Name: Tenda Colonna flusso: ottimizzazione dellefficienza e della sensibilità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Impara a ottimizzare le colonne curtain flow per migliorare efficienza e sensibilità nelle analisi HPLC. Questo metodo avanzato è ideale per scienze ambientali, forensi e analisi di tracce.

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Uno degli autori (DK) riconosce di aver ricevuto un Australian Postgraduate Award.

Attenzione: Si prega di fare riferimento alle schede di sicurezza dei materiali (MSDS) per tutti i materiali e reagenti prima dell&#39;uso (ad esempio, scheda di sicurezza per il metanolo). Garantire l&#39;uso di tutte le pratiche di sicurezza appropriate durante la manipolazione di solventi e ad alte prestazioni cromatografia liquida eluente (HPLC). Garantire un uso appropriato di controlli tecnici di HPLC, analitica equilibrio e rilevatore di strumentazione, e garantire l&#39;uso di dispositivi di protezione individuale (occhiali, guanti, camice, pantaloni a figura intera, e scarpe chiuse). Nota: Questo protocollo contiene le istruzioni su come utilizzare una colonna CF su un sistema HPLC accoppiato con un rivelatore UV-Vis. Il protocollo è stato scritto assumendo che il lettore abbia una conoscenza di base ed esperienza in cromatografia. 1. Configurazione dello strumento HPLC Nota: Questa sezione può essere modificato in base alle esigenze degli analisti, vale a dire, la scelta dei solventi, rilevatore di lunghezza d&#39;onda e velocità di flusso cheappropriate per il campione di interesse. <ol><li> Preparazione dello strumento HPLC con acqua ultrapura 100% (esempio acqua Milli-Q) per la linea A e 100% di metanolo per la linea B come fase mobile e spurgare le pompe secondo il requisito produttore. </li><li> Impostare il rivelatore UV-Vis a 254 nm. </li><li> Scegliere una modalità split flusso pre-iniezione di set-up, o una doppia portata della pompa di set-up. Per la modalità split-flow passare al punto 2, per la modalità dual pompa passare alla Fase 3. </li></ol> 2. Installazione del sistema Split-flow <ol><li> Scollegare la linea della pompa dalla valvola dell&#39;iniettore della auto-campionatore. </li><li> Collegare un raccordo a T alla linea pompa. </li><li> Fissare un pezzo a 15 cm da 0,13 millimetri tubi id a ogni porta della T-pezzo. </li><li> Collegate un tubo dal raccordo a T per iniettore valvola di auto-campionatore. </li><li> Impostare la pompa 1,0 ml min -1. </li><li> Prima di collegare le linee pompa all&#39;ingresso della colonna CF, ottimizzare il rapporto della segmentazione del flusso al 40%: 6<html> 0% (linea centrale: linea periferica) come segue al punto 2.7. </li><li> Messa a punto del rapporto di entrata CF sul sistema split-flow <ol><li> Misurare la massa dei due recipienti di raccolta vuoti utilizzando una bilancia analitica ed etichettare un recipiente di raccolta centrale e l&#39;altra periferica (una per la linea dal autocampionatore per centrare porta e uno per la linea dal T-pezzo porta periferica) . </li><li> Per 1,0 min, raccogliere la fase mobile esce dalla linea proveniente dall&#39;iniettore (al punto che verrà collegato alla colonna) nel recipiente di raccolta, la cui massa è stata misurata in 2.7.1. </li><li> Pesare nuovamente il serbatoio di raccolta sulla bilancia analitica e determinare la massa di fase mobile raccolti. </li><li> Ripetere i passaggi 2.7.2 al 2.7.3 per l&#39;eluente uscita dalla linea dalla T-pezzo che deve essere collegato alla porta periferiche. </li><li> Determinare la percentuale di flusso (ml min -1) da ciascuna linea di flusso secondo le seguenti equazioni: 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> Regolare il rapporto di flusso al 40%: 60% (± 2%) (la linea da iniettore a porta centrale: la linea di T-pezzo porta periferica). Se la linea dall&#39;iniettore alla percentuale flusso porto centrale è superiore al 