Name: Amministrazione e Rilevamento di segni di proteine su artropodi per Dispersione ricerca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Impara le tecniche di marcatura proteica su artropodi per studiare la dispersione e la migrazione degli insetti. Questo metodo utilizza saggi ELISA per rilevare i segni in modo semplice ed economico direttamente in habitat naturali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Il finanziamento è stato fornito da USDA CRIS 5347-22620-021-00D e, in parte, dalla dell&#39;agricoltura e dell&#39;alimentazione iniziativa di assegno di ricerca competitiva no. 2011-67009-30141 dal National Institute USDA di alimentazione e l&#39;agricoltura. Siamo grati per il supporto tecnico di Johanna Nassif. Ringraziamo anche Paul Baker, David Horton, Diego Nieto, e Frances Sivakoff per la fornitura di alcune delle immagini usate in figura 3.

1. Mark interno, di conservazione, e procedura di rilevazione <ol><li> Procedura marcatura interna <ol><li> Raccogliere insetti di interesse (n ≈ 100 individui) da una colonia di laboratorio allevati con una dieta artificiale o dal campo e dividere in due contenitori di allevamento puliti. </li><li> Collocare un normale pacchetto di dieta 20 ml (trattamento di controllo negativo non marcato) in uno dei contenitori. Supplemento un secondo 20 ml pacchetto dieta artificiale con 1,0 ml di una / IgG pollo ml di soluzione 1,0 mg / IgY, mescolare accuratamente, e inserirlo in un altro contenitore. Nota: se l&#39;insetto di interesse non ha una dieta artificiale, il marchio può essere posizionato su o in qualunque dieta sono normalmente sostenuti su (ad esempio, fagiolini, uova falena, acqua, zucchero, miele). </li><li> Consentire agli insetti di riprendere la loro attività di alimentazione per 24 ore. </li></ol></li><li> Marchio interno Procedura ritenzione <ol><li> Rimuovere i pacchetti di dieta di ogni contenitore e fornire gli insetti with un&#39;altra fonte di cibo per sostenerli tutta la durata dell&#39;esperimento (ad esempio, fagiolini). </li><li> Raccogliere una coorte (n = 20) di insetti giornaliera (o in qualsiasi intervallo di tempo desiderato) da ciascun trattamento e congelare immediatamente a -20 ° C. </li></ol></li><li> Sandwich procedura ELISA <ol><li> Aggiungere 50 ml di coniglio anti-pollo IgY anticorpo primario diluito 1: 500 in Tris Buffered Saline (TBS) a ciascun pozzetto di una micropiastre ELISA pulito e incubare per un minimo di 1 ora a temperatura ambiente (nota: i micropiastre può anche essere incubate O / N a 4 ° C). </li><li> Scartare l&#39;anticorpo dalla piastra e bloccare ogni pozzetto con 300 ml di una soluzione non grasso secco 1,0% per 30 min. </li><li> In attesa che le fasi di incubazione precedenti, posizionare insetti congelati singolarmente in 1,6 ml microprovette con 1,0 ml di TBS. </li><li> Grind ogni insetto con un pestello pulito fino al completo omogeneizzato e aggiungere 100 ml di ciascun campione di un bene individuale del ELISApiatto. Lasciare i campioni incubare a temperatura ambiente per 1 ora. </li><li> Aggiungere 100 pl di negativo (solo TBS) e positivi (albumi in TBS) controlli nei pozzetti nella prima colonna di ciascuna piastra ELISA. Inoltre, aggiungere 100 ml di controlli negativi insetti (insetti non marcati) per le 8 pozzetti nell&#39;ultima colonna di ciascuna piastra (Figura 1). Lasciare i campioni di controllo per incubare a temperatura ambiente per 1 ora. Si noti che il modello fornito nella figura 1 è il modello che utilizziamo per i nostri test standardizzati. Il posizionamento dei campioni nei pozzetti è a discrezione del ricercatore. </li><li> Lavare i pozzetti tre volte con tampone fosfato salino (PBS) -tween e poi aggiungere 50 ml di IgG di coniglio anti-pollo / IgY coniugato con perossidasi diluito 1: 10.000 in 1% soluzione di latte e incubare per 1 ora a temperatura ambiente. </li><li> Lavare i pozzetti tre volte con PBS-Tween e aggiungere 50 ml di tetrametilbenzidina (TMB) substrato in ogni pozzetto. </li><li> Dopo 10 min, leggere i pozzetticon uno spettrofotometro per micropiastre impostato alla lunghezza d&#39;onda di 650 nm. </li></ol></li></ol><img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53693/53693fig1.jpg" /> Figura 1. Un diagramma schematico che illustra le denominazioni e standardizzati utilizzati per un tipico 96 ben ELISA micropiastra. Ciascuna piastra contiene 7 pozzetti dedicate ai controlli negativi salina tamponata con Tris (TBS), un pozzo dedicato a un controllo positivo proteine ​​(Pos Ctrl), 80 singoli pozzetti dedicati agli insetti ricatturati (campione 1 ... 