Name: Transarteriosa somministrazione di oncolitici virus per locoregionale Terapia delle ortotopico HCC in Rats (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: Impara la somministrazione transarteriosa di virus oncolitici per la terapia locoregionale dell'epatocarcinoma ortotopico nel ratto. Questa tecnica consente di raggiungere alte titolazioni virali nelle lesioni tumorali.

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Questo lavoro è supportato dai sottoprogetti SFB 824 C6 e C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), German Research Foundation, Bonn, Germania.

Nota: sono state eseguite le seguenti operazioni in conformità con le linee guida della nostra istituzione e il governo locale di Baviera, in Germania. Tutti i tentativi di riprodurre questo protocollo devono essere effettuati in aderenza con le linee guida locali per il trattamento umano degli animali, come dettato dalla cura degli animali locale e comitato uso. Ad esempio, molti istituti richiedono che guanti sterili sono indossati durante l&#39;intervento roditore. Inoltre, il lavoro con i virus deve essere effettuata secondo le normative locali, facendo attenzione per la sicurezza personale ed ambientale. Si deve prestare attenzione al corretto smaltimento dei rifiuti contaminati e per pulire gli strumenti e spazio di lavoro (ad esempio, in autoclave e la pulizia con un disinfettante antivirale appropriata in base alle istruzioni del produttore). 1. Preparativi prima dell&#39;intervento chirurgico Beginning <ol><li> Sterilizzare gli strumenti chirurgici (vale a dire, in autoclave). </li><li> Diluire il virus al approprconcentrazione iate, che variano a seconda della tossicità del virus specifico utilizzato e la suscettibilità del ceppo di ratto. Nota: Per esempio, quando si utilizzano virus della stomatite vescicolare nei ratti maschi Buffalo, di solito Iniettare 10 7 PFU in un volume 1 ml, che è la dose massima tollerata in quel modello. <ol><li> Precompilare il virus (utilizzando una tecnica asettica) in 1 ml siringhe, aghi e allegare 30 G, avendo cura di eliminare l&#39;aria dalla siringa e l&#39;ago. </li></ol></li><li> Preparare lo spazio chirurgico con tutti i materiali e le attrezzature necessarie, e spruzzare la zona con etanolo per disinfettare. Riempire un piccolo recipiente con soluzione salina sterile (0,9% NaCl) per inumidire i tamponi di garza e applicatori con punta in cotone. </li></ol> 2. Preparazione del Rat <ol><li> Somministrare un analgesico (come specificato dalla commissione cura degli animali e uso locale), al appropriata dose di 30 min prima di iniziare la procedura chirurgica. Per esempio,somministrare una dose elevata di metamizolo (100-200 mg / kg). </li><li> Anestetizzare il topo mediante inalazione (isoflurano) o iniettabili (cioè, una miscela di medetomidina (0,15 mg / kg), midazolam (2 mg / kg), e fentanil (0,005 mg / kg), noto anche come MMF) anestesia. Amministrare isolflurane attraverso un vaporizzatore al 1-3% e regolare come necessario per mantenere la respirazione normale e la frequenza cardiaca. <ol><li> Prima di procedere, assicurarsi che il ratto è completamente sedato e in grado di sentire dolore pizzicando il rilievo del piede e osservando una reazione. </li><li> Applicare una pomata occhio veterinaria per prevenire la secchezza durante l&#39;anestesia. </li></ol></li><li> Radere la zona addominale dallo sterno verso il basso per appena sopra i genitali con un piccolo tagliatore di capelli veterinaria. Fare attenzione per ottenere una rasatura senza ferire la pelle. </li><li> Fissare il ratto al letto chirurgico con del nastro sulla zampe anteriori e posteriori, e, se si utilizza l&#39;anestesia per inalazione, mettere il muso in un cono di dimensioni adeguate. Posizionare una piastra elettricasotto il topo