40%, aumenta la caduta di pressione diminuendo il diametro interno del tubo, o aumentando la sua lunghezza. Se la linea dall&#39;iniettore alla percentuale flusso porta centrale è inferiore al 40%, aumentare il diametro interno del tubo o diminuire la lunghezza del tubo. </li><li> Una volta che i rapporti di flusso sono sintonizzati girare la pompa a flusso fuori. </li><li> Collegare la linea dall&#39;iniettore alla porta centrale del ingresso della colonna e la linea dal pezzo a T alla porta periferica del ingresso della colonna. </li><li> Lentamente rampa la portata di 1,0 ml min -1 a 100% linea B. </li><li> Equilibrare la colonna (4,6 mm Lunghezza id x 100 mm), consentendo100% di metanolo (linea B) fase mobile di fluire attraverso la colonna a 1,0 ml min -1 per 10 min. Questo tempo è scalato in base alle dimensioni delle altre colonne l&#39;utente può impiegare. </li><li> Per la messa a punto della presa CF passare al punto 4. &#39;Ottimizzazione del flusso in uscita CF&#39;. </li></ol></li></ol> Setup 3. Sistema Dual Pump <ol><li> Collegare la pompa del sistema HPLC all&#39;iniettore e quindi collegare la linea dall&#39;iniettore alla porta di entrata centrale della colonna. </li><li> Collegare la pompa aggiuntiva direttamente alla porta periferica all&#39;ingresso della colonna. Si noti che questa seconda pompa by-passa l&#39;iniettore. </li><li> Rampa la portata della pompa dell&#39;impianto collegato alla porta centrale per 0,4 ml min -1 (rappresentante il 40% della portata totale di 1,0 ml min -1) al 100% di metanolo (linea B). </li><li> Allo stesso tempo, come Fase 3.3, rampa la portata della pompa periferica 0,6 ml min -1 (rappresentante il 60% della portata totale1,0 ml min -1) al 100% di metanolo (linea B). </li><li> Equilibrare la colonna (4.6 mm Lunghezza id x 100 mm), consentendo 100% metanolo (linea B) fase mobile a fluire attraverso la colonna a 1,0 ml min -1 per 10 min. Questo tempo è scalato in base alle dimensioni delle altre colonne l&#39;utente può impiegare. </li><li> Per la messa a punto della presa CF passare al punto 4. &#39;Ottimizzazione del flusso in uscita CF&#39;. </li></ol> 4. Ottimizzazione di CF Mandata <ol><li> Collegare la porta di uscita centrale per il rivelatore UV-Vis con un pezzo a 15 cm da 0,13 millimetri tubi id. </li><li> Collegare un pezzo 15 cm da 0,13 millimetri tubo id alla porta di uscita periferica della colonna CF. </li><li> Pesare la massa di due navi insieme vuoto sulla bilancia analitica ed etichettare una nave centrale e l&#39;altra periferica. </li><li> Per 1,0 min, raccogliere la fase mobile in uscita dal rivelatore (flusso centrale) UV-Vis nell&#39;etichetta recipiente di raccolta centrale, la cui massa è stata misurata in 4.2. </li><li> Pesare nuovamente il serbatoio di raccolta contenente l&#39;eluente raccolta sulla bilancia analitica e determinare la massa di fase mobile raccolti. </li><li> Ripetere i punti 4.4 a 4.5 per l&#39;eluente uscita dalla linea dalla porta di uscita periferica. </li><li> Determinare la percentuale di flusso da ciascuna linea di flusso secondo le seguenti equazioni: <img alt="Equazione 2" src="/files/ftp_upload/53471/53471eq2.jpg" /></li><li> Regolare il rapporto portata al 21%: 79% (± 2%) (flusso di uscita centrale da UV-Vis: flusso di uscita periferica dalla linea). Se la percentuale di flusso centrale dal UV-Vis è superiore a 21%, aumenta la caduta di pressione diminuendo il diametro interno del tubo collegato al l&#39;uscita del rivelatore UV-Vis, o aumentando la sua lunghezza. Se la percentuale di flusso centrale dal UV-Vis è inferiore a 21%, aumentare il diametro interno del tubo collegato al l&#39;uscita del rivelatore UV-Vis, o diminuire la lunghezza del tubo. Ogni volta che la lunghezza del tubo è stata modificata, ripeterepassi 4,3-4,7. Nota: La colonna CF in modalità id &#39;virtuale&#39; 2,1 millimetri è pronto per l&#39;analisi. </li></ol>