80), e 8 pozzetti dedicati alla non marcati (negativi) di controllo degli insetti (Neg Ctrl 1 ... 8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53693/53693fig1large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> 2. Mark esterno, di conservazione, e procedura di rilevazione <ol><li> Procedura marcatura esterna <ol><li> Raccogliere insetti di interesse (n ≈ 100individui) da una colonia laboratorio o dal campo e posto in due contenitori di plastica 1.0 L con un foro di diametro 2.5 cm perforato del lato di ciascun contenitore. </li><li> Spray insetti nel primo contenitore con 1,0 ml di dH 2 O (trattamento di controllo negativo) utilizzando un nebulizzatore medico. Spray insetti nel secondo contenitore con 1,0 ml di una soluzione 5,0% di albumi pollo usando un nebulizzatore medico. </li><li> Attaccare il tubo del nebulizzatore ad una presa d&#39;aria di laboratorio standard e quindi inserire la bocca del nebulizzatore nel foro 2.5 cm del contenitore. Quindi, accendere l&#39;uscita dell&#39;aria gradualmente fino il nebulizzatore produce un vapore. </li><li> Continuare a spruzzo (marcatura) fino a quando la soluzione albumi è stato erogato (ca. 2-5 minuti). </li><li> Rimuovere il nebulizzatore e posizionare un tappo nel foro del contenitore di plastica. Lasciare gli insetti di stare a temperatura ambiente fino a quando la soluzione si è asciugato completamente. </li></ol></li><li> Contrassegno esterno Procedura ritenzione<ol><li> Mettere ogni trattamento degli insetti secchi in un contenitore pulito allevamento separato per evitare ulteriore esposizione al marchio. </li><li> Aggiungere cibo e acqua ai contenitori puliti per sostenere gli insetti per tutta la durata dello studio. </li><li> Raccogliere una coorte (n = 20) di insetti di ogni trattamento giornaliero e congelare immediatamente a -20 ° C. </li></ol></li><li> Procedura indiretta ELISA <ol><li> Posizionare gli insetti congelati singolarmente in 1,6 ml microprovette e aggiungere 1,0 ml di TBS. </li><li> Mettere a bagno i campioni per 1 ora su un set agitatore orbitale a 120 giri al minuto. </li><li> Aggiungere i controlli negativi e positivi come descritto al punto 1.3.5. </li><li> Dopo l&#39;immersione, pipettare un&#39;aliquota di 100 microlitri di ciascun campione in uno dei 80 pozzetti del campione designati su un nuovo 96 pozzetti ELISA come mostrato in Figura 1 consentire ai campioni di incubare per 1 ora a RT (nota:. Micropiastra può anche essere incubati O / N a 4 ° C). </li><li> Lavare i pozzetti tre volte conPBS-Tween e poi aggiungere 300 ml di tampone fosfato salino contenente 1% di albumina sierica bovina (BSA PBS-) a ciascun pozzetto. </li><li> Dopo 30 min a RT lavare due volte con PBS-Tween. </li><li> Aggiungere 50 ml di coniglio anti-albumina d&#39;uovo anticorpo primario diluito 1: 8000 in PBS-BSA-Silwet (0,05%) in ogni pozzetto e incubare per 1 ora a temperatura ambiente. </li><li> Lavare i pozzetti tre volte con PBS-Tween e poi aggiungere 50 ml di IgG anti-coniglio di capra coniugato con perossidasi diluito 1: 2000 in PBS-BSA-Silwet (0,05%) per 1 ora a temperatura ambiente. </li><li> Lavare i pozzetti tre volte con PBS-Tween e aggiungere 50 ml di substrato TMB in ogni pozzetto. </li><li> Dopo 10 min, leggere i pozzetti con uno spettrofotometro per micropiastre impostato alla lunghezza d&#39;onda di 650 nm. </li></ol></li></ol> Analisi 3. Dati <ol><li> Calcolare il valore medio delle 8 insetti di controllo negativo su ogni piastra ELISA e poi calcolare la deviazione standard in base ai controlli negativi pool from tutte le piastre ELISA di un dato studio 12. </li><li> Aggiungere sei volte la deviazione standard aggregata al medio ottenuto per ogni piastra ELISA per ottenere un valore di soglia positivo ELISA. Ogni campione insetto ottenendo un valore di assorbanza uguale o superiore a questo valore è considerato positivo per la presenza del marchio proteine. </li></ol>

