Name: Ingegneria dei tessuti da parte intrinseca Vascolarizzazione in un In Vivo Camera ingegneria dei tessuti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Scopri la creazione di tessuti vascolarizzati in vivo mediante anastomosi microchirurgica arterovenosa in modelli murini. Questa tecnica avanzata consente la rigenerazione di organi e la riparazione di difetti tessutali con approvvigionamento intrinseco.

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Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti provenienti NHMRC e Stafford Fox Medical Foundation. Gli autori riconoscono l&#39;assistenza chirurgica di Sue McKay, Liliana Pepe, Anna Deftereos e Amanda Rixon del Medical Sperimentale e l&#39;Unità Chirurgia, Ospedale di St. Vincent, Melbourne. Il supporto è fornito anche dal Dipartimento del Governo dello Stato del Victoria di innovazione, l&#39;industria e il Programma delle infrastrutture di supporto operativi per lo sviluppo regionale.

I protocolli descritti qui sono stati approvati dal Comitato Etico Animal Hospital di Melbourne di San Vincenzo, in Australia, e sono state condotte in stretta aderenza alle linee guida Australian National sanità e ricerca medica del Consiglio. NOTA: due protocolli della camera sono descritti di seguito. I due modelli diversi e loro disegni camera specifici sono illustrati in Figura 1. Sezione (1) è realizzato in policarbonato (per il modello camera di ciclo di ratto artero). È cilindrico con diametro interno 13 mm e altezza 4 mm. Una finestra a un certo punto nel muro consente l&#39;accesso senza ostacoli per il peduncolo. Nel secondo modello (per flusso continuo ratto modello camera peduncolo), la camera è realizzata poliacrilici e è rettangolare (10 x dimensioni 8 x 4 mm 3 interne). Ha due aperture 1,5 mm sui lati opposti per accogliere l&#39;arteria femorale e la vena quanto trasgrediscono la camera. 1. Rat artero-Loop Modello Camera (One Chamber per animale) NOTA: Prima di iniziare l&#39;intervento chirurgico, assicurarsi che tutti gli strumenti siano stati correttamente sterilizzati. Allo stesso modo, assicurano il resto strumenti su asciugamani sterili e sono ad una distanza ragionevole dal campo operatorio per evitare la contaminazione durante la procedura. <ol><li> Preparazione del Animal per la chirurgia <ol><li> Utilizzare ratti peso di almeno 250 g per le grandi dimensioni delle navi per la realizzazione del ciclo artero. </li><li> Anestetizzare l&#39;animale con il 4% inalazione isoflurano. Corroborare un&#39;adeguata profondità dell&#39;anestesia valutando refrattarietà alla punta-pizzico. Dopo l&#39;anestesia, tenere l&#39;animale adeguatamente anestetizzato durante tutta la procedura con il 2% isoflurano. </li><li> Posto l&#39;animale in posizione supina su un blocco riscaldante e applicare il lubrificante sterile per gli occhi per prevenire l&#39;essiccamento durante l&#39;intervento chirurgico. </li><li> L&#39;utilizzo di un rasoio elettrico, la barba sia inguini e rimuovere i capelli con un pezzo di garza umida. </li><li> Preparare i siti chirurgici con clorexidina/ Soluzione di etanolo al 70% e drappeggio l&#39;animale con teli sterili. Somministrare una singola dose di Carprofen (5 mg / kg, per via sottocutanea) come analgesico. </li></ol></li><li> Raccolta di vena femorale Graft <ol><li> Utilizzando una lama # 15, fare un lungo 4 cm incisione cutanea sulla all&#39;inguine sinistro parallelo al legamento inguinale. Ciò espone il cuscinetto adiposo inguinale. </li><li> Tagliare il cuscinetto adiposo circonferenziale con le forbici lasciandola attaccata al suo peduncolo vascolare sulla base dei vasi epigastrici. </li><li> Utilizzando le forbici micro, liberare le aderenze del tessuto connettivo vaporosi tra la parete addominale e vasi femorali sottostanti. </li><li> Posizionare un divaricatore sulla parete addominale e tirare mediale. Ciò espone il legamento inguinale e tutta la lunghezza dei vasi femorali. </li><li> Utilizzando micro pinze e forbici curve sezionare la vena epigastrica e isolarlo dal suo grasso circostante tirando e taglio con delicatezza. Questa vena agisce come un tether nel costruire il ciclo. </li><li> usinG Micro pinze e micro forbici curve