Milk Collection nella Rat Utilizzando tubi capillari e stima di tenore di materia grassa per Creamatocrit

L'obiettivo generale di questa procedura è descrivere come raccogliere manualmente il latte da un ratto in lattazione per l'analisi di laboratorio della composizione del latte. Questo metodo può essere utilizzato per aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della salute materna e infantile, come ad esempio il modo in cui la dieta materna può influenzare la composizione del latte. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può essere eseguita da un singolo investigatore senza alcuna attrezzatura specializzata per il vuoto o l'aspirazione.

No.To iniziare, separare la madre dalla sua prole per un minimo di cinque minuti prima della mungitura. Quindi, raccogli tutti i materiali necessari per la procedura di mungitura come mostrato qui. Quindi posizionare un banco assorbente su un tavolo chirurgico riscaldato o utilizzare un cuscinetto termico separato per evitare la perdita di calore dalla madre durante la procedura di mungitura.

Successivamente, controllare il sistema anestetico per assicurarsi che il sistema disponga di ossigeno e isofluoro sufficienti prima della procedura. Quindi collegare la maschera che verrà utilizzata per l'induzione iniziale dell'anestesia alla macchina e posizionare la maschera di mantenimento nelle vicinanze. Aprire la bombola di ossigeno e impostare il flusso su un litro al minuto.

Quindi accendere il flusso di fluoro e impostarne il flusso al 5%Una volta anestetizzato, passare la diga alla maschera di mantenimento. Confermare un livello sufficiente di anestesia verificando la mancanza di un riflesso del pedale. Quindi posizionare la diga in posizione supina sul cuscino assorbente della panca.

Ridurre il flusso di fluoro isof dal due al 3%Monitorare continuamente la diga durante la procedura e regolare il flusso di fluoro isof secondo necessità per evitare dolore e depressione respiratoria. Quindi, utilizzare una salvietta imbevuta di alcol sterile o un tampone detergente per disinfettare una fiala di ossitocina utilizzando una siringa da un millilitro dotata di un ago da 25 gauge, aspirare 0,1 millilitri di ossitocina. Quindi inserire l'ago nel quadrante inferiore destro dell'addome della madre con l'ago rivolto verso la testa con un angolo compreso tra 15 e 30 gradi, profondo circa 0,5 centimetri.

Tirare indietro lo stantuffo per garantire una pressione negativa prima dell'iniezione. Se non viene aspirato alcun liquido, iniettare l'ossitocina e gettare immediatamente l'ago e la siringa in un contenitore a rischio biologico. Attendi circa 5-15 minuti affinché l'ossitocina stimoli il latte.

Delusa durante questo periodo, scegli i tet da cui verrà raccolto il latte. Utilizzare i trimmer per rimuovere delicatamente la pelliccia attorno ai tet selezionati poiché la pelliccia può causare difficoltà nella raccolta del campione. Quindi pulire i tet con acqua tiepida.

Preparare almeno due siti, poiché potrebbe essere necessario più di un sito per la raccolta del latte. Una volta che il latte è sceso, schiacciare delicatamente la base del Tet per espellere manualmente il latte. Per la raccolta, raccogliere le goccioline di latte in un tubo capillare da 50 microlitri.

Una volta pieno, erogare il latte dal tubo capillare in una provetta sterile per microcentrifuga toccando l'estremità del tubo che è stata utilizzata per aspirare il latte dal capezzolo al lato della provetta per microcentrifuga. Quindi utilizzare un ago calibro 18 collegato a una siringa da un millilitro per soffiare via il latte che non è stato aspirato nel tubo. Ripetere la raccolta del latte e trasferirlo nella provetta della microcentrifuga fino a quando non è stata raccolta una quantità sufficiente di latte.

Per l'analisi scelta, cercare di limitare il tempo totale in cui la diga è sotto anestesia a meno di un'ora. Al termine della mungitura, chiudere il flusso di fluoro e ossigeno e rimuovere la maschera dalla diga. Continuare a monitorare la diga fino a quando non ha riacquistato sufficiente coscienza per mantenere la posizione sdraiata sternale.

Se non sono necessarie ulteriori analisi, frullare il latte a una temperatura negativa di 80 gradi. Per prepararsi alla misurazione CCR, caricare da 15 a 20 microlitri di latte in una provetta per microematocrito direttamente dal Tet. Quindi sigillare l'estremità del tubo con un sigillante di argilla.

Posizionare la provetta capillare nella rotella per ematocrito con l'ammaccatura di tenuta rivolta verso l'esterno e assicurarsi che la centrifuga sia bilanciata. Quindi centrifugare il campione a 13, 700 volte G per due minuti. Una volta terminata la centrifuga del campione, rimuovere la provetta dalla centrifuga.

Osservare la separazione del campione in uno strato di crema e uno strato trasparente. Misurare e registrare la lunghezza totale del fluido nel tubo e la lunghezza dello strato di grasso o crema utilizzando un righello o un calibro. Utilizzare queste informazioni per calcolare il CCR come descritto nel protocollo di testo allegato al fine di determinare in che modo la dieta durante la gravidanza e l'allattamento influisce sulla composizione del latte.

I campioni di latte sono stati raccolti allo svezzamento da madri di Worcester che vengono alimentate con una dieta ad alto contenuto proteico, ad alto contenuto di fibre prebiotiche o controllata. Il latte raccolto dalle madri con la dieta ad alto contenuto di fibre prebiotiche aveva l'ematocrito C numericamente più alto, una cattiva concentrazione e un valore energetico. Tuttavia, queste differenze non erano statisticamente significative quando si tratta di proteine.

Tuttavia, il latte raccolto dalle madri con la dieta ad alto contenuto proteico aveva la più alta concentrazione proteica. Anche se, ancora una volta, questa differenza non era statisticamente significativa. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in meno di un'ora dal punto iniziale di anestesia della diga se eseguita correttamente.

Quando si tenta questa procedura, è importante ricordarsi di monitorare continuamente la diga per assicurarsi che non si verifichi depressione della respirazione durante l'anestesia dopo questa procedura. Altri metodi come la spettrometria di massa possono essere utilizzati per rispondere a domande aggiuntive come la determinazione della composizione oligosaccaridica del latte. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire la raccolta manuale del latte da un ratto in allattamento.