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</ol>

Questo lavoro è stato supportato da UWS e ThermoFisher Scientific.

Questo studio ha coinvolto l&#39;analisi interlaboratorio di CF colonne cromatografiche per verificare la prestazione analitica in termini di efficienza e sensibilità. La colonna CF è stato istituito con un doppio sistema di pompaggio, come descritto nella sezione &#39;3. due pompe impostato &#39;per ottenere un rapporto di flusso di 40:60 (centro: periferica) in ingresso della colonna CF. Il 40:60 (centro: periferica) Rapporto flusso è stato ottenuto impostando la portata di ogni pompa al valore che rappresenta il 40% ...

Negli ultimi anni la tecnologia colonna per cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è progredita notevolmente; capacità di picco sono aumentate considerevolmente soprattutto grazie all&#39;impiego di dimensioni delle particelle più piccole e le particelle core shell più efficienti. Poiché separazioni sono generalmente più efficienti, un flusso-on effetto è stato un aumento della sensibilità poiché picchi sono ora nitide e quindi più alto 1-8. Tuttavia, bed radiale eterogeneità è ancora un fattore limitante nella esecuzione di tutte le colonne, ma questa non è una nuova storia dal cromatografi sanno da molti anni. Letti colonna sono eterogenei sia nella direzione radiale 9-12, e lungo la colonna sull&#39;asse 10,12-15. Il muro-effetto in particolare è un importante contributo alla perdita di prestazioni 7,16-18 separazione. Shalliker e Ritchie 7 Recensioni recenti su aspetti di base della colonna eterogeneità e quindi questo non devono essere discussed qui ulteriormente. Anche se Basti dire, che la variazione nella colonna densità di imballaggio letto e gli effetti di parete portano ad una distorsione della spina soluto, in modo tale che le bande eluiscano attraverso la colonna di spine che somigliano parzialmente riempito zuppa di bocce invece di sottili dischi pieni piatto 7 che sono di solito raffigurato nei testi di insegnamento di base. Quando gli esperimenti sono stati effettuati in modo tale che la migrazione soluto attraverso il letto potrebbe essere visualizzato i profili dei plug all&#39;interno della colonna erano in parte cava e la sezione tailing della band è in gran parte la componente parete della spina campione. Il risultato finale è che ci vogliono molti più piatti di separare questi tappi &#39;parzialmente vuoti&#39; di quanto sarebbe richiesto se i dischi erano solide e piatte 12,14,17. Per superare la band ampliando le questioni connesse con effetti a muro e la variazione di densità di imballaggio radiale, una nuova forma di tecnologia colonna nota come tecnologia di flusso attivo (AFT) è stato progettato 7,19. Lo scopo di questo progetto eraper eliminare effetti di parete attraverso la separazione fisica di eluizione del solvente lungo la regione di parete, da quella della fase mobile eluendo nella regione centrale radiale della colonna 19. Ci sono due tipi principali di colonne AFT; Parallel segmentato flusso (FPF) colonne e cortina di flusso (CF) colonne 7. Dal momento che questo protocollo è volto a l&#39;uso e l&#39;ottimizzazione delle colonne CF, colonne PSF non saranno ulteriormente discussi. Tenda di flusso (CF) Tenda flusso (CF) formati di colonna utilizzano finali raccordi AFT sia a ingresso e l&#39;uscita della colonna. AFT finali raccordi sono costituiti da un fritta anulare situato all&#39;interno di un raccordo multiporta. La fritta è composto da tre parti: una porzione centrale radiale porosa che è allineato