Name: Acqua in emulsioni olio: un nuovo sistema di montaggio idrosolubili proteine clorofilla vincolante con pigmenti idrofobi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Scopri come assemblare clorofille con proteine ricombinanti solubili in acqua utilizzando emulsioni acqua-in-olio. Questo metodo semplice e ad alto rendimento consente studi dettagliati delle interazioni clorofilla-proteina senza necessità di marcatura.

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DN riconosce il sostegno dell&#39;Unione europea del 7 ° PQ progetti PEPDIODE (GA 256.672) e REGPOT-2012-2013-1 (GA 316.157), e un assegno di ricerca personale (n ° 268/10) dalla Israel Science Foundation. Ringraziamo il Prof. Shmuel Rubinstein, Facoltà di Ingegneria e Scienze Applicate, Università di Harvard, Cambridge, MA, USA per prendere le immagini di microscopia confocale.

1. Preparazione Chl uno stock Solutions <ol><li> PUNTO CRITICO: eseguire tutte le fasi della preparazione clorofilla in una cappa chimica, sotto luce verde (520 nm) o al buio, al fine di ridurre al minimo fotodanneggiamento. Aggiungere sempre azoto o argon prima del congelamento dei pigmenti per la conservazione. Assicurarsi che tutti i solventi sono grado analitico. </li><li> Pesare circa 5 mg di cellule Spirulina platensis liofilizzati o altre cellule cianobatterio che contengono solo Chl a nelle membrane tilacoidi e schiacciarlo con un mortaio e pestello. </li><li> Caricare cellule schiacciato su una colonna di vetro e lavare con circa 50-100 ml di 100% di acetone per rimuovere carotenoidi. Eliminare il arancione / verde frazione eluita. Nota: Se la frazione arancione non sia eluito con 100 ml di acetone continuano lavare le cellule con acetone fino frazione verde inizia ad eluire. </li><li> Scambio di acetone con il 100% di metanolo e raccogliere la frazione verde contenente Chl a. Il volume di fract eluitaioni può variare tra 50-100 ml. All&#39;inizio, la frazione eluita ha un colore verde scuro, che cambia in verde pallido a fine eluizione. Quando il colore della frazione eluita si trasforma in verde pallido fermare l&#39;eluizione. </li><li> Si evapora il metanolo usando un evaporatore rotante fino l&#39;estratto è completamente asciutta. Non applicare calore alla soluzione; accertarsi che la temperatura bagnomaria dell&#39;evaporatore non superi 30 ° C. Nota: Il tempo di evaporazione dipende dal volume della frazione metanolo essere evaporato e può variare tra 10-60 min. È importante asciugare completamente estratto. </li><li> Sciogliere i pigmenti estratto secco in un piccolo volume di etere dietilico (5-10 ml) e filtrata attraverso cotone idrofilo. Assicurarsi che i pigmenti sono completamente disciolti in etere prima del filtraggio. </li><li> Far evaporare l&#39;etere etilico fino a quando i pigmenti sono completamente asciutti (10-30 min). Nota: I pigmenti secchi possono essere eliminati con e tenuti sotto azoto o argon a -20 ° C, al buio, fino al procedimento. </li><li> Sciogliere i pigmenti secchi nel minor volume possibile di 100% metanolo (circa 1 ml), anche se non tutto è completamente sospeso. Aggiungere 4 ml di acetone alla soluzione, e flick il vetro delicatamente per sciogliere completamente i pigmenti. </li><li> Usando una pipetta Pasteur, caricare il campione delicatamente