La valutazione transcutanea della funzione renale nei roditori Conscious

L'obiettivo generale di questa procedura è misurare per via transcutanea la funzionalità renale senza la necessità di campioni di sangue o ulteriori analisi sperimentali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della nefrologia, come ad esempio, qual è l'impatto del danno renale o di interventi terapeutici specifici sulla funzione renale. I principali vantaggi di questa tecnica sono che è minimamente invasiva e che i risultati sono pronti per l'analisi immediatamente dopo la misurazione senza successive manipolazioni sperimentali.

Questa tecnica può essere utilizzata per studiare praticamente qualsiasi condizione renale in diverse specie. Inoltre, è utile per eseguire misurazioni sequenziali all'interno di un animale. Prima di iniziare la procedura, confermare il corretto livello di anestesia pizzicando le dita dei piedi.

E usa un rasoio elettrico per rimuovere un'area di tre x sei centimetri di pelo dal basso addome posteriore dell'animale. Rimuovere il pelo rimanente con la crema depilatoria. Dopo due o tre minuti, lavare accuratamente la pelle denudata poiché la crema potrebbe emettere una certa fluorescenza di fondo.

Quindi, posizionare il dispositivo ottico per la misurazione della funzionalità renale su un lato di un cerotto biadesivo. Posizionando la parte ottica sopra la finestra trasparente e lasciando il lato opposto coperto da pellicola protettiva. Quindi, attacca un pezzo di toppa biadesiva della stessa dimensione alla batteria.

Prima di fissare il dispositivo, pesare l'animale. Quindi, tagliare un pezzo di benda di garza elastica tubolare circa un centimetro più lungo della larghezza del cerotto biadesivo. E tira la benda sopra la testa dell'animale.

Successivamente, posiziona l'animale in posizione supina, lasciando scoperta l'area rasata. E collegare il connettore della batteria alla porta corrispondente sul dispositivo. Se la batteria è stata collegata correttamente, il dispositivo inizierà a lampeggiare.

Rimuovere la pellicola protettiva dall'altro lato della toppa attaccata alla batteria. E montare la batteria sulla superficie superiore del dispositivo. Ora, rimuovi il coperchio protettivo dal cerotto del dispositivo operativo e tenendo i bordi fino a quando non è fissato correttamente, posiziona il cerotto sulla zona rasata sul dorso dell'animale.

Coprire il dispositivo con la benda di garza elastica tubolare, avendo cura di distendere completamente la benda sull'addome facendo in modo che gli arti possano muoversi liberamente. Un buon fissaggio è fondamentale per evitare artefatti di movimento durante la misurazione, quindi si prega di fare attenzione che il dispositivo sia fissato correttamente prima dell'inizio della misurazione. Quando la benda è in posizione, applicare una striscia di nastro adesivo di dimensioni uguali sul dispositivo in modo che copra i fili della batteria.

E misura la lettura in background da uno a tre minuti senza esercitare pressione sul dispositivo. Per somministrare la FITC-sinistrin, dopo aver riscaldato la coda dell'animale per dilatare le vene della coda, iniettare per via endovenosa il volume appropriato di soluzione madre di FITC-sinistrina. Quindi, posiziona con cura l'animale da solo nella sua gabbia domestica senza acqua o un coperchio metallico.

Facendo attenzione a non introdurre artefatti di movimento. Quindi registrare la fluorescenza emessa dalla FITC-sinistrina con il dispositivo ottico per il periodo di tempo sperimentale appropriato. Al termine del periodo di registrazione, rimuovere con cura il nastro adesivo seguito dalla benda tubolare.

Quindi staccare delicatamente il cerotto biadesivo dalla pelle. E riporta l'animale nella sua normale gabbia di casa. Per leggere i dati, scollegare la batteria dal dispositivo e rimuovere la toppa adesiva.

Quindi utilizzare un cavo micro USB per collegare il registratore ottico a un computer e scaricare i dati con il software appropriato. Infine, utilizzare l'apposito software per generare la curva cinetica di eliminazione secondo i protocolli software. E apri il file CSV punto contenente i dati.

Quando la funzione renale è compromessa, l'emivita della FITC-sinistrina aumenta. A causa della ridotta escrezione della sostanza e dell'aspetto della curva cambia. In genere, la curva misurata non torna al livello di fondo e si osserva un aumento dell'area sotto la curva.

Nello stesso animale, le misurazioni pre e post lesione dimostrano un aumento dell'intensità massima di fluorescenza a causa di un accumulo del marcatore causato dalla sua ridotta escrezione. Ad esempio, in presenza di insufficienza renale, la curva FITC-sinistrina misurata per via transcutanea mostra uno stato stazionario a causa della funzione gravemente compromessa del tessuto renale. Inoltre, il dispositivo miniaturizzato è stato utilizzato per misurare con successo la funzione renale in diversi ceppi di roditori con una varietà di diversi stati di salute.

Sottolineando l'idoneità e la sensibilità del dispositivo per rilevare i cambiamenti dovuti alla malattia renale e all'invecchiamento. Una volta padroneggiato, l'esperimento può essere completamente impostato in 50 minuti con almeno quattro animali all'ora in grado di essere valutati da un singolo sperimentatore. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di proteggere il dispositivo elettronico rimuovendo l'alimentazione idrica e qualsiasi struttura sporgente durante il periodo di misurazione.