Name: Laudacia, laggressività e saggi shoaling per Zebrafish comportamentali Sindromi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Impara a standardizzare l'osservazione di audacia, aggressività e shoaling in Danio rerio per studi di neuroscienza e genetica comportamentale. Questo metodo facilita confronti tra ricerche diverse.

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Questo lavoro è stato supportato da una borsa di studio per l'istruzione dell'Howard Hughes Medical Institute e da una sovvenzione interna del capitolo della Saint Joseph's University di Sigma Xi. Vorremmo anche ringraziare i tre revisori anonimi che hanno contribuito a rafforzare il protocollo e le interpretazioni.

Le seguenti metodologie per la custodia, la cura e lo studio di zebrafish sono stati approvati dal di San Giuseppe Università IACUC. 1. Zebrafish alloggio e cure <ol><li> Ottenere il pesce zebra soggetto da un fornitore locale, o da popolazioni catturati in natura. Si prega di notare che gli alloggi il pesce zebra è soggetto alle linee guida IACUC e permessi aggiuntivi sono necessari per abitazioni popolazioni catturati in natura. </li><li> Identificare e zebrafish separata a seconda del sesso. In alternativa, saltare questo passaggio o sostituirlo con un diverso metodo di separazione basato sull&#39;ipotesi di studio. NOTA: caratteristiche sessuali sono difficili da determinare in zebrafish, soprattutto nelle femmine. Fare riferimento a queste linee guida 10 o manuali online utili per distinguere il sesso. </li><li> Casualmente separare le popolazioni ulteriormente nel rapporto appropriato di pesci focale allo stimolo di pesce. Nota: i pesci focale sono i soggetti del test hanno seguito attraverso la serie di behaviosaggi RAL, e pesce di stimolo sono le persone che occuperanno le camere di stimolo nei saggi di aggressione e shoaling. NOTA: Tradizionalmente, tra 1 e 5 pesci di stimolo per i pesci focale nelle analisi shoaling e un 1: 1 di stimolo: sono utilizzati focale rapporto pesce in saggi aggressione 14,17. Tuttavia, il ricercatore ha bisogno di progettare specificamente allo studio con l&#39;ipotesi in mente (ad esempio, dovrebbe stimolo pesce essere mantenuta costante per mantenere la coerenza nel comportamento dei pesci focale, o dovrebbe stimolo pesce essere ruotato tra ogni test per garantire una corretta randomizzazione). </li><li> Conservare tutti i pesci in rack abitative zebrafish (27,5-28,5 ° C) sotto un rigoroso 00:12 ciclo luce / buio. Nutrire tutti gli alimenti focale e di stimolo pesce fiocco giornaliera e settimanale artemie, nei giorni non di ricerca. </li><li> Assicurarsi che tutti i test si fanno tra ZT1 e ZT5 (tempo zeitgeber) per evitare gli effetti del ritmo circadiano 26. </li></ol> 2. Installazione randomizzazione e serbatoio <ol><li> RAndomize tutti gli individui a priori una determinata sequenza di test comportamentali. Impostare uno schema di randomizzazione coerente utilizzando un generatore di sequenza casuale linea 27 o un generatore di sequenza casuale da un pacchetto software statistico (R). <ol><li> Etichetta ogni saggio 1-3 e mantenere questo incarico coerente. Assegnare una sequenza casuale di ogni individuo e mappare la sequenza secondo l&#39;etichetta test comportamentale. Ad esempio, per tre saggi totali (1 mappati a shoaling, 2 mappato audacia, e 3 mappati per aggressione), un dato individuo può avere una sequenza randomizzata di &#39;2,3,1&#39;, che richiederà loro di svolgere la specifica test comportamentali nella sequenza specificata. </li></ol></li><li> Impostare i serbatoi del test (coraggio, aggressività, e shoaling) in laboratorio in luoghi che riducano al minimo la possibilità di stimoli esterni negativi ed essere sicuri di avere abbastanza spazio per una videocamera per catturare l&#39;intero serbatoio. Assicurarsi che la videocamera è enough chiarezza per visualizzare le etichette del serbatoio così come essere in grado di distinguere sottili comportamenti dei pesci focale e messa a punto la videocamera in questa posizione. </li><li> Registra tutti i test comportamentali con la fotocamera mantenuto nella stessa posizione con una vista completa del serbatoio specificata per minimizzare le differenze indesiderate scoring comportamentale come risultato di registrazioni differenziali. NOTA: Evitare di posizionare i serbatoi in aree soggette a traffico pesante e da porte come movimento e suono influenzerà il comportamento zebrafish. </li><li> Stabilire protocolli JWatcher unici 24 per aver eseguito ogni test comportamentale. Fare riferimento al manuale JWatcher per imparare a creare file master focali per assegnare i comportamenti a combinazioni di tasti e archivi di analisi focali per riassumere i dati raccolti. NOTA: JWatcher è un software di punteggio comportamentale che permette di scoring comportamentale affidabile e ripetibile misura 24. </li><li> Definire un sistema di etichettatura per monitorare la data, il numero di pesci, e il numero di test per tutte le analisi del comportamento (ad esempio,&#39;F5-B-123.115&#39; che implica Pesce 5, saggio di audacia, dicembre 31, 2015) e l&#39;etichetta all&#39;esterno del serbatoio con del nastro in vista e nel fuoco della telecamera. Tenere e registrare queste informazioni in un quaderno di laboratorio per una rapida consultazione e controllo di qualità futuro. </li><li> Impostare un serbatoio di acclimatazione che verrà utilizzato tra tutti i dosaggi e subito dopo gli individui sono rimossi dal rack custodia. NOTA: I serbatoi di acclimatazione e serbatoi terminali sono piccoli acquari (40 cm x 20 cm x 25 cm) con ghiaia e un filtro che assomigliano da vicino il rack custodia. </li><li> Dopo che i test sono tutti completati, trasferire l&#39;individuo in un serbatoio terminale