su una colonna di DEAE Sepharose equilibrata in 100% acetone. </li><li> carotenoidi Eluire (una banda giallo-arancio) con il 100% di acetone. Poi, eluire Chl a (fascia verde) con 3: miscela 1 v / v acetone / metanolo. Nota: Il volume di acetone e la miscela acetone / metanolo è approssimativamente equivalente al volume di DEAE Sepharose caricata sulla colonna. </li><li> Verifica Chl purezza, in cromatografia su strato sottile utilizzando un 68: 25: 5: 2 diclorometano / n-esano / isopropanolo / metanolo (v / v) come eluente la miscela 17. </li><li> Si evapora il solvente usando un evaporatore rotante fino alla Chl a completa asciugatura (10-60 min). Nota: Il secco Chl a poter essere spurgato con azoto o argon e conservati in atmosfera di argon a -20 ° C al buio. </li><li> Preparare Chl una soluzione stock di ri-dissoluzione secco Chl a in 2-4 ml di etanolo al 100%. Nota: Il coefficiente di estinzione di Chl a a 663 nm è 74.400 cm -1 M -1 (83,3 cm -1 (mg / ml) -1) in etanolo. Una tipica soluzione di riserva deve avere OD di 1.860 corrispondente ad una concentrazione di 25 mM (23 mg / ml). Aggiunta di 20 microlitri di questo stock da un&#39;emulsione contenente 5 ml di fase organica, e 1 mg di WSCP in 1 ml di risultati di fase acquosa in una miscela con 10 volte eccesso molare di Chl a vs. WSCP. </li></ol> 2. Preparazione fase organica dell&#39;emulsione Nota: La fase organica dell&#39;emulsione è composto da olio minerale contenente 4,5% (v / v) Span 80, e 0,4% (v / v) Tween 80. <ol><li> Pesare in 50 ml tubo 0,2 g di Tween 80, 1,8 g di Span 80, e 38 g di olio minerale. Mescolare bene tutti i componenti e raffreddare su ghiaccio. Nota: La fase organica può essere memorizzato in 4 ° C fino ad una settimana. </li></ol> 3. Preparazione della fase acquosa dell&#39;emulsione Nota: La fase acquosa dell&#39;emulsione può essere composto da uno WSCP purificato, o l&#39;estratto grezzo di batteri iperesprimono WSCP. <ol><li> Preparazione di una fase acquosa contenente WSCP purificata. <ol><li> Grow batteri E.coli BL21 contenenti WSCP plasmide 12 in 1 L di terreno LB a 37 ° C fino a OD di 0.3-0.6. </li><li> Indurre l&#39;espressione delle proteine ​​con l&#39;aggiunta di 1 mM IPTG. Dopo l&#39;induzione crescere batteri a 30 ° C per 12-16 ore. </li><li> batteri Harvest per centrifugazione a 5.000 xg per 10 minuti a 4 ° C. </li><li> Sciogliere il pellet nel buffer e ultrasuoni vincolante sul ghiaccio (30 sec a 15 sec spento, cinque volte). Usare 10 ml di tampone per il pellet ottenuto dalla centrifugazione di 250 ml diterreno LB con cellule che sovraesprimono la proteina. Nota: A seconda del metodo di purificazione, il tampone di legame può essere composto da 100 mM tampone fosfato, pH 7,2 o 50 mM Tris, pH 7,5, 500 mM NaCl, 5 mM EDTA. </li><li> Centrifugare il lisato cellulare a 12.000 xg per 30 min a 4 ° C. </li><li> Purificare WSCP mediante cromatografia di affinità. A seconda del tag fuso WSCP, purificare le proteine ​​ricombinanti utilizzando il sistema di cromatografia di affinità disponibile in commercio adatto per la purificazione della proteina seguendo le istruzioni del produttore. </li><li> Per la preparazione dell&#39;emulsione, utilizzare WSCP purificata in 50 mM tampone fosfato, pH 7,8. Assicurarsi che la quantità di proteine ​​finale usata per la