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DOI: 10.3791/53410-v
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Questo manoscritto descrive un metodo semplice e ad alta produttività per assemblare proteine solubili in acqua con pigmenti idrofobiche che è basato su emulsioni acqua-in-olio. Dimostriamo l'efficacia del metodo per l'assemblaggio di clorofille nativi con quattro varianti di ricombinante solubile in acqua-clorofilla proteine leganti (WSCPs) di piante Brassica espressi in E. coli.
L'obiettivo generale di questa tecnica è quello di consentire l'incorporazione di clorofille insolubili in acqua nei siti di legame delle proteine idrosolubili. Questo metodo consente l'assemblaggio di clorofille con proteine ricombinanti, il che consente studi rigorosi sulle interazioni clorofilla-proteina e apre nuove possibilità per la costruzione di nuovi complessi clorofilla-proteina. Il vantaggio principale di questa tecnica è che non richiede l'etichettatura o l'immobilizzazione delle proteine.
Pertanto, è adatto per i saggi di screening. A dimostrare la procedura sarà Dominica Bednarczyk, post-doc nel mio gruppo di ricerca. Durante la preparazione delle seguenti soluzioni stock, eseguire tutte le fasi di preparazione della clorofilla sotto una cappa chimica, sotto la luce verde o al buio per ridurre al minimo i danni fotografici.
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