separato che servirà come il serbatoio di destinazione finale per tutti gli individui focali utilizzate. Utilizzare un serbatoio che è grande abbastanza per ospitare un gruppo di individui per il resto delle loro vite (ad esempio, 25 litri). NOTA: E &#39;molto importante per mantenere le temperature e le condizioni dell&#39;acqua coerenti e simili Across tutti i serbatoi. Questo include l&#39;alloggio, acclimatazione, e tutti i serbatoi di test. </li></ol> 3. Lo svolgimento del saggio Aggressione <ol><li> Eseguire il test aggressione in una vasca rettangolare 19 L misura 30 cm x 15 cm x 10 cm. Outfit il serbatoio in pareti opache esterne circostanti tre lati del serbatoio aggressione, lasciando il fronte esposto per la visualizzazione, per ridurre stimoli esterni indesiderati. Dividere il serbatoio con una marcatura esterna in quattro quadranti rettangolari uguali e fissare uno specchio permanente (con mastice silicone) all&#39;interno del quadrante inferiore sinistro, inclinata di 22,5 ° formando un triangolo rettangolo contro all&#39;estrema sinistra del serbatoio. </li><li> Assicurarsi che la temperatura dell&#39;acqua nel serbatoio serbatoio di acclimatazione e aggressività è a 2 ° C del rack custodia. Per farlo, hanno acqua fresca età pre-riscaldato a 27,5-28,5 ° C pronti ad aggiungere al serbatoio aggressione. Si prega di notare che è importante per cambiare l&#39;acqua tra ogni test per eliminare ingiustificatistimoli olfattivi. </li><li> Trasferimento, da cupping, un pesce focale dalla rastrelliera custodia ad un serbatoio acclimatazione separata dove sarà acclimatarsi per 10 min. NOTA: E &#39;importante ridurre lo stimolo introdotte per il pesce attraverso un uso improprio. Individui di trasferimento come precedentemente descritto 27. <ol><li> In particolare, manualmente e con attenzione inserire un piccolo, bicchiere di plastica trasparente nel serbatoio di interesse. Senza interrompere il pesce tanto quanto il trasferimento, utilizzando una rete, lentamente raccogliere il pesce nella tazza. </li></ol></li><li> Assicurarsi che la videocamera è pronta a registrare confermando che il serbatoio di dosaggio aggressione (vedi punto 3.1) è a fuoco e subito prima di trasferire l&#39;individuo nel serbatoio aggressione, premere RECORD sul dispositivo. Trasferire il pesce focale tramite coppa dal serbatoio di acclimatazione al serbatoio aggressione. NOTA: E &#39;importante registrare prima che il pesce entrare nel serbatoio di aggressione per monitorare l&#39;ora esatta di entrata. </li><li> Registrare il AggrSerbatoio ESSIONE per 10 min e 30 sec e poi tazza il pesce focale dal serbatoio aggressioni nel serbatoio acclimatazione. </li><li> Durante la visione della registrazione, attendere 30 secondi dopo che il pesce è stato introdotto al serbatoio come un periodo di acclimatazione supplementare prima comportamenti di punteggio. </li><li> Utilizzando il sistema di punteggio JWatcher definito per comportamenti aggressivi, quantificare i seguenti comportamenti per 10 minuti: tempo trascorso vicino a specchio, serie di approcci specchio, il numero di freccette, il numero di tentativi di morsi (apertura della bocca in direzione dello specchio), e il numero di schermi laterali (dorsale, pettorali, anale e caudale erezione fin) 9. </li><li> Segna un singolo test aggressione almeno due volte, fino a quando il test viene segnato con alto accordo tra le iterazioni. </li></ol> 4. L&#39;esecuzione L&#39;audacia Assay <ol><li> Effettuare il test coraggio in un piccolo serbatoio trapezoidale 1.5 L, che misura 15 cm di altezza x 26,5 centimetri sopra x 22,5 cm di larghezza inferiore x 6 cm. Avvolgere carta opaca su tutti i lati of serbatoio ma lasciare il fronte esposto per la visualizzazione. Posizionare un unico pezzo sottile di nastro esterna al serbatoio per delimitare all&#39;inizio dalla parte inferiore del serbatoio. </li><li> Garantire che la temperatura dell&#39;acqua nel serbatoio coraggio è a 2 ° C del rack dell&#39;alloggiamento (vedi punto 3.2) </li><li> Trasferire il pesce focale dal rack custodia al serbatoio acclimatazione (vedi punto 3.3) e lasciare acclimatare per 10 min. </li><li> Assicurarsi che la videocamera è pronta a registrare il test audacia e, una volta pronti a trasferire il pesce focale, premere RECORD sul dispositivo. Trasferire il pesce focale dal serbatoio di acclimatazione al serbatoio audacia e record per 8 min e 30 sec. </li><li> Quando si guarda la registrazione, consentire un ulteriore periodo di acclimatazione 30 sec dopo il pesce viene introdotto nel serbatoio prima di punteggio. </li><li> Utilizzando il software JWatcher, quantificare i comportamenti audacia per 8 min. In particolare, quantificare i seguenti comportamenti: Tempo vicino alla superficie, la latenza di entrare parte superiore, il numero di Transitions nella parte superiore, e il numero di movimenti erratici (freccette) 29. </li><li> Segna un singolo test audacia almeno due volte, fino a quando il test viene segnato con alto accordo tra le iterazioni. </li></ol> 5. L&#39;esecuzione del saggio shoaling <ol><li> Effettuare il test shoaling in un serbatoio 76 L che ha tre scomparti divisi da due divisori di vetro sigillate con mastice siliconico (conseguenti tre scomparti sono costituiti da due zone di stimolo e uno scomparto focale). Esternamente, segnare due zone di preferenza designati 6.35 cm da ciascuno dei divisori in vetro delle zone di stimolo &quot;, indicativo di due lunghezze corpo 30. Applicare pareti opache esternamente attorno a tre lati del serbatoio shoaling, ma lasciare il fronte esposto per la visualizzazione. NOTA: Questa zona preferenza può essere personalizzato per verificare ipotesi specifiche per le specie di dimensioni diverse. </li><li> A seconda della natura