per mantenere la temperatura corporea. Disinfettare la zona addominale utilizzando un disinfettante grado chirurgico, seguito da un risciacquo di alcol e l&#39;applicazione di una vernice antisettica. </li></ol> 3. laparotomia <ol><li> Usando un piccolo bisturi curvo, ad esempio # 15, fare una piccola incisione verticale nello strato pelle direttamente lungo la linea mediana. Estendere l&#39;incisione fino al processo xifoideo. Avanti, incidere lo strato muscolare delicatamente sollevando con un paio di pinze Adson per fare un&#39;incisione bisturi, e quindi estendere l&#39;incisione fino al processo xifoideo con le forbici chirurgiche. Fare attenzione a non forare organi della cavità addominale o danneggiare i piccoli vasi su entrambi i lati del processo xifoideo. </li><li> Posizionare un divaricatore attraverso l&#39;addome per diffondere il muscolo e pelle ed esporre l&#39;intera zona addominale. </li><li> Inumidire due 7,5 x 7,5 cm 2 tamponi di garza con soluzione fisiologica sterile e diffondere uno nella parte superiore della chirurgicaapertura ed una parte inferiore, come mostrato nella Figura 2A. </li></ol> 4. Isolamento dell&#39;arteria epatica <ol><li> Utilizzando due tamponi di cotone imbevuto applicatori inumiditi con soluzione fisiologica sterile, sollevare delicatamente l&#39;intestino e cieco fuori della cavità addominale, e metterli sul tampone di garza inferiore. Piegare la garza sopra per mantenere gli organi umido e di tenerli fuori del modo. </li><li> Utilizzando due tamponi di cotone inumiditi applicatori, sollevare delicatamente il lobo epatico laterale sinistro, che sarà il lobo più predominante in considerazione in questa fase. Vibrazione lobo verso l&#39;alto, e, utilizzando un piccolo paio di forbici primavera, tagliare la membrana fibrosa sul lato inferiore del lobo, permettendo il lobo di essere completamente capovolta verso l&#39;alto e riposo sopra il tampone di garza precedentemente posizionato. Piegare il tampone di garza sopra il lobo per tenerlo in posizione. </li><li> Continuare con la prossima lobo (caudato anteriore), che è ora il lobo più anteriore in vista. con esimoe aiuto di un microscopio da dissezione e pinza sottile, sezionare la sottile membrana che circonda il lobo per rilasciarlo e farlo liberamente capovolto verso l&#39;alto. Posizionare il lobo sotto il tampone di garza insieme con il lobo laterale sinistro. </li><li> Osservare il lobo posteriore caudato, che sarà ora visibile. Ripetere il passaggio 4.3 di sezionare completamente il caudato lobo posteriore e flip verso l&#39;alto e dentro la garza con i lobi del fegato precedentemente posizionati. </li><li> Appena sotto la posizione originaria del lobo caudato, trovare l&#39;arteria epatica comune, che sarà ora visibile e facilmente riconoscibile per la sua forte pulsazioni. Dopo l&#39;arteria verso destra anatomica, osservare il materiale membranoso spessore oscurare le arterie epatiche gastroduodenali e propri da vista. Utilizzando una pinza sottile, sollevare questo materiale e delicatamente strappare, avendo cura di evitare eventuali piccoli vasi in questo settore. Usare tamponi di cotone applicatori per fermare qualsiasi emorragia che potrebbero verificarsi. <ol><li> Individuare l&#39;unarami rterial, che sarà ben visibile con l&#39;aiuto di un microscopio da dissezione quando le membrane siano correttamente sezionati. </li></ol></li><li> Utilizzando due fini, pinze atraumatiche, sezionare con cura l&#39;arteria epatica comune, l&#39;arteria gastroduodenale, e l&#39;arteria epatica adeguata in modo tale che essi sono liberati dalle membrane che circondano (Figura 2b). </li></ol> 5. Preparazione della Artery iniettabile <ol><li> Passare un Prolene di sutura 7-0 sotto l&#39;arteria gastroduodenale, e utilizzare un micro-ago-titolare di legare