con la porta centrale della fine raccordo, una porzione esterna porosa che è allineata con la porta periferica (s) del raccordo terminale, e un anello impermeabile che separa le due porzioni porose impedendo qualsiasi croceFUORI-USCITA tra le regioni centrali radiali ed esterne della fritta 19. La Figura 1 illustra il disegno della fritta AFT e la figura 2 illustra il formato di colonna CF. In questa modalità di funzionamento (CF) il campione viene iniettato nel porto centrale radiale del raccordo di ingresso, mentre la fase mobile aggiuntiva viene introdotto attraverso la porta periferica di entrata al &#39;tenda&#39; la migrazione dei soluti attraverso la regione centrale radiale colonna. Quindi il campione entra nel letto nella regione centrale radiale della colonna con la regione esterna della colonna con fase mobile fecero che attraversarla. Studi hanno dimostrato che un rapporto volumetrico portata di circa 40:60 (centrale: porta periferica) di entrata fine-montaggio di una colonna 4,6 millimetri di diametro interno (ID) è 6,7,16 ottimale. L&#39;uscita AFT della colonna CF permette la regolazione del flusso centrale e periferica al loro porzione relativa e può essere variata a quasi qualsiasi rati desideratoo attraverso la gestione della pressione. L&#39;ottimizzazione di una colonna CF può migliorare significativamente diversi aspetti funzionali della tecnologia delle colonne, come l&#39;efficienza di separazione o la sensibilità di rilevazione. In questo modo si stabilisce un &#39;muro-less&#39;, &#39;infinita di diametro&#39; o colonna &#39;virtuale&#39; 6,10,18,20. Lo scopo di colonne CF è quello di gestire attivamente la migrazione del campione attraverso la colonna per evitare che il campione di raggiungere la regione di parete. Pertanto, la concentrazione del soluto all&#39;uscita al rivelatore è ingrandita, aumentando la sensibilità di circa 2,5 volte maggiore rispetto al formato colonna convenzionale utilizzando ultravioletta (UV) di rilevamento 16, e ancora maggiore quando si utilizza la massa di rilevamento 6 spettrale. colonne CF sono ideali per i campioni a bassa concentrazione, dal momento che la sensibilità di rilevazione è aumentata. Inoltre, sono ideali quando accoppiato alla portata rivelatori limitate, come lo spettrometro di massa (MS) 6. un AColonna FT in un formato id 4,6 millimetri, per esempio può essere sintonizzata per fornire lo stesso volume di solvente ad un rivelatore come colonna formato id norma 2.1 mm se azionati alla stessa velocità lineare, regolando uscendo flusso centrale al 21%. Allo stesso modo la colonna AFT potrebbe anche essere sintonizzato per fornire lo stesso carico di volume ad un rivelatore come colonna id 3,0 mm, con regolando uscendo flusso centrale 43%. In realtà qualsiasi formato colonna &#39;virtuale&#39; potrebbe essere prodotta per soddisfare l&#39;esigenza analitica 6,18,22. Utilizzando questi terminali raccordi appositamente progettati in entrata e l&#39;uscita assicura che un vero colonna parete inferiore è stabilito. Ci sono due modi per configurare il sistema di erogazione del solvente alle porte centrali e periferiche di ingresso:. Sistema split-flusso 6 e due 6,7 sistema a pompa di figura 3 illustra ognuno di questi sistemi CF set up. Sistema split-flow iona split system-flow (Figura 3A) la portata della pompa che porta all&#39;iniettore è diviso pre-iniezione utilizzando un morto nullo T-piece volumi, dove un flusso flusso della fase mobile è collegata all&#39;iniettore, che viene poi collegata al porto centrale della bocca di