L'audacia, l'aggressività e saggi shoaling per Zebrafish comportamentali Sindromi

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di standardizzare la metodologia utilizzata per osservare, analizzare e interpretare le sindromi comportamentali di audacia, aggressività e secchezza nel pesce zebra. Direttamente, questo metodo può rispondere a domande di teoria evoluzionistica, struttura e dinamica della popolazione. Se combinato con tecniche interdisciplinari può essere applicato a campi come la farmacologia, la tossicologia, la genetica comportamentale e l'endocrinologia.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che la combinazione di audacia, aggressività e branco comprende molti comportamenti ben studiati e facilmente quantificabili nel pesce zebra. E ogni saggio può essere modificato per rispondere a domande sperimentali alternative. Iniziate separando casualmente il pesce zebra nel rapporto appropriato tra pesce focale e pesce stimolo.

Conservare tutto il pesce nelle rastrelliere Zebrafish con un rigoroso ciclo luce/buio di 12-12 ore. Somministrare cibo in scaglie a tutti i pesci focali e stimolanti ogni giorno. E dai da mangiare ai gamberetti in salamoia solo una volta alla settimana nei giorni di non ricerca.

Successivamente, allestire tre serbatoi di analisi in laboratorio. Uno per l'aggressività, l'audacia e la branca in luoghi che riducono al minimo la possibilità di stimoli esterni avversi. E lascia spazio sufficiente per una videocamera per catturare l'intero serbatoio.

Imposta la videocamera, in modo che abbia abbastanza chiarezza per visualizzare le etichette della vasca, così come per distinguere i comportamenti sottili del pesce focale. Mantenere la telecamera nella stessa posizione con una visione completa del serbatoio durante tutte le registrazioni dei saggi comportamentali, al fine di ridurre al minimo le differenze involontarie nel punteggio comportamentale a seguito di registrazioni differenziali. Successivamente, definire uno schema di etichettatura per tenere traccia della data, del numero di pesci e del numero di test per tutti i test comportamentali.

Etichettare l'esterno del serbatoio con del nastro adesivo in vista della telecamera. Registra queste informazioni in un quaderno di laboratorio per una rapida consultazione e un futuro controllo di qualità. Infine, allestire una vasca di acclimatazione che verrà utilizzata tra tutti i saggi, nonché subito dopo che gli individui sono stati rimossi dal rack di alloggiamento.

Inizia procurandoti un serbatoio rettangolare da 19 litri, che misura 30 x 15 x 10 centimetri. Equipaggiare il carro armato con divisori esterni opachi che circondano tre lati del carro armato di aggressione, lasciando la parte anteriore esposta per la visione per ridurre gli stimoli esterni indesiderati. Dividere il serbatoio con i segni esterni in quattro quadranti rettangolari uguali.

Usa il mastice siliconico per fissare uno specchio all'interno del quadrante inferiore sinistro, inclinato di 22,5 gradi, formando un triangolo rettangolo contro il lato sinistro del serbatoio. Avere acqua fresca e invecchiata, preriscaldata a 27,5-28,5 gradi Celsius, pronta da aggiungere al serbatoio di aggressione per garantire che la temperatura dell'acqua nel serbatoio di acclimatazione e nel serbatoio di aggressione sia entro due gradi Celsius dal rack di alloggiamento. Prendete a coppa un pesce focale dalla rastrelliera e trasferitelo in una vasca di acclimatazione separata dove si acclimaterà per 10 minuti.

Verificare che la videocamera sia focalizzata sul serbatoio del saggio di aggressione e premere il tasto di registrazione. Quindi, trasferire immediatamente il pesce focale tramite coppettazione dalla vasca di acclimatazione alla vasca di aggressione. Registra il carro armato di aggressione per 10 minuti e 30 secondi.

Quindi, rimettete i pesci focali dalla vasca di aggressione nella vasca di acclimatazione. Quando si guarda la registrazione dopo che il test è stato completato, attendere 30 secondi dopo che il pesce è stato introdotto nella vasca come ulteriore periodo di acclimatazione prima di valutare i comportamenti. Infine, assegnare un punteggio a un singolo test di aggressività almeno due volte fino a quando il test non viene valutato con un alto accordo tra le iterazioni.

