Name: Quantitative Fundus autofluorescenza per la valutazione delle patologie retiniche (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Impara la tecnica di autofluorescenza quantitativa del fondo oculare per valutare i livelli di lipofuscina nell'epitelio pigmentato retinico. Questo metodo consente misurazioni riproducibili nella degenerazione maculare senile.

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Vorremmo ringraziare i nostri collaboratori, Francois Delori, Tomas Burke e Tobias Duncker. Supporto di ricerca: NIH / NEI R01 EY015520 (RTS, JPG), e fondi disponibili da Research per prevenire la cecità (RTB).

Etica Dichiarazione: Tutti i pazienti arruolati in questi studi sono stati fatti così in conformità approvato revisione istituzionale di Vigilanza presso la New York University School of Medicine. 1. selezione dei pazienti e preparazione iniziale per l&#39;imaging Nota: Sono necessari i seguenti materiali: 0.5% soluzione oftalmica tropicamide, 2,5% soluzione oftalmica fenilefrina, cSLO dotato di dominio spettrale tomografia a coerenza ottica (SD-OCT), e il riferimento di fluorescenza interna. <ol><li> Prima di immagini, opportunamente istituito cSLO per l&#39;acquisizione dei dati in base alle istruzioni del produttore. </li><li> Montare un riferimento fluorescente interna nel cSLO. Nota: Il riferimento fluorescente interna, come acquistati dal produttore, è ospitato in un anello di metallo e viene posizionato direttamente dietro l&#39;obiettivo della fotocamera. Se viene utilizzato un cSLO da un altro produttore, ci può essere una configurazione diversa da quella che è descritta inquesto protocollo. <ol><li> Per inserire il riferimento nella cSLO, ruotare la lente per rimuoverla, svitare ghiera della macchina, e sostituirlo con il nuovo anello metallico contenente il riferimento. Nota: il riferimento fluorescente interno è essenziale alla tecnica QaF, in quanto consente la correzione per variazione di potenza del laser e rivelatore di sensibilità / guadagno. </li></ol></li><li> Hanno pazienti reclutati per l&#39;imaging sottoposti ad un esame di routine occhio dilatato e ottenere informazioni di base sulla storia passata e oculare condizioni mediche di base che possono manifestarsi con i risultati oculari. </li><li> Dilatare gli alunni con lo 0,5% e il 2,5% tropicamide fenilefrina. PUNTO CRITICO: Dilata alunni di almeno 6 mm. Nota: Ciò è essenziale per passaggio continuo di luce, e quindi per la visualizzazione ottimale e la misurazione del fondo. </li><li> Prima di immagini, posizionare il paziente correttamente sul cSLO, con il mento appoggiato sul mentoniera, la fronte posta contro la forehead riposo, e angoli palpebrali laterali correttamente allineati con gli indicatori. </li></ol> 2. Baseline Imaging del fondo oculare <ol><li> In primo luogo, l&#39;immagine del fondo oculare con riflessione della luce infrarossa (IR), vicino (lunghezza d&#39;onda di 820 nm) al fine di centralizzare la fotocamera sopra la macula e ottenere messa a fuoco approssimativa. <ol><li> Con il paziente posizionato correttamente, attivare l&#39;impostazione hardware sul pannello di controllo per la modalità di imaging IR, macchina fotografica posizionare manualmente fino a quando il fondo è in pieno centro, e prendere una immagine </li><li> Regolare l&#39;impostazione sul pannello di controllo per &quot;IR-OCT&quot;, che utilizza spettrale dominio tomografia a coerenza ottica (SD-OCT), in combinato disposto con l&#39;imaging a infrarossi per valutare la macula per malattia di base. </li><li> Utilizzare le guide presenti nella finestra di imaging per orientare correttamente l&#39;Office per l&#39;immagine IR del fondo. Per ottenere ottimale SD-OCT qualità, posizionare la telecamera in modo tale che l&#39;immagine PTOM nel terzo superiore della finestra di imaging. Acquisire almeno una sc linea orizzontaleuna attraverso la fovea e attraversa l&#39;intero campo di ripresa. </li></ol></li></ol> 3. Impostazione di Qaf Imaging <ol><li> Utilizzare acquisizione