Menzione di marchi o prodotti commerciali in questa pubblicazione è solo scopo di fornire informazioni specifiche e non implica raccomandazione o approvazione da parte del Dipartimento dell&#39;Agricoltura degli Stati Uniti. USDA è un fornitore di pari opportunità e datore di lavoro.

La procedura immunomarking proteina artropodi è stato descritto quasi un quarto di secolo fa 9. Da allora, la procedura è stato adattato per studiare i modelli di dispersione di una vasta gamma di artropodi utilizzando sia internamente che esternamente amministrati IgG / IgYs. Queste proteine ​​sono rivelati marcatori risoluti per la grande varietà di specie di insetti testati finora. Tuttavia, come già detto, la principale limitazione per l&#39;utilizzo di IgG / IgYs è che sono molto costosi. Di conseguenza,...

Registrazione della movimentazione dei parassiti artropodi, nemici naturali (parassitoidi e predatori) e degli impollinatori in natura è essenziale per una migliore comprensione su come migliorare i servizi ecosistemici. La componente chiave per la maggior parte dei tipi di ricerca dispersione sta avendo un metodo affidabile per contrassegnare il artropodi (s) di interesse. Una varietà di materiali (ad esempio, vernici, coloranti, polveri colorate, etichette, elementi rari, proteine) sono stati utilizzati per marcare artropodi per valutare le loro dinamiche di popolazione, capacità di dispersione, l&#39;alimentazione, i comportamenti e altre interazioni ecologiche 1,2. L&#39;adeguatezza di un marcatore utilizzato per una qualsiasi ricerca dispersione dipenderà dal tipo di studio condotto. Ci sono tre categorizzazioni di massima per marcatura artropodi: (1) mark-release-ricattura (MRR), (2) mark-capture, e (3) auto-mark-capture. Per ricerche mark-release-ricattura, l&#39;investigatore segna in genere i artropodi collettivamente alla laboratory e li rilascia in un punto nel campo centrale. Gli artropodi sono poi ripresi a vari intervalli spaziali e temporali con diversi dispositivi di raccolta (ad esempio, al netto spazzata, il vuoto, appiccicoso trappola) 3,4,5. I campioni ricatturati vengono esaminate per il marchio specifico di distinguere la liberato da individui nativi. Per ricerche mark-cattura, l&#39;investigatore di solito si applica il marchio direttamente nel spruzzo campo usando (per esempio, zaino spruzzatore, braccio e l&#39;ugello spruzzatore). I migliori marcatori per la ricerca mark-cattura sono poco costosi e facilmente applicata al habitat della artropodi. Per la ricerca di auto-mark-capture, l&#39;investigatore si applica di solito segni di un artropode esca 6,7 o nido ingresso 8. A sua volta, il artropodi si contraddistingue all&#39;interno divorando l&#39;esca marcata o esternamente da &quot;spazzolatura&quot; contro il marchio come esce il nido. Come accennato in precedenza, molti tipi di marcatori ci sono statied al tag una varietà di specie di artropodi. Tuttavia, molto pochi sono utili per tutte e tre queste categorie di ricerca di dispersione. Lo sviluppo della procedura proteine ​​immunomarking era un importante passo avanti per la marcatura insetti. Immunomarking mette un&#39;etichetta di proteine ​​su artropodi sia internamente che esternamente, che, a sua volta, viene rilevato da una specifica immunosorbent assay anti-proteina enzimatica (ELISA). I primi marcatori proteici come usati erano immunoglobulina coniglio (IgG) e IgG pollo / IgY 9,10. Hanno dimostrato di essere i marchi molto efficaci per la MRR e di ricerca di auto-mark-capture (vedi la discussione). Purtroppo, le proteine ​​IgG / IGY sono costosi e non sono quindi pratico per la ricerca mark-cattura e la maggior parte dei tipi di ricerca auto-mark-capture. Successivamente, ELISA di rilevamento di proteine ​​di seconda generazione sono stati sviluppati per le proteine ​​contenute nel albumi pollo (albumina), latte vaccino (caseina) e latte di soia (tripsina proteina inibitrice). Ciascun test è altamente sensibile, specifico, e, piùimportante, utilizza proteine ​​che sono molto meno costoso rispetto alle proteine ​​IgG / IGY 11. Queste proteine ​​si sono dimostrati efficaci per MRR, mark-cattura, e la ricerca di auto-mark-capture (vedi la discussione). In questo articolo, si descrive e dimostrare come condurre marchio proteina studi di ritenzione di laboratorio. Tali studi sono la prima fase di ricerca necessaria per ogni tipo di studio sul campo dispersione. In particolare, è fondamentale che gli investigatori sanno quanto tempo il marchio sarà mantenuto sulle specie di artropodi bersaglio prima di intraprendere gli studi di campo di dispersione. Qui, descriviamo e dimostrare come contrassegnare internamente ed esternamente insetti per MRR, mark-cattura, e studi di settore di tipo auto-mark-capture. Abbiamo poi dimostrare come rilevare la presenza dei marchi con ELISA indiretta e sandwich.