dello studio, selezionare banchi stimolo per acclimatare per almeno 12 ore before testare e rimanere nel serbatoio shoaling tutto il corso dell&#39;esperimento. NOTA: banchi di stimolo sono raccolte di singoli pesci che vengono utilizzati per valutare come il pesce focale si comporta in presenza o in assenza di questi banchi. Diverse combinazioni di stimolo del banco possono essere selezionati per testare una serie di diverse ipotesi shoaling. Assicurarsi che i banchi di stimolo sono ruotati tra ogni zona di stimolo per evitare distorsioni lato e sono anche permesso di acclimatare per almeno 12 ore prima del test. </li><li> Trasferire il pesce focale nel serbatoio acclimatazione come descritto in precedenza (vedi punto 3.3) </li><li> Trasferimento, da cupping, il pesce focale dal serbatoio acclimatazione intermedio al compartimento centrale nel serbatoio shoaling. </li><li> Lasciare per un periodo di acclimatazione 10 minuti prima di un periodo di osservazione dal vivo di punteggio 10 min. In alternativa, registrare i saggi shoaling e segnare in seguito utilizzando JWatcher. I pesci sono determinato a essere shoaling quando sono all&#39;interno della zona di preferenza nella cameraospita il banco di destinazione. </li><li> Quantificare il tempo trascorso in ogni zona preferenza e il tempo trascorso nel volume centrale. </li><li> Come misura descrittivo, il calcolo &#39;la forza di shoaling&#39; (SOS). Assegnare un valore compreso tra -1 e +1 in cui la grandezza descrive come spesso un individuo banchi di pesci. </li><li> Calcolare il rapporto fra tempo dedicato shoaling divisa per l&#39;area delle zone shoaling e sottrarre la proporzione di tempo trascorso non shoaling e l&#39;area delle zone non shoaling. Inserire questa quantità rispetto alla somma del tempo trascorso in ciascuna zona divisa per il volume di ogni singola zona. Maggiori informazioni su questo calcolo può essere trovato in uno studio precedente 14. </li></ol> 6. Controllo di qualità dei dati <ol><li> Analizzare i dati utilizzando i dati tradizionali strumenti di analisi 31-32. </li><li> Test per l&#39;omogeneità della varianza con il test non parametrico di Levene per tutti i comportamenti. Se un comportamento è non omogenea effettuare un log-trasformazione33. </li><li> Verificare che non vi sono effetti sequenza (ad esempio, che l&#39;ordine randomizzazione non ha influenzato il comportamento degli individui) utilizzando un Kruskal-Wallis ANOVA sui dati omogenei 34. </li><li> Verificare che non vi siano pregiudizi laterali per il dosaggio shoaling creando modelli lineari generali univariati su indici sos con lato come un fattore fisso 35. NOTA: Se non ci sono poco o nessun problema con i dati, le analisi possono essere condotte a valle. Se ci sono problemi, riconciliarsi con le trasformazioni aggiuntive, razionalizzare con spiegazioni biologicamente plausibile, e / o aumentare le dimensioni del campione. </li></ol> 7. Analisi dei dati <ol><li> Calcolare a due code di Spearman correlazioni 36 per tutti i comportamenti a parte all&#39;interno dei saggi audacia e aggressione. </li><li> Calcolare i coefficienti di correlazione intraclasse (ICC) come un modello misto a due vie con coerenza per i test comportamentali che sono stati condotti più di un time per un dato individuo 36. In questo contesto, la Corte penale internazionale è una misura di quanto costantemente un pesce comportato in un determinato dosaggio misurato più di una volta. </li><li> Pre-elaborazione audacia e aggressione comportamenti di centraggio e norming tutti i comportamenti di prepararsi per l&#39;ingresso ad una analisi delle componenti principali (PCA) 25. NOTA: Pre-elaborazione delle misure per la centratura e norming è un passo fondamentale. Senza questa pre-elaborazione comportamenti passo che si verificano con maggiore frequenza e più variabile sarà eccessivamente influenzare le interpretazioni dei componenti estratti. Il processo di centraggio e norming rimuoverà questo pregiudizio. </li><li> Eseguire un PCA con una matrice di correlazione per determinare se l&#39;audacia e l&#39;aggressione sono collegati tra loro da una sindrome comportamentale. Interpretare carichi comportamentali di ogni significativa componente a&gt; 0,6. Vedere Budaev 2010 24 per una guida completa per la segnalazione PCA per studi comportamentali. Un grafico decrescente sarà informativo su cui eigenvectors dovrebbero essere tenuti per l&#39;interpretazione. </li><li> Utilizzando software statistico, come R o SPSS 31,32, estrarre i punteggi per ogni componente per ogni individuo. Le colonne rappresentano quante comportamento dell&#39;individuo proposta può essere spiegato dal componente particolare. </li><li> Calcola Spearman correlazioni rango tra i punteggi di regressione dei fattori e la forza del shoaling 36. NOTA: una sindrome comportamentale è considerato presente se audacia e aggressione comportamenti caricare sullo stesso componente o, se qualsiasi componente con notevoli carichi interpretabili si correla con la forza di shoaling. Si noti inoltre che la forza di shoaling non è incluso nel PCA per consentire una migliore interpretazione delle quantificazioni comportamentali più complessi (audacia e aggressività). La PCA si ortogonalmente crollare coraggio e aggressività caratteristiche in autovettori per massimizzare la quantità di variazione spiegata ed è adatto per queste misure complesse. Interpretazionela conseguente autovettori e regressione la nostra forza di misurazioni shoaling su ciascuno di loro dà un&#39;interpretazione molto più intuitivo di come ciascuno dei comportamenti complessi (coraggio e aggressività) si riferiscono ad una misurazione shoaling binario più ben definito (ad esempio, il pesce è shoaling o non shoaling). </li></ol>