di immagini &quot;ad alta velocità&quot;. Nota: Questa impostazione consente per l&#39;acquisizione delle immagini più veloce, che riduce il rischio di perdita del segnale a causa del movimento del paziente e conseguente blocco della luce da parte dell&#39;iride o le palpebre. </li><li> Utilizzare &quot;Mean di 9&quot; frames. Nota: Questa impostazione consente la rapida, cattura sequenziale di 9 fotogrammi di immagini, che possono essere successivamente &quot;media&quot; per ridurre il rumore e artefatti (vedi sotto). </li><li> Utilizzare campo &quot;30 x 30 gradi&quot;. Nota: Questo si riferisce ai gradi di zona della retina catturati durante l&#39;acquisizione dell&#39;immagine. </li><li> Prima di imaging, avvertire paziente circa la luce blu, in quanto questo può essere allarmante in un primo momento. </li><li> Attivare la modalità AF e allineare l&#39;asse della telecamera in modo che lo schermo è al massimo &quot;riempito&quot; con fundus AF (oscuramento minima dei lati e gli angoli dell&#39;immagine). <ol><li> Se i pazienti have difficoltà a tollerare la luce blu brillante, avviare l&#39;imaging con la telecamera più lontano dall&#39;occhio e quindi portare la fotocamera lentamente verso il paziente fino a quando il fondo è in vista. PUNTO CRITICO: Se la luce di entrare in o uscire dall&#39;occhio è ostruito, è diminuito il segnale risulterà. diminuzione localizzata è visibile come oscuramento asimmetrica di un lato un&#39;immagine o un angolo. perdita generalizzata di segnale è visto quando i movimenti degli occhi solo ostruiscono il passaggio della luce. </li></ol></li><li> Allineate la telecamera in modo tale che il segnale AF è al livello più alto in tutto il campo. Obiettivo per il segnale massima anziché immagine più nitida, tuttavia essi più o meno correlati. Regolare la messa a fuoco spostando il cSLO per riposizionare la fotocamera manualmente o con il joystick oftalmoscopio. </li><li> Regolare la sensibilità / guadagno tale da fondo AF è facilmente visibile, ma evitare un eccesso di saturazione. Durante l&#39;acquisizione delle immagini, pixel colorati visibili sia il riferimento interno (situato nella parte superiore dellaimmagine) o fundus indicano sovrasaturazione e quindi perdita di segnale. </li></ol> 4. Acquisizione di immagini Nota: PUNTO CRITICO: L&#39;obiettivo in acquisizione delle immagini deve essere quello di ottenere 2 qualità 9-cornice dell&#39;immagine pile alte per sessione per controllare la variabilità tra le immagini all&#39;interno di una sessione. Dopo il riposizionamento del paziente e la macchina fotografica, di ottenere una seconda sessione di due immagini per valutare e controllo per la variabilità. Tutte le immagini saranno in ultima analisi, essere calibrati per il riferimento interno (descritto di seguito). <ol><li> Acquisire immagini solo dopo almeno 20 secondi di &quot;sbianca&quot; (piena esposizione della retina alla luce AF) per ridurre al minimo l&#39;assorbimento della luce da parte rodopsina nella retina sensitiva 9. <ol><li> Utilizzare questo periodo per ottimizzare l&#39;allineamento della fotocamera, messa a fuoco e sensibilità. </li></ol></li><li> Avere i soggetti lampeggiare prima di ogni acquisizione di immagini come un film lacrimale fresca migliora la qualità del segnale. </li><li> Evitare le palpebre nel piano di acquisizione. Nota: Può essere utile manualmente le palpebre aperte per i pazienti più impegnativi. Gli autori raccomandano che un assistente svolge questo compito. </li><li> Ottimizzare l&#39;allineamento prima di ogni acquisizione delle immagini per assicurare che la luce non sia ostruita da l&#39;iride con conseguente diminuzione del segnale. Nota: Come almeno minore movimento è molto comune, gli autori raccomandano bene riallineamento, se necessario, prima di ogni acquisizione delle immagini. Guidare e incoraggiare il paziente, mentre l&#39;imaging aiuta il movimento diminuzione. Gli autori raccomandano anche tramite pedale della macchina come il &quot;tasto di acquisizione&quot; in modo da ridurre al minimo dell&#39;operatore distrazione. </li><li> Eseguire l&#39;elaborazione post-immagine calcolando il &quot;medio&quot; della pila 9-frame per aumentare il rapporto segnale-rumore. Calcolare la media di una pila usando il software cSLO selezionando l&#39;opzione per calcolare la media. Nota: Ci possono essere pile in cui alcuni fotogrammi non sono di qualità ottimale (cioè, hanno localizzata o generalizzata diminuzione SIsegnal rispetto ai telai ottimali), quindi ispezionare accuratamente ogni pila e deselezionare telai subottimali prima calcolo della media. Nota: le immagini medie con rapporti accettabili segnale-rumore possono essere trattati da almeno 3 fotogrammi. E &#39;normale per i lati e gli angoli di ogni immagine di avere segnale inferiori ai 20 gradi centrali a causa di limitazioni all&#39;interno del cSLO stesso. <ol><li> Se il software chiede se l&#39;operatore vorrebbe normalizzare i livelli di grigio (vale a dire, allungare l&#39;istogramma) tra 0 e 255, selezionare &quot;No&quot;. Questo mantiene inalterati livelli di grigio per l&#39;analisi. </li></ol></li></ol> Analisi 5. Immagine <ol><li> Analizzare le immagini AF come descritto in precedenza utilizzando il software di analisi delle immagini sviluppato per la tecnica QAF (IGOR; 9). Una breve descrizione di una tipica analisi delle immagini utilizzando questo software è riportato qui di seguito. <ol><li> Caricare il programma Qaf in IGOR e importare le immagini (in formato .bmp) esportati dallasoftware cSLO con proporzioni pixel 768 x 768 (parametro di uscita di default). </li><li> Selezionare l&#39;immagine nel menu a discesa e di avviare l&#39;analisi. </li><li> Riposizionare indicatori di calibrazione sull&#39;immagine in modo tale che il &quot;mirino&quot; si sovrappongono fovea e della &quot;staffa&quot; confina con la disco ottico (questi indicatori sono utilizzati per scalare e posizionare i ROI). Una volta posizionato correttamente, il software utilizzare i prompt quindi popolare l&#39;immagine con ROI circolari che circondano la fovea (vedi figure 1, 2). </li><li> Selezionare l&#39;opzione in IGOR per calibrare i livelli di grigio complessivi di ciascuna immagine a quei livelli presenti nel riferimento fluorescente interna. Nota: Questa fase consente di calibrare fattori correlati alla macchina, compreso il livello elettronico zero ogni immagine e il fattore di calibrazione di riferimento interno di ogni macchina, così come i fattori correlati al paziente, quali l&#39;età, rifrazione e curvatura corneale. Nota: Il software di analisi mostra poi il r fissoegioni sull&#39;immagine risultante e un valore di Qaf è dimostrata all&#39;interno di ogni regione. I valori Qaf vengono anche inseriti automaticamente in un formato foglio di calcolo in una finestra separata. &quot; </li><li> Generate &quot;mappe di calore&quot; Qaf selezionando l&#39;opzione entro i prompt dei comandi. Tutte le immagini e dati possono essere esportati dal software IGOR in un foglio di calcolo Excel selezionando le opzioni appropriate. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li>
<li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li>
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<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li>
<li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull%27s-eye+maculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li>
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<li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li>
<li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice%3A+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li>
<li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. American National Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+%28ANSI+2000%29%2C+with+emphasis+on+ophthalmic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Optical+Society+of+America.+A%2C+Optics%2C+image+science%2C+and+vision%22%5BJournal%5D)">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li>
</ol>

