Name: Fecale Analisi glucocorticoidi: non invasivo di monitoraggio surrenale in equidi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Impara a valutare l'attività surrenale negli equidi tramite analisi non invasiva dei metaboliti fecali dei glucocorticoidi. Questo metodo consente di monitorare lo stress cronico in cavalli domestici e zebre selvatiche.

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Il finanziamento per la produzione di questo manoscritto è stato fornito dalla Nottingham Trent University. Gli autori desiderano ringraziare la responsabile del cortile dell'Università, Anna Gregory, per l'uso dei suoi cavalli e la fornitura di campioni fecali da utilizzare nel protocollo. Grazie anche al Chester Zoo Wildlife Endocrinology Laboratory per l'utilizzo delle loro strutture.

Etica dichiarazione: procedure che coinvolgono soggetti campo di campionamento e di animali sono stati approvati dalla Scuola di animali, rurale e Scienze Ambientali (ARES) alla Nottingham Trent University. 1. Raccolta di campioni di feci NOTA: I guanti devono essere indossati durante la manipolazione dei campioni fecali e metanolo. Se c&#39;è un forte sospetto che un animale possa essere affetto da una zoonosi, indumenti protettivi, come un camice da laboratorio dovrebbe essere indossati. <ol><li> Raccogliere i campioni fecali appena possibile (entro min a qualche ora) dopo la defecazione e metterli in un sacchetto di campionamento. Prendere tre a cinque sotto-campioni di qualsiasi campione defecato con un peso totale di circa 10 g. Etichettare il sacchetto con l&#39;ora e la data di raccolta, ID individuale, e congelare il campione a -20 ° C fino al momento dell&#39;analisi. </li><li> Per ridurre al minimo errore, congelare tutti i campioni a -20 ° C fino a quando lo studio è completo quindi di raccogliere i campioni insieme per l&#39;analisi in un unico lotto. &lt;/ Li&gt; </ol> 2. fecale Hormone Estrazione <ol><li> Lasciare i campioni di feci per scongelare a temperatura ambiente. </li><li> Assicurarsi che i campioni sono omogeneizzati miscelando manualmente ogni campione nel proprio sacchetto di campionamento. </li><li> Per ogni campione pesa 0.50 (± 0,003 g) di materiale fecale su una microbilancia in una barca pesare poi trasferire le feci in una fiala di vetro 8 ml. Utilizzare una nuova barca pesare per ogni campione e pulire le pinzette con il 30% di metanolo tra ogni campione. </li><li> Unire la 0,5 g di materiale fecale con 5 ml di metanolo al 90%: acqua e agitare O / N in un agitatore orbitale a RT. </li><li> La mattina seguente, Vortex il campione e quindi si centrifuga per 20 minuti a 600 g. </li><li> Decantare la frazione di metanolo in un tubo di vetro 16 x 125 mm 2 e posto in un rack in un bagnomaria regolato ad una temperatura di 37 ° C. Portare a secco con aria sotto cappa. Sciacquare la fiala di estrazione e posizionare il pellet fecale rimanente in un sacchetto di rifiuti clinici per lo smaltimento. </li><li> Risospendere gli estratti fecali in 100%, 1 ml di metanolo e trasferire in una provetta di polipropilene da 12 x 75 mm 2. Immediatamente tappo e conservare a -20 ° C fino al momento dell&#39;analisi. </li></ol> 3. Analisi Hormone <ol><li> Effettuare l&#39;analisi con un collegato-immuno-enzimatico (EIA) utilizzando antisiero policlonale corticosterone CJM006. NOTA:. Un secondo EIA è stato testato (cortisolo R4866 antisiero, ma questo non è riuscito a raggiungere la fase di validazione biochimica (vedere paragrafo 4.1) L&#39;antisiero policlonale corticosterone CJM006 e cortisolo R4866 antisiero e la rispettiva HRP del sono forniti da CJ Munro, University of California, Davis, CA. </li><li> Diluire l&#39;antisiero a 1: 15.000 in tampone di rivestimento (0,05 M NaHCO3, pH 9.6) con una pipetta ripetitiva e un puntale 50 microlitri, caricare una micropiastra a 96 pozzetti con 50 microlitri / bene. Coprire la piastra con un sigillante ed incubare O / N a 4 ° C. Lascia due pozzi non rivestiti per rappresentare i pozzi legame non specifico (NSB). </li><li> Immediatamente prima dell&#39;uso lavare i piatti microtitolazione cinque volte utilizzando un lavatore micropiastra automatizzato (soluzione di lavaggio; 0,15 M di NaCl, 0,05% di Tween 20). </li><li> Caricare le piastre con 50 microlitri per bene per la NSB di e pozzi [tampone EIA (0,1 M NaPO 4, 0,149 M di NaCl, 0,1% di albumina sierica bovina, pH 7,0) soltanto] &#39;zero&#39;, standard (corticosterone, 3.9 - 1000 pg / bene) o campioni fecali estratto (opportunamente diluiti a 1:20 tampone EIA, vedere paragrafo 4.1). Norme e zeri devono essere eseguiti in triplice copia e quadruplice, rispettivamente. Diluito campioni estratto fecale e NSB di dovrebbero essere eseguiti