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</ol>

Gli autori (GW e SPM) non hanno interessi finanziari concorrenti o conflitti di interesse.

Il protocollo determinerà se ci sono associazioni coerenti in coraggio, aggressività e comportamenti shoaling in zebrafish. Se vi sono associazioni consistenti in una data popolazione tra uno di questi comportamenti, quindi una sindrome comportamentale è presente. Studiando sindrome comportamentale naturale di una popolazione, i ricercatori possono avere una comprensione più completa della sua dinamica comportamentale, struttura della popolazione, e la storia evolutiva possibilmente 3. Inoltre, manipolando l&...

Vi è un crescente corpo di letteratura indagare le associazioni tra comportamenti distinti all&#39;interno dei singoli animali da una data popolazione. Queste associazioni sono denominate sindromi comportamentali, e le misure includono tipicamente coraggio, aggressività, comportamento esplorativo, e la socialità 1-5. sindromi comportamentali sono preziosi per ragioni sia diretti che indiretti. Direttamente, la conoscenza delle sindromi comportamentali in grado di fornire una visione più completa della teoria evoluzionistica, la struttura della popolazione, e la dinamica della popolazione 3. Indirettamente, la conoscenza per quanto riguarda le associazioni di comportamento può informare i campi che quantificano il comportamento, come la farmacologia 6, tossicologia 7, genetica comportamentale 8,9, ed endocrinologia 10. A causa di questi benefici diretti e indiretti, una maggiore conoscenza delle sindromi comportamentali è particolarmente importante in organismi modello di uso comune come il pesce zebra. Gli studi che utilizzano zebrafish si trovano ina varietà di discipline, tra cui l&#39;analisi delle sindromi comportamentali 11-13. Per progredire le conoscenze nel campo della ricerca sindrome comportamentale, e perché altre discipline usano anche misure comportamentali per la verifica di ipotesi, sono necessarie descrizioni affidabili e succinte di comportamento per le analisi e interpretazioni validi e protocolli standardizzati faciliterà il confronto inter-studio all&#39;interno delle specie. Il nostro protocollo è stato sviluppato per misurare una sindrome comportamentale audacia-aggressione-shoaling in una popolazione di zebrafish laboratorio-allevati 14. Tuttavia, in base al protocollo (monitoraggio singoli pesci, garantire una corretta randomizzazione, e le analisi del caso) può essere facilmente modificato per una serie di misure comportamentali alternativi. Inoltre, saggi di audacia, aggressione, o shoaling possono essere eseguiti singolarmente per la verifica delle ipotesi distinte. Pertanto, mentre è il nostro obiettivo di descrivere come condurre uno studio sindrome comportamentale e il protocollo per il successo l individualela misurazione del comportamento evel, ogni aspetto di questa procedura può stare da solo. La letteratura sulle sindromi comportamentali estende su diversi gruppi tassonomici, da artropodi all&#39;uomo 4 e, per misurare una sindrome comportamentale, almeno due contesti comportamentali devono essere quantificati. Purtroppo, vi è spesso scarsa coerenza nei saggi che vengono utilizzati per quantificare la misura del comportamento di tutti gli assi di comportamento. Ad esempio, nel pesce, l&#39;audacia può essere misurata mediante saggi T-labirinto, test in campo aperto, o l&#39;introduzione di un romanzo o di stimolo stranieri 15. Studi aggressione nei pesci potrebbero comportare interazioni diade, saggi video di stimolo, o saggi modello in creta 12,16,17. Analogamente, l&#39;analisi del comportamento shoaling, che in genere comporta la misurazione di preferenza shoalmate, può essere eseguita in diversi tipi di serbatoi, con metodi differenti per determinare il tempo sezione 21-23. In questo protocollo un sottogruppo specifico del overall comportamento saggio repertorio è presentato. In particolare, questo protocollo presenta una metodologia per monitorare gli individui attraverso l&#39;audacia, l&#39;aggressività, e saggi shoaling in modo da facilitare il confronto all&#39;interno di individui per determinare se i confronti sono coerenti in tutti gli individui all&#39;interno di una popolazione. Abbiamo effettuato questo protocollo con zebrafish e amatitlania nigrofasciata (Amatitlania nigrofasciata) in studi precedenti 14,18, e funzionerà con tutti i pesci d&#39;acqua dolce di dimensioni simili. saggi Boldness sono condotti in un serbatoio trapezoidale 1,5 L che ha una linea orizzontale che delimita aree uguali dimensioni in porzioni superiore e inferiore del serbatoio. comportamenti quantificati includono il numero di transizioni dal pesce di prova tra la