ricostituzione è 0,5-1,0 mg per 1 ml di tampone. </li></ol></li><li> Preparazione di una fase acquosa contenente lisato batterico grezzo con WSCP. <ol><li> Crescere le cellule di E.coli BL21 contenenti WSCP plasmide esprimente in 250 ml di terreno LB a 37 ° C fino a OD 0.3-0.6. </li><li> Indurre l&#39;espressione della proteina con1 mM IPTG e crescere i batteri notte a 30 ° C. </li><li> cellule batteriche Harvest per centrifugazione a 5.000 xg per 10 minuti a 4 ° C. </li><li> Sciogliere il pellet in 1-2 ml di 50 mM tampone fosfato di sodio pH 7,8, Sonicare (30 sec acceso, 15 sec off, tre volte) e centrifugare a 12.000 xg per 30 min a 4 ° C. </li><li> Preparare la fase acquosa dell&#39;emulsione mescolando 0,125 ml di surnatante con 0,875 ml di 50 mM sodio fosfato tampone pH 7.8. </li></ol></li></ol> 4. Montaggio di WSCP con Chl a in emulsione <ol><li> Transfer 5 ml di miscela olio-tensioattivo in una fiala di vetro e raffreddare in ghiaccio. Prima di pipettamento, verificare che tutti i componenti della fase organica vengono miscelati accuratamente e non vi è alcuna separazione di fase tra tensioattivi e olio minerale. </li><li> Aggiungere 1 ml di fase acquosa ghiacciata preparato come al punto 3 a 5 ml di fase organica. </li><li> Mescolare le due fasi usando un omogeneizzatore tessuto per 2 min a 9500 rpm su ghiaccio.</li><li> PUNTO CRITICO: Da questo punto in poi, eseguire tutte le ulteriori passi sotto la luce verde (520 nm) al fine di minimizzare fotodanneggiamento. Aggiungere 20 ml di 25 mM Chl una soluzione madre (vedi paragrafo 1.13) per l&#39;emulsione. Disperdere muovendo e invertendo la fiala di vetro. Assicurarsi che il Chl è distribuito uniformemente in emulsione. </li><li> Incubare la emulsione per 1-2 ore in ghiaccio al buio. </li><li> Al fine di abbattere l&#39;emulsione e goccioline di acqua separata dalla fase organica trasferire l&#39;emulsione in provette di plastica da 1,5 ml e centrifugare a 14000 xg per 5 min a temperatura ambiente. Nota: Se il gruppo ha successo, la fase acquosa inferiore dovrebbe avere un colore verde. </li><li> Smaltire la fase superiore dell&#39;olio e aggiungere 1 ml di olio minerale. Mescolare bene l&#39;olio minerale con l&#39;emulsione pellet dal vortice o girando la provetta accuratamente. Centrifugare il campione a 14.000 xg per 5 min a temperatura ambiente. Ripetere questa operazione fino a quando un menisco chiaro che separa il acquosa e minatorefasi di petrolio al, senza alcuna emulsione intermedio si ottiene. </li><li> Eseguire questo passaggio in una cappa chimica. Dopo le fasi di petrolio acquose e minerali sono chiaramente separati, rimuovere l&#39;olio minerale e aggiungere 1 ml di acqua satura di etere etilico. Vortex e centrifugare il campione a 14.000 xg per 5 min a temperatura ambiente. Ripetere questa operazione due volte. </li><li> Dopo la seconda centrifugazione, eliminare l&#39;etere etilico e lasciare i tubi aperti per 5-20 min nella cappa. </li><li> Infine, caricare la fase acquosa contenente la WSCP / Chl un complesso su una colonna dissalazione ed eluire con tampone appropriato per ulteriori esperimenti. Nota: La proteina è stabile in buffer Tris fosfati o in una vasta gamma di pH (6.0-7.5). Il campione può essere conservato a 4 ° C al riparo dalla luce fino a un mese. </li></ol>