una legatura permanente alla fine distale, appena sopra la biforcazione (vedi Figura 1 per il corretto posizionamento). Attendere circa 2 pollici di materiale di sutura rimanenti sulle estremità, e bloccare con un supporto dell&#39;ago per tirare l&#39;arteria insegnato, come in Figura 2C. </li><li> Mettere un piccolo morsetto sulla arteria epatica comune per bloccare temporaneamente il flusso di sangue (Figura 2C). Nota: Questo è important evitare sanguinamento massivo volta l&#39;ago viene rimosso dalla arteria. Inoltre, il blocco del flusso di sangue arterioso permette la somministrazione virus lento e migliore efficienza di trasduzione. <ol><li> Importante: Lavorare velocemente per limitare la quantità di tempo che il flusso di sangue viene arrestata - effettuare l&#39;iniezione e la successiva legatura dell&#39;arteria entro 5 minuti bloccaggio dell&#39;arteria epatica comune. </li></ol></li><li> Se possibile, aumentare l&#39;ingrandimento del microscopio da dissezione, tale che l&#39;arteria gastroduodenale è a fuoco e sembra abbastanza grande per inserire con precisione il ago G 30. Inserire l&#39;ago della siringa nel lume dell&#39;arteria gastroduodenale e lentamente spingere lo stantuffo. Nota: posizionamento corretto dell&#39;ago comporterà la soluzione iniettata scorre direttamente attraverso il corretto arteria epatica e verso il fegato. <ol><li> Eseguire l&#39;iniezione molto lentamente per massimizzare l&#39;efficienza di trasduzione. </li></ol></li> &lt;li&gt; Una volta che l&#39;intero volume di iniezione è stato somministrato, retrarre lentamente l&#39;ago dalla arteria. Nota: Non ci dovrebbero essere sanguinamento dal sito di iniezione. Nel caso che il sanguinamento si verifica, indica che il morsetto non è correttamente posizionato e deve essere regolato rapidamente. </li></ol> 6. chiusura <ol><li> Passare un secondo 7-0 Prolene sutura sotto l&#39;arteria gastroduodenale, e legare una seconda legatura permanente al di sopra del sito di iniezione. </li><li> Rimuovere la fascetta dalla arteria epatica comune. Verificare che il flusso di sangue attraverso l&#39;arteria epatica corretto verso il fegato è stata ripristinata. <ol><li> Tagliare le estremità delle legature. </li></ol></li><li> Verificare che non vi è alcun sanguinamento, prima di tornare l&#39;intestino e il fegato alla cavità addominale. Fare attenzione che l&#39;appendice viene restituito il suo orientamento originale. </li><li> Suturare la muscolo e pelle in strati separati utilizzando 4-0 Vicryl materiale di sutura con un ago curvo. luogo fissa Sus suture di circa 1 mm l&#39;uno dall&#39;altro e tirare con forza. <ol><li> Durante la fase di sutura, somministrare un analgesico come buprenorfina (0,05 mg / kg). </li></ol></li><li> Rimuovere ratto dall&#39;anestesia. Se è stato utilizzato isoflurano, il ratto dovrebbe riprendere conoscenza in pochi minuti. Se MMF è stato usato come una anestesia iniettabile, antagonizzare con un&#39;iniezione sottocutanea di atipamezolo (0,75 mg / kg), flumazenil (0,2 mg / kg), e naloxone (9.12 mg / kg), che invertire gli effetti dell&#39;anestesia e consentire agli animali di recuperare la coscienza entro 20 min. Mantenere ratti caldo con una lampada a raggi infrarossi riscaldamento durante la fase di risveglio iniziale. <ol><li> Non lasciare un animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere decubito sternale. </li><li> Non restituire un animale che ha subito un intervento chirurgico per la compagnia di altri animali fino alla completa guarigione. </li></ol></li><li> Monitorare ratti post-operatoria per i segni patologici di disagio, e followcon analgesici, come richiesto dalla commissione cura degli animali e uso locale. Ad esempio, la buprenorfina può essere somministrato a 0,05 mg / kg ogni 12 ore. </li></ol>