fine-montaggio della colonna. La seconda corrente di flusso della fase mobile by-passa l&#39;iniettore ed è collegato alla porta periferica sul all&#39;ingresso della colonna. Durante il frazionamento del flusso, la percentuale corrente di flusso viene regolato a 40:60 (centro: periferica) prima che le linee sono collegate alla colonna, cioè, da iniettore a centrare e pompa di periferiche. Sistema a due pompe La colonna CF richiede due correnti di flusso alla entrata fine montaggio della colonna. A seconda del tipo di autocampionatore / dell&#39;iniettore dello strumento HPLC, a flusso separato istituire potrebbe non essere possibile, e così CF può quindi essere raggiunto attraverso 2 pompe (Figura 3B 21). Ogni pompa è allocata e collegata sia alla porta centrale o periferico e la portata viene impostato a rappresentare il 40% del flusso per la porta centrale e il 60% per la porta periferica. Ad esempio, se la portata totale è 1,0 ml min -1, la portata della pompa centrale è impostata a 0,4 ml min -1 e la pompa periferico è impostato a 0,6 ml min -1. La scelta di quale modalità di funzionamento dipende in larga misura la strumentazione HPLC e modalità cromatografica di funzionamento. Ad esempio, in alcuni autocampionatore una variazione della pressione tra la posizione di carico del campione e il campione iniettare posizione può verificarsi interrompendo il rapporto di divisione del flusso e quindi in questo caso una doppia pompa istituito sarebbe consigliato per prestazioni ottimali CF. Indipendentemente dal sistema di erogazione del solvente configurazione scelta per l&#39;ingresso della colonna CF, l&#39;ottimizzazione presa CF rimane la stessa. Il porto centrale all&#39;uscita della colonna CF è collegata al rivelatore ultravioletto-visibile (UV-Vis) con il smaltimore di volume possibile di tubo per minimizzare gli effetti di post-colonna volume morto. Poiché, colonne CF emulano colonne diametro ridotto, volume morto tra l&#39;uscita della colonna ed il rivelatore è dannosa per le prestazioni di separazione della colonna CF. È fondamentale per garantire la più piccola quantità di volume del tubo tra il porto centrale e il rivelatore UV-Vis per minimizzare gli effetti di volume morto come banda allargamento, perdita di efficienza e sensibilità. Quindi, è consigliato l&#39;uso di stretta tubo di diametro (0,1 mm di diametro) per consentire facilmente le regolazioni di pressione senza aggiungere volume morto inadeguato. Il tubo è anche collegato alla porta periferiche e diretto da perdere. Dopo l&#39;uscita della colonna CF, il rapporto di segmentazione può essere regolato a qualsiasi rapporto che si adatta allo scopo dell&#39;analista. Quando si utilizza un CF id 4,6 millimetri, per esempio, è spesso conveniente per impostare il rapporto sia come 43:57 o 21:79 (al centro: periferica) per emulare una colonna id &#39;virtuale&#39; 3,0 millimetri o colonna id 2,1 millimetri,rispettosamente. In questo modo le prestazioni di separazione è facilmente panca-marcato. Il rapporto di segmentazione viene misurata pesando la quantità di portata in uscita dal rivelatore collegato alla porta centrale e portata in uscita la porta periferica per un periodo di tempo. Il flusso percentuale attraverso ciascuna porta può quindi essere determinata e il rapporto può essere regolata modificando la lunghezza del tubo collegato o usando tubo che ha un diametro interno diverso (id). i dettagli Questo protocollo video le procedure di funzionamento e l&#39;ottimizzazione di una colonna CF per prestazioni cromatografiche.