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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Il nostro obiettivo era quello di sviluppare un nuovo sistema generale per l&#39;assemblaggio delle proteine ​​clorofilla-binding solubili in acqua con pigmenti idrofobiche. Qui si dimostra che il nuovo sistema di ricostituzione basato su W / O emulsione è un approccio generale dimostrato di funzionare per l&#39;assemblaggio di apoproteine ​​WSCP da cavolini di Bruxelles, cavolfiore, rafano giapponese e Virginia pepperweed ricombinante espresse in E. coli. Qui i risultati sono presentati dalla ricostituzione di...

pigmenti idrofobi, come clorofille (Chls), batterioclorofilla (BChls) e carotenoidi sono i cofattori primari in centri di reazione fotosintetici e le proteine ​​di raccolta di luce che effettuano trasporto di elettroni, e la cattura l&#39;energia della luce e il trasferimento. I centri di reazione e la maggior parte dei complessi di raccolta della luce Chl-leganti sono proteine ​​transmembrana. La Fenna-Matthews-Olson (FMO) proteine ​​di batteri fotosintetici verde-zolfo non oxygenic 1,2, e la proteina peridinina-Chl (PCP) dei dinoflagellati 3 sono esempi eccezionali di solubili in acqua proteine ​​luce raccolta. Il legame clorofilla proteine ​​solubili in acqua (WSCPs) di Brassicacee, Polygonaceae, Chenopodiaceae e piante Amaranthaceae 4, 5 sono un altro esempio unico, ma a differenza di FMO e PCP, questi non sono coinvolti nella raccolta della luce, né in alcuna della reazione fotosintetica primaria , e la loro precisa pHYfunzioni siological sono ancora poco chiari 5-8. La loro alta affinità Chl vincolante hanno portato ad una funzione suggerito come portatori transitori di Chls e derivati ​​Chl 9,10. In alternativa, è stato ipotizzato che WSCP svolge un ruolo nei collettori Chls in cellule danneggiate e protegge contro Chl-indotta danni photooxidative 7,11-13. Più di recente, è stato suggerito che le funzioni WSCP come un inibitore della proteasi e svolge un ruolo durante la resistenza erbivoro e regola la morte delle cellule durante lo sviluppo del fiore 14. WSCPs sono divisi in due classi principali in base alle loro proprietà fotofisiche. La prima classe (classe I, ad es. Da Chenopodium album) può subire fotoconversione su di illuminazione. WSCPs Classe II da piante del genere Brassica, che non subiscono fotoconversione 5,10, sono ulteriormente suddivisi in classe IIa (ad es., Dalla Brassica oleracea, Raphanus sativus) e IIb (ad es., Da lepidium virginicum </em&gt;). La struttura di classe IIb WSCP da lepidium virginicum è stato risolto con la cristallografia a raggi X con una risoluzione di 2.0 Å 8. Si rivela un omotetramero simmetrica in cui le subunità proteiche formano un core idrofobico. Ogni subunità lega un singolo Chl che si traduce in una stretta disposizione di quattro Chls stipati all&#39;interno delle core.This semplice tutti convenire Chl rende WSCPs un sistema modello potenzialmente utile per studiare vincolante e assemblaggio di complessi Chl-proteina, e gli effetti della vicina Chls e ambienti proteine ​​sulle proprietà spettrali ed elettroniche di singoli Chls. Inoltre, può fornire modelli per la costruzione di proteine ​​artificiali Chl vincolanti che possono essere utilizzati per i moduli che raccolgono la luce nei dispositivi fotosintetici artificiali. Studi rigorosi di WSCPs nativi non sono realizzabili perché i complessi purificati da piante contengono sempre una miscela eterogenea di tetrameri con diverse combinazioni di Chl ae Chl b 9. Pertanto, è necessario un metodo per assemblare WSCPs ricombinanti espresse con Chls in vitro. Questo è contestata dalla trascurabile idrosolubilità Chls che rende impossibile assemblare il complesso in vitro per semplice miscelazione dei apoproteine ​​idrosolubili con pigmenti in soluzioni acquose. In vitro assemblaggio miscelando i apoproteine ​​con membrane tilacoidi 15 è stata dimostrata, ma questo metodo è limitato al nativo Chls presente nei tilacoidi. Schmidt et al. riportato sul montaggio diversi derivati ​​Chl e BCHL con WSCP dal cavolfiore (CaWSCP) esprimendo una proteina ricombinante, istidina-marcato in E. coli immobilizzare esso su una colonna Ni-affinità e l&#39;introduzione di strumenti derivati ​​Chl solubilizzati nei detergenti 11. Con successo della ricostituzione di WSCPs ricombinanti da A. thaliana 6, e cavolini di Bruxelles (BoWSCP), giapponese ravanello selvatico (RshWSCP) unsono stati anche riferito d Virginia pepperweed (LvWSCP) con un metodo simile. Qui, vi presentiamo un romanzo, in generale, il metodo semplice per l&#39;assemblaggio di Chls con WSCP che non richiede codifica o immobilizzare le proteine. Essa si basa sulla preparazione di emulsioni dalle loro soluzioni acquose dei apoproteine ​​idrosolubili in olio minerale. Le proteine ​​sono quindi incapsulati in acqua-in-olio (W / O) microgocce con un&#39;elevata superficie in rapporto al volume 16. I cofattori idrofobi vengono disciolti nell&#39;olio e vengono facilmente introdotti nelle goccioline della fase oleosa. Riportiamo di utilizzare il metodo per l&#39;assemblaggio di diverse varianti di apoproteine ​​WSCP ricombinante espresse in E. coli con Chl a. Dimostriamo il gruppo dal lisato grezzo di batteri WSCP-iperespressione che possono essere utilizzati come un sistema di screening per lo sviluppo di nuovi Chl proteine ​​leganti.