in duplicato. </li><li> Seguire questa immediatamente con l&#39;aggiunta di 50 ml / pozzetto dell&#39;etichetta perossidasi coniugato ᵻ diluito in tampone EIA a 1: 70.000. </li><li> Incubare le piastre microtitolazione al buio per 2 ore a temperatura ambiente. </li><li> Lavare le piastre microtitolazione con soluzione di lavaggio 5 volte e incubare le piastre a RT al buio con 100 l / well di RT substrato [0,4 mM 2,2&#39;-Azino-di- (3-ethylbenzthiazoline solfonico) sale diammonico, 1.6 mM H 2 O 2, 0,05 M citrato, pH 4,0]. Preparare il substrato immediatamente prima dell&#39;uso. </li><li> Utilizzare un Spettrofotometro alla lunghezza d&#39;onda di 405 nm per leggere le piastre di microtitolazione. L&#39;incubazione delle piastre è considerata completa quando la densità ottica dei pozzetti di zero raggiunge da 0,8 o 1,0. </li><li> Per assicurare la ripetibilità, utilizzare i controlli [standard EIA o un campione biologico diluiti in tampone EIA di consolidare a circa il 30% (standard EIA), il 50% (un campione per esempio biologica, pool di cavallo domestico estratto fecale) e il 70% (standard EIA) ] a dimostrare un intra e inter-assay coefficienti di variazione di &lt;10% e &lt;15%, rispettivamente. </li></ol> 4. Enzyme Linked-immunologico: convalida per la specie di studio e sesso <ol><li> Biochimica Validation (parallelismo) <ol><li> Utilizzando tampone EIA, eseguire una diluizione seriale del pool fecale in piùct, idealmente preso da presunti campioni di alta e bassa concentrazione di ormoni da diversi individui (range: pulito, 1: 2 a 1: 8192) ed eseguire sulla VIA, come descritto nella sezione 3. NOTA: Un parallelismo si considera raggiunto quando le diluizioni seriali di estratti fecali producono una curva spostamento parallelo ai risultati della curva e di regressione lineare standard di dimostrare R2&gt; 0,90, una pendenza&gt; 0,50 e p &lt;0.05. L&#39;estratto fecale diluito seriale che lega circa il 50% sulla curva standard dovrebbe essere considerata la diluizione ideale per eseguire tutti gli estratti fecali (ad esempio, 1:20). Non vi è alcuna interferenza considerato sul test quando i risultati di regressione lineare dimostrano R2&gt; 0,90 e p &lt;0.05. </li></ol></li><li> Biochimica Validation (Interference) <ol><li> Spike 200 ml di standard diluite in serie (zero, 3.9 a 1000 ng / pozzetto corticosterone) con 200 ml di estratto fecale opportunamente diluito in pool [diluito al 50% legame determinati da Parallelism (1:20)] ed eseguire sulla VIA, come al punto 3. A seguito di trama analisi EIA la concentrazione osservata meno il fondo (concentrazione del campione zero) rispetto alla concentrazione prevista. NOTA: se l&#39;aggiunta di estratto fecale pool diluito per gli standard non altera in modo significativo la quantità prevista e lineari risultati della regressione produce R 2&gt; 0,90, un pendio vicino al 1.0 e p &lt;0.05. Nessuna interferenza con l&#39;EIA è stato raggiunto. </li></ol></li><li> Validazione biologica: NOTA: Una dimostrazione che la VIA scelta ha la capacità di misurare le variazioni biologicamente rilevanti di ormone di interesse [ad esempio, l&#39;aumento delle concentrazioni di glucocorticoidi a seguito di un farmacologica (ACTH è spesso una procedura di licenza) o una sfida biologica (ad esempio, psicologica e / o ambientale; più probabile che sia un evento non regolamentata opportunistica)]. <ol><li> Selezionare, estrarre e analizzare i campioni di feci per le concentrazioni del metabolita glucocorticoidiutilizzando il processo descritto nelle sezioni 1 - 3 prima e dopo un evento impegnativo. NOTA: Un evento impegnativo sarà determinate specie. Un metodo esempio è riportato qui sotto cavallo domestico. Esempi di eventi impegnativi per i cavalli sono stati pubblicati in precedenza compreso l&#39;uso di gestione 9 e allevamento procedure 16. Un aumento significativo della concentrazione di metaboliti glucocorticoidi dopo l&#39;evento impegnativo deve essere osservato e confermato con l&#39;analisi statistica. Questo deve incorporare, se del caso, l&#39;effetto delle misure ripetute, data campione e singoli. validazione biologica è quindi considerato raggiunto. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Analisi corticosterone fecale fornisce un mezzo per valutare i modelli a lungo termine di attività surrenalica nei cavalli. La natura non invasiva del metodo supera gli effetti confondenti di altri metodi di campionamento utilizzati per valutare l&#39;attività del surrene tra cui saliva e nel plasma analisi 9. Inoltre la tecnica ha un vantaggio non invasivo chiaro se lo studio cavalli liberi che vanno. Ci sono diversi punti chiave da discutere riguardo a questo metodo e il suo uso...