<table><tbody><tr>Strumento <td></td><td></td><td></td><td>HPLC</td></tr><tr><td>Pompa</td><td></td><td></td> aggiuntiva <td>Necessaria se si deve configurare un sistema CF a 2 pompe.</td></tr><tr><td>Colonna HPLC a flusso a tendina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Non definito</td><td>Presto commercializzato</td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td><td>Grado HPLC</td></tr><tr><td>Tubo PEEK</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td><td>Varie lunghezze e i.d.</td></tr><tr><td>Tagliatubi in PEEK</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica Qualsiasi</td><td>marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cronometro</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Recipienti di raccolta dell'eluente</td><td>Qualsiasi marca</td><td></td> Le <td>fiale di campionamento da 1-2 ml possono essere utilizzate come recipienti di raccolta dell'eluente</td></tr><tr><td>Raccordo a T</td><td>di qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tenda colonna flusso: ottimizzazione dell&#39;efficienza e della sensibilità

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

La tecnologia a flusso attivo (AFT) è una forma di tecnologia a colonna che aumenta le prestazioni di separazione di una colonna HPLC attraverso l'uso di raccordi terminali multiporta appositamente costruiti. Le colonne Curtain Flow (CF) appartengono alla suite di colonne AFT, in particolare la colonna CF è progettata in modo che il campione venga iniettato nella regione centrale radiale del letto e un flusso a cortina di fase mobile che circonda l'iniezione di soluto impedisce la dispersione radiale del campione sulla parete. La colonna funziona come una colonna di "diametro infinito". Lo scopo del progetto è quello di superare l'eterogeneità radiale del letto della colonna e allo stesso tempo massimizzare il carico del campione nella regione centrale radiale del letto della colonna, il che serve ad aumentare la sensibilità di rivelazione. Il protocollo qui descritto delinea la configurazione del sistema e della colonna CF e il processo di messa a punto per una colonna "virtuale" ottimizzata a diametro infinito.

Colonne AFT sono stati sviluppati usando un disegno fritta specializzata (Figura 1) nella colonna multiporta finali raccordi per superare il letto eterogeneità colonna e migliorare le prestazioni di separazione. Uno studio interlaboratorio sul rendimento di separazione di colonne cromatografiche CF (Figura 2) è stata effettuata con un sistema a doppia pompa costituito (figura 3B), come descritto nella sezione 3 di questo protocollo ...

Qui, presentiamo un protocollo per il funzionamento e l'ottimizzazione della colonna AFT (Active Flow Technology) in modalità Curtain flow (CF) per migliorare le prestazioni di separazione.