<table><tbody><tr><td>Olio minerale</td><td>Sigma</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Span80</td><td>Sigma</td><td>85548</td><td></td></tr><tr><td>Tween80</td><td>Sigma</td><td>P8074</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Scale Mini Profinity eXact Cartucce</td><td>Bio Rad</td><td>10011164</td><td>Affinity cromatografia per la purificazione WSCP con sequenza nativa.</td></tr><tr><td>Colonna HF His Trap</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>17-5248-02</td><td>Cromatografia di affinità per la purificazione WSCP con His-tag</td></tr><tr><td>DEAE Sepharose Fast</td><td>Flow GE Healthcare Life Science</td><td>17-0709-01</td><td>Terreno cromatografico per la purificazione della clorofilla</td></tr></tbody></table>

acqua in emulsioni olio: un nuovo sistema di montaggio idrosolubili proteine ​​clorofilla vincolante con pigmenti idrofobi

Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

Clorofille (Chls) e batterioclorofilla (BChls) sono i cofattori principali che effettuano la raccolta luce fotosintetica e di trasporto degli elettroni. La loro funzionalità dipende in modo critico dalla loro specifica organizzazione all&#39;interno di grandi ed elaborati complessi proteici multisubunit transmembrana. Per comprendere a livello molecolare come questi complessi facilitano conversione dell&#39;energia solare, è essenziale comprendere proteina-pigmento, e le interazioni pigmenti pigmento, e il loro effetto sulla dinamica eccitati. Un modo per ottenere questo senso sia costruendo e studiando complessi di Chls con semplici proteine ​​ricombinanti solubili in acqua. Tuttavia, incorporando le Chls lipofile e BChls in proteine ​​solubili in acqua è difficile. Inoltre, non esiste un metodo generale, che potrebbero essere utilizzati per l&#39;assemblaggio delle proteine ​​solubili in acqua con pigmenti idrofobi. Qui, dimostriamo un sistema di throughput semplice ed alta basato su emulsioni acqua-in-olio, che consente assembly di proteine ​​solubili in acqua con Chls idrofobi. Il nuovo metodo è stato convalidato assemblando versioni ricombinanti della clorofilla proteina legante idrosolubile di Brassicaceae piante (WSCP) con Chl a. Dimostriamo l&#39;assemblaggio di successo di Chl A utilizzando lisati grezzi di WSCP esprimono E. cellule coli, che può essere usato per sviluppare un sistema di screening genetico per nuove proteine ​​Chl-leganti idrosolubili, e per studi di interazione Chl-proteina e processi di assemblaggio.