Gli obiettivi metodo descritto per analizzare le concentrazioni di corticosterone nelle feci equine per fornire una valutazione non invasiva dell&#39;attività surrenale. Misurazione dell&#39;attività (HPA) dell&#39;asse ipotalamo-ipofisi-surrene è un approccio accettato di studiare la risposta a situazioni potenzialmente avversi in entrambe le specie in cattività e nazionali. La tecnica di riferimento e il metodo più diffuso è l&#39;uso di plasma sanguigno 1 Tuttavia, metodi alternativi come l&#39;analisi fecale sono state sviluppate per superare lo stress indotto mediante campionamento sangue stesso e permettere la possibilità di monitorare le specie che vanno. Durante una situazione di avversione, l&#39;omeostasi fisiologica è interrotta. L&#39;ipotalamo nel cervello rilascia ormone di rilascio della corticotropina (CRH), che agisce sulla ghiandola pituitaria anteriore e stimola il rilascio di ormone adrenocorticotropo (ACTH). ACTH entra nel flusso sanguigno e stimola la corteccia surrenale a secernere species glucocorticoidi specifici (GC). I glucocorticoidi sono strettamente legate ad eventi stressanti piuttosto che essere prodotta in modo coerente in tutti gli stati di energia accresciuta quindi sono spesso misurati in preferenza rispetto ad altri di stress legato ormoni 2. I glucocorticoidi sono responsabile di diversi effetti di adattamento nei cavalli. Energia viene rapidamente mobilizzato da siti di stoccaggio nel corpo sotto forma di acidi grassi e glucosio, assunzione di ossigeno viene aumentata, funzione sensoriale è migliorata 3 e il flusso di sangue è diminuita ad aree non necessarie per il movimento 4. Così come in qualità di un meccanismo di coping, l&#39;aumento indotto stress nella glucocorticoidi può anche aiutare a preparare l&#39;animale per il prossimo 5 fattore di stress. Valutare livelli dell&#39;ormone nel plasma e nella saliva coinvolge misurare l&#39;ormone effettivo circolante Tuttavia, misurando i metaboliti nelle misure feci il prodotto finale del metabolismo dell&#39;ormone. steroidi circolanti sono catabolizzati nella liver prima di escrezione della bile dove subiscono ulteriori modifiche facilitati dalle attività enzimatiche della flora batterica intestinale all&#39;interno della traccia 6. Pertanto, saggi immunologici diretti verso glucocorticoidi nel sangue può non essere adatto per l&#39;analisi dei metaboliti fecali glucocorticoidi 7. Come raccolta fecale può essere effettuata con nessun disturbo al cavallo, analisi delle feci per corticosterone, è stato ampiamente utilizzato per monitorare l&#39;attività HPA in una serie di circostanze. Corticosterone elevata nelle feci dei cavalli è stata riportata in risposta a situazioni potenzialmente avversi anche durante post-operatorio trattamento veterinario 8 e nelle abitazioni restrittiva 9. Campionamento fecale riflette un livello di glucocorticoide pool nel corso del tempo, piuttosto che il punto di campionamento in tempo offerto dal plasma e la saliva che lo rende adatto per il monitoraggio a lungo termine, cronica o modelli stagionali 10. A causa della non-invasivanatura del metodo, i campioni possono essere ritirati ripetutamente per un individuo senza la necessità di cattura o di ritenuta 11. Tuttavia, specie specifica il tempo di transito intestinale deve essere preso in considerazione quando si pianifica un protocollo di campionamento. Nei cavalli, il tempo di transito intestinale è di circa 18 ore 12 Pertanto, la risposta surrenale e successive metaboliti corticosterone possono essere rilevati nelle feci un giorno dopo attivazione iniziale dell&#39;asse HPA. Quando utilizzando tecniche non invasive immunodosaggio una validazione accurata per le specie oggetto di indagine è essenziale 13. Inoltre, le differenze di sesso ormone metaboliti sono stati segnalati probabilmente a causa di differenze nel tasso metabolico e il tipo di metabolita corticosterone escreto nelle varie specie, tra cui topi, 14 e polli 15. Era quindi importante nell&#39;ambito di questo metodo che il test è stato convalidato per l&#39;uso in maschi e femmine cavalli domestici come dettagliato in the protocollo. Questa differenza nel metabolismo ormonale tra i generi ha conseguenze per la qualità dei dati eppure raramente si rivolge e incluso come parte di convalida del test. Questo metodo non invasivo consente la valutazione a lungo termine di attività surrenalica nei cavalli domestici. I dettagli del protocollo sia la validazione del test e la tecnica di analisi in sé.