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<li>Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+newcastle+disease+virus+as+an+improved+oncolytic+agent+against+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma.</a> Mol Ther. 18, 275-284 (2010).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Sebbene l'iniezione intratumorale diretta sia senza dubbio il metodo più semplice per ottenere un'efficiente trasduzione tumorale di un singolo nodulo tumorale, l'infusione arteriosa epatica rappresenta una via di somministrazione ideale per colpire l'HCC multifocale e ortotopico. Questo metodo si è dimostrato sicuro ed efficace per il trattamento dell'HCC in ratti immunocompetenti con virus oncolitici. Inoltre, poiché i pazienti con HCC sono trattati di routine mediante applicazione transarteriosa di chemioembolizzazi...

Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il quinto tumore più diffuso in tutto il mondo, e la terza causa di morte per cancro, che lo rende un problema significativo di salute 1,2. Per i pazienti che non sono ammissibili per la resezione del tumore, o di quelli in attesa di trapianto di fegato, terapia locoregionale coinvolgendo embolizzazione transarteriosa (TAE) o transarteriosa chemioembolizzazione (TACE) sono applicati come standard cure palliative 3,4. Queste terapie sfruttano la caratteristica unica di doppia alimentazione di sangue nel fegato per cui i tumori sono alimentati quasi esclusivamente da epatica flusso di sangue arterioso, mentre il fegato circostante riceve la maggior parte del suo apporto di sangue dalla vena porta 5,6. A causa delle efficacies estremamente limitate di terapie stabilite per HCC, i virus oncolitici sono emersi come terapie alternative promettenti. JX-594, recentemente rinominato Pexa-Vec, è una timidina chinasi-cancellato vaccino vettore, armato di granulociti-macrophage fattore stimolante le colonie (GM-CSF), che ha completato la fase II della sperimentazione clinica per il carcinoma epatocellulare 7. Più di recente, un vescicolare vettore ricombinante virus della stomatite (VSV) che esprime l&#39;interferone-beta umano è entrato in una fase I di sperimentazione clinica per il carcinoma epatocellulare sorafenib-refrattario (NCT01628640). Come i virus oncolitici si avvicinano a ottenere l&#39;approvazione per l&#39;applicazione clinica per il carcinoma epatocellulare nei pazienti, la necessità di una efficace via di somministrazione di indirizzare la malattia multifocale è evidente. Mentre la consegna sistemica è in gran parte inefficace a causa di trasduzione del tumore inefficiente, applicazioni intratumorale potrebbe limitare l&#39;efficacia della terapia per il tumore iniettato, lasciando lesioni microscopiche uninjectable sensibili alla progressione della malattia. Abbiamo stabilito un metodo per isolare l&#39;arteria epatica nei ratti di somministrare la terapia virus oncolitici in maniera locoregionale per indirizzare HCC ortotopico. Abbiamo dimostrato che questa rotta amministrazione si traduce in sicurezza e effective trasduzione del multifocali noduli di HCC, con conseguente significativo prolungamento della sopravvivenza in topi immuno competenti 8-10. Qui, descriviamo il metodo di accesso, dissezione, e l&#39;iniezione nell&#39;arteria epatica nei ratti. Uno schema del procedimento è mostrato in Figura 1 (precedentemente pubblicato 9)

<table><tbody><tr><td>Tosatrici veterinarie</td><td>Aesculap</td><td>GT415</td><td>Piccolo rifinitore a batteria ideale per rimuovere il pelo dall'area chirurgica</td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Zeiss</td><td>Stemi SV6</td><td></td></tr><tr><td>30 G Aghi</td><td>Braun</td><td>4656300</td><td>30 G x &frac12; "</td></tr><tr><td>Siringhe da 1 ml Braun</td><td></td><td>9161406V</td><td>Siringa per tubercolina</td></tr><tr><td>Bisturi monouso</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td>#15 lama&nbsp;</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche standard</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13&nbsp;</td><td>Affilato/smussato, per l'apertura della pelle e dei muscoli</td></tr><tr><td>Pinza Adson</td><td>Fine Science Tools</td><td>1101-12</td><td>Con denti, per afferrare la pelle e il muscolo</td></tr><tr><td>Divaricatore Alm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17008-07</td><td>Con denti smussati, per allargare la cavità addominale aperta durante l'intervento chirurgico</td></tr><tr><td>Tamponi di garza</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>18504</td><td>7,5 cm x 7,5 cm, deve essere sterilizzato in autoclave prima dell'uso</td></tr><tr><td>Tamponi applicatori con punta in cotone</td><td>Lohmann & Rauscher</td><td>11970</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>Foreceps a punta fine</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td>0,4 mm, punta angolata, per la dissezione dell'arteria epatica</td></tr><tr><td>Forbici a molla Vannas</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>Per il taglio delicato</td></tr><tr><td>Micro-porta aghi</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td>Per legare l'arteria gastroduodenale</td></tr><tr><td>Porta aghi</td><td>Fine Science Tools</td><td>12005-15</td><td>Ganasce in carburo di tungsteno</td></tr><tr><td>7-0 Suture in prolene</td><td>Ethicon</td><td>8648H</td><td>Sutura in polipropilene con ago curvo, per legare l'arteria gastroduodenale</td></tr><tr><td>4-0 Suture in vicryl</td><td>Ethicon</td><td>V3040H</td><td>Con ago curvo montato</td></tr><tr><td>Lampada riscaldante a infrarossi</td><td>Beurer</td><td>IL11</td><td>Per il mantenimento della temperatura corporea dopo l'intervento</td></tr></tbody></table>

transarteriosa somministrazione di oncolitici virus per locoregionale terapia delle ortotopico hcc in rats