parte superiore e inferiore del serbatoio, il tempo trascorso in ciascuna porzione, il numero di freccette, e la latenza di entrare nella porzione superiore. Il dosaggio aggressione avviene in una vasca rettangolare 19L che comprendeuno specchio 3 pollici x 5 pollici inclinato di circa 22 ° situato nell&#39;angolo in basso a sinistra della vasca 19. Comportamenti quantificati comprendono la quantità totale di tempo trascorso dai pesci bersaglio interagire con lo specchio 20, insieme a specifici indicatori aggressivi - il numero di punture, schermi laterali, freccette tra i pesci di prova e il suo riflesso. Per questi indicatori specifici, punture sono definiti come affondi rapidi verso lo specchio con una bocca aperta, schermi laterali sono definiti come la svasatura di alette laterali, pettorali, anale e dorsale nella direzione dello specchio, e freccette eventuali movimenti erratici che sono non diretto verso lo specchio. Infine, il saggio shoaling quantifica il comportamento di un pesce di prova nel centro della camera di un serbatoio tri-incamerata. Le camere laterali della vasca sono vuote, o contengono una &quot;target banco&quot; di pesce, e il momento in cui il pesce di prova passa in prossimità di ogni camera laterale viene misurata 21-23. Un unico punteggio composito, denominato Strength di shoaling (SOS), viene calcolato per ogni pesce singolo test, specifico agli stimoli, e può essere usato in analisi valle 14. Tutti i comportamenti sono segnati da un unico spettatore, o più spettatori del software gratuito quantificazione del comportamento noto come JWatcher 24. Verifica la presenza di una sindrome comportamentale è in primo luogo uno sforzo statistico, e si consiglia di seguire le linee guida così come presentato dal Budeav 2010 25. In particolare, si consiglia di eseguire una analisi delle componenti principali (PCA) in data centrati e normati in cui il gli ingressi sono i vettori di comportamenti di un individuo in analisi con più misure comportamentali (ad esempio, l&#39;audacia e l&#39;aggressione). Il PCA, eseguita su una matrice di correlazione, riduce la dimensionalità delle misure comportamentali, ed estrae quindi la conoscenza più importante che spiega la maggioranza della variazione. I componenti estratti possono quindi essere interpretate based in alti carichi di fattore per il comportamento individuale di interesse e di regressione colonne possono essere estratte per ogni individuo sulla base dei componenti esplicativi. Questi punteggi di regressione possono poi essere confrontati alla misurazione SoS e altre varie misurazioni non-comportamentali come la dimensione del pesce o il sesso. Questo flusso di lavoro è stato implementato in uno studio delle sindromi comportamentali zebrafish in cui è stato scoperto una sindrome comportamentale specifica il sesso che esiste tra audacia e shoaling 14. In questa situazione, più audaci maschi zebrafish sono più propensi ad associare con, specie più aggressiva grandi (D. albolineatus), ma questa associazione si perde nelle femmine. Questo flusso di lavoro è stata implementata anche in uno studio di giovane detenuto parente ciclidi (Amatitlania nigrofasciata) 18, in cui una sindrome comportamentale non è stato scoperto, potenzialmente indicando la plasticità comportamentale della specie. Pertanto, il seguente protocollo è presentato wesimo un obiettivo di delineare la natura dei tre saggi specifici (coraggio, aggressività, e shoaling) nel quadro di studiare una sindrome comportamentale livello individuale.

<table><tbody><tr><td>Zebrafish Rack System</td><td>Aquaneering Inc</td><td>Cat. # ZS550</td><td></td></tr><tr><td>Pet Valu Tropical Fish Food, 224,0 g</td><td>Pet Valu</td><td>Cat. # 31700</td><td></td></tr><tr><td>Uova di artemia salina di alta qualità, 16 oz</td><td>Brine Shrimp Direct</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,5 L Trapezoidal Tank</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>Cat. # itsts-a</td><td></td></tr><tr><td>19 L vasca rettangolare</td><td>That Fish Place</td><td></td><td></td>211932</tr><tr><td>76 L vasca rettangolare</td><td>che il posto dei pesci</td><td>212180</td><td></td></tr><tr><td>Hitachi KP-D20A CCD Camera</td><td>Prescott's, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s obiettivo MACRO</td><td>Nikon Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3" x 3"</td><td>Michaels</td><td>Cat. # 10334162</td><td></td></tr><tr><td>Jwatcher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS Statistics Base</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R</td><td>The R Foundation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;audacia, l&#39;aggressività e saggi shoaling per zebrafish comportamentali sindromi

