanto, questo protocollo può fornire informazioni su come il parassita sintetizza la sua lipidica più abbondante, la fosfatidilcolina. Questo protocollo può essere applicato anche ad altri tipi cellulari, come le cellule di mammifero e i batteri. Coltivazione delle cellule di Leishmania in una bottiglia di plastica sterile chiusa con un tappo ermetico a 26 gradi Celsius in un mezzo M199 supplementato, senza agitazione.Raccogliere le cellule mediante centrifugazione a 1500G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Quando raggiungono una densità cellulare di 10-20 milioni di cellule per millilitro. Dopo aver rimosso il soprannatante con una pipetta, lavare le cellule risospendendo il pellet cellulare con una pipetta serologica in metà del volume di soluzione salina tamponata al fosfato fredda rispetto al volume della coltura.Centrifugare nuovamente le cellule a 1550G per cinque minuti a quattro gradi Celsius. Rimuovere il soprannatante con una pipetta. Procedere al passaggio successivo oppure congelare rapidamente il pellet cellulare in azoto liquido per la conservazione a lungo termine a meno 80 gradi Celsius.Successivamente, risospendere il pellet cellulare in un volume uguale di tampone di lisi 2X. Aggiungere un volume di perline di vetro e vortexare vigorosamente a quattro gradi Celsius per 10 minuti. Aggiungere due volumi di tampone di lisi 1X e mescolare.Quindi centrifugare gli estratti cellulari a 1500G e a quattro gradi Celsius per 10 minuti per ottenere un pellet di cellule non lisate e nuclei. Trasferire il soprannatante con una pipetta in un nuovo tubo da centrifuga freddo e mantenere gli estratti cellulari sul ghiaccio fino al termine dell'esperimento. Aggiungere due microlitri di estratti cellulari a un millilitro di soluzione di acido bicinconinico e duplicare il campione.Incubare gli standard e i campioni proteici per 10 minuti in un bagnomaria pre-riscaldato a 60 gradi Celsius. Trasferire i campioni sul ghiaccio per tre minuti. Misurare l'assorbanza degli standard e dei campioni proteici mediante spettrofotometro a una lunghezza d'onda di 562 nanometri.Calcolare la concentrazione proteica degli estratti cellulari utilizzando l'albumina sierica bovina come standard di riferimento, come descritto nel protocollo del produttore. Diluire gli estratti cellulari fino a una concentrazione proteica di 10 milligrammi per millilitro con buffer di lisi 1X. In una cappa chimica, analizzare ogni campione e duplicato in un tubo conico da 15 millilitri.Preparare 20 microlitri di TrisHCl uno molare a pH 7,5 per provetta e mantenerli sul ghiaccio. Preparare inoltre due millilitri di soluzione di arresto cloroformio-metanolo per ogni provetta a temperatura ambiente. Pipettare 20 microlitri di TrisHCl uno molare in ciascun tubo conico da 15 millilitri posto sul ghiaccio.Quindi, seguendo le linee guida per la sicurezza nelle radiazioni, utilizzare una concentrazione equivalente di zero virgola zero sei micromolare di SAM triziato e 50 micromolare di SAM freddo per provetta, per un totale di 50 virgola zero sei micromolare di SAM. A questo punto, aggiungere a ogni provetta un volume di acqua fredda calcolato in base al protocollo descritto nel testo. Trasferire ogni provetta conica in un bagno d'acqua preriscaldato a 30 gradi Celsius.Aggiungere 20 microlitri di estratti cellulari in ogni provetta per avviare la reazione. Incubare i campioni per il tempo desiderato. Arrestare la reazione aggiungendo due millilitri di cloroformio-metanolo in ogni provetta.Trasferire i tubi conici a temperatura ambiente. Lavorando in una cappa chimica, aggiungere 700 microlitri di acqua in ciascun tubo contenente il campione della reazione enzimatica. Vortexare energeticamente per 30 secondi.Quindi centrifugare a 1500g per cinque minuti a temperatura ambiente per separare la fase organica da quella acquosa. È fondamentale, durante il trasferimento della fase inferiore, non prelevare alcuna parte della fase acquosa, poiché ciò altererebbe il calcolo del saggio. Utilizzare una pipetta per trasferire la fase organica inferiore in un nuovo tubo conico da 15 millilitri.Aggiungere un millilitro di acqua in ciascun tubo contenente la fase inferiore ed eseguire un'agitazione vigorosa con vortex per 30 secondi. Successivamente, centrifugare nuovamente a 1500G per cinque minuti al fine di separare la fase organica dalla fase acquosa. Trasferire la fase organica inferiore in un tubo per scintillazione mediante pipetta.Asciugare i campioni sotto un flusso di gas azoto. Smaltire le fasi acquose contenenti il SAM radioattivo non incorporato e i tubi conici radioattivi seguendo le linee guida per le radiazioni. Successivamente, aggiungere due millilitri di liquido scintillatore per ogni tubo.Misurare la radioattività incorporata mediante un contatore a scintillazione seguendo il protocollo del produttore e gli strumenti utilizzati. Calcolare l'attività enzimatica in nanomoli per milligrammo di proteina utilizzando l'equazione indicata nel protocollo testuale. Qui è mostrato un saggio PEMT dipendente dal tempo eseguito con un estratto cellulare totale di Leishmania come fonte enzimatica, utilizzando PE endogeno come substrato.La quantità di radioattività nella fase organica è stata quantificata mediante conteggio con scintillazione ed è stata utilizzata per calcolare la quantità di gruppi metilici tritiati trasferiti sul PE. L'attività di PEMT è risultata lineare per circa 20 minuti. Successivamente ha raggiunto un plateau intorno ai 30 minuti, mantenendosi costante per altri 15 minuti. Come previsto, l'attività di PEMT non è stata rilevata in assenza di estratti cellulari ed è stata invece rilevata quando gli estratti cellulari sono stati aggiunti al saggio.Inoltre, questa attività è stata abolita in presenza di 100 micromolar di bromuro di ottadeciltrimetilammonio, che è un inibitore specifico delle fosfatidiletanolammina metiltransferasi di Leishmania major LMJ PEM uno e LMJ PEM due. L'attività PEMT dipendeva anche dalla concentrazione proteica e questa attività era proporzionale in modo lineare alla quantità di proteina utilizzata nel saggio enzimatico. Infine, è stato eseguito un saggio PEMT dipendente dalla concentrazione di SAM, in cui sono state testate concentrazioni crescenti di SAM.L'attività di PEMT ha raggiunto un plateau a una concentrazione di SAM di circa zero virgola cinque millimolari. La realizzazione di questo protocollo richiede da tre a cinque ore, a seconda del numero di campioni. Nel corso dell'esecuzione di questo protocollo, è molto importante utilizzare SAM acquistato recentemente, poiché questo composto è instabile.Ricordate che lavorare con agenti patogeni e radioattività può essere estremamente pericoloso. Pertanto, è importante seguire le linee guida per la sicurezza e indossare l'equipaggiamento da laboratorio adeguato.