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Il carcinoma epatocellulare (HCC) è una malattia con opzioni terapeutiche limitate e prognosi infausta. Negli ultimi anni, le viroterapie oncolitiche si sono dimostrate strumenti potenzialmente potenti per combattere i tumori maligni. Grazie all'esclusivo doppio apporto di sangue nel fegato, è possibile applicare le terapie localmente ai tumori ortotopici del fegato, che sono prevalentemente alimentati dal flusso sanguigno arterioso. Abbiamo precedentemente dimostrato che la somministrazione arteriosa epatica di virus oncolitici determina un'efficienza di trasduzione sicura ed efficiente delle lesioni multifocali dell'HCC, con conseguente significativo prolungamento della sopravvivenza nei ratti immunocompetenti. Questa procedura imita da vicino l'applicazione dell'embolizzazione transarteriosa nei pazienti, che è la cura palliativa standard fornita a molti pazienti con HCC. La capacità di somministrare terapie tumorali attraverso l'arteria epatica nei ratti consente un modello preclinico altamente sofisticato per la valutazione di nuovi vettori virali in fase di sviluppo. Qui descriviamo il protocollo dettagliato per la microdissezione dell'arteria epatica per l'infusione di vettori virali oncolitici per il trattamento dell'HCC ortotopico.

Con l&#39;esperienza, un tasso di successo quasi il 100% (il che significa che l&#39;arteria è stato dissezionato successo e iniettata, e l&#39;animale sopravvissuto chirurgico) può essere raggiunto. Tuttavia, lo stato di salute del ratto prima dell&#39;intervento chirurgico (grado di carico tumorale, la funzione epatica sottostante, etc.) sarà ovviamente un ruolo nel risultato dell&#39;intervento chirurgico. Dopo l&#39;intervento chirurgico, i ratti può aspettare che una perdit...

Le viroterapie oncolitiche sono in fase di sviluppo come nuove terapie per il trattamento del carcinoma epatocellulare (HCC). Qui descriviamo un metodo per la terapia locoregionale dell'HCC tramite somministrazione arteriosa epatica del virus oncolitico.

Transarteriosa somministrazione di oncolitici virus per locoregionale Terapia delle ortotopico HCC in Rats