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

Una sindrome comportamentale esiste quando specifici comportamenti interagiscono in diversi contesti. Zebrafish sono stati soggetti di prova in studi recenti ed è importante standardizzare protocolli per garantire analisi adeguate e interpretazioni. Nei nostri studi precedenti, abbiamo misurato coraggio monitorando una serie di comportamenti (tempo in prossimità della superficie, la latenza nelle transizioni, numero di transizioni, e freccette) in una vasca trapezoidale 1.5 L. Allo stesso modo, abbiamo quantificato l&#39;aggressione da punture di osservazione, display laterali, freccette, e il tempo vicino a uno specchio inclinato in una forma rettangolare serbatoio 19 l. Dividendo un serbatoio di 76 L in tre parti, abbiamo anche esaminato le preferenze shoaling. Il saggio shoaling è un test altamente personalizzabile e può essere adattata per specifiche ipotesi. Tuttavia, protocolli per questo test anche devono essere standardizzati, però sufficientemente flessibile per la personalizzazione. In studi precedenti, camere di testa erano o vuoto, conteneva 5 o 10 zebrafish, o 5 danios Pearl (D. albolineatus). Nel following manoscritto, vi presentiamo un protocollo dettagliato e dati rappresentativi che accompagnano applicazioni di successo del protocollo, che permetterà per la replica degli esperimenti sindrome comportamentale.

A seconda della natura dello studio e protocollo specifico impiegato, diversi risultati distinte sono possibili in un esperimento sindromi comportamentale. Le tabelle e le figure, nei casi indicati di seguito, sono adattati dal nostro precedente studio pubblicato sulla rivista Behavioural Processes 14 e la rivista Zebrafish 17. Quando la proposta (come descritto sopra) è condotta nella sua interezza, due serie di risultati, &#39;entro correlazioni dosaggio&#39; e &#...

Questo manoscritto descrive l'impostazione, l'implementazione e l'analisi dell'audacia, dell'aggressività e del branco nel pesce zebra e la verifica della presenza di una sindrome comportamentale. Un approccio standardizzato per la quantificazione comportamentale consentirà un confronto più facile tra gli studi. Sono possibili modifiche a questo protocollo in quanto ogni test può essere eseguito individualmente.

L&#39;audacia, l&#39;aggressività e saggi shoaling per Zebrafish comportamentali Sindromi