Apoproteine ​​WSCP ricombinanti sono stati assemblati con Chl a in emulsioni / O W secondo il protocollo descritto nella sezione precedente. Il protocollo è stato implementato utilizzando fasi acquose contenenti sia WSCPs puri, o lisati cellule di E.coli sovraesprimono WSCP (Figura 1). Il protocollo è semplice, veloce e non richiede particolari attrezzature tranne un omogeneizzatore tessuto. ...

Questo manoscritto descrive un metodo semplice e ad alta produttività per assemblare proteine ​​solubili in acqua con pigmenti idrofobiche che è basato su emulsioni acqua-in-olio. Dimostriamo l&#39;efficacia del metodo per l&#39;assemblaggio di clorofille nativi con quattro varianti di ricombinante solubile in acqua-clorofilla proteine ​​leganti (WSCPs) di piante Brassica espressi in E. coli.

Acqua in emulsioni olio: un nuovo sistema di montaggio idrosolubili proteine ​​clorofilla vincolante con pigmenti idrofobi

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. ...

L'obiettivo generale di questa tecnica è consentire l'incorporazione di clorofille insolubili in acqua nei siti di legame di proteine solubili in acqua. Questo metodo permette l'assemblaggio di clorofille con proteine ricombinanti, il che consente studi rigorosi sulle interazioni tra clorofilla e proteina e apre nuove possibilità per la costruzione di complessi clorofilla-proteina innovativi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che non richiede l'etichettatura né l'immobilizzazione delle proteine.Pertanto, è particolarmente adatto per saggi di screening. A illustrare la procedura sarà Dominica Bednarczyk, un ricercatore post-dottorato del mio gruppo di ricerca. Durante la preparazione delle seguenti soluzioni stock, eseguire tutti i passaggi di preparazione della clorofilla sotto cappa chimica, alla luce verde o al buio, per minimizzare i danni fotochimici.Aggiungere sempre azoto o argon prima di congelare i pigmenti per la conservazione ed assicurarsi che tutti i solventi siano di grado analitico. Per iniziare, pesare circa cinque grammi di cellule liofilizzate di Spirulina platensis o di altre cellule di cianobatteri contenenti solo clorofilla a o clorofilla-a nelle membr

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Questo protocollo descrive in dettaglio la ricostituzione dei complessi di raccolta della luce in vitro. Queste proteine integrali di membrana coordinano le clorofille e i carotenoidi e sono responsabili della raccolta della luce nelle piante superiori e nelle alghe verdi.

In Vitro Ricostituzione di Complessi Light-raccolta di piante e alghe verdi

Le molecole di colorante organico e le nanoparticelle di conversione rivestite di acido oleico non sono solubili in acqua. Questo protocollo descrive un metodo "plug and play" che consente il trasferimento di molecole di colorante organico e particelle di upconverting dal loro solvente idrofobico iniziale all'acqua.

Un metodo &#39;Plug and Play&#39; per creare Nanoassemblies acqua dispersibile contenenti un polimero Amphiphilic, coloranti organici e Upconverting nanoparticelle

Questo articolo riporta metodi pratici per preparare idrogel in film autoportanti e membrane impregnate e per caratterizzare le loro proprietà fisiche, comprese le proprietà di trasporto dell'acqua.

Sintesi di idrogel con proprietà antivegetative come membrane per la purificazione dell&#39;acqua

Questo protocollo descrive un mezzo clinicamente applicabile di dissoluzione composti idrofobici in ambiente acquoso, utilizzando combinazioni di autoassemblanti soluzioni peptidi e aminoacidi. Il nostro metodo risolve una limitazione importante di terapeutica idrofobica, che mancano mezzi sicuri, efficienti metodi di solubilità e consegna nelle regolazioni cliniche.