STA: nessuna divulgazione, JPG: nessuna divulgazione, RTS: consulente, Ocata Therapeutics.

Anormale distribuzione lipofuscina RPE, sia aumentato o diminuito, è un marcatore sensibile della malattia retinica ed è generalmente associata a perdita di funzione retina sensitiva. Qui, descriviamo l&#39;applicazione di Qaf per la valutazione dei RPE lipofuscina. Costituzione di un riferimento fluorescente interna per correggere per la variabile potenza del laser e rilevatore di sensibilità 9 a fianco della nostra tecnica di imaging standardizzata consente una quantificazione affidabile dei livelli di AF. ...

L&#39;epitelio pigmentato retinico (RPE) supporta la funzione della retina sensoriale attraverso numerosi processi 1. Età degenerazione maculare (AMD) è la causa più importante di cecità incurabile nei paesi industrializzati ed è caratterizzata da cambiamenti nella RPE, tra cui la perdita di pigmento, perdita della funzione e atrofia. In AMD ed in normale invecchiamento, l&#39;RPE accumula fluorescenti, organelli lisosomi-derivati ​​contenenti frammenti di fotorecettori fagocitati, di cui come granuli di lipofuscina. L&#39;accumulo di RPE lipofuscina è stato pensato per indicare ossidativo disfunzioni 1, ma recenti studi hanno dimostrato che la morfologia RPE rimane normale negli occhi età con elevati livelli di lipofuscina 2. Marcatori Tuttavia, i modelli anormali di distribuzione lipofuscina, in particolare la perdita di lipofuscina, sono documentate per la progressione di AMD e AMD, sia istologicamente e clinicamente 3,4 proces difettosicantare di RPE lipofuscina è stato dimostrato anche che si verifichi in certe degenerazioni retiniche ereditarie. I pazienti affetti da malattia di Stargardt (STGD) si accumulano lipofuscina nel RPE in giovane età, alla fine lo sviluppo di perdita della vista simile a quello visto in AMD 5. Questi risultati hanno suggerito che l&#39;accumulo di lipofuscina stessa può essere tossico e guidare RPE disfunzioni 6,7. Tuttavia, uno studio di imaging dettagliata di soggetti con STGD nel corso del tempo non ha confermato che l&#39;accumulo di lipofuscina focale ha portato alla conseguente perdita RPE 8. Quindi, anche se le anomalie lipofuscina sono marcatori per degenerazioni retiniche, un ruolo per tossicità diretta di lipofuscina ancora da dimostrare. La RPE è la più strato di cellule posteriore della retina, ma genera la maggior parte del segnale fluorescente dal fondo oculare. Generazione e rilevamento di autofluorescenza (AF) derivato dal RPE possono essere eseguite utilizzando ophthalmoscopy scansione laser confocale (cSLO), che consente visualization della distribuzione spaziale di AF fondo. Alcune degenerazioni retiniche mostrano modelli distintivi del fondo oculare AF, e aiuti di imaging AF nella diagnosi e nel monitoraggio di queste condizioni. Sebbene l&#39;imaging standard di AF è clinicamente importante, AF quantitativa (Qaf) è diventato un importante mezzo per valutare la salute RPE. Noi e altri hanno sviluppato un approccio standardizzato che può determinare in modo affidabile i livelli di Qaf a specifiche posizioni della retina 9. Qaf ha potenziali applicazioni nella diagnosi e nel monitoraggio delle condizioni della retina, e può anche avere utilità nella prognosi e stratificazione del rischio. Inoltre, la capacità diagnostica di Qaf sono anche stati descritti per certi disturbi della retina 10-12. Qui, forniamo dettagli graduale per eseguire la nostra tecnica accompagnata da una dimostrazione visiva della sua applicazione nella valutazione di occhi sani e malati.

<table><tbody><tr><td>Spectralis HRA + OCT</td><td>Heidelberg Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr>Soluzione <td></td><td></td><td>oftalmica tropicale allo 0,5%</td><td>Qualsiasi marca può essere utilizzata</td></tr><tr><td>Soluzione</td><td></td><td></td> oftalmica al 2,5% di fenilefrina <td>Qualsiasi marca può essere utilizzata</td></tr><tr><td>Riferimento fluorescente interno</td><td>Heidelberg Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software IGOR Pro</td><td>WaveMetrics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative fundus autofluorescenza per la valutazione delle patologie retiniche

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) è giustapposto alla retina sensoriale sovrastante e supporta la funzione del sistema visivo. Tra i compiti svolti dall'RPE vi sono la fagocitosi e l'elaborazione dei segmenti fotorecettori esterni attraverso organelli derivati dai lisosomi. Questi prodotti di degradazione, conservati e indicati come granuli di lipofuscina, sono composti parzialmente da bisretinoidi, che hanno ampi spettri di assorbimento ed emissione della fluorescenza che possono essere rilevati clinicamente come autofluorescenza del fondo oculare con oftalmoscopia laser a scansione confocale (cSLO). L'accumulo di lipofuscina è associato all'avanzare dell'età, ma si trova anche in vari modelli nelle malattie degenerative della retina sia acquisite che ereditarie. Pertanto, studiare il suo modello di accumulo e correlare tali modelli con i cambiamenti nella retina sensoriale sovrastante è essenziale per comprendere la fisiopatologia e la progressione della malattia retinica. Qui, descriviamo una tecnica impiegata dal nostro laboratorio e da altri che utilizza il cSLO per quantificare il livello di RPE lipofuscina sia negli occhi sani che in quelli malati.