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

L'obiettivo generale di questo intervento chirurgico è somministrare una terapia oncolitica localizzata mediante infusione arteriosa epatica a lesioni di carcinoma epatocellulare ortotopico o HCC. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo dei virus oncolitici, ad esempio qual è l'efficacia di una terapia applicata a livello locoregionale nel trattamento dell'HCC ortotopico? Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente la somministrazione di titoli elevati di virus oncolitico a più lesioni di HCC.Un limite dell'amministrazione intratumorale o sistemica. Questa tecnica imita l'applicazione della chemioembolizzazione transarteriosa. Lo standard di cura per molti pazienti con carcinoma epatocellulare, che consente un'eccellente traduzione dei dati preclinici.Prima di iniziare l'intervento chirurgico, indossare l'apposita attrezzatura di protezione individuale e disinfettare l'area operatoria e l'equipaggiamento con etanolo al 70%. Diluire il virus alla concentrazione appropriata, in base alla sua tossicità e alla suscettibilità della ceppia di ratto utilizzata. Successivamente, riempire in anticipo siringhe da un millilitro con il virus diluito ed equipaggiare le siringhe con aghi da 30 Gauge, avendo cura di rimuovere eventuali bolle d'aria.Verificare che il ratto sia completamente sedato dall'assenza di risposta alla compressione della pianta del piede. Utilizzando un piccolo bisturi curvo, praticare una piccola incisione verticale nella cute, direttamente lungo la linea mediana, estendendo l'apertura fino al processo xifoidale. Successivamente, incidere lo strato muscolare nello stesso modo, avendo cura di non perforare gli organi della cavità addominale.Posizionare un retra­tto­re lungo l'addome per allargare il muscolo e la pelle, esponendo l'intera area addominale. Quindi inumidire due tamponi di garza di 7,5 per 7,5 centimetri con soluzione fisiologica e disporre un pezzo di garza nella parte superiore dell'apertura chirurgica e uno in quella inferiore. Per isolare l'arteria epatica, utilizzare innanzitutto due bastoncini di ovatta inumiditi per spostare delicatamente l'intestino e il cieco dalla cavità addominale sul tampone di garza inferiore, ripiegando la garza sugli organi per mantenerli umidi.Successivamente, sollevare delicatamente e ribaltare il lobo epatico laterale sinistro sulla garza superiore e utilizzare un piccolo paio di forbici a molla per tagliare la membrana fibrosa sulla faccia inferiore del lobo. Piegate la garza sopra il lobo per mantenerlo in posizione. Quindi, utilizzando un microscopio stereoscopico e pinzette fini, dissezionare la membrana sottile che circonda il lobo caudato interno e ribaltare il lobo sulla garza superiore.Posizionare il lobo caudato interno sotto la piega della garza insieme al lobo laterale sinistro, quindi dissezionare il lobo caudato posteriore nello stesso modo. Dopo aver posizionato il lobo caudato posteriore sotto la garza, individuare l'arteria epatica comune attraverso la sua marcata pulsazione. Seguendo l'arteria verso destra in senso anatomico, utilizzare pinzette fini per rimuovere il tessuto membranoso spesso che oscura le arterie gastroduodenale ed epatica propria.Fermare qualsiasi sanguinamento con un applicatore di cotone. Quindi utilizzare due pinze fini atraumatiche per dissezionare con attenzione le arterie epatica comune, gastroduodenale ed epatica propria dalle membrane circostanti. Per iniettare l'arteria epatica, passare prima un filo di sutura in prolene 7-0 sotto l'arteria gastroduodenale e utilizzare un portaghi microchirurgico per praticare una legatura permanente all'estremit&agrave; distale dell'arteria appena al di sopra della biforcazione, lasciando circa due pollici di materiale di sutura su ciascuna estremit&agrave;.Successivamente, posizionare una piccola pinza sull'arteria epatica comune per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno. Entro cinque minuti dal posizionamento della pinza, aumentare l'ingrandimento fino a quando l'arteria gastroduodenale sarà perfettamente a fuoco e apparirà sufficientemente ingrandita per inserire con precisione l'ago. Quindi inserire l'ago della siringa nell'area luminale dell'arteria gastroduodenale e premere lentamente lo stantuffo per massimizzare l'efficienza di trasduzione.Una volta somministrato l'intero volume di iniezione, ritirare lentamente l'ago dall'arteria e passare una seconda sutura in prolene 7-0 al di sotto dell'arteria gastroduodenale. Praticare una seconda legatura permanente al di sopra del sito di iniezione e rimuovere il clamp dall'arteria epatica comune. Verificare che il flusso ematico attraverso l'arteria epatica propria in direzione del fegato sia stato ripristinato, quindi tagliare le estremità libere delle legature.Verificare l'assenza di emorragia interna. Quindi riposizionare i tessuti esterni nella cavità addominale. Utilizzando vicryl 4-0 e un ago curvo, suturare il muscolo e la pelle in strati separati con punti continui distanziati approssimativamente di un millimetro.Quindi monitorare l'animale fino a quando non si è completamente ripreso. La cinetica della replicazione virale intratumorale dipende dal virus. Ad esempio, la replicazione del virus della stomatite vescicolare raggiunge il picco entro un giorno dall'iniezione.Con numerosi foci virali, un genitore esclusivamente all'interno dei noduli di carcinoma epatocellulare degli animali iniettati. Al contrario, il virus della malattia di Newcastle mostra una cinetica prolungata di replicazione virale, con titoli virali massimi al quinto giorno dall'iniezione. A causa della specificità tumorale intrinseca dei virus, l'agente patogeno viene rapidamente eliminato dal tessuto epatico normale circostante.Inoltre, l'analisi morfometrica di noduli tumorali trattati con vettore del virus della stomatite vescicolare selezionati casualmente dimostra che l'efficienza di trasduzione tumorale non correla con la dimensione del tumore. L'amministrazione transarteriosa epatica di microsfere di amido degradabili, somministrate contemporaneamente alla soluzione virale, determina un'embolizzazione quasi completa dei noduli tumorali, esercitando al contempo un effetto minimo sulla perfusione del tessuto epatico normale. Come ulteriormente dimostrato da queste immagini dinamiche con risonanza magnetica a contrasto ottenute utilizzando un agente di contrasto a base di gadolinio.Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in 20 minuti, se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di avere tutto preparato in anticipo prima di somministrare l'anestesia, al fine di minimizzare il tempo necessario per l'intervento. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come dissezionare l'arteria epatica e prepararla per l'iniezione di soluzioni virali oncolitiche per la terapia locoregionale del carcinoma epatocellulare (HCC).Non dimenticare che lavorare con virus può essere estremamente pericoloso e che è sempre necessario adottare precauzioni, come indossare indumenti protettivi personali e disinfettare correttamente l'area di lavoro e gli strumenti durante l'esecuzione di questa procedura.

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Imaging PET/RM non invasivo in un modello murino ortotopico di carcinoma epatocellulare

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