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è standardizzare la metodologia utilizzata per osservare, analizzare e interpretare i sindromi comportamentali di audacia, aggressività e nuoto in banchi nel pesce zebra. Direttamente, questo metodo può fornire risposte a domande relative alla teoria dell'evoluzione, alla struttura delle popolazioni e alla dinamica delle popolazioni. Quando combinato con tecniche interdisciplinari, può essere applicato a campi come la farmacologia, la tossicologia, la genetica comportamentale e l'endocrinologia.Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'insieme di comportamenti quali aggressività, determinazione e nuoto in gruppo comprende numerose attività ampiamente studiate e facilmente quantificabili nel Danio rerio. Inoltre, ogni saggio può essere modificato per rispondere a diverse domande sperimentali. Iniziare separando casualmente i Danio rerio nella proporzione appropriata tra pesci focali e pesci stimolo.Conservare tutti i pesci nei rack per l'allevamento di Zebrafish in un ciclo rigoroso di 12 ore di luce e 12 ore di buio. Somministrare cibo in fiocchi a tutti i pesci focali e di stimolo ogni giorno. Somministrare Artemia salina solo una volta alla settimana nei giorni non dedicati alla ricerca.Successivamente, preparare tre vasche sperimentali in laboratorio: una per l'aggressività, una per la spavalderia e una per l'aggregazione, posizionate in aree che riducano al minimo la possibilità di stimoli esterni avversi. Assicurarsi che vi sia spazio sufficiente perché una videocamera possa riprendere l'intera vasca.Posizionare la videocamera in modo che abbia una risoluzione sufficiente per visualizzare le etichette degli acquari e al contempo per distinguere i comportamenti sottili del pesce in osservazione. Mantenere la videocamera nella stessa posizione con una visione completa dell'acquario durante tutte le registrazioni dei test comportamentali, al fine di ridurre al minimo differenze non intenzionali nella valutazione del comportamento dovute a registrazioni diverse. Successivamente, definire uno schema di etichettatura per tracciare la data, il numero del pesce e il numero del test per tutti i test comportamentali.Etichettare l'esterno del serbatoio con del nastro in modo che sia visibile dalla telecamera. Registrare queste informazioni su un quaderno di laboratorio per un rapido riferimento e per futuri controlli di qualità. Infine, preparare un serbatoio di ambientazione che verrà utilizzato tra tutti i saggi, nonché immediatamente dopo il prelievo degli individui dal rack di alloggio.Iniziare procurandosi un serbatoio rettangolare da 19 litri, di dimensioni 30 per 15 per 10 centimetri. Equipaggiare il serbatoio con partizioni esterne opache che circondino tre lati del serbatoio per l'aggressività, lasciando il lato anteriore esposto per l'osservazione, al fine di ridurre stimoli esterni indesiderati. Dividere il serbatoio, mediante marcature esterne, in quattro quadranti rettangolari uguali.Utilizzare un sigillante in silicone per fissare uno specchio nel quadrante inferiore sinistro, inclinato di 22,5 gradi, in modo da formare un triangolo rettangolo contro il lato estremo sinistro della vasca. Avere a disposizione acqua fresca e maturata, preriscaldata a una temperatura compresa tra 27,5 e 28,5 gradi Celsius, pronta da aggiungere alla vasca di aggressività, in modo da garantire che la temperatura dell'acqua nella vasca di ambientazione e in quella di aggressività sia entro due gradi Celsius rispetto a quella del sistema di allevamento. Catturare delicatamente un pesce bersaglio dal sistema di allevamento e trasferirlo in una vasca di ambientazione separata, dove si ambienterà per 10 minuti.Verificare che la videocamera sia focalizzata sul serbatoio per il test di aggressività e premere il tasto di registrazione. Successivamente, trasferire immediatamente il pesce oggetto del test, mediante bicchiere, dal serbatoio di ambientazione al serbatoio di aggressività. Registrare il serbatoio di aggressività per 10 minuti e 30 secondi.Quindi, trasferire delicatamente il pesce focale dal serbatoio dell'aggressività al serbatoio di ambientamento. Durante la visione della registrazione al termine del saggio, attendere 30 secondi dopo l'introduzione del pesce nel serbatoio, come ulteriore periodo di ambientamento, prima di iniziare la valutazione dei comportamenti. Infine, valutare un singolo saggio di aggressività almeno due volte, fino a ottenere un elevato grado di accordo tra le ripetizioni.Per impostare il saggio di aggressività, procurarsi innanzitutto un piccolo serbatoio trapezoidale da 1,5 litri, alto 15 centimetri, con una base superiore di 26,5 centimetri e una base inferiore di 22,5 centimetri, e una larghezza di 6 centimetri. Avvolgere della carta opaca su tre lati del serbatoio, lasciando il lato anteriore scoperto per l'osservazione. Applicare un unico sottile pezzo di nastro adesivo all'esterno del serbatoio per delimitare la parte superiore da quella inferiore del serbatoio.Successivamente, assicurarsi che la temperatura dell'acqua nel serbatoio per il test di ardimento sia entro due gradi Celsius rispetto a quella del sistema di contenimento. Trasferire il pesce oggetto del test dal sistema di contenimento al serbatoio di ambientamento e lasciarlo ambientare per 10 minuti. Verificare che la videocamera sia puntata sul test di ardimento e premere la registrazione sul dispositivo.Trasferire immediatamente il pesce focale dal serbatoio di ambientazione al serbatoio per il test di audacia e registrare per otto minuti e 30 secondi. Durante la visione della registrazione al termine del saggio, prevedere un periodo aggiuntivo di ambientazione di 30 secondi dopo l’introduzione del pesce nel serbatoio, prima di procedere alla valutazione. Infine, valutare un singolo saggio di audacia almeno due volte, fino a quando il saggio viene valutato con un elevato grado di accordo tra le ripetizioni.Per impostare il saggio di shoaling, procurarsi un serbatoio da 76 litri suddiviso in tre compartimenti da due divisori in vetro sigillati con silicone. Esternamente, utilizzare del nastro adesivo per delimitare due zone di preferenza situate a 6,35 cm da ciascun divisorio in vetro, che definiscono ogni zona stimolo. Applicare divisori opachi esterni su tre lati del serbatoio per lo shoaling, lasciando il lato frontale esposto per l'osservazione.Successivamente, selezionare banchi di stimolo da ambientare per almeno 12 ore prima del test, mantenendoli nel serbatoio per il nuoto in gruppo per tutta la durata dell'esperimento. Trasferire il pesce bersaglio dalla vasca di allevamento a un serbatoio di ambientamento separato mediante l'uso di un bicchiere, dove rimarrà per 10 minuti. Successivamente, trasferire, sempre mediante l'uso di un bicchiere, il pesce bersaglio dal serbatoio di ambientamento al compartimento centrale del serbatoio per il nuoto in gruppo.Consentire un periodo di ambientamento di 10 minuti prima di un periodo di osservazione diretta della durata di 10 minuti, durante il quale i pesci in banchi sono definiti come quelli situati nella zona di preferenza nella camera contenente il banco bersaglio. Successivamente, quantificare il tempo trascorso in ciascuna zona di preferenza, nonché il tempo trascorso nel volume centrale. Infine, al termine dei saggi, trasferire i pesci in un serbatoio terminale separato che fungerà da serbatoio finale per tutti gli individui focali utilizzati.Questo protocollo ha analizzato le associazioni costanti nei comportamenti di aggressività, audacia e nuoto in branco del pesce zebra per determinare se fosse presente un sindromo comportamentiale. Qui, la componente uno rappresenta i comportamenti aggressivi, mentre la componente due è associata ai comportamenti di audacia. Poiché i comportamenti di aggressività e di audacia non sono rappresentati dalla stessa componente, si può concludere che non esiste un sindromo comportamentiale di aggressività-audacia nel pesce zebra.Una volta acquisita padronanza, l'intero protocollo per un pesce focale può essere completato in 70 minuti. Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante ricordare di familiarizzare voi stessi e il vostro team con ciascun comportamento bersaglio al fine di minimizzare il bias dell'osservatore. Valutare più volte la stessa registrazione video aumenterà inoltre la fiducia nei risultati ottenuti.Al termine di questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi nei campi farmacologico, genetico o fisiologico per rispondere ad ulteriori domande riguardo ai fattori interni ed esterni che influenzano i sindromi comportamentali. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come osservare, analizzare e interpretare i sindromi comportamentali di audacia, aggressività e nuoto in banchi nel pesce zebra. Grazie per averci guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti!