Questa tecnica è stata utilizzata per studiare QaF in entrambi i sani e 13 di malattia stati 10-12. In occhi sani (Figura 1), AF emessa dal RPE è distribuito in modo relativamente uniforme in tutto il fondo (Figura 1A). intensità ridotta è visto nella regione maculare centrale dovuto al blocco della luce da pigmento maculare, e ai lati ed angoli dell&#39;immagine dovuto l&#39;ottica dell&#39;occhio e fotocamera. Vasi appaiono scure ...

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) supporta la retina sensoriale attraverso il riciclaggio dei sottoprodotti del ciclo visivo, che si accumulano sotto forma di lipofuscina. Questi prodotti sono autofluorescenti e possono essere visualizzati qualitativamente in vivo. Qui, descriviamo un metodo per visualizzare quantitativamente la lipofuscina RPE utilizzando l'oftalmoscopia laser a scansione confocale.

Quantitative Fundus autofluorescenza per la valutazione delle patologie retiniche

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

L'obiettivo generale della fluoroscenza autofluorescente quantitativa, o qAF, è valutare il livello complessivo di lipofuscina nelle cellule di supporto della retina, l'epitelio pigmentato retinico, o RPE, sia negli occhi sani che in quelli malati. Questa tecnica può contribuire a rispondere a domande fondamentali nella biologia cellulare della retina, ad esempio in che modo lo stato di salute dell'epitelio pigmentato retinico interagisce con lo sviluppo della degenerazione maculare legata all'età, o AMD. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente di determinare livelli assoluti di autofluorescenza della lipofuscina nel fondo oculare, permettendo quindi un follow-up quantitativo e riproducibile tra pazienti, tra diverse sessioni di imaging dello stesso paziente e all'interno di ampie popolazioni studiate.Prima dell'acquisizione delle immagini, configurare correttamente la microscopia a scansione confocale con laser ophtalmoscopico, o CSLO, per l'acquisizione dei dati seguendo le istruzioni del produttore. Per montare un riferimento fluorescente interno, acquistato dal produttore, ruotare l'obiettivo per rimuoverlo, svitare l'anello metallico della macchina e sostituirlo con il nuovo anello metallico contenente il riferimento. È essenziale che le pupille siano dilatate almeno a 6 mm per consentire un passaggio ininterrotto della luce.Con tropicamide allo 0,5% e fenilefrina al 2,5%, dilatare le pupille del paziente fino a un diametro di almeno 6 mm, condizione essenziale per consentire un passaggio ininterrotto della luce necessario per visualizzare e misurare il fondo oculare. Posizionare correttamente il paziente sul CSLO con il mento appoggiato sul sostegno per il mento, la fronte contro l’appoggio frontale e i cantus laterali allineati correttamente con gli indicatori. Per acquisire le immagini di base, iniziare con l’imaging del fondo oculare mediante riflettanza nell’infrarosso vicino, o luce IR, al fine di centrare la telecamera sulla macula e ottenere una messa a fuoco approssimativa.Una volta posizionato correttamente il paziente, impostare l'apparecchiatura sul pannello di controllo sulla modalità di imaging IR, posizionare manualmente la telecamera finché il fondo oculare non è perfettamente a fuoco ed acquisire un'immagine. Regolare l'impostazione sul pannello di controllo su IROCT, che utilizza la tomografia a coerenza ottica a dominio spettrale, o SDOCT, in combinazione con l'imaging IR, per valutare la macula alla ricerca di patologie sottostanti. Utilizzare le guide presenti nella finestra di imaging per orientare correttamente l'OCT rispetto all'immagine IR del fondo oculare.Per ottenere una qualità ottimale di SDOCT, posizionare la telecamera in modo che l'immagine OCT si trovi nel terzo superiore della finestra di acquisizione. Acquisire almeno una scansione lineare orizzontale attraverso la fovea, estesa a tutto il campo di imaging. Per impostare l'imaging qAF, utilizzare l'acquisizione di immagini ad alta velocità, che riduce il rischio di perdita di segnale dovuta ai movimenti del paziente e al blocco della luce da parte dell'iride o delle palpebre.Utilizzare la media di 9 fotogrammi, che