<table><tbody><tr><td>Contenitore per alimenti (per l'allevamento di insetti)</td><td>Rubbermaid/Tupperware</td><td>Varie dimensioni</td><td>Vari produttori e venditori. Il tessuto a rete è incollato in una finestra</td></tr><tr><td>Nebulizzatore di piccolo volume (Micro Mist)</td><td>Teleflex-Hudson RCI</td><td>1881</td><td>Disponibile online e nei negozi di forniture mediche. Anche altre marche funzioneranno.</td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga, 1,6 ml con tappo</td><td>Continental Lab Products</td><td>4445.X</td><td>Qualsiasi tipo simile funzionerà. Preferiamo le marche che hanno coperchi facili da aprire.</td></tr><tr><td>Scatola di stoccaggio in polistirolo per provette per microcentrifuga (griglia 5x20)</td><td>RPI Corp.</td><td>145746</td><td>Questo design è bello perché non affolla i tubi.</td></tr><tr><td>Dispenser, ripetitore</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322</td><td>Qualcosa di simile aiuterà a velocizzare l'erogazione.</td></tr><tr><td>Pestelli, smerigliatrici per fazzoletti usa e getta in plastica, 1,5 ml</td><td>Kimble Chase</td><td>749521-1500</td><td>Disponibile con vari fornitori. I pestelli possono essere puliti e sterilizzati in autoclave per il riutilizzo.</td></tr><tr><td>Piastre ELISA BD Falcon, 96 pozzetti (fondo piatto)</td><td>Pipetta BD</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>Ovation, manuale (20-200 &; l)</td><td>VistaLab</td><td>1057-0200 o 1070-0200</td><td>Qualsiasi tipo simile funzionerà. Questo modello è ergonomico.</td></tr><tr><td>Serbatoi, reagente sterile</td><td>VistaLab</td><td>4054-1000</td><td>Qualcosa di simile funzionerà.</td></tr><tr><td>Pipetta elettronica, 8 canali (50-1.200 &; micro; l) (Biohit eLine)</td><td>Sartorius</td><td>730391</td><td>Se dovessi scegliere un modello elettronico, questa dimensione è molto utile.</td></tr><tr><td>Pipetta elettronica, 8 canali (10-300 & micro; l) (Biohit eLine)</td><td>Sartorius</td><td>730361</td><td>Qualsiasi cosa simile funzionerà.</td></tr><tr><td>Colletto, rondella per piastre multipozzetto (8 posizioni, diritta)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z369802&nbsp;</td><td>Qualcosa di simile funzionerà per il lavaggio manuale delle lastre.</td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre con rilevamento dell'assorbanza</td><td>Molecular Devices</td><td>SpectraMax 250</td><td>Qualsiasi cosa simile funzionerà.