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Questo protocollo descrive la preparazione di un substrato sintetico per il...

Test in vitro Metilazione tRNA con l&#39;Entamoeba histolytica del DNA e Dnmt2 tRNA metiltransferasi (Ehmeth) Enzyme

Questo video mostra un test enzimatico basato sulla cromatografia su strato sottile per determinare l'attività della pirofosfochinasi utilizzando nucleotidi radiomarcati. Il metodo fornisce informazioni sulla sintesi nucleotidica e sulle reazioni di fosfotrasferimento.

Saggio dell'attività enzimatica basato sulla cromatografia su strato sottile: una tecnica per determinare l'attività della pirofosfochinasi in vitro utilizzando la cromatografia su strato sottile

Proteine ​​arginina metilazione, catalizzata da una classe di enzimi viz., Proteina arginina metil transferasi (PRMTs), è il processo di aggiunta enzimatica di gruppi metile (s) per arginines all'interno di proteine. Il test in vitro metilazione è lo strumento più affidabile per valutare lo stato di metilazione di substrati PRMT noti o nuovi.

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Descriviamo un protocollo di base per quantificare l'attività dell'ATPasi in vitro. Questo protocollo può essere ottimizzato in base al livello di attività e ai requisiti di una data ATPasi purificata.

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C'è una domanda per fare pre-clinica test per una nuova classe di farmaci "orfani" chiamato chaperoni farmacologici riproducibile, veloce ed efficiente. Abbiamo sviluppato un test cellulari semplice, altamente standardizzate e versatile cultura alla schermata per i pazienti eleggibili come pure droghe romanzo chaperoni farmacologici.

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Qui, descriviamo un metodo per purificare enzimi pyrophosphokinase istidina-etichettate e utilizzando la cromatografia su strato sottile di radiomarcato substrati e prodotti di test per l' attività enzimatica in vitro. L'analisi di attività dell'enzima è ampiamente applicabile a qualsiasi chinasi, ciclasi del nucleotide o reazione di fosforo-trasferimento cui meccanismo include idrolisi di trifosfato del nucleotide.

Una purificazione e l'analisi di attività In Vitro per un ppGpp (p) sintetasi da Clostridium difficile

Qui, viene descritto un saggio in vitro privo di anticorpi per l'analisi diretta dell'attività di metiltransferasi sull'RNA transscritto sintetico o in vitro.

Analisi anticorp-free per l'analisi dell'attività di RNA methyltransferase

Qui presentiamo un metodo di screening per gli inibitori di pyrophosphatase legati alla membrana (da Thermotoga maritima) basato sulla reazione blu molybdenum in un formato 96 pozzo piastra.

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Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Analisi per la Determinazione Quantitativa della Palmitoylation delle Proteine della Membrana Cerebrale

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Saggio fluorometrico basato sulla chimica dei clic per l'apolipoproteina N-aciltransferasi dalla caratterizzazione enzimatica allo screening ad alta produttività

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In vitro misurare phosphatidylethanolamine metiltransferasi attività

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