aprire la guaina perivascolare che contiene i vasi femorali e dei nervi tutta la strada dal legamento inguinale alla sua distale biforcazione al ramo epigastrica. </li><li> Utilizzando micro pinze, prendere la vena femorale per la sua avventizia e delicatamente separarlo dai tessuti circostanti e di accompagnamento delle arterie. Fare questo con una pinza micro e curve micro forbici rotonde punte tirando il tessuto a parte e taglio attraverso di essa. NOTA: Non afferrare tutto lo spessore della parete venosa come questo potrebbe causare traumi alla intima che lo rende incline alla trombosi. </li><li> rami laterali legare trovato durante la dissezione con 10/0 sutura in nylon o coagulano con un coagulatore bipolare. </li><li> Con la vena femorale completamente libero, legare la sua estremità prossimale e distale con 4/0 punti di sutura in seta. Assicurarsi di ottenere una vena innesto di almeno 10 mm di lunghezza e comprende circa 0.5 cm Lunghezza del ramo epigastrica per essere usato come un tether corda ragazzoper tenere l&#39;anello aperto nella camera. </li><li> Utilizzando pinze micro e micro forbici diritte, tagliare l&#39;avventizia dalla estremità del trapianto tirando e tagliando delicatamente. Questo può essere fatto anche in seguito, prima di anastomosi microchirurgiche. </li><li> Lavare l&#39;innesto della vena con soluzione fisiologica eparinizzata (10 U / ml di eparina) e lasciare riposare nella soluzione. Chiudere la ferita con funzionamento continuo 4/0 sutura di seta più due o tre ulteriori semplici punti interrotti. </li></ol></li><li> Creazione di arterovenose Loop e l&#39;impianto della Camera <ol><li> Ripetere i passaggi da 1.2.1 a 1.2.4 in esattamente allo stesso modo sull&#39;arto controlaterale. </li><li> Utilizzando micro pinze, sezionare e isolare sia l&#39;arteria epigastrica e la vena formare il cuscinetto adiposo circostante. Per fare ciò, tirando delicatamente il tessuto lontano da vasi </li><li> Utilizzando micro pinze, prendere l&#39;arteria femorale dal suo avventizia e liberarla dai tessuti circostanti. Fare questo con una pinza micro e curvo mic rotonda punteforbici ro tirando il tessuto a parte e taglio attraverso di essa. Legare o coagulare i suoi rami laterali. </li><li> Legare l&#39;arteria femorale e la vena distale alla nascita dei vasi epigastrici utilizzano 4/0 di seta di sutura. </li><li> Posizionare un morsetto prossimalmente su ciascuna arteria femorale e la vena. Utilizzando un forte dritto micro forbice, fare una trasversale pulito tagliato in ogni distale nave alla nascita dei rami epigastrico. Posizionare un contrasto di fondo di plastica sterile sotto i vasi. </li><li> Lavare le navi energicamente con abbondante soluzione salina eparinizzata finché tutto il sangue viene rimosso dal lume. </li><li> Portare l&#39;innesto della vena nel campo operatorio e rimuovere eventuali avventizia esubero dalle estremità delle navi di cui al punto 1.2.10, se necessario. </li><li> Eseguire entrambe le anastomosi microchirurgiche con 10/0 sutura in nylon. Anastomose l&#39;estremità prossimale della vena graft alla vena femorale e l&#39;estremità distale all&#39;arteria femorale. Questo permetterà al sangue di fluire fROM arterioso al lato venoso senza resistenza dalle valvole all&#39;interno del trapianto vena. NOTA: Assicurarsi che i vasi femorali e della vena trapianto resto nella loro posizione naturale, senza colpi di scena. </li><li> Controllare eventuali perdite in entrambi i siti anastomosi. Risolvere piccole perdite, che sembrano non pulsante il sangue che esce dal sito anastomotico, mettendo un piccolo pezzo di grasso sulla parte superiore e delicatamente compressione per 5-10 min. Grandi perdite pulsanti che rapidamente inondano l&#39;intero campo avranno bisogno di punti di sutura aggiuntivi. </li><li> Controllare la pervietà del ciclo artero-venosa. occlusione Gentle dell&#39;arteria femorale dovrebbe rendere termoretraibile mentre la stessa nella vena femorale dovrebbe engorge esso. </li><li> Posizionare la base della camera di ingegneria dei tessuti sotto il ciclo arterovenosa con quest&#39;ultimo riposo nella sua posizione naturale senza torsioni o piegature. </li><li> Fissare la base della camera