</td></tr><tr><td>Pollo IgG/IgY</td><td>Stati Uniti Biologico</td><td>I1903-15R</td><td>Disponibile anche da altre fonti</td></tr><tr><td>Albumi d'uovo Negozio di</td><td>alimentari</td><td>" Tutti bianchi", " Frulli", ecc.</td><td>Mescolare 5 ml con 95 ml dH2O per soluzione al 5%</td></tr><tr><td>Tris (Trizma Base)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>2,42 g/L per fare TBS</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>29,22 g/L per fare TBS e 8.0&nbsp; g&#8288;/&#8288; L per PBS</td></tr><tr><td>Fosfato di sodio bibasico (Na2HPO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>1,14 g/L per PBS</td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico (KH2PO4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td>0,2 g/L per PBS</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio (KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td>0,2 g/L per PBS</td></tr><tr><td>Tween 20, Grado EIA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td>Aggiungere 0,5 ml per L a PBS dopo che i sali sono stati disciolti.</td></tr><tr><td>PBS con 1% BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3688</td><td>Mix 1 bustina in 1 L dH2O</td></tr><tr><td>Anti-Chicken IgY (IgG) (molecola intera) anticorpo prodotto nel coniglio (1:500)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6409</td><td>Mix 100 &; l in 50 ml TBS</td></tr><tr><td>Latte in polvere, latte in polvere o fresco (1%)</td>Negozio <td>di</td><td></td> alimentari <td>Mescolare 10 g con 1 L dH2O per soluzione all'1%</td></tr><tr><td>Anti-pollo IgY (IgG) (molecola intera)-Anticorpo perossidasi prodotto nel coniglio (1:10.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9046</td><td>Mix 100 &; l in 1 L di latte</td></tr><tr><td>Anti-uovo di gallina Anticorpo all'albumina prodotto nel coniglio (1:8.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6534</td><td>Diluire 125 &; l in 1 L PBS-BSA</td></tr><tr><td>Capra Anti-Coniglio Perossidasi Perossidasi (1:2.000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6154</td><td>Diluire 0,5 ml in 1 L PBS-BSA, quindi aggiungere 1,3&nbsp; ml Silwet</td></tr><tr><td>Vac-In-Stuff (Silwet L-77) copolimero silicio-polietere</td><td>Lehle Seeds</td><td>VIS-01</td><td>Aggiungere come ultimo ingrediente</td></tr><tr><td>TMB Microwell Substrato di perossidasi monocomponente</td><td>SurModics</td><td>TMBW-1000-01</td><td></td></tr></tbody></table>

amministrazione e rilevamento di segni di proteine ​​su artropodi per dispersione ricerca

Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

È spesso richiesto il monitoraggio movimento artropodi per meglio comprendere dinamiche relative popolazioni, i modelli di dispersione, preferenze pianta ospite, e altre interazioni ecologiche. Gli artropodi sono solitamente monitorati in natura da loro codifica con un segno unico e poi ri-raccogliere loro nel tempo e nello spazio di determinare le loro capacità di dispersione. Oltre ai tag fisici, come polvere o vernice colorata, vari tipi di proteine ​​sono dimostrati molto efficaci per la marcatura per artropodi ricerca ecologica. Le proteine ​​possono essere somministrati internamente e / o esternamente. Le proteine ​​possono poi essere rilevate su artropodi ricatturati con un saggio di immunoassorbimento specifiche proteina enzimatica (ELISA). Qui si descrive protocolli per esternamente ed internamente la codifica artropodi con proteine. Due semplici esempi sperimentali sono dimostrati: (1) un marchio di proteine ​​interno introdotto un insetto fornendo una dieta proteici e (2) un marchio proteina esterna topicamente unapplied di un insetto con un nebulizzatore medico. Abbiamo poi rapportiamo una guida passo-passo del panino e metodi ELISA indiretti impiegati per rilevare segni di proteine ​​sugli insetti. In questa dimostrazione, vari aspetti della acquisizione e l&#39;individuazione di marcatori proteici su artropodi per mark-release-ricattura, mark-cattura, e tipi di auto-mark-cattura di ricerca sono discussi, insieme con i vari modi in cui la procedura immunomarking è stato adattata per una vasta gamma di obiettivi di ricerca.

Interno marcatura: I risultati del test di ritenzione contrassegno interno sono mostrati nella Figura 2A. Il test ELISA valore di soglia critica calcolato era 0,054. Nel complesso (tutte e quattro le date seguenti combinati), gli insetti trattati senza proteine ​​hanno prodotto valori costantemente bassi ELISA (X = 0,038 ± 0,002, n = 80). Al contrario, tutti gli inset...

Le proteine sono spesso utilizzate per marcare gli artropodi per la ricerca sulla dispersione. Vengono dimostrati i metodi per la somministrazione di marcature proteiche interne ed esterne sugli artropodi. Vengono inoltre illustrate le tecniche di rilevamento dei marcatori proteici, sia attraverso saggi di immunoassorbimento enzimatico indiretto che a sandwich (ELISA).

Amministrazione e Rilevamento di segni di proteine ​​su artropodi per Dispersione ricerca

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ...

L'obiettivo generale di questa dimostrazione è quello di descrivere come marcare gli insetti con le proteine per la ricerca sulla dispersione o sulla migrazione. Inclusi in questa dimostrazione sono i metodi su come rilevare i segni mediante un sandwich o un test di immunoassorbimento enzimatico indiretto. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sulla dispersione degli insetti.Può essere utilizzato per studiare i modelli di migrazione degli insetti, le preferenze delle piante ospiti degli insetti e la diffusione delle specie invasive. I vantaggi di questa tecnica sono che il metodo di rilevamento è semplice ed economico. Adatto per un'elevata produttività e gli animali possono essere facilmente marcati direttamente nel loro habitat naturale.Generalmente le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà, perché sembra più difficile di quanto non sia, perché la maggior parte dei ricercatori sul campo non ha l'esperienza con questa semplice tecnica. Ho avuto l'idea di questo metodo per la prima volta nel 1989. Allevavamo predatori di insetti dagli occhi grandi con una dieta artificiale.Eravamo preoccupati che questi insetti non sareb

administering-detecting-protein-marks-on-arthropods-for-dispersal

Research

Ricerca

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Questo protocollo fornisce le istruzioni per la selezione clonale di cellule di linea e un saggio di bioluminescenza di calcio per analizzare la struttura-attività di sintetizzata neuropeptidi artropodi sul loro affini GPCR. Questo test può essere utilizzato per deorphanization recettore e struttura-attività degli studi rapporto di sintesi per la progettazione analogica e peptide / farmaco-lead scoperta.

Un saggio di calcio bioluminescenza di analisi funzionale del Mosquito ( Aedes aegypti) E Tick ( Rhipicephalus Microplus) G recettori accoppiati alla proteina

Un metodo per rapidamente volatili ospitanti schermo vegetali mediante la misurazione della risposta elettrofisiologica dei orangeworm ombelico adulti...

Bioassay Electroantennographic come strumento di screening per Volatili piante ospiti

Questo video dimostra la visualizzazione delle interazioni proteina-proteina alla giunzione neuromuscolare di Drosophila (NMJ) utilizzando il Proximity Ligation Assay (PLA). Dopo aver isolato le pareti corporee, le proteine interagenti vengono sondate con anticorpi primari e anticorpi secondari coniugati con PLA. La vicinanza delle proteine interagenti facilita la legatura delle sonde con oligonucleotidi connettori, formando DNA circolare, che viene poi amplificato dall'amplificazione del...