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo corticosterone & Kit HRP</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Non più disponibile tramite UC Davis - consultare i saggi Arbor Anticorpi</td></tr><tr><td>cortisolo e Kit HRP</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>Non più disponibile tramite UC Davis - consultare i saggi Arbor</td></tr><tr><td>Corticosterone ormone standard sintetico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>50-23-7</td><td>Harnful se ingerito o a contatto con la pelle. Utilizzare in cappa chimica</td></tr><tr><td>Ormone standard sintetico cortisolo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15087-01-1</td><td>Nocivo se ingerito o a contatto con la pelle. Utilizzare in cappa chimica</td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-56-1</td><td>Irritante. Uso in cappa di aspirazione</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>144-55-8</td><td>Carbonato di sodio irritante</td></tr><tr><td>anidro</td><td>Sigma Aldrich</td><td>497-19-8</td><td>Fosfato di</td></tr><tr><td>sodio irritante bibasico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Fosfato di</td></tr><tr><td>sodio irritante monobasico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10049-21-5</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>Irritante Acido Citrico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>77-92-9</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>30931-67-0</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>Perossido di idrogeno 30%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>7722-84-1</td><td></td></tr><tr><td>Irritante Cloruro di sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>Capsule tampone - pH 4</td><td>VWR</td><td>332732B</td><td></td></tr><tr><td>Capsule tampone - pH 7</td><td>VWR</td><td>332742D</td><td></td></tr><tr><td>Capsule tampone - pH 10</td><td>VWR</td><td>332762H</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td>Irritante. Utilizzo in cappa</td></tr> chimica <tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>Bilancia analitica</td><td>Fisher Scientific</td><td>BFS-525-010A</td><td></td></tr><tr><td>Compressore</td><td></td><td></td><td></td>d'aria</tr><tr><td>Centrifuga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer + stampante</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>frigo-congelatore</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Asciugatura apparato</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>+tubi</td> Armadio per lo stoccaggio di <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>liquidi infiammabili</td><td>VWR</td><td>649-002</td><td></td></tr><tr><td>Cappa</td><td></td><td></td><td></td>aspirante</tr><tr><td>Agitatore a piastre riscaldanti</td><td>VWR</td><td>640-282</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lavatrice per micropiastre</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH Pipette</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research&reg; - opzione confezione multipla 2</td> Pipette <td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>- 1.000 &; l</td> Pipetta <td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>- 200 &; l</td> Pipetta <td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>- 20 &; l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetta a ripetitore</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Riempitrice per pipette</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agitatore orbitale</td><td>Progen Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Hilsonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bagno</td><td></td><td></td><td></td>di acqua calda</tr><tr><td>Sistema di purificazione dell'acqua</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecale analisi glucocorticoidi: non invasivo di monitoraggio surrenale in equidi