al legamento inguinale e sottostante fascia muscolare con 6/0 punti di sutura in nylon. </li><li> Mettere il coperchio sopra ilbase in modo che i vasi femorali entrano nella camera attraverso una tacca (finestra nel lato della camera). Quando si chiude il coperchio, assicurarsi che cattura i rami epigastrico, tra la base e il coperchio della camera, che agiscono come pastoie di tenere l&#39;anello artero-venosa in posizione. </li><li> Chiudere la ferita con funzionamento continuo 4/0 sutura di seta più due o tre ulteriori semplici punti interrotti. </li><li> Lasciare che l&#39;animale per recuperare da anestesia su un blocco di riscaldamento. </li><li> Non lasciare l&#39;animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere decubito sternale. Allo stesso modo, non restituiscono un animale che ha subito un intervento chirurgico per la compagnia di altri animali fino alla completa guarigione. 24 ore più tardi, somministrare un&#39;altra dose singola di Carprofen (5 mg / kg, per via sottocutanea) come analgesico. </li><li> Trattare la ferita con attualità pomata antibiotica per 5 giorni. Se la ferita è aperta, anestetizzare l&#39;animale come al punto 1.1.2 tramite 1.1.5 e chiudere la ferita come in 1.3.14. Monitorare la salute di animali al giorno. Eutanasia l&#39;animale con una dose letale di iniezione lethabarb intraperitoneale (163 mg / kg a 0,25 ml per 23 ago G) se l&#39;animale mostra più di segni moderati di inacitivity, scarso appetito, perdita di peso e perdita di colore. </li></ol></li></ol> 2. flusso continuo Pedicle Camera (due camere per animale) <ol><li> Preparazione del Animal per la chirurgia <ol><li> Ripetere i passaggi 1.1.1 tramite 1.1.4. Due camere possono essere impiantati in entrambe le regioni all&#39;inguine di un singolo topo. </li></ol></li><li> Isolamento di vasi femorali e inserimento di sezione <ol><li> Ripetere i passaggi 1.2.1 tramite 1.2.8. </li><li> Con entrambi arteria e vena completamente liberata tessuti circostanti e loro rami ligato, portare la camera nel campo operatorio. </li><li> Mettere ciascuno dei vasi femorali intatte sulla corrispondente feritoia della base della camera assicurandosi che non vi siano torsioni o curvature. </li><li> Chiudere la camera da attaching il coperchio alla base. Chiudere la ferita utilizzando funzionamento continuo 4/0 sutura seta più di due o tre ulteriori semplici punti interrotti e permettere all&#39;animale di recuperare come precedentemente descritto. </li></ol></li></ol> 3. Raccolta delle Camere e la lavorazione dei tessuti <ol><li> Una volta punti di tempo dell&#39;esperimento (4-6 settimane post-impianto) vengono raggiunti, anestetizzare l&#39;animale come al punto 1.1.2 e 1.1.3 ripetere i passaggi attraverso 1.1.5. </li><li> Aprire la ferita con una lama # 15 e tagliare i tessuti con le forbici finché la camera è completamente esposto. </li><li> Esporre i vasi femorali prossimale al costrutto e di prova per la pervietà vascolare: occlude delicatamente il vaso con due microforceps, poi il latte il sangue in una direzione distale e, infine, rilasciare il forcipe prossimali. Se la nave si riempie di sangue nuovo, ciò conferma la pervietà. Legare i vasi femorali prossimalmente nel caso del ciclo artero ed entrambi prossimale e distale nel caso di the flow-through configurazione e rimuovere le camere con il tessuto contenente in blocco. </li><li> Alla fine dell&#39;esperimento, eutanasia l&#39;animale con una dose letale di iniezione lethobarb intraperitoneale (163 mg / kg in 0,25 ml per 23 ago G). </li><li> Fissare tessuti in paraformaldeide 4% a temperatura ambiente per 24 ore. Tessuti dividere in più sezioni trasversali (1-2 mm di spessore) e incorporare in cera di paraffina o composto ottimale temperatura di taglio per le sezioni di paraffina (5 micron) o sezioni congelate (10 micron), rispettivamente. 3,4,8,17,22, 24 </li><li> Eseguire routine di colorazione istologica come ematossilina ed eosina esaminare la morfologia generale dei tessuti. Eseguire la colorazione immunoistochimica con anticorpi specifici per identificare il tipo cellulare di interesse, 3,4,8,17,22,24,29 per T immunostaining esempio, la troponina cardiaca per cardiomiociti. </li></ol>