Per impostare il saggio di audacia, procurarsi prima una piccola vasca trapezoidale da 1,5 litri, alta 15 centimetri con una parte superiore e inferiore di 26,5 centimetri e una larghezza di 6 centimetri. Avvolgere la carta opaca attorno a tre lati del serbatoio e lasciare la parte anteriore esposta per la visualizzazione. Posizionare un singolo pezzo sottile di nastro adesivo esterno al serbatoio per delimitare la parte superiore da quella inferiore del serbatoio.

Quindi, assicurarsi che la temperatura dell'acqua nel serbatoio di grassetto sia entro due gradi Celsius dal rack dell'alloggiamento. Trasferisci il pesce focale dalla rastrelliera di stabulazione alla vasca di acclimatazione e lascialo acclimatare per 10 minuti. Assicurarsi che la videocamera sia focalizzata sul test di grassetto e premere il pulsante di registrazione sul dispositivo.

Trasferire immediatamente il pesce focale dalla vasca di acclimatazione alla vasca di audacia e registrare per otto minuti e 30 secondi. Quando si guarda la registrazione dopo che il test è stato completato, prevedere un ulteriore periodo di acclimatazione di 30 secondi dopo che il pesce è stato introdotto nella vasca prima di segnare. Infine, assegna un punteggio a un singolo test di audacia almeno due volte, fino a quando il test non viene valutato con un alto accordo tra le iterazioni.

Per impostare il saggio di shoaling, procurarsi un serbatoio da 76 litri che ha tre scomparti divisi da due divisori in vetro sigillati con mastice siliconico. Esternamente, usa del nastro adesivo per contrassegnare due zone di preferenza che si trovano a sei virgola tre cinque centimetri da ciascuno dei divisori di vetro che designano ciascuna zona di stimolo. Applicare pareti divisorie opache esterne attorno a tre lati della vasca di raccolta e lasciare la parte anteriore esposta per la visualizzazione.

Successivamente, selezionare i banchi di stimolo per acclimatarsi per almeno 12 ore prima del test e farli rimanere nella vasca di banco per tutto il corso dell'esperimento. Trasferire il pesce focale dal rack di stabulazione in una vasca di acclimatazione separata tramite coppettazione, dove si acclimaterà per 10 minuti. Quindi trasferire, mediante coppettazione, il pesce focale dalla vasca di acclimatazione al compartimento centrale della vasca di banchina.

Prevedere un periodo di acclimatazione di 10 minuti prima di un periodo di osservazione di 10 minuti dal vivo, in cui i pesci in branco sono definiti come appartenenti alla zona di preferenza nella camera che ospita il banco bersaglio. Successivamente, quantifica il tempo trascorso in ciascuna zona di preferenza, nonché il tempo trascorso nel volume centrale. Infine, una volta completati i saggi, trasferire i pesci in una vasca terminale separata che fungerà da vasca di destinazione finale per tutti gli individui focali utilizzati.

Questo protocollo ha esaminato le associazioni coerenti nell'aggressività, nell'audacia e nei comportamenti di branco del pesce zebra per determinare se fosse presente una sindrome comportamentale. Qui, la componente uno rappresenta i comportamenti di aggressività, mentre la componente due è associata ai comportamenti di audacia. Poiché i comportamenti di aggressività e audacia non sono rappresentati dalla stessa componente, si può concludere che vi è un'assenza di sindrome comportamentale da audacia e aggressività nel pesce zebra.

Una volta padroneggiato, l'intero protocollo di un pesce focale può essere eseguito in 70 minuti. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di familiarizzare se stessi e il proprio team con ogni comportamento target al fine di ridurre al minimo la distorsione dell'osservatore. Segnare la stessa registrazione video più volte aumenterà anche la fiducia nei tuoi risultati.

Seguendo questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi in campo farmacologico, genetico o fisiologico per rispondere a ulteriori domande su quali fattori interni ed esterni influenzano le sindromi comportamentali. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come osservare, analizzare e interpretare l'audacia, l'aggressività, le sindromi comportamentali da banco nel pesce zebra. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti!