Metodi per studiare Mrp4 contenenti complessi macromolecolari nel regolamento di Fibroblasto migrazione
May 19th, 2016
MRP4 regola varie ciclici eventi di segnalazione nucleotidi-dipendenti, tra cui un ruolo di recente chiarito nella migrazione cellulare. Descriviamo un approccio diretto, ma multiforme per svelare i bersagli molecolari a valle di MRP4 con conseguente identificazione di un interattoma MRP4 unico che gioca un ruolo chiave nella regolazione messa a punto della migrazione dei fibroblasti.
L'obiettivo generale di questa procedura sperimentale è quello di osservare la regolazione ciclica AMP dipendente della migrazione dei fibroblasti da parte di MRP4. La microscopia ad alto contatto può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia cellulare. Ad esempio, oltre a conferire resistenza ai germi, MRP4 può anche regolare processi fisiologici come la migrazione cellulare modulando la concentrazione di nucleotidi ciclici intracellulari. Il vantaggio principale dell'imaging FRET che tenteremo oggi è quello di consentire il monitoraggio delle dinamiche intracellulari dell'AMP ciclico e della chinasi AMP dipendente ciclica in tempo reale. L'implicazione della microscopia ad alto contatto è che può essere utilizzata nella scoperta di farmaci. Una volta che il sistema è configurato, tutto lo strumento è impostato, non è coinvolto alcun intervento umano in questo compito basato su targa. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla migrazione cellulare, può essere applicato ad altri sistemi, come il nonparturbing delle cellule lipe, l'imaging ad alto contatto dell'uccisione delle cellule immunitarie, la diluizione più fredda, l'angiogenesi, la proliferazione cellulare, la chemiotassi e la fillite trattativa. Per preparare le cellule per la microscopia ad alto contatto sotto una cappa di coltura cellulare, utilizzare una soluzione di fibronectina all'uno per cento in PBS per rivestire i pozzetti di una piastra a 96 pozzetti. Incubare la piastra in un incubatore a CO2 a 37 anni
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Panoramica
MRP4 è coinvolto nella regolazione degli eventi di segnalazione dipendenti da nucleotidi ciclici e svolge un ruolo cruciale nella migrazione cellulare. Questo studio identifica un interattome MRP4 unico che è essenziale per la regolazione della migrazione dei fibroblasti.
Componenti chiave dello studio
Area di scienza
- Migrazione cellulare
- Vie di segnalazione
- Biologia dei fibroblasti
Sfondo
- MRP4 è un trasportatore che influenza varie vie di segnalazione.
- Comprendere il ruolo di MRP4 può fornire informazioni sui meccanismi di migrazione cellulare.
- I fibroblasti sono attori chiave nella riparazione e rigenerazione dei tessuti.
- Identificare gli interatori MRP4 può rivelare nuovi bersagli terapeutici.
Obiettivo dello studio
- Chiarire i bersagli molecolari a valle di MRP4.
- Esplorare il ruolo di MRP4 nella migrazione dei fibroblasti.
- Caratterizzare l'interattome MRP4.
Metodi utilizzati
- Identificazione degli interatori MRP4 attraverso saggi biochimici.
- Analisi delle vie di segnalazione influenzate da MRP4.
- Saggi di migrazione cellulare per valutare i risultati funzionali.
- Utilizzo di tecniche di biologia molecolare per studiare le interazioni proteiche.
Risultati principali
- Identificazione di un interattome unico associato a MRP4.
- Dimostrazione del ruolo di MRP4 nella regolazione della migrazione dei fibroblasti.
- Informazioni sulle vie di segnalazione modulate da MRP4.
- Potenziali implicazioni per strategie terapeutiche mirate alla migrazione cellulare.
Conclusioni
- MRP4 è un regolatore critico della migrazione dei fibroblasti.
- L'interattome di MRP4 fornisce nuove strade per la ricerca.
- Comprendere il ruolo di MRP4 può portare a progressi nelle terapie di riparazione dei tessuti.