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<li>Dilley, R. J., Morrison, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularisation+to+improve+translational+potential+of+tissue+engineering+systems+for+cardiac+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vascularisation to improve translational potential of tissue engineering systems for cardiac repair.</a> Int J Biochem Cell Biol. 56, 38-46 (2014).</li>
<li>Lesman, A., Koffler, J., Atlas, R., Blinder, Y. J., Kam, Z., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vessel-like+networks+within+multicellular+fibrin-based+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering vessel-like networks within multicellular fibrin-based constructs.</a> Biomaterials. 32 (31), 7856-7869 (2011).</li>
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<li>Lim, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tissue+engineering+chamber+supports+human+induced+pluripotent+stem+cell+survival+and+rapid+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo tissue engineering chamber supports human induced pluripotent stem cell survival and rapid differentiation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 422 (1), 75-79 (2012).</li>
<li>Piao, Y., Hung, S. S., Lim, S. Y., Wong, R. C., Ko, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+integration-free+human+induced+pluripotent+stem+cells+from+keratinocytes+by+simple+transfection+of+episomal+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of integration-free human induced pluripotent stem cells from keratinocytes by simple transfection of episomal vectors.</a> Stem Cells Transl Med. 3 (7), 787-791 (2014).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano interessi in gioco.

