Dissezione e Flat-montaggio del Threespine Stickleback branchiale scheletro

L'obiettivo generale di questa procedura è sezionare e montare in piano lo scheletro branchiale dello spinarello. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nei campi dello sviluppo, della genetica e dell'evoluzione. Ad esempio, come il modo in cui gli animali si adattano a nuovi ambienti e il modo in cui la variazione nella morfologia adulta si verifica durante lo sviluppo.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che sezionando e montando in piano lo scheletro branchiale, si possono visualizzare una varietà di caratteri trofici che non possono essere studiati in montatura intera. In preparazione, rivedere la morfologia scheletrica della testa rilevante dello spinarello a tre spine. Dopo aver preparato il pesce per la dissezione, inizia inserendo una pinza numero cinque affilata nel lato dell'occhio, con un angolo di 45 gradi per perforare la membrana che copre l'occhio.

Quindi, stacca la membrana oculare, come il coperchio di un contenitore di yogurt. Quindi, inserisci una pinza aperta dietro l'occhio, afferra il nervo ottico e rimuovi l'occhio. Fai attenzione a non perforare l'occhio, altrimenti perderà melanina.

Ripeti questo processo con l'occhio sul lato opposto. Quindi, posiziona la lama di una piccola forbice sotto il lato posteriore del lembo dell'opercolo e taglia il tessuto molle dorsalmente sopra l'opercolo, verso l'orbita. Quindi tagliare l'osso frontale, che è dorsale all'orbita oculare.

Quindi, taglia l'osso parasfenoide della linea mediana, attorno al centro dell'orbita. Ripetere il taglio dell'opercolo sul lato opposto. Per i passaggi successivi, le spine pelviche possono essere utilizzate come maniglie.

Si ripiegano, tirandoli delicatamente lontano dal corpo. Ora, inserisci la pinza sotto l'opercolo e stacca lentamente il viso dal corpo. Tagliare via tutti i tessuti molli che sono ancora attaccati durante il processo.

Fai attenzione ai rastrelli branchiali e fai attenzione a non interromperli. È facile afferrare accidentalmente il primo osso ceratobranchiale, insieme al percoll, quando si rimuove lo scheletro facciale. Guarda sotto il loro percoll mentre lo sfogli in avanti per essere sicuro di non avere nulla in più.

Ora, con una pinza, staccare i ceratoiali da entrambi i lati della linea mediana basihyal, mentre si stacca e si rimuove lo scheletro facciale cranico anteriore. Ripeti sul lato opposto. Lo scheletro cranico facciale anteriore comprende l'intera mascella, l'intero scheletro ioide, gli elementi dorsali ed endocondriali sottostanti e la parte anteriore del cranio.

Quindi, inserisci le pinze chiuse appena sotto il tubo intestinale e trascinale anteriormente. Separare i muscoli e i legamenti rimanenti attaccati allo scheletro branchiale nel processo. Quindi, usa la punta della pinza chiusa per raschiare via i muscoli che attaccano lo scheletro branchiale dorsale alla scatola cranica ventrale.

Raschiare con un movimento da posteriore a anteriore. Ripeti il processo di rimozione muscolare sul lato opposto dello spinarello. Quindi, rimuovere lo scheletro branchiale, afferrando la base del tubo intestinale e tirando anteriormente.

Separare il tubo intestinale utilizzando un taglio perpendicolare, posteriormente al quinto ceratobranchiale. Un errore comune è quello di afferrare il tubo intestinale troppo anteriormente, lasciando il tubo frontale ventrale molto indietro. Assicurati di afferrare in profondità nella parte posteriore della cavità toracica e puoi sempre rimuovere il tubo intestinale in eccesso in un secondo momento.

Dopo aver rimosso eventuali frammenti ossei rimanenti dalla scatola cranica sul lato dorsale dello scheletro branchiale. Inserire le forbici nel cestello branchiale e praticare un taglio dorsale tra le serie bilaterali di placche dentali dorsali. Mantenere questo taglio centrato per evitare di danneggiare le placche dentate dorsali.

Successivamente, fai due tagli laterali poco profondi nel lume gommoso dell'intestino all'estremità posteriore dello scheletro branchiale. All'estremità anteriore del tubo intestinale. Per facilitare l'apertura dello scheletro branchiale.

Ora, trasferisci lo scheletro in un tubo di microsentrifugo caricato con glicerolo al 50%, idrossido di potassio al 50% virgola zero per una pulizia delicata. Oppure, trasferiscilo in glicerolo puro se non è necessaria un'ulteriore pulizia. Se è necessaria una nuova colorazione, i dettagli sono riportati nel protocollo di testo.

Per prepararsi al montaggio, cambiare la soluzione in glicerolo puro e agitare il tubo per almeno cinque minuti. Quindi, rimuovere lo scheletro branchiale e posizionarlo vicino al fondo di un vetrino di vetro da 22 x 60 millimetri con il lato dorsale rivolto verso l'alto. Ora, trasferisci alcune gocce di glicerolo sullo scheletro.

Quindi, stendi due palline di argilla da modellare e suonane una su entrambe le estremità del vetrino coprioggetti, funzionano come distanziatori. Quindi, posizionare senza stringere un secondo vetrino coprioggetti sul preparato, con una pressione sufficiente ad appiattire lo scheletro branchiale anteriore. Ora, aprire il lembo dorsale sinistro, comprese le placche dentali dorsali, e far scorrere il lembo tra i vetrini coprioggetti.

Quindi fai lo stesso con il lembo dorsale destro. E spingere l'intero scheletro branchiale lontano dal bordo del vetrino coprioggetti. Per completare la procedura, premere leggermente sul vetrino coprioggetti superiore per appiattire le palline di argilla.

Quanto basta per mantenere lo scheletro branchiale montato piatto. Ma non così tanto da essere schiacciato. Se durante il processo una fila di rastrelli è oscurata, far scorrere le pinze tra i vetrini coprioggetti e riorientare il ceratobranchiale o l'intera preparazione.

Se montato in piano in glicerolo puro, il preparato può essere conservato in piano a temperatura ambiente per almeno un decennio. Questo protocollo si traduce in uno scheletro branchiale sezionato e montato in piano. Dove una varietà di importanti tratti trofici può essere cronometrata.

Da una vista dorsale, tutte le file di rastrelli branchiali, tutte le placche dentarie faringee e quasi tutte le ossa branchiali possono essere facilmente visualizzate e cronometrate. Alizarina rossa S, anche fluorurato su una rodamina o un filtro rosso simile, consentendo una doppia marcatura con altri marcatori e metodi alternativi per la visualizzazione. In questa immagine, i rastrelli branchiali sono contrassegnati da carati.

I denti sono contrassegnati da punte di freccia e le ossa sono contrassegnate da asterischi. Una volta padroneggiata, la dissezione può essere eseguita in pochi minuti ed essere eseguita su centinaia di animali in tempi relativamente brevi. E mentre abbiamo dimostrato una dissezione dello scheletro branchiale a schiena d'asino, speriamo che questa procedura possa essere utilizzata come guida per una varietà di specie ittiche.

Sezionando lo scheletro branchiale, possiamo visualizzare rapidamente e facilmente una varietà di importanti tratti trofici, non visibili in intere montature. Consentendo una migliore comprensione dello sviluppo e dell'evoluzione dello scheletro cranico facciale.