Un metodo semplice per Automated fase solida estrazione di campioni di acqua per l'analisi immunologiche di piccole inquinanti

L'obiettivo generale di questo metodo di preparazione del campione è quello di preconcentrare in modo semplice, economico e automatizzato inquinanti organici di piccole dimensioni da campioni d'acqua. Questo metodo può sostituire i processi standard di SPE nello studio della contaminazione di campioni d'ac游戏副本

Inoltre, le prestazioni del processo di arricchimento soddisfano i requisiti per l'analisi degli immunodosaggi sia in termini di basso contenuto di solvente che di efficienza di preconcentrazione. Per prima cosa, filtrare 100 millimetri di campione d'acqua utilizzando un filtro con dimensione dei pori di zero virgola due micrometri. Collocare il campione filtrato in un flacone di vetro con filettatura GL 45.

Preparare 300 microlitri di eluente diluendo metanolo in acqua deionizzata al 50 percento in volume in un tubo stretto. Successivamente, preparare una sospensione di 20 milligrammi per millilitro di particelle di silice ottadeciliche aggiungendo 1.600 microlitri di metanolo seguiti da 400 microlitri di acqua deionizzata a 40 milligrammi di sorbente in fase inversa in un vial di vetro. Chiudere bene il coperchio e agitare con un miscelatore vortex.

Posizionare una membrana di nylon con dimensione dei pori di 11 micrometri su un doppio strato di tessuto antipolvere. Tagliare due piccole parti nella membrana utilizzando un perforatore da tre millimetri di diametro. Successivamente, prendere una delle piccole membrane con pinze per filtri a estremità piatta e posizionarla su un lato della colonna.

Successivamente, avvitare il connettore con fondo piatto al tubo e serrare. Quindi, disegnare una freccia sul corpo della colonna, puntando verso l'estremità in cui è stata posizionata la membrana. A questo punto, fissare la colonna sul supporto con la freccia rivolta verso il basso.

Collegare una siringa monouso da 10 millilitri vuota all'estremità del tubo della colonna utilizzando i connettori di blocco inferiori. Agitare la sospensione del sorbente con il miscelatore vortex e pipettare rapidamente 100 microlitri al centro della colonna. Durante l'iniezione, aspirare delicatamente la soluzione pipettata attraverso la membrana utilizzando la siringa con l'altra mano.

La preparazione della colonna di estrazione in fase solida (SPE) è molto importante. È necessario assicurarsi di aspirare correttamente la soluzione attraverso la membrana utilizzando la siringa mentre si inietta la sospensione di particelle nella colonna. In caso contrario, le particelle non si impaccheranno in modo denso.

Ripetere il processo precedente altre due volte, agitando la sospensione madre tra tutti i passaggi di pipettaggio, per garantire una sospensione omogenea delle particelle nella soluzione. Dopo che l'intera sospensione è stata caricata ed essiccata aspirando con una siringa, mantenere la siringa in posizione e posizionare il secondo filtro in nylon sopra utilizzando la pinzetta con l'altra mano. Successivamente, avvitare il secondo connettore con un tubo e smaltire la siringa.

A questo punto, stringere la colonna sul dispositivo SPE utilizzando i connettori di bloccaggio inferiori. Collegare la bottiglia contenente il campione al dispositivo avvitando il tappo di sicurezza GL 45 fornito. Caricare 200 microlitri di eluente nel serbatoio dell'eluente.

Successivamente, caricare 800 microlitri di acqua deionizzata nel serbatoio di diluizione. Verificare che il regolatore di pressione sia in posizione chiusa ruotandolo in senso antiorario fino a quando non è più possibile proseguire. Dopo aver acceso il prototipo, inserire i valori 580 per pset e 30 per delta pset.

Per regolare il regolatore di pressione, avviare la pompa. Quindi, ruotare manualmente il regolatore di pressione finché il valore letto per preg è inferiore ma vicino a 320 millibar. Dopo aver fermato la pompa, avviare la procedura SPE premendo start nell'angolo della modalità automatica.

Una volta completata la procedura di SPE, chiudere il piccolo flacone del campione e conservarlo a quattro-cinque gradi Celsius al buio fino all'analisi mediante ELISA. Per pulire il sistema, preparare una soluzione di 10 millilitri al 70 percento di metanolo in volume in un flacone di vetro con filetto GL 45. Scollegare la colonna di SPE e tappare i tubi con i connettori.

In modalità automatica, selezionare il file di pulizia e avviarlo con le stesse impostazioni di pressione utilizzate in precedenza per pset, delta pset e preg. La riproducibilità del confezionamento del sorbente è stata valutata mediante essiccazione e pesatura del sorbente dispensato in vial di vetro. La riproducibilità del tempo di iniezione è stata verificata su campioni da 100 millilitri.

Le concentrazioni dei campioni iniziali e pre-concentrati arricchiti sono state determinate utilizzando un kit ELISA commerciale per il 17 beta-estradiolo. Dalle curve di calibrazione risulta evidente che il rapporto di metanolo presente nel campione arricchito non influenza la sensibilità del saggio immunoenzimatico. Le rese, pari a 128 ± 22 percento e 107 ± 6 percento, sono state calcolate rispettivamente per acqua deionizzata e acqua di mare artificiale.

Una volta padroneggiata, la preparazione di una colonna per SPE può essere eseguita in meno di cinque minuti, se effettuata correttamente. L'intera procedura di SPE può essere completata in meno di un'ora. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo delle scienze ambientali per esplorare lo sviluppo di metodi di immunorilevamento per il monitoraggio di piccoli inquinanti organici.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare campioni d'acqua utilizzando il nostro strumento automatizzato ed economico per l'analisi di inquinanti mediante saggi immunoenzimatici. Non dimenticare che lavorare con inquinanti organici e solventi può essere pericoloso, e precauzioni come indossare guanti adeguati e occhiali di protezione devono essere sempre adottate durante l'esecuzione di questa procedura.