Ingegneria della microcircolazione è attualmente in fase di studio essenzialmente attraverso due approcci. La prima comporta lo sviluppo di una rete vascolare altamente interconnessa all&#39;interno del costrutto in vitro in modo che quando impiantato, capillari dal letto vascolare ospitante collegano con quelli del trapiantato costruire attraverso un processo chiamato inosculation, garantendo così la consegna di nutrienti non solo la periferia ma anche al nucleo. 21,32,33 Questo è chiamato pre-vasco...

Fabbricazione del tessuto vascolarizzato funzionale utilizzando un approccio di ingegneria dei tessuti è un paradigma emergente nel campo della medicina rigenerativa. 1,2 Molti approcci di ingegnerizzare tessuti nuovi e sani per la sostituzione di tessuto danneggiato o organi difettosi sono stati sviluppati, 3-6 sperimentalmente in modelli animali di piccole dimensioni con promettente potenziale clinico. 7,8 Tuttavia, vascolarizzazione rimane una delle grandi sfide per l&#39;ingegneria dei tessuti che limitano il potenziale per crescere tessuti di dimensioni clinicamente rilevante. 9 Gli attuali approcci per vascolarizzano tessuto seguire sia una via estrinseca in cui i nuovi vasi crescono da letto vascolare destinatario e invadono tutto il tessuto impiantato costruisce 10 o un percorso di vascolarizzazione intrinseca dove il sistema vascolare cresce e si espande in sintonia con il tessuto di recente sviluppo. 11 L&#39;approccio estrinseca coinvolge tradizionalmente le cellule di semina su una impalcaturain vitro e impiantare il costrutto completo nella animale vivente con l&#39;aspettativa che i nutrienti, in precedenza forniti da terreni di coltura, sarà acquistato dalla circolazione. 12,13 Il concetto è semplice come crescita interna vascolare è troppo lento e solo gli impianti molto sottili (&lt; di spessore 1-2 mm) rimane valida. Fornire sostanze nutritive e ossigeno per mezzo di una vascolarizzazione sufficiente e rapida è al centro di tutti i tentativi riusciti a crescere sostituti tissutale più complesse e più grandi, come ossa, muscoli, grasso e gli organi solidi. 14,15 vascolarizzazione intrinseca offre il potenziale per costrutti più grandi per lo sviluppo dalla crescita di tessuto progressiva compatibile con la sua espansione apporto di sangue. Un disegno è l&#39;impianto in vivo in una camera di un peduncolo vascolare con o senza un ponteggio seminato cellule. 5,6 Questo ha aperto la strada a nuove procedure per la generazione di tessuti intrinsecamente vascolarizzati spessi. 16,17 &lt;/ P&gt; Più recentemente, sono state sviluppate strategie di pre-vascolarizzano innesti di tessuto, prima dell&#39;impianto. Queste reti dei vasi sanguigni incorporate hanno lo scopo di inosculate con vasi di accoglienza presso l&#39;impianto consentono la rapida fornitura di un apporto di sangue completo per migliorare la sopravvivenza di tutte le parti di un innesto di tessuto spesso trapiantato. 18 Siamo stati pionieri di un vascolarizzato vivo modello in ingegneria dei tessuti nei piccoli animali che coinvolge una via sottocutanea impiantato semirigido camera chiusa contenente un peduncolo vascolare perfusione e biomateriali cellulari contenenti. La camera crea un ambiente ischemico che stimola sprouting angiogenico dai vasi impiantati. 3 Il peduncolo vascolare può essere un ciclo arterovenosa ricostruite o un&#39;arteria flusso continuo intatta e vena. 3-6,19 This vascolari germogli peduncolari un funzionamento ed estesa artero rete -capillary-venosa che collega sia l&#39;arteeriole e venoso si conclude con il peduncolo vascolare. 3,20, inoltre, la circostante camera di supporto cava protegge il tessuto in via di sviluppo da potenzialmente deformare forze meccaniche e prolunga l&#39;unità ischemico per migliorare la vascolarizzazione. 3,21,22 Se il peduncolo nave è semplicemente impiantato in tessuto normale e non all&#39;interno dello spazio protetto della camera, germinazione angiogenico cessa lungo la stessa timeline come una ferita normale e nessun nuovo tessuto si accumulano intorno al peduncolo. Gli investigatori hanno utilizzato questa configurazione in vivo per produrre costrutti di tessuto tridimensionali funzionali vascolarizzati con vascolarizzazione di sostegno e di dimensioni clinicamente rilevante. 4,23 Inoltre, i costrutti di tessuto vascolarizzate ingegnerizzati con il suo peduncolo vascolare intatto possono essere raccolti per il successivo trapianto presso il sito della lesione . 24,25 Uno scenario più clinicamente fattibile sarebbe la creazione della camera presso il sito definitivo per la ricostruzione sale come il petto. Così, questa de novo tessuto approccio ingegneristico potrebbe avere potenziale clinico di fornire una nuova fonte di tessuto bersaglio funzionale per la chirurgia ricostruttiva. 26-28 Il seguente protocollo fornirà una guida generale per costruire un vascolarizzati camera di ingegneria tissutale in vivo nel ratto, che potrebbe essere adattato in diversi modelli animali e impiegato per esaminare i processi complicati dell&#39;angiogenesi, produzione della matrice, e la migrazione e la differenziazione cellulare.