Tenda Colonna flusso: ottimizzazione dell&#39;efficienza e della sensibilità

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

L'obiettivo generale di questo metodo è migliorare l'efficienza e la sensibilità di una separazione attraverso l'ottimizzazione di una colonna a flusso di cortina. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande fondamentali nel campo delle scienze ambientali, della criminalistica e in settori che richiedono l'analisi di campioni in tracce, dove è necessaria una tecnica di separazione efficiente e altamente sensibile. Il principale vantaggio di questa tecnica è che aumenta l'efficienza della separazione e la sensibilità dell'analisi rispetto ai metodi convenzionali di separazione HPLC.Questo metodo può fornire un mezzo per aumentare il potere di separazione e quindi la capacità di velocità, in modo economico ed efficiente in termini di tempo. La colonna a flusso a tenda è un concetto nuovo per gli operatori di HPLC, tuttavia il suo utilizzo non è complicato. Richiede semplicemente l'ottimizzazione dei rapporti di flusso appropriati.Per prima cosa, preparare bottiglie di acqua ultrapura al 100 percento e di metanolo al 100 per le fasi mobili A e B dello strumento HPLC. Sottoporre le pompe a spurgo secondo i requisiti del produttore. Dopo lo spurgo, scollegare la linea della pompa dalla valvola dell'iniettore del campionatore automatico.Collegare un raccordo a T al tubo scollegato. A ciascuna porta del raccordo a T, collegare un tubo con diametro interno di 0,13 millimetri e lunghezza di 15 centimetri. Collegare un tubo del raccordo a T alla valvola di iniezione dell'autoiniettore.Infine, impostare la pompa su una portata di un millilitro al minuto. Tarare due contenitori vuoti e etichettarli come centrale e periferico. Per 60 secondi, utilizzare il contenitore etichettato come centrale per raccogliere la fase mobile in uscita dalla linea proveniente dall'injector.Pesare nuovamente il contenitore centrale e determinare la massa della fase mobile raccolta. Ripetere questo procedimento raccogliendo il flusso proveniente dal porto periferico nel contenitore etichettato come periferico. Determinare la percentuale di flusso, o millilitri al minuto, proveniente da ciascuna linea utilizzando le equazioni indicate.La portata centrale dovrebbe essere circa il 40 percento, e quella periferica circa il 60 percento. Se i valori differiscono di più del due percento, modificare la lunghezza o il diametro dei tubi per regolare il rapporto di flusso. Quindi ripetere la raccolta e i passaggi di calcolo.Successivamente, spegnere il flusso della pompa e collegare la linea dell'iniettore al porto centrale dell'ingresso della colonna. Collegare inoltre la linea del pezzo a T al porto periferico dell'ingresso della colonna. Aumentare lentamente la portata fino a un millilitro al minuto di fase mobile B al 100%. Per completare la taratura del sistema, far passare metanolo al 100% a una portata di un millilitro al minuto per 10 minuti per equilibrare la colonna.Per iniziare, utilizzare un tubo per collegare il porto dell'uscita centrale al rivelatore UV-Vis. Collegare lo stesso tipo e lunghezza di tubo al porto dell'uscita periferica della colonna CF. Successivamente, impostare la pompa su una portata di un millilitro al minuto.Aliquota due contenitori vuoti e etichettane nuovamente uno per la raccolta centrale e uno per quella periferica. Per 60 secondi, utilizza il contenitore etichettato come centrale per raccogliere la fase mobile in uscita dal rivelatore UV-Vis. Pesa nuovamente il contenitore di raccolta per determinare la massa della soluzione eluita.Ripetere questo processo con il porto di uscita periferico e il contenitore di raccolta etichettato. Determinare ora la percentuale di flusso proveniente da ciascuna linea, come eseguito in precedenza con il flusso in ingresso. La linea UV-Vis dovrebbe essere del 21 percento, mentre il flusso dell'uscita periferica dovrebbe essere del 79 percento.Se il rapporto di flusso differisce in modo significativo, regolare le dimensioni del tubo collegato all'uscita del rivelatore UV-Vis per modificare la percentuale di flusso centrale. È importante che i rapporti di flusso tra centrale e periferico all'ingresso e all'uscita della colonna seguano questo protocollo per garantire un rendimento ottimale della colonna a flusso di cortina. Le colonne con tecnologia di flusso attivo sono state sviluppate utilizzando un design specializzato di frittelle negli attacchi terminali della colonna multiporta per superare l'eterogeneità del letto della colonna e migliorare le prestazioni di separazione.Una miscela di prova contenente fenetolo, butilbenzene e pentilbenzene è stata analizzata su colonne convenzionali con diametro interno di 4,6 e 2,1 millimetri e su una colonna a flusso di tendina con diametro interno di 4,6 millimetri. La separazione della miscela illustra le prestazioni migliorate in termini di efficienza e sensibilità offerte da una colonna a flusso di tendina rispetto alle colonne standard. L'uso di una colonna a flusso di tendina ha aumentato il segnale per il butilbenzene nonostante il volume ridotto del picco.Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere allestita in meno di mezz'ora se eseguita correttamente. L'allestimento della colonna a flusso a tendina può essere riutilizzato più volte, ma i rapporti di flusso devono essere verificati regolarmente. Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante ricordare di avvicinarsi il più possibile ai rapporti di flusso prescritti.La colonna a flusso di tenda ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della HPLC, permettendo di spingere i limiti delle colonne e degli strumenti UPLC per ottenere analisi del campione più rapide senza compromettere le prestazioni di separazione. Dopo aver visto questo video, dovresti comprendere l'importanza delle colonne a flusso di tenda, in quanto possono offrire una separazione migliore rispetto alle colonne HPLC convenzionali.

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Chimica

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