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Abbiamo sviluppato il Visual-Motor risposta per quantificare la potenza del motore di zebrafish larvale in risposta alla luce incrementi e decrementi. Abbiamo anche esaminato visione zebrafish mutanti, tra cui la non optocinetico risposta (NRC) mutanti, che si pensava essere completamente cieco quando testato da un altro saggio di visione, il riflesso optocinetica.

Un test per misurare capacità di risposta comportamentale di Zebrafish a variazioni di intensità di luce

Il video descrive l'evitamento e il test della tigmotassi delle larve di pesce zebra. Il video esamina il comportamento delle larve di pesce zebra in risposta a uno stimolo visivo avversivo.

Saggio di evitamento e tigmotassi del pesce zebra: un metodo ad alto rendimento per esaminare il comportamento larvale in risposta a uno stimolo visivo avversivo

L'articolo descrive un test per studiare l'aggressività del pesce zebra. Il metodo utilizza un semplice specchio e osserva la risposta comportamentale del pesce zebra nei confronti del proprio riflesso nello specchio.

Saggio di aggressività: un metodo per studiare il comportamento aggressivo del pesce zebra in risposta a uno specchio

Il nostro laboratorio ha sviluppato un sistema di imaging automatizzato romanzo ad alta produttività che è utile per il rilevamento di diversi comportamenti differenti in 7 giorni di età zebrafish larve. Il sistema può essere usato per rilevare sottili cambiamenti nel comportamento dopo le larve sono stati esposti agli agenti tossici ambientali o farmaceutici.

Automatizzati high-throughput analisi comportamentali nelle larve Zebrafish

Viene descritto l'uso di un sistema video automatico 3D in grado di tracciare singoli e gruppi di pesci zebra. Come esempio applicativo esploriamo gli effetti dell'antagonista del recettore NMDA MK-801 sui banchi di zebrafish.

Utilizzo di un sistema di tracciamento 3D automatizzato per registrare singoli e banchi di pesci zebra adulti

Questo manoscritto descrive un metodo semplice per misurare la sollecitazione comportamentale in un pesce zebra adulto. L'approccio sfrutta la tendenza innata che il pesce zebra preferisce la metà inferiore di un serbatoio quando è in uno stato stressante. Descriviamo anche i metodi per accoppiare il saggio con la farmacologia.

Approcci comportamentali allo studio dello stress innato nel zebrafish

Presentiamo una camera comportamentale progettata per valutare le prestazioni cognitive. Forniamo dati che dimostrano che una volta acquisiti, i pesci zebra ricordano l'attività 8 settimane dopo. Mostriamo anche che i pesci zebra iperglicemici hanno alterato le prestazioni cognitive, indicando che questo paradigma è applicabile agli studi che valutano la cognizione e la memoria.

L'attività comportamentale di scelta a tre camere utilizzando Zebrafish come sistema modello

L'obiettivo dell'attuale protocollo è quello di delineare i passaggi necessari per stabilire e utilizzare un test di preferenza sociale per il pesce zebra adulto e dimostrare che può essere utilizzato per caratterizzare i difetti sociali indotti dall'etanolo.

Modellazione dei disturbi dello spettro alcolico fetale nel pesce zebra per caratterizzare l'impatto di un ambiente embrionale avverso sul comportamento sociale adulto

Qui, presentiamo una batteria di test comportamentali completa, tra cui il nuovo serbatoio, Shoaling e i test di preferenza sociale, per determinare efficacemente i potenziali effetti neurotossici delle sostanze chimiche (ad esempio, metanfetamina e glifosato) sul pesce zebra adulto utilizzando un singolo acquario. Questo metodo è rilevante per la neurotossicità e la ricerca ambientale.

Valutazione della neurotossicità in Danio rerio adulto utilizzando una batteria di test comportamentali in un singolo serbatoio

Questo protocollo stabilisce un paradigma di fenotipizzazione comportamentale nelle larve di pesce zebra trattate con MPTP per valutare i deficit motori e non motori simili alla malattia di Parkinson.

Profilazione fenotipica dei fenotipi comportamentali simili a Parkinson indotti da MPTP nelle larve di pesce zebra, basata su un esperimento comportamentale

I compiti di preferenza sociale multi-camera sono stati adattati dai roditori al pesce zebra, facilitando lo studio del comportamento sociale negli organismi modello. Questo protocollo convalida un compito a basso costo a 3 camere in vasca aperta utilizzando webcam e software open source per misurare la preferenza sociale dei pesci zebra, rendendolo accessibile alla ricerca e all'insegnamento degli studenti universitari.

Alternativa a basso costo per esaminare la preferenza sociale nel pesce zebra (Danio rerio) utilizzando il compito a 3 camere in acquario libero libero

Impara a standardizzare l'osservazione di audacia, aggressività e shoaling in Danio rerio per studi di neuroscienza e genetica comportamentale. Questo metodo facilita confronti tra ricerche diverse.

L'audacia, l'aggressività e saggi shoaling per Zebrafish comportamentali Sindromi

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