<table><tbody><tr><td>Lama da bisturi 1 15</td><td>Braun</td><td>BB515</td><td></td></tr><tr><td>Pinza adson a denti 1</td><td>Braun</td><td>BD527R</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per ago 1</td><td>Braun</td><td>BM201R</td><td></td></tr><tr><td>Coagulatore bipolare 1&amp;nbsp;</td><td>Braun</td><td>US335</td><td></td></tr><tr><td>Pinza microchirurgica per ago B-15-8,3</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00763</td><td></td></tr><tr><td>Pinza microdilatatore D-5a,2</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00125</td><td></td></tr><tr><td>Pinza microchirurgica da orafo JF-5</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00108</td><td></td></tr><tr><td>Forbici microchirurgiche - dritte SAS-11</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00098</td><td></td></tr><tr><td>Forbici microchirurgiche - curve SDC-11</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00090</td><td></td></tr><tr><td>2 Morsetti singoli B-3</td><td>S &amp;amp; T</td><td>00400</td><td></td></tr><tr><td>2 Suture in nylon 10/0</td><td>S &amp;amp; T</td><td>03199</td><td></td></tr><tr><td>1 Sutura in nylon 6/0</td><td>Braun</td><td>G2095469</td><td></td></tr><tr><td>2 Suture in seta 4/0</td><td>Braun</td><td>C0760145</td><td></td></tr><tr><td>Xilocaine 1%</td><td>Dealmed</td><td>150733</td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>Eparina sodica</td><td>Dealmed</td><td>272301</td><td>5.000 UI/ml</td></tr><tr><td>Ringer lattato</td><td>Baxter</td><td>JB2323</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>1 Camera a forma di cupola per ingegneria tissutale</td><td>realizzata su misura</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 Camera a flusso continuo</td><td>realizzata su misura</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lettina I, Griffonia Simplicifolia&amp;nbsp;</td><td>Vector Laboratories</td><td>B-1105</td><td>1,67 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Anticorpo contro la troponina T</td><td>Abcam</td><td>Ab8295</td><td>4 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Anticorpo specifico per l'uomo contro Ku80</td><td>Abcam</td><td>Ab80592</td><td>0,06 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Anticorpo contro la desmina</td><td>Dako</td><td>M0760</td><td>2,55 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>Colorante Cell Tracker CM-DiI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C-7000</td><td>3 mg/10&lt;sup&gt;6&lt;/sup&gt; cellule</td></tr><tr><td>Lethabarb (pentobarbitone sodico)</td><td><a href="www.virbac.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Virbac Animal Health</a></td><td>LETHA450</td><td>325 mg/ml</td></tr><tr><td>Piastra riscaldante flessibile</td><td><a href="http://www.redzoneheating.com.au" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Redzone Heating</a></td><td>RZ/Medium</td><td></td></tr></tbody></table>

ingegneria dei tessuti da parte intrinseca vascolarizzazione in un<em&gt; in vivo</em&gt; camera ingegneria dei tessuti

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

Nella chirurgia ricostruttiva, vi è una necessità clinica di un&#39;alternativa ai metodi attuali di ricostruzione autologo che sono complessi, costosi e commercio un difetto per un altro. L&#39;ingegneria dei tessuti mantiene la promessa di affrontare questa crescente domanda. Tuttavia, la maggior parte delle strategie di ingegneria tissutale non riescono a generare sostituti stabili e funzionali dei tessuti a causa della scarsa vascolarizzazione. Questo documento si concentra su una ingegneria dei tessuti modello in vivo della camera di vascolarizzazione intrinseca in cui un&#39;arteria perfusione e una vena o come un ciclo artero o di una configurazione peduncolo a flusso continuo è diretto all&#39;interno di una camera cava protetta. In questo sistema camerale basato germinazione angiogenica verifica dai vasi arterovenose e questo sistema attrae migrazione cellulare endogena ischemica e infiammatoria motore che riempie progressivamente spazio della camera con tessuto fibro-vascolare. cellula esogena / matrice impianto al momento della costruzione della camera migliora sur cellularevivenza e determina la specificità dei tessuti ingegnerizzati che si sviluppano. I nostri studi hanno dimostrato che questo modello camera può generare con successo diversi tessuti come grasso, muscolo cardiaco, fegato e altri. Tuttavia, sono necessarie modifiche e perfezionamenti per garantire tessuto bersaglio formazione è coerente e riproducibile. Questo articolo descrive un protocollo standardizzato per la realizzazione di due differenti modelli a camera ingegneria tissutale vascolarizzate in vivo.

La creazione microchirurgico di camere ingegneria tissutale è stata eseguita come descritto nel protocollo di cui sopra. I tessuti generati all&#39;interno delle camere possono essere esaminate istologicamente come descritto nel passaggio protocollo 3. Vari tipi di tessuto sono stati progettati con successo utilizzando la camera vascolarizzata in vivo (Figura 2). Questi includono tessuto cardiaco con cardiomiociti neonatali di ratto (Figura 2A),...

Questa è una linea guida per la costruzione di tessuto vascolarizzato in vivo utilizzando un circuito arterovenoso microchirurgico o una configurazione peduncolare a flusso continuo all'interno di una camera di ingegneria tissutale. I tessuti vascolarizzati generati possono essere impiegati per la rigenerazione degli organi e la sostituzione di difetti tissutali, nonché per test farmacologici e modellazione della malattia.