acquisisce rapidamente e in sequenza nove immagini che vengono successivamente mediate per ridurre il rumore e gli artefatti. Selezionare un campo di 30 x 30 gradi, che indica i gradi di area retinica acquisiti durante l'acquisizione dell'immagine. Dopo aver avvisato il paziente della luce blu, attivare la modalità AF e allineare l'asse della telecamera in modo che lo schermo sia riempito al massimo dalla autofluorescenza del fondo oculare, con un minimo scurimento dei lati e degli angoli dell'immagine.Se i pazienti hanno difficoltà a tollerare la luce blu intensa, allontanare la telecamera dall'occhio per iniziare l'acquisizione delle immagini e avvicinarla lentamente al paziente finché il fondo oculare non è completamente visibile. Regolare l'allineamento della telecamera manualmente o tramite il joystick dell'oftalmoscopio, spostando il CSLO in modo da riposizionare la telecamera in modo che il segnale di autofluorescenza (AF) sia al massimo livello in tutto il campo, piuttosto che ottenere l'immagine più nitida possibile. Durante l'acquisizione delle immagini, la presenza di pixel colorati nell'immagine di riferimento interno o nel fondo oculare indica una saturazione eccessiva e, di conseguenza, una perdita di segnale.Esponi completamente la retina alla luce AF per almeno 20 secondi per ridurre al minimo l'assorbimento della luce dalla rodopsina nella retina sensoriale durante l'acquisizione delle immagini. Utilizza questo periodo per ottimizzare l'allineamento, la messa a fuoco e la sensibilità della telecamera. Chiedi ai soggetti di battere le palpebre prima di ogni acquisizione d'immagine, poiché un film lacrimale fresco migliora la qualità del segnale.Evitare le palpebre nel piano di acquisizione ed eseguire l'immagine. È importante generare almeno due immagini di alta qualità per ogni sessione di imaging per l'analisi dei dati. Eseguire l'elaborazione post-immagine utilizzando il software CSLO per calcolare la media dello stack di nove fotogrammi, al fine di aumentare il rapporto segnale-rumore.Eseguire l'analisi delle immagini seguendo il protocollo descritto nel testo. Come mostrato qui, negli occhi sani, la fluorescenza emessa dall'epitelio pigmentato retinico (RPE) è distribuita in modo relativamente uniforme in tutta la regione del fondo oculare. Una ridotta intensità è osservabile nella regione maculare centrale a causa dell'assorbimento della luce da parte del pigmento maculare, e ai lati e agli angoli a causa dell'ottica dell'occhio e della telecamera.Le strutture vascolari devono essere scure e ben a fuoco. Questa figura rappresenta la presentazione corrispondente sotto forma di mappa termica dei livelli di qAF provenienti da questa figura. I colori più freddi corrispondono a zone con intensità di AF più bassa, mentre i colori più caldi corrispondono a zone con intensità di AF più elevata.L'intensità massima è generalmente osservata nel secondo anello concentrico composto da otto segmenti, e le intensità medie in quest'area vengono utilizzate per la maggior parte delle analisi dei dati. Qui è mostrata un'analisi rappresentativa dell'occhio con DMAE, che dimostra un'atrofia geografica, una forma avanzata di DMAE. Questa forma di DMAE provoca aree localizzate di perdita dell'epitelio pigmentato retinico (RPE), evidenziate da una riduzione marcatamente diminuita o assente della fluorescenza autofluorescente (AF), e causa una perdita progressiva della visione centrale.Nel tentativo di eseguire questa procedura, è importante ricordare di selezionare attentamente i pazienti candidati e di ottenere immagini di alta qualità in modo riproducibile per massimizzare la qualità dei dati. L'uso di questa procedura consente un follow-up longitudinale della salute retinica per determinare l'andamento delle degenerazioni retiniche. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'oftalmologia per seguire e analizzare le degenerazioni retiniche.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare l'autofluorescenza quantitativa per valutare i tuoi pazienti affetti da degenerazioni retiniche. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.

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