Solubilità dei composti idrofobici in soluzione acquosa utilizzando combinazioni di autoassemblanti peptidi e aminoacidi

Qui presentiamo due protocolli ultraveloce per la ricostituzione delle proteine di membrana in fusogena proteoliposomi e la fusione di tali proteoliposomi con lipidici di destinazione per la consegna senza detersivo di queste proteine di membrana nel bilayer del postfusion. La combinazione di questi approcci consente montaggio veloce e facile da controllare di sistemi complessi multi-componente della membrana.

Privo di detersivo ultraveloce ricostituzione delle proteine di membrana in lipidici utilizzando fusogena proteoliposomi complementari a carico.

Qui, presentiamo un protocollo per isolare le proteine che legano fucoxantina clorofilla a/c (FCP) da diatomee e incorporarli nei liposomi con composizioni lipidiche naturali per studiare il trasferimento di energia di eccitazione su cambiamenti della composizione dello ione.

Isolando e incorporando luce-raccolta di antenne da diatomea Cyclotella Meneghiniana in liposomi con i lipidi Thylakoid

All'interfaccia di solventi organici e acquosi, proteine arofhiliche elastine su misura si assemblano in complesse strutture supramolecolari come vescicoli, fibre e coacervate innescate da parametri ambientali. I protocolli di assemblaggio descritti producono compartimenti basati su membrana proteica (PMBC) con proprietà regolabili, consentendo l'incapsulamento di vari carichi.

Diretto Assemblea di proteine Elastin-like in strutture supramolecolari definite e Incapsulamento di carico In Vitro

Reportiamo un protocollo per la produzione di una membrana lipidica ibrida all'interfaccia acqua/aria doping il bistrato lipidico con molecole di rame (II) 2,9,16,23-tetra-tert-butil-29H,31H-ftatocianina (CuPc). La membrana lipidica ibrida risultante ha una struttura sandwich lipidica/ CuPc / lipidica. Questo protocollo può anche essere applicato alla formazione di altri nanomateriali funzionali.

Auto-assemblaggio di membrane lipidiche ibride drogate con molecole organiche idrofobiche presso l'interfaccia acqua/aria

Gli oli utilizzati per le applicazioni di somministrazione di farmaci possono alterare il profilo lipidico dei pazienti, il che è indesiderabile nelle malattie cardiovascolari. Gli oli ricchi di acidi grassi Omega-3 sono un'alternativa salutare agli oli convenzionali e hanno un enorme potenziale per i sistemi di somministrazione di farmaci autoemulsionati.

Auto-nanoemulsificazione di oli sani per migliorare la solubilità dei farmaci lipofili

Il presente protocollo descrive l'assemblaggio di liposomi assistiti da ottanolo (OLA), una tecnica microfluidica per generare liposomi biocompatibili. OLA produce liposomi monodispersi di dimensioni micron con un incapsulamento efficiente, consentendo una sperimentazione immediata su chip. Si prevede che questo protocollo sia particolarmente adatto per la biologia sintetica e la ricerca sulle cellule sintetiche.

Assemblaggio di liposomi assistiti da ottanolo su chip per la bioingegneria

Questo protocollo descrive il sistema di sintesi proteica senza cellule (CFPS) utilizzato nella costruzione di cellule sintetiche. Delinea le fasi chiave con risultati rappresentativi in diversi micro-compartimenti. Il protocollo mira a stabilire le migliori pratiche per i diversi laboratori della comunità delle cellule sintetiche, facendo avanzare i progressi nello sviluppo delle cellule sintetiche.

Sistema di sintesi proteica cell-free per la costruzione di cellule sintetiche

Scopri come assemblare clorofille con proteine ricombinanti solubili in acqua utilizzando emulsioni acqua-in-olio. Questo metodo semplice e ad alto rendimento consente studi dettagliati delle interazioni clorofilla-proteina senza necessità di marcatura.

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