Ingegneria dei tessuti da parte intrinseca Vascolarizzazione in un<em&gt; In Vivo</em&gt; Camera ingegneria dei tessuti

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare uno spazio in cui il tessuto possa crescere ed espandersi contemporaneamente allo sviluppo di un'adeguata rete vascolare, portando infine alla generazione di un blocco tridimensionale di tessuto vascularizzato, di grandi dimensioni. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nell'ingegneria di tessuti vascularizzati per scopi ricostruttivi, nonché per il trapianto e la riparazione d'organo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il tessuto appena generato è intrinsecamente irrorato dalla propria rete vascolare, senza dover dipendere dalla diffusione dall'ambiente circostante per la sopravvivenza.La procedura sarà dimostrata da Sue McKay e Liliana Pepe. Anestetizzare un ratto del peso di almeno 250 grammi e valutare la profondità dell'anestesia mediante una pinzatura del dito del piede. Se il ratto non risponde, mantenere la sedazione utilizzando isoflurano al 2% per tutta la durata della procedura.Successivamente, applicare un unguento a base di solfato di magnesio sugli occhi. Poi, con il ratto in posizione supina, utilizzare rasoi elettrici per depilare l'inguine e rimuovere i peli con una garza inu

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Il nostro gruppo ha sviluppato un sistema di coltura bioreattore che imita lo stress pulsatile fisiologica del sistema cardiovascolare per rigenerare impiantabili protesi vascolari di piccolo diametro.

Ingegneria biologica basata innesti vascolari Utilizzando un bioreattore pulsatile

Qui, descriviamo una metodologia per fornire cordone umano derivati ​​dal sangue umano endoteliali che formano colonie cellule (ECFCs) e dal midollo osseo le cellule staminali mesenchimali (MSCs), inserita in un collagene / fibronectina gel, per via sottocutanea in topi immunodeficienti. Questa cella / gel combinazione genera una rete umana vascolare che collega con la vascolarizzazione del mouse.

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Sono descritti metodi per creare tessuti tumorali 3D umani come sistemi di test. Queste tecnologie si basano su un decellularized biologica vascolarizzato impalcatura (BioVaSc), cellule umane primarie e una linea di cellule tumorali, che possono essere coltivate in condizioni statiche e in condizioni dinamiche in un bioreattore flusso.

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Vascolarizzazione è la chiave per approcci in ingegneria dei tessuti successo. Pertanto, tecnologie affidabili sono necessari per valutare lo sviluppo di reti vascolari in tessuto-costrutti. Qui vi presentiamo un metodo semplice e conveniente per visualizzare e quantificare vascolarizzazione in vivo.

Una pelle piena Difetto modello per valutare Vascolarizzazione di Biomateriali<em&gt; In Vivo</em

Qui, vi presentiamo un protocollo per generare ingegneria dei tessuti dei vasi innesti che sono funzionali per l'innesto in topi con un doppio semina cellule staminali pluripotenti indotte in parte (PiPSC) - derivato cellule muscolari lisce e PiPSC - cellule endoteliali derivate su una nave decellularized ponteggio bioreattore.

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In questo lavoro, presentiamo una tecnica per la rapida fabbricazione di tessuti vascolari viventi mediante coltura diretta di collagene, cellule muscolari lisce e cellule endoteliali. Inoltre, viene descritto un nuovo protocollo per la caratterizzazione meccanica di tessuti vascolari ingegnerizzati.

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Questo manoscritto presenta un metodo di stampaggio ad iniezione di progettare microvasi che ricapitolano le proprietà fisiologiche di endotelio. Il processo di microfluidica-based crea reti vascolari brevetto 3D con condizioni tailorable, come il flusso, composizione cellulare, la geometria, e gradienti biochimici. Il processo di fabbricazione ed esempi di possibili applicazioni sono descritte.

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Descriviamo un approccio microchirurgico per la generazione di un loop arterovenosa (AV) come un modello di analisi vascolarizzazione in vivo in un ambiente isolato e ben caratterizzato. Questo modello non è solo utile per l'indagine di angiogenesi, ma è anche perfettamente adatto per l'ingegneria vascolarizzato assialmente e tessuti trapiantabili.

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