Rilevamento delle interazioni proteina-proteina nelle larve di Drosophila utilizzando un saggio di legatura di prossimità

Questo protocollo dimostra come Proximity legatura test può essere utilizzato per rilevare in situ interazioni proteina-proteina in Drosophila larvale neuromuscolare giunzione. Con questa tecnica, dischi grandi e Hu-li Shao tai sono presenti per formare un complesso in corrispondenza della zona postsinaptico, un'associazione precedentemente identificato mediante co-immunoprecipitazione.

Rilevamento di In Situ Complessi proteina-proteina del Drosophila Larvale neuromuscolare Junction Utilizzando prossimità legatura Assay

La capacità di rilevare con precisione le trascrizioni o proteine nei tessuti della drosofila è fondamentale per lo studio della loro abbondanza e localizzazione relazionati al processo di sviluppo. Ecco la descrizione di una procedura semplice per dissecare pupale ali. Queste ali possono essere utilizzate come campioni in diverse tecniche (immunohistochemistry, analisi di PCR, ecc.).

Un metodo rapido ed efficiente per sezionare Pupal ali della drosofila adatto per Immunodetections o analisi di PCR

Questo protocollo descrive i passaggi per utilizzare il nuovo software, SwarmSight, per il monitoraggio di frame-by-frame di posizioni dell'antenna e proboscide dell'insetto dal video fotocamera web convenzionale utilizzando computer convenzionali. Il software gratuito, open-source elabora frame circa 120 volte più veloce di esseri umani e si esibisce al meglio di precisione umano.

SwarmSight: Monitoraggio in tempo reale dei movimenti di Antenna dell'insetto e proboscide estensione Reflex utilizzando una preparazione comune e Hardware convenzionali

Descriviamo come quantificare gli artropodi delle abitazioni delle foglie sigillando le foglie e la fine dei rami in un sacchetto, tagliando e congelando il materiale insaccato e risciacquando il materiale precedentemente congelato in acqua per separare gli artropodi dal substrato per la quantificazione.

Un metodo per quantificare gli artropodi Foliage-Dwelling

Il presente protocollo descrive un metodo per raccogliere una quantità sufficiente di saliva dagli insetti che succhiano il piercing usando un mezzo artificiale. Questo è un metodo conveniente per raccogliere la saliva degli insetti e studiare la funzione salivare sul comportamento di alimentazione degli insetti e sulla trasmissione del virus trasmesso da vettori.

Metodo sandwich a membrana a due strati per la raccolta della saliva di Laodelphax striatellus

Descriviamo un metodo per raccogliere in modo efficiente l'emolinfa quantificabile da piccoli artropodi per analisi successive.

Un metodo preciso e quantificabile per raccogliere emolinfa da piccoli artropodi

Sono descritte le procedure per studiare i comportamenti di sondaggio e ingestione delle zanzare Culex tarsalis sulle mani umane utilizzando l'elettropenetragrafia AC-DC.

Elettropenetragrafia AC-DC per lo studio dei comportamenti di sondaggio e ingestione delle zanzare Culex tarsalis sulle mani umane

Questo articolo descrive un protocollo efficiente di dissezione immaginale del disco e colorazione degli anticorpi, economico con i reagenti e facilita la gestione di dischi immaginari in piccole quantità.

Dissezione su piccola scala e colorazione di anticorpi dei dischi immaginari occhio-antenna e alare da Drosophila melanogaster

Impara le tecniche di marcatura proteica su artropodi per studiare la dispersione e la migrazione degli insetti. Questo metodo utilizza saggi ELISA per rilevare i segni in modo semplice ed economico direttamente in habitat naturali.

Amministrazione e Rilevamento di segni di proteine ​​su artropodi per Dispersione ricerca

Esplora altri video

Amministrazione e Rilevamento di segni di proteine su artropodi per Dispersione ricerca