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

L'attività surrenalica può essere valutata nella specie equina mediante l'analisi delle feci per i metaboliti del corticosterone. Durante una situazione potenzialmente avversiva, l'ormone di rilascio della corticotropina (CRH) viene rilasciato dall'ipotalamo nel cervello. Questo stimola il rilascio dell'ormone adrenocorticotropo (ACTH) dalla ghiandola pituitaria, che a sua volta stimola il rilascio di glucocorticoidi dalla ghiandola surrenale. Nei cavalli il glucocorticoide corticosterone è responsabile di diversi adattamenti necessari per supportare il comportamento di volo degli equini e la successiva rimozione dalla situazione avversiva. I metaboliti del corticosterone possono essere rilevati nelle feci dei cavalli e la valutazione offre un'opzione non invasiva per valutare i modelli a lungo termine dell'attività surrenalica. La valutazione fecale offre vantaggi rispetto ad altre tecniche che monitorano l'attività surrenalica, tra cui l'analisi del plasma sanguigno e della saliva. La natura non invasiva del metodo evita lo stress di campionamento che può confondere i risultati. Consente inoltre l'opportunità di campionamenti ripetuti nel tempo ed è ideale per studi su cavalli in libertà. Questo protocollo descrive il dosaggio immunoenzimatico (EIA) utilizzato per valutare le feci per il corticosterone, oltre alla convalida biochimica associata.

cavalli domestici (n = 16, 8 cavalle, 8 castroni), con un&#39;età media di 15 anni (± 3) sono stati raggruppati in base al sesso e sottoposti a quattro disegni abitative con crescenti livelli di isolamento sociale (n = 4 cavallo / trattamento). Housing 1 coinvolti cavalli che vivono in un ambiente mandria, simulando attentamente il loro habitat naturale. Housing 2 coinvolti cavalli che vivono in coppie in una stalla coperta. Housing 3 cavalli coinvolti alloggiati solo nelle stalle, ma co...

L'attività surrenalica può essere valutata nella specie equina mediante l'analisi delle feci per i metaboliti del corticosterone. Il metodo offre un'opzione non invasiva per valutare i modelli a lungo termine sia nei cavalli domestici che in quelli liberi. Questo protocollo descrive il test immunoenzimatico coinvolto e la validazione biochimica associata.

Fecale Analisi glucocorticoidi: non invasivo di monitoraggio surrenale in equidi

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare come l'attività surrenale possa essere valutata in modo non invasivo negli equini attraverso l'estrazione e l'analisi dei metaboliti fecali di glucocorticoidi. Questo metodo può aiutarci a rispondere a domande fondamentali nel campo della valutazione del benessere, analizzando gli impatti fisiologici dei protocolli di allevamento sui cavalli domestici, fino alle popolazioni selvatiche di zebre africane. Il principale vantaggio di questa tecnica è che offre un'opzione non invasiva per misurare l'attività surrenale a lungo termine sia nei cavalli domestici sia in quelli selvatici.Nel giorno dell'esperimento, dopo lo scongelamento a temperatura ambiente, omogeneizzare manualmente i campioni fecali mescolando all'interno di ciascun sacchetto individuale. Successivamente, per ogni campione, pesare la quantità appropriata di feci su una bilancia microanalitica in un contenitore pulito per pesatura e trasferire i campioni in singoli viali di vetro da otto millilitri. Poi, aggiungere cinque millilitri di metanolo al 90% in acqua a ciascun campione e agitare i campioni tutta la notte su un agitatore orbitale a temperatura ambiente.La mat

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Descriviamo la procedura e analisi dei dati di un sistema di screening chimico per la segnalazione ormone dello stress glucocorticoide con larve di zebrafish: il Responsive dosaggio glucocorticoidi In vivo Zebrafish Luciferase attività (GRIZLY). Il test con sensibilità e in particolare rileva gli effetti sulla segnalazione glucocorticoide da composti che necessitano di metabolizzazione o influenzano la produzione di glucocorticoidi endogeni.

Una procedura di screening chimico per glucocorticoidi segnalazione con un reporter del sistema Zebrafish Larva Luciferase

Cortisolo (CORT) si accumula nel fusto del pelo crescente di esseri umani e primati non umani. Descriviamo metodi per l'estrazione e l'analisi dei capelli CORT con alta precisione e sensibilità. Misura di capelli CORT è particolarmente adatto per la valutazione dello stress cronico per periodi di settimane o mesi.

Estrazione e analisi di cortisolo da umani e Monkey Capelli

Vi è la necessità di una valutazione non invasiva di stress. Questo documento descrive un semplice protocollo utilizzando immagini termiche per rilevare una risposta significativa a temperatura eye-regione in cinciarelle selvatici per un fattore di stress acuto da lieve.

Thermal Imaging per studiare lo stress in modo non invasivo in Uccelli sfrenato

'Super-selettivo' campione venoso adrenale (ssAVS, chiamato anche campione venoso adrenale segmentale: sAVS) è stato effettuato usando un micro-catetere per identificare adrenale o dei segmenti che producono una quantità eccessiva di ormoni. È stata descritta la tecnica di ssAVS, sono stati presentati casi in cui la lesione segmentale adrenale sono stati identificati da ssAVS e l'utilità di ssAVS in future ricerche adrenale è stata discussa.

Un metodo novello: Campione venoso adrenale Super-selettivo

L'ormone secernuta dalla corteccia surrenale è vitale per animali contro lo stress e malattie. Qui, presentiamo un protocollo alla cultura il ratto primario cellule adrenali. Potrebbe essere una buona piattaforma in vitro per indagare i meccanismi del reagente di interesse nella steroidogenesi surrenalica e biosintesi lipidica.

Colture primarie di cellule corticosurrenali ratto e saggi di Steroidogenic funzioni

Vi presentiamo un protocollo per determinare il solvente di estrazione ottimale per misurare il cortisolo dalla pelliccia di koala. I solventi utilizzati in questo protocollo sono metanolo, etanolo e isopropanolo. Determinare un solvente di estrazione ottimale aiuterà a misurare in modo affidabile la pelliccia per determinare l'impatto dello stress cronico sui koala.

Misurazione del cortisolo a Koala (Phascolarctos cinereus) Pelliccia

Le glia enteriche stanno diventando sempre più riconosciute per il loro ruolo nell'omeostasi intestinale e nei processi patologici, comprese le complicanze postoperatorie. I pazienti equini che si stanno riprendendo da una laparotomia esplorativa d'urgenza soffrono di un alto rischio di condizioni infiammatorie postoperatorie, evidenziando l'importanza di stabilire una coltura di cellule primarie gliali enteriche equine ripetibili per lo studio.

Coltura gliale enterica equina e applicazione allo studio di un meccanismo infiammatorio neurale nelle coliche equine

È stato sviluppato un approccio robusto e riproducibile per stabilire colture primarie 2D di cellule arricchite di zona glomerulosa e zona fascicolata, per la corteccia surrenale del muro. Questo sistema preserva le caratteristiche molecolari e funzionali chiave di ciascuna zona, consentendo un'indagine mirata delle vie di segnalazione, della produzione ormonale e del comportamento delle cellule corticali surrenali ex vivo.

Stabilimento di colture primarie arricchite in zona dalla corteccia surrenale del topo

Midollare surrenale cromaffini sistemi di colture cellulari sono estremamente utili per lo studio della secrezione di accoppiamento eccitazione-in un ambiente in vitro. Questo protocollo illustra il metodo utilizzato per analizzare le ghiandole surrenali e quindi isolare la regione midollare strappando via la corteccia surrenale. La digestione del midollo in singole cellule cromaffini è poi dimostrato.

Topo surrenale cromaffini cella di isolamento

Per la valutazione delle terapie con cellule staminali nuovo, è importante non invasiva traccia le cellule iniettate in vivo. Questo video vi mostrerà come etichetta cellule staminali mesenchimali ed embrionali con il ferro mezzi di contrasto a base di ossidi in vivo per la successiva RM in vivo.

Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM

Impara a valutare l'attività surrenale negli equidi tramite analisi non invasiva dei metaboliti fecali dei glucocorticoidi. Questo metodo consente di monitorare lo stress cronico in cavalli domestici e zebre selvatiche.

Fecale Analisi glucocorticoidi: